用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的包含羥基吡喃酮衍生物化合物的化妝品組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的包含羥基吡喃酮衍生物化合物作為活性成分的化妝品組合物。根據(jù)本發(fā)明的組合物具有促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的作用，并且因此允許皮膚層中的脂肪細(xì)胞分化，從而提高皮膚體積或彈性。因此，本發(fā)明的組合物可在例如皮膚損傷的領(lǐng)域中廣泛用作化妝品組合物或藥物組合物。
【專利說明】
用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的包含羥基吡喃酮衍生物化合物的化 妝品組合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本公開內(nèi)容涉及用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的化妝品組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 皮膚的基本結(jié)構(gòu)由皮下脂肪組織來維持。皮下脂肪組織在維持皮膚的體積 (早HI喜）和強(qiáng)度中發(fā)揮關(guān)鍵作用。因此，與向外真皮層或表皮層提供彈性的現(xiàn)有方法相 比，提高脂肪組織的體積可以是用于維持皮膚體積和彈性的更好解決方案。正在對脂肪細(xì) 胞積極進(jìn)行多種研究。通常來說，廣泛使用前脂肪細(xì)胞，因?yàn)槠渫ㄟ^誘導(dǎo)分化的物質(zhì)（例如 胰島素）而分化為脂肪細(xì)胞。近來，間充質(zhì)干細(xì)胞在使用脂肪細(xì)胞的研究中頗受關(guān)注。脂肪 源性間充質(zhì)干細(xì)胞廣泛用于研究脂肪細(xì)胞的分化(Science 1999,284,143-146)，因其可以 以類似于前脂肪細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞的方式分化(Exp. Cel 1 Res. 2006，312，1856-1864)。 脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞（天丨哲異BH吾21舀奎〕丨燦呈）廣泛分布遍及全身，并且已知 不僅能夠分化為脂肪細(xì)胞而且還能夠分化為其他類型的細(xì)胞，例如軟骨細(xì)胞、骨細(xì)胞等 (J.Cell Sci.2006，119,2204-2213)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 技術(shù)問題
[0004] 本公開內(nèi)容的發(fā)明人已對表現(xiàn)出促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化作用的化合物進(jìn)行了研究。在 此期間，他們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)具有特定結(jié)構(gòu)的羥基吡喃酮衍生物表現(xiàn)出促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的作 用，并且已經(jīng)完成了本公開內(nèi)容。
[0005] 因此，本公開內(nèi)容涉及提供用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化或者增大皮膚體積或彈性的組 合物，其包含羥基吡喃酮衍生物化合物。
[0006] 技術(shù)方案
[0007] 在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容提供了用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化或者增大皮膚體積或彈 性的組合物，其包含羥基吡喃酮衍生物作為活性成分。
[0008] 有益效果
[0009] 根據(jù)本公開內(nèi)容的包含羥基吡喃酮衍生物作為活性成分的組合物表現(xiàn)出促進(jìn)脂 肪細(xì)胞分化的作用，并且藉此表現(xiàn)出增大皮膚體積或彈性的作用。更特別地，其可通過促進(jìn) 人間充質(zhì)干細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞并由此產(chǎn)生脂滴而表現(xiàn)出增大皮膚體積和彈性的作用。因 此，本公開內(nèi)容的組合物可廣泛應(yīng)用于化妝品或藥物領(lǐng)域。
[0010] 附圖簡述
[0011] 圖1示出了顯示使用根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的羥基吡喃酮衍生物化合物來誘導(dǎo) 脂肪細(xì)胞分化的結(jié)果的顯微鏡圖像。
[0012]最佳方式
