一種紫杉烷類長(zhǎng)循環(huán)納米粒及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥物制劑，具體是一種抗腫瘤藥物的長(zhǎng)循環(huán)納米粒及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]難溶性藥物的靜脈給藥一直是藥劑學(xué)難題，因?yàn)槌Ｓ玫脑鋈茌o料靜脈安全性差，限制了制劑的發(fā)展。以紫杉醇為代表的紫杉烷類化合物的靜脈給藥一直是研究的熱點(diǎn)。FDA批準(zhǔn)的靜脈注射用輔料，如聚氧乙烯蓖麻油、吐溫80仍然具有很大的毒性，例如紫杉醇市售制劑中的聚氧乙烯蓖麻油在應(yīng)用中，為了降低過(guò)敏反應(yīng)，病人在使用前6小時(shí)必須口服地塞米松。
[0003]目前具有較好抗腫瘤活性的紫杉烷類藥物包括紫杉醇、多西紫杉醇(docetaxel)、MTC220、阿齊他賽(Aziditaxel)、以及其他紫杉烷類衍生物。其中阿齊他賽是以一種天然來(lái)源的紫杉烷三尖杉寧堿為原料，通過(guò)結(jié)構(gòu)改造得到的紫杉烷衍生物，對(duì)微管蛋白具有高親和力。
[0004]人血清白蛋白是一種生物相容性良好的輔料，美國(guó)專利US5916596和US6096331保護(hù)了紫杉醇與白蛋白結(jié)合的白蛋白納米粒，產(chǎn)品已在美國(guó)上市。納米粒劑型不僅可解決藥物的靜脈注射問(wèn)題，其納米粒徑會(huì)產(chǎn)生提高滲透治療效應(yīng)(EPR效應(yīng))，提高藥物對(duì)腫瘤組織的靶向性，從而提高治療效果。
[0005]納米給藥系統(tǒng)由于其在腫瘤部位的提高組織滲透和滯留效應(yīng)(EPR)的特性，在腫瘤靶向治療應(yīng)用過(guò)程中越來(lái)受到重視。普通的納米劑型，如脂質(zhì)體、納米粒等在血漿中，會(huì)被人體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識(shí)別，使納米制劑的血漿清除加快，降低了其治療效果?？茖W(xué)家們將聚乙二醇(PEG)修飾到納米制劑表面，聚乙二醇片段在納米制劑表面形成親水外核，降低了調(diào)理素作用，從而提高納米制劑的血漿循環(huán)時(shí)間。聚乙二醇修飾的納米制劑，常被稱為長(zhǎng)循環(huán)制劑，在脂質(zhì)體、納米粒中被廣泛應(yīng)用。
[0006]已被批準(zhǔn)的US5916596A和US6096331A紫杉醇白蛋白納米粒使用方便，無(wú)需使用溶劑，提高了病人的耐受劑量，輸注時(shí)間短，可以降低與溶劑相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的潛在風(fēng)險(xiǎn)，但是其并未延長(zhǎng)紫杉醇的半衰期。延長(zhǎng)抗腫瘤納米劑型的血漿滯留時(shí)間，有利于提高藥物在腫瘤組織的分布，從而大大提高藥效。已公開(kāi)CN102772369多西紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)納米粒制劑采用了聚乙二醇聚乳酸材料制備了膠束制劑，而本發(fā)明采用了內(nèi)源性白蛋白為主要材料，本發(fā)明納米粒生物相容性更好，且半衰期更長(zhǎng)。已公開(kāi)專利CN1582902A保護(hù)了陽(yáng)離子化白蛋白腦靶向納米粒，其采用化學(xué)修飾使白蛋白帶有陽(yáng)離子電荷，且修飾后的陽(yáng)離子白蛋白作為靶向配體，納米粒的主要材料為聚乙二醇聚乳酸類合成聚合物，與本發(fā)明不同。合肥工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文:聚乙二醇修飾人血清白蛋白及其納米微球制備論文報(bào)道了荷載重組人生長(zhǎng)激素的白蛋白納米微球，其采用了制備方法采用溶劑-化學(xué)交聯(lián)法，其原理是納米沉淀-化學(xué)交聯(lián)結(jié)合方法，沉淀過(guò)程中采用了表面活性劑Span85，為非靜脈注射可用表面活性劑，制備工藝中除去較難，化學(xué)交聯(lián)的原理為戊二醛交聯(lián)氨基，將大大降低白蛋白的生物相容性，且交聯(lián)會(huì)有納米粒間的交聯(lián)，導(dǎo)致粒徑分布不均，而與本發(fā)明的高壓均質(zhì)的方法中白蛋白無(wú)明顯變性，具有良好的生物相容性，且粒徑均一度易控。
[0007]因此本專利旨在利用聚乙二醇化技術(shù)，制備一種安全、穩(wěn)定、具有長(zhǎng)循環(huán)效應(yīng)的紫杉烷類抗腫瘤藥物白蛋白納米粒，從而提高紫杉烷類化療藥物的治療效果，降低毒副作用。
[0008]因此本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)為:使用內(nèi)源性的白蛋白為主要材料，聚乙二醇修飾后的白蛋白無(wú)明顯毒性，所以生物相容性好。聚乙二醇化修飾使納米粒有利于延長(zhǎng)藥物血漿滯留時(shí)間，體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)顯示聚乙二醇化修飾提高了藥物的抗腫瘤活性及抗轉(zhuǎn)移效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的主要目的是在不加入常規(guī)增溶劑的前提下，制備一種紫杉烷類抗腫瘤藥物的長(zhǎng)循環(huán)納米顆粒，該納米顆粒穩(wěn)定、靜脈給藥安全，且具有長(zhǎng)循環(huán)效應(yīng)。