[0013] 在2014年1月20日提交的韓國專利申請No. 10-2014-0006640出于所有目的而以其 整體并入本公開內(nèi)容。本公開內(nèi)容還要求韓國專利申請No . 10-2014-0006640的優(yōu)先權(quán)，其 內(nèi)容整體并入本公開內(nèi)容。
[0014] 在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及用于增大皮膚體積或彈性的組合物，其包含化 學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍生物化合物作為活性成分：
[0015] [化學(xué)式1]
[0017] 其中 R為-CH2-或-CH2CH2-。
[0018] 在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及用于增大皮膚體積或彈性的方法，其包括向需 要增大皮膚體積或彈性的對象施用化學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍生物化合物或者包含所述化 合物作為活性成分的組合物。在本公開內(nèi)容的一個(gè)方面中，施用可根據(jù)本公開內(nèi)容中描述 的施用方法和施用劑量來進(jìn)行。
[0019] 在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及化學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍生物化合物或者包 含其作為活性成分的組合物，其用于增大皮膚體積或彈性。
[0020] 在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及化學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍生物化合物用于增 大皮膚體積或彈性的用途。在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及化學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍生 物化合物在制備用于增大皮膚體積或彈性的組合物中的用途。
[0021] 在本公開內(nèi)容的一個(gè)方面中，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的組合物可促進(jìn)間充質(zhì)干 細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞。
[0022]在本公開內(nèi)容的一個(gè)方面中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞可以是人間充質(zhì)干細(xì)胞。
[0023] 在本公開內(nèi)容的一個(gè)方面中，基于所述組合物的總體積，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方 面的組合物可包含0.01至lOOyM濃度的活性成分。在本公開內(nèi)容的一個(gè)方面中，基于所述組 合物的總體積，活性成分的濃度可以是0.0 OlyM或更高、0.0 lyM或更高、0. lyM或更高、0.5yM 或更高、lyM或更高、5yM或更高、10yM或更高、20yM或更高、25yM或更高、28yM或更高、29yM或 更高、30yM或更高、31yM或更高、32yM或更高、35yM或更高、40yM或更高、50yM或更高、100yM 或更高、200yM或更高、500yM或更高、ImM或更高、10mM或更高、50mM或更高、100mM或更高、1M 或更高、或者5M或更高以及10M或更低。特別地，在本公開內(nèi)容的一個(gè)方面中，活性成分的濃 度可以是30yM。
[0024] 在本公開內(nèi)容的一個(gè)方面中，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的組合物可提高脂肪組 織。
[0025] 在本公開內(nèi)容的一個(gè)方面中，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的組合物可提高皮膚體 積。
[0026] 在本公開內(nèi)容的一個(gè)方面中，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的組合物可提高皮膚彈 性。
[0027] 在本公開內(nèi)容的一個(gè)方面中，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的組合物可以是藥物、食 品或化妝品組合物。
[0028] 在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及用于制備化學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍生物的方 法，其包括：
[0029] (1)通過替換5-羥基-2-(羥甲基)-4H-吡喃-4-酮的2位羥甲基中的羥基來制備5-羥基-2-(氯甲基)-4H-吡喃-4-酮的步驟；
[0030] (2)通過使3,4-(亞甲基二氧基）肉桂酸或3,4-(亞乙基二氧基）肉桂酸與無機(jī)堿在 極性溶劑中反應(yīng)來制備金屬鹽；以及
[0031] (3)使5-羥基_2_(氯甲基)-4H-吡喃-4-酮與所述金屬鹽反應(yīng)。
[0032] 用方案1作為實(shí)例描述所述制備方法。
[0033] [方案 1]
[0035] 其中 R為-CH2-或-CH2CH2-。
[0036] 通過根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的制備方法獲得的化學(xué)式1的羥基吡喃酮衍生物化 合物的具體實(shí)例包括(2E)-3-(苯并[d][l，3]二氧代-6-基)丙烯酸(5-羥基-4-氧代-4H-吡 喃-2-基）甲酯和(2E)-3-(2,3-二羥基苯并[b][l，4]二氧代-7-基)丙烯酸(5-羥基-4-氧代-4H-吡喃-2-基）甲酯。
[0037] 在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及用于增大皮膚體積或彈性的組合物，其包含通 過根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的制備方法制備的羥基吡喃酮衍生物化合物作為活性成分。
[0038] 由于通過根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的制備方法制備的化學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍 生物化合物能夠通過促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化而產(chǎn)生并積累脂滴，因此其可改善皮膚彈性和增大 皮膚體積。
[0039] 在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的組合物，其包含化學(xué) 式1所示羥基吡喃酮衍生物化合物作為活性成分。
[0040] [化學(xué)式1]
[0042] 其中 R為-CH2-或-CH2CH2-。
[0043] 在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的方法，其包括向需要 促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的對象施用化學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍生物化合物或者包含所述化合物 作為活性成分的組合物。在本公開內(nèi)容的一個(gè)方面中，施用可依照本公開內(nèi)容中描述的施 用方法和施用劑量來進(jìn)行。
[0044] 在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及化學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍生物化合物或者包 含所述化合物作為活性成分的組合物，其用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化。
[0045] 在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及化學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍生物化合物用于促 進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的用途。在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及化學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍生物 化合物在制備用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的組合物中的用途。
[0046] 在本公開內(nèi)容中，"皮膚"是指覆蓋生物體的外部的器官，其由表皮、真皮和皮下脂 肪層構(gòu)成。該術(shù)語以最廣泛的概念使用，不僅包括覆蓋面部或身體外部的組織而且還包括 頭皮和毛發(fā)。
[0047] 在本公開內(nèi)容中，"體積"指皮膚層的體積或容量。其可意味著明顯的大體積外觀。 因此，體積提高或增大的皮膚將看起來提升、健康且年輕。此外，例如，當(dāng)皮膚已因損傷、創(chuàng) 傷、灼傷等而受損并且因此而具有疤痕或凹陷，或者皮膚或組織已因外科手術(shù)而切開時(shí)等， 增大皮膚組織的體積可導(dǎo)致受損組織和皮膚層的體積增大，并且提供使皮膚或組織恢復(fù)到 接近其初始狀態(tài)的作用。