[0010]本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種一種抗腫瘤藥物的長(zhǎng)循環(huán)納米粒的制備方法，其采用含有聚乙二醇化白蛋白、白蛋白的白蛋白混合物溶液，與藥物的有機(jī)相溶液混合，高壓均質(zhì)，制備載藥納米粒懸液，冷凍干燥，得到載藥納米粒的凍干粉末。
[0011]更特別地，所述制備方法包括:將抗腫瘤藥物分布在有機(jī)相和含有蛋白質(zhì)的水性介質(zhì)中，有機(jī)相與水性介質(zhì)的比例為1:19?1:49，優(yōu)選比例為1:15-1:30，在9000-30000psi壓力范圍內(nèi)高壓均質(zhì)，(優(yōu)選壓力范圍為18000-25000psi，優(yōu)選為7_10個(gè)循環(huán)時(shí)間)，剪切成50-1000nm的顆粒，優(yōu)選顆粒粒徑范圍為50_200nm，低壓除去有機(jī)溶劑后，0.22 um無(wú)菌過(guò)濾，之后低溫-40?-80攝氏度冷凍干燥24_48h，最終升溫至20-40°C保持0.5-2小時(shí)，優(yōu)選I小時(shí)，得到載藥的納米粒。
[0012]在本發(fā)明中，所述抗腫瘤藥物為選自紫杉醇、多西紫杉醇、MTC220、阿齊他賽。
[0013]在本發(fā)明中，所述有機(jī)相是與水不溶性有機(jī)溶劑，或者是水不溶性有機(jī)溶劑與水溶性有機(jī)溶劑組成的混合物。所述水不溶性有機(jī)溶劑可以是氯仿、二氯甲烷、乙醚、正丁醇等、或其混合物，所述水溶性有機(jī)溶劑可以是乙醇、甲醇、丙二醇、甘油等、或其混合物。
[0014]在本發(fā)明中，所述蛋白質(zhì)是白蛋白、聚乙二醇化白蛋白的混合物，其中聚乙二醇化白蛋白與白蛋白材料的重量比例是1:10至1:200。其中單獨(dú)描述的“白蛋白”或“白蛋白材料”指純的白蛋白，不含任何修飾物或其它任何雜質(zhì)，即在沒(méi)有特別指出的情況下，該“白蛋白”意味著不包含“聚乙二醇化白蛋白”。在本發(fā)明，優(yōu)選地，白蛋白為人血白蛋白。
[0015]本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及由所述藥物、白蛋白、聚乙二醇化白蛋白制成的長(zhǎng)循環(huán)納米粒，其中藥物占該納米?？偭康?-20%重量，聚乙二醇化白蛋白與白蛋白的重量比例是1:10至1:200。在一個(gè)具體的方案中，
[0016]在一個(gè)具體方案中，本發(fā)明的抗腫瘤藥物的長(zhǎng)循環(huán)納米粒的制備方法如下:將白蛋白、聚乙二醇化白蛋白溶解在水中形成白蛋白混合物0.5%-3%濃度(w/v )的水溶液，將藥物溶解于有機(jī)溶劑中(濃度飽和濃度的50%-100%)，將有機(jī)溶劑與白蛋白混合物水溶液按體積比為1:19?1:49，優(yōu)選比例為I:15-1:30，，在9000-30000psi壓力下均質(zhì)(優(yōu)選壓力范圍為18000-25000psi，優(yōu)選為7_10個(gè)循環(huán)時(shí)間)，剪切成50_1000nm的顆粒，優(yōu)選顆粒粒徑范圍為50-200nm，低壓除去有機(jī)溶劑后，0.22 μ m無(wú)菌過(guò)濾，之后低溫-40?-80攝氏度冷凍干燥24-48h得到載藥的納米粒。減壓除去有機(jī)溶劑，在_80°C至_40°C之間冷凍干燥，終升溫至20-40°C保持0.5-2小時(shí)，優(yōu)選I小時(shí)，得到紫杉烷類抗腫瘤藥物的長(zhǎng)循環(huán)納米粒的凍干粉。優(yōu)選地，其中白蛋白混合物的濃度選擇為0.5-3% (w/v)，在所述白蛋白混合物中，聚乙二醇化白蛋白的量為白蛋白(純的白蛋白)的0.5%-10%，藥物與總白蛋白(純的白蛋白”與聚乙二醇化白蛋白的混合物)質(zhì)量比為1:99?1:4，有機(jī)溶劑與白蛋白混合物溶液的體積比 1:19-1:49。
[0017]在一個(gè)具體方案中，本發(fā)明涉及通過(guò)按照前述方式制備得到的紫杉烷類藥物的長(zhǎng)循環(huán)納米粒顆粒粉末。
[0018]本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得，對(duì)于本發(fā)明中沒(méi)有具體描述的裝置、條件(溫度、時(shí)間等)、物質(zhì)、用量、方法等，均可采用本領(lǐng)域已知的或本領(lǐng)域技術(shù)人員按照常規(guī)技術(shù)可確定的。
[0019]聚乙二醇化白蛋白為聚乙二醇修飾的白蛋白，可以按照已有方法制備，例如中國(guó)專利CN200910229546.3，也可按照本發(fā)明實(shí)施例中I的方法制備，此方法的特點(diǎn)是修飾得率高，制備方法溫和無(wú)毒易控。
【附圖說(shuō)明】
[0020]圖1是用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析技術(shù)來(lái)分析利用不同分子量的活化聚乙二醇修飾人血蛋白，獲得的聚乙二醇化白蛋白的電泳圖譜
[0021]其中:
[0022]1.