[0048] 在本公開內(nèi)容中，"增大體積"意指皮膚層的體積提高。其還可意指由于皮膚體積 提高而使皮膚看起來提升且健康，或者使受損的皮膚組織恢復(fù)至接近其初始狀態(tài)。因此，提 高的皮膚組織體積可提供這樣的效果:借此當(dāng)下垂皮膚的體積提高并且皮膚表面伸展時(shí)， 受損皮膚恢復(fù)至接近其初始狀態(tài)。
[0049] 根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的化妝品組合物的制劑不受特別限制，并且可根據(jù)目的 而適當(dāng)選擇。例如，其可制成選自以下的一種或更多種制劑:皮膚洗劑、皮膚軟化劑、緊膚劑 (厶藝!巨L~| )、收斂洗劑、乳液洗劑、增濕洗劑、滋養(yǎng)洗劑、按摩霜、滋養(yǎng)霜、增濕霜、護(hù)手 霜、粉底、精華液、滋養(yǎng)精華液、面膜（埤）、皂、清潔泡沫、清潔洗劑、清潔霜、身體洗劑和身 體清潔劑，但不限于此。
[0050] 當(dāng)將根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的化妝品組合物配制為糊劑、霜?jiǎng)┗蚰z時(shí)，可使 用以下作為載體成分:動(dòng)物纖維、植物纖維、蠟、石蠟、淀粉、西黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙 二醇、硅酮、膨潤土、二氧化硅、滑石、氧化鋅等。
[0051] 當(dāng)將根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的化妝品組合物配制為粉劑或噴霧劑時(shí)，可使用以 下作為載體成分:乳糖、滑石、二氧化硅、氫氧化鋁、硅酸鈣或聚酰胺粉末。特別地，噴霧劑還 可包含拋射劑，例如氯氟烴、丙烷/ 丁烷或二甲醚。
[0052] 當(dāng)將根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的化妝品組合物配制為溶液劑或乳劑時(shí)，可使用溶 劑、增溶劑或乳化劑作為載體成分。例如可使用水、乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐 醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3_ 丁二醇、脂肪族甘油酯、聚乙二醇、或失水山梨糖醇的脂肪酸 酯。
[0053] 當(dāng)將根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的化妝品組合物配制為混懸劑時(shí)，可使用以下作為 載體成分:液體稀釋劑(例如水、乙醇或丙二醇）、助懸劑(例如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯 山梨糖醇酯和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯）、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂、西黃蓍 月父等。
[0054]當(dāng)將根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的化妝品組合物配制為含表面活性劑的清潔劑時(shí)， 可使用以下作為載體成分:脂肪醇硫酸酯、脂肪醇醚硫酸酯、磺基琥珀酸單酯、羥乙磺酸酯/ 鹽、咪唑啉ft衍生物、牛磺酸甲酯、肌氨酸酯/鹽、脂肪酸酰胺醚硫酸酯、烷基酰氨基甜菜堿、 脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、乙氧基化甘油脂肪酸酯 等。
[0055]除羥基吡喃酮衍生物化合物以外，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的化妝品組合物還可 包含功能性添加劑以及化妝品組合物中通常含有的其他成分。功能性添加劑可以是選自以 下的成分:水溶性維生素、油溶性維生素、多肽、多糖、鞘脂和海藻提取物。
[0056]必要時(shí)，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的化妝品組合物可包含化妝品組合物中通常含 有的除功能性添加劑之外的成分。額外包含的成分可以是油、脂肪、濕潤劑、潤膚劑、表面活 性劑、有機(jī)或無機(jī)顏料、有機(jī)粉末、UV吸收劑、防腐劑、滅菌劑、抗氧化劑、植物提取物、pH控 制劑、醇、著色劑、芳香劑、血液循環(huán)刺激劑、冷卻劑、止汗劑、純化水等。
[0057]在一個(gè)方面中，本公開內(nèi)容可涉及用于皮膚外用制劑，其包含羥基吡喃酮衍生物 化合物作為活性成分。皮膚外用制劑包括可由外部施用于皮膚的任何制劑，并且其中可包 括多種制劑形式的化妝品。
[0058]根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的藥物組合物可作為多種經(jīng)口或腸胃外制劑來提供。通 常來說，所述制劑使用常用的稀釋劑或賦形劑(例如填料、增容劑、黏合劑、濕潤劑、崩解劑、 表面活性劑等)來制備。用于經(jīng)口施用的固體制劑包括片劑、丸劑、散劑、粒劑以及軟或硬膠 囊劑。這些固體制劑通過將化合物與至少一種賦形劑(例如淀粉、碳酸鈣、蔗糖、乳糖、明膠 等)混合來制備。除簡單的賦形劑外，還使用潤滑劑，例如硬脂酸鎂、滑石等。用于經(jīng)口施用 的液體制劑包括混懸劑、內(nèi)用溶液劑、乳劑、糖漿劑。除常用的簡單稀釋劑(例如水和液體石 蠟)之外，所述制劑還可包含多種賦形劑，例如濕潤劑、甜味劑、芳香劑、防腐劑等。用于腸胃 外施用的制劑包括無菌水溶液劑、非水溶液劑、混懸劑、乳劑、凍干制劑和栓劑。非水溶液劑 和混懸劑可包含丙二醇、聚乙二醇、植物油（例如橄欖油）、可注射酯（例如油酸乙酯）等。作 為栓劑的基質(zhì)，可使用Wit印sol、聚乙二醇、吐溫61、可可豆脂、月桂精酯、甘油明膠等。
[0059] 根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的組合物可包含所述化合物的可藥用鹽，并且還可包含 其他藥物活性化合物。所述鹽不受特別限制，只要其可藥用即可。例如，可使用鹽酸鹽、硫酸 鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、氫氟酸鹽、氫溴酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、富 馬酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、萘磺酸鹽等。
[0060] 根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的組合物根據(jù)目的可腸胃外或經(jīng)口施用?？擅刻焓┯?0.1至5 00mg/kg體重，特別地1至10 Omg/kg體重的日劑量一次或數(shù)次。對特定患者的施用劑 量可根據(jù)以下而變化:患者的體重、年齡、性別和身體狀況，飲食，施用時(shí)間，施用方法，排出 速率，疾病的嚴(yán)重程度等。
[0061] 根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的藥物組合物可制成任何藥學(xué)上合適的制劑，包括例如 丸劑、顆粒劑、片劑、軟或硬膠囊劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑、氣霧劑、皮膚外用制劑(如，軟膏 劑、霜?jiǎng)┑龋?、栓劑、注射劑、注射用無菌溶液劑等的制劑。特別地，其可制成注射劑或皮膚外 用制劑。
[0062] 根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的組合物可通過多種途徑施用于哺乳動(dòng)物，例如大鼠、 小鼠、牛、人等。所有施用方式均可在預(yù)期之內(nèi)。例如，其可經(jīng)口、經(jīng)直腸、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮 下、子宮內(nèi)或者腦室內(nèi)施用。
[0063] 根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的組合物可通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可容易地選擇的 多種途徑來施用。特別地，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的藥物組合物可以作為皮膚外用制劑 通過皮膚表面來施用。
[0064] 在本公開內(nèi)容的一個(gè)方面中，所述食品組合物可以是健康功能性食品組合物。
[0065] 根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的食品組合物的制劑不受特別限制。例如，其可配制成 片劑、顆粒劑、散劑、液體(如，飲料）、焦糖、凝膠、棒等。食品組合物的每種制劑可包含相關(guān) 領(lǐng)域中常用的除活性成分之外的成分，所述成分可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)具體制劑和使用 目的而容易地選擇。在這種情況下，可實(shí)現(xiàn)協(xié)同作用。
[0066] 確定根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的食品組合物中活性成分的施用劑量在本領(lǐng)域技 術(shù)人員的能力之內(nèi)。日施用劑量可以是例如〇. 1至5000mg/kg/天，更特別地50至500mg/kg/ 天，但不限于此。施用劑量可根據(jù)多種因素(例如對象的年齡和健康狀況、存在或并發(fā)癥等） 而變化。
[0067] 例如，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的食品組合物可以是以下形式:多種食品，例如口 香糖、焦糖、糖果、冷凍甜點(diǎn)、甜食等;飲料，例如碳酸飲料、礦泉水、酒精飲料等;或者健康功 能性食品，包括維生素、礦物質(zhì)等。
[0068] 此外，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的食品組合物可包含多種營養(yǎng)物質(zhì)、維生素、礦物 質(zhì)（電解質(zhì)）、香料（例如合成和天然香料）、著色劑、增容劑（乳酪、巧克力等）、果膠酸及其 鹽、藻酸及其鹽、有機(jī)酸、保護(hù)性膠體增稠劑、pH控制劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、醇類、用于碳 酸飲料的碳酸化劑等。此外，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的功能性食品組合物可包含用于制 備天然果汁、果汁飲料和蔬菜飲料的果肉。這些成分可以獨(dú)立使用或組合使用。基于1〇〇重 量份根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的組合物，這些添加劑通常以約〇至20重量份的量包含在內(nèi)， 但并不具有顯著重要性。
[0069] 下文中，將通過實(shí)施例和測試?yán)敿?xì)描述本公開內(nèi)容。然而，以下實(shí)施例和測試?yán)?僅用于說明性目的，并且本公開內(nèi)容不受其限制。
[0070] [實(shí)施例1](2幻-3-(苯并[d][1，3]二氧代- 6-基)丙烯酸(5_羥基-4-氧代-4H-吡 喃-2-基）甲酯的制備
[0071] 將50g 5-羥基_2_(羥甲基）-4H-吡喃-4-酮（0.35mmol)溶解于250mL N，N-二甲基 甲酰胺中。在于冰-水浴中冷卻至l〇°C之后，逐滴添加50g亞硫酰氯(0.42mol)，持續(xù)30分鐘。 在于室溫下攪拌2小時(shí)之后，向反應(yīng)溶液中添加2000mL冰水。過濾所產(chǎn)生的固體，并將所得 固體溶解在lOOOmL乙酸乙酯中。在使用碳酸鎂和活性炭干燥和脫色并隨后過濾之后，通過 濃縮濾液并添加己烷來獲得結(jié)晶。在真空過濾之后，獲得39.5g作為黃色固體的5-羥基-2-(氯甲基)-4H-吡喃-4-酮(70 % )。
[0072] 將5g 3,4-(亞甲基二氧基）肉桂酸(0.026mol)和1.3g氫氧化鈉(0.031mol)溶解于 40mL甲醇中。在蒸餾出甲醇之后，將剩余殘留物溶解于70mL N，N-二甲基甲酰胺中。向其中 添加4.2g 5-羥基_2_(氯甲基)-4H-吡喃-4-酮(0.026mol)，之后在攪拌下將混合物在油浴 中于110°C下加熱2小時(shí)。在蒸餾出溶劑之后，將殘留物溶解于300mL乙酸乙酯中。用5 %鹽酸 和蒸餾水洗滌乙酸乙酯溶液，然后通過添加碳酸鎂和活性炭干燥并脫色。在濾掉不溶性物 質(zhì)之后，在減壓（12托（torr))下蒸發(fā)濾液以獲得5.3g作為淡黃色固體的反應(yīng)產(chǎn)物（產(chǎn)率： 65%)〇
[0073] TLC(乙酸乙酯：己烷= l:l):Rf = 0.63。
[0074] NMR(DMS0-d6，S):9.29(bs，lH)，8.12(s，lH)，7.65(d，lH，J=16.2Hz)，7.46(s， lH)，7.23(d，lH，J = 8.1Hz)，6.96(d，lH，J = 8.1Hz)，6.60(d，lH，J=16.2Hz)，6.52(s，lH)， 6.08(s，2H)，5.07(s，2H).
[0075][實(shí)施例2](2E)-3-(2,3-二羥基苯并[b][l，4]二氧代-7-基)丙烯酸(5-羥基-4-氧 代-4H-吡喃-2-基）甲酯的制備
[0076]以與實(shí)施例1中相同的方式獲得作為淡黃色固體的目標(biāo)產(chǎn)物(5.0g，57%)，不同之 處在于:使用3,4-(亞乙基二氧基）肉桂酸代替3,4-(亞甲基二氧基）肉桂酸。
[0077] TLC(乙酸乙酯：己烷= l:l):Rf = 0.58。
[0078] NMR(DMS0-d6，S):9.26(bs，lH)，8.11(s，lH)，7.63(d，lH，J=16.2Hz)，7.32(s， lH)，7.25(d，lH，J = 8.1Hz)，6.90(d，lH，J = 8.1Hz)，6.59(d，lH，J=16.2Hz)，6.51(s，lH)， 5.06(s，2H)，4.27(m，4H).
[0079] [測試?yán)?]誘導(dǎo)脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞
[0080] 人脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞（human adipose-derived mesenchymal stem cell， hAT-MSC)購買自 Lonza，Inc ? (Walkersville，MD，USA)，并按照Lonza，Inc的說明書進(jìn)行培 養(yǎng)。按照L〇nza，Inc.的說明書來誘導(dǎo)脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞，不同之處在 于:使用曲格列酮(1^〇81；^32〇116，11?0)代替吲噪美辛（；[11(101]161：1^(3；[11)。具體地，通過向間充 質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)物中添加以下物質(zhì)來使間充質(zhì)干細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞:lg/mL胰島素、1M地 塞米松（dexamethasone，DEXA)、0 ? 5mM異丁基甲基黃噪呤（isobutylmethylxanthine，IBMX) 和2M TR0。對于測試組，在誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞時(shí)，以30yM的濃度向培養(yǎng)基中添加實(shí)施例1 的化合物。用30yM格列本脲與IDX-起處理陽性對照組。在脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞開始分化 為脂肪細(xì)胞后的第14天，用10mL磷酸緩沖鹽水(PBS)清洗細(xì)胞，然后使用10%福爾馬林/PBS 溶液(0.2mL/cm 2)固定10分鐘。用60 %異丙醇溶液(0.5mL/cm2)洗滌經(jīng)固定的細(xì)胞一次，并用 溶解在60%異丙醇中的油紅0(0.2mL/cm 2)將脂肪細(xì)胞中的脂肪體染色10分鐘。然后，在用 蘇木精再次染色以使細(xì)胞核可視化之后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞。結(jié)果在圖1中示出。
[0081]根據(jù)圖1，與只用IDX進(jìn)行處理相比，用實(shí)施例1的化合物進(jìn)行處理導(dǎo)致向脂肪細(xì)胞 的分化提高。與作為陽性對照的格列本脲相比，染色細(xì)胞的數(shù)目略少，但向脂肪細(xì)胞的分化 顯著提高。因此，根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的羥基吡喃酮衍生物化合物或者包含所述化合 物的組合物可促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化，并且因此可提供增大皮膚體積或彈性的效果。
[0082] [測試?yán)?]測量人脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞中脂連蛋白的表達(dá)水平
[0083] 脂連蛋白是脂肪細(xì)胞中分泌的一種代表性蛋白質(zhì)類激素。據(jù)報(bào)道，脂連蛋白的表 達(dá)隨著向脂肪細(xì)胞的分化而提高。因此，測量分泌到細(xì)胞培養(yǎng)基中的脂連蛋白的量作為促 進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的標(biāo)志。為了測量脂連蛋白的分泌量，在購自L 〇nza，Inc.的人脂肪源性間 充質(zhì)干細(xì)胞開始分化為脂肪細(xì)胞后的第14天對其進(jìn)行收集，并使用脂連蛋白ELISA試劑盒 (R&D Systems，目錄號.DY1065)如下量化脂連蛋白的量(將數(shù)據(jù)相對于對照組的數(shù)據(jù)進(jìn)行 歸一化）。具體地，在96孔板上與捕獲抗體反應(yīng)并用清洗緩沖液清洗后，用濃度為60yM的樣 品處理細(xì)胞并在室溫下孵育2小時(shí)。其后，將細(xì)胞與檢測抗體、HRP、底物溶液和終止溶液一 起孵育方案中指定的時(shí)間，同時(shí)在各步驟之間清洗3次。在最后的孵育后，使用分光光度計(jì) 在450nm處測量吸光度。結(jié)果在表1中示出。
[0084] 【表1】
[0085]脂連蛋白的表達(dá)水平
[0088] 實(shí)施例1和實(shí)施例2的化合物為曲酸酯化合物。如從表1可見，盡管曲酸未顯示出提 高脂連蛋白表達(dá)的作用，但是實(shí)施例1和實(shí)施例2的化合物提高了脂連蛋白的表達(dá)。根據(jù)本 公開內(nèi)容的化合物提高脂連蛋白表達(dá)的作用與陽性對照物質(zhì)格列本脲并無顯著差異。因 此，可以證實(shí)根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的羥基吡喃酮衍生物化合物或者包含所述化合物的 組合物表現(xiàn)出顯著的促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的作用，并且因此可提供增大皮膚體積或彈性的效 果。
[0089] 下文中，將通過配制例詳細(xì)描述本公開內(nèi)容。然而，以下制備例僅用于說明性目 的，并且本公開內(nèi)容不受其限制。
[0090] [配制例1]軟膠囊劑
[0091] 根據(jù)常用方法通過混合以下物質(zhì)來制備軟膠囊劑填充溶液:8mg實(shí)施例1或2的羥 基P比喃酮衍生物、9mg維生素E、9mg維生素C、2mg棕櫚油、8mg氫化植物油、4mg黃蜂錯(cuò)和9mg卵 磷脂。獨(dú)立于此，由66重量份明膠、24重量份甘油和10重量份山梨糖醇溶液制備軟膠囊片 材，并用填充溶液填充以制備包含400mg根據(jù)本公開內(nèi)容一個(gè)方面的組合物的軟膠囊劑。 [0092][配制例2]片劑
[0093]混合以下物質(zhì)并使用流化床干燥器制粒：8mg實(shí)施例1或2的羥基吡喃酮衍生物、 9mg維生素E、9mg維生素C、200mg半乳寡糖、60mg乳糖和140mg麥芽糖。添加6mg糖酯之后，根 據(jù)常用方法將500mg所得組合物制備成片劑。
[0094][配制例3]飲料
[0095] 混合以下物質(zhì)并添加300mL純化水:8mg實(shí)施例1或2的羥基吡喃酮衍生物、9mg維生 素E、9mg維生素C、10g葡糖糖、0.6g檸檬酸和25g寡糖糖漿。每瓶裝填200mL所得溶液并在130 °C下滅菌4至5秒。
[0096][配制例4]顆粒劑
[0097]混合以下物質(zhì)并使用流化床造粒機(jī)制粒：8mg實(shí)施例1或2的羥基吡喃酮衍生物、 9mg維生素E、9mg維生素C、250mg無水結(jié)晶葡萄糖和550mg淀粉。將所制備的顆粒劑裝入袋 中。
[0098][配制例5]注射劑
[0099] 通過常用方法以表2中所述的組成制備注射劑。
[0100] 【表2】
[0102][配制例6]健康功能性食品
[0103] 通過常用方法以表3中所述的組成制備健康功能性食品。
[0104] 【表3】
[0106]
[0107] 以上維生素和礦物質(zhì)的組成比僅作為相對適用于健康功能性食品的特定實(shí)例給 出，并且可根據(jù)需要而變化。
[0108] [配制例7]健康飲料
[0109] 通過常用方法以表4中所述的組成制備健康飲料。
[0110] 【表4】
[0112] 根據(jù)常用的健康飲料制備方法，將上述成分混合，在85°C下于攪拌下加熱約1小 時(shí)，過濾，然后滅菌。
[0113] [配制例8 ]軟化洗劑(皮膚洗劑）
[0114] 通過常用方法以表5中所述的組成制備軟化洗劑。
[0115] 【表5】
[0117] ~[配制例9 ]滋養(yǎng)洗劑(乳液洗劑)
[0118] 通過常用方法以表6中所述的組成制備滋養(yǎng)洗劑。
[0119] 【表6】
[0121]
[0122] [配制例10]滋養(yǎng)霜
[0123] 通過常用方法以表7中所述的組成制備滋養(yǎng)霜。
[0124] 【表7】
[0126]
[0127] [配制例11]按摩霜
[0128] 通過常用方法以表8中所述的組成制備按摩霜。
[0129] 【表8】
[0131][配制例12]面膜
[0132] 通過常用方法以表9中所述的組成制備面膜。
[0133] 【表9】

[0135]雖然已示出并描述了一些示例性實(shí)施方案，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是： 在不脫離如所附權(quán)利要求書限定的本公開內(nèi)容的精神和范圍的情況下，可以對本公開內(nèi)容 進(jìn)行多種形式和細(xì)節(jié)的改變。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 用于增大皮膚體積或彈性的組合物，其包含化學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍生物化合物 作為活性成分： [化學(xué)式1] 其中 R為-CH2-或-CH2CH2-。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于增大皮膚體積或彈性的組合物，其中所述組合物促進(jìn)間 充質(zhì)干細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于增大皮膚體積或彈性的組合物，其中基于所述組合物的 總體積，所述組合物包含〇. 01至100μΜ濃度的所述活性成分。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于增大皮膚體積或彈性的組合物，其中所述組合物提高脂 肪組織。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的用于增大皮膚體積或彈性的組合物，其中所述組 合物為藥物組合物或化妝品組合物。6. 用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的組合物，其包含化學(xué)式1所示羥基吡喃酮衍生物化合物作 為活性成分： [化學(xué)式1] 其中 R為-CH2-或-CH2CH2-。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的組合物，其中所述組合物促進(jìn)間充 質(zhì)干細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的組合物，其中基于所述組合物的總 體積，所述組合物包含〇. 01至1〇〇μΜ濃度的所述活性成分。
【文檔編號】A61K8/49GK105873584SQ201580003446
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2015年1月20日
【發(fā)明人】盧浩植, 白興洙, 金俞姃, 申松錫, 李存桓
【申請人】株式會社愛茉莉太平洋