一種高載卡巴他賽藥物的白蛋白組合物及其制劑和制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域。更具體地說，本發(fā)明涉及一種高載卡巴他賽藥物的白 蛋白組合物及其制劑和制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 卡巴他賽由Sanof i-aventis公司研發(fā)，2010年FDA批準其注射液（商品名 Jevtana)上市。適用于與潑尼松聯(lián)用治療既往用含多烯紫杉醇治療方案激素難治的轉(zhuǎn)移 性前列腺癌患者。Jevtana屬于紫杉烷類抗腫瘤藥物，它通過干擾細胞有絲分裂和分裂間 期細胞功能所必需的微管網(wǎng)絡(luò)而起抗腫瘤作用。它可與游離的微管蛋白結(jié)合，促進微管 蛋白裝配成穩(wěn)定的微管，同時抑制其解聚，導(dǎo)致喪失了正常功能的微管束的產(chǎn)生和微管 的固定，從而抑制細胞的有絲分裂。與其它紫杉烷類藥物一樣，卡巴他賽的水溶性非常差 (6 μ g/ml)，因此，實踐上不能與水介質(zhì)配制用于靜脈內(nèi)給藥。目前，已上市的卡巴他賽注射 液為兩瓶裝制劑，一瓶制劑為60mg :1. 5ml，含1. 56g Tween 80 ;另一瓶為5. 7ml含13%乙 醇溶液的稀釋劑。其主要依靠表面活性劑吐溫-80及助溶劑乙醇來達到溶解卡巴他賽的目 的。但因表面活性劑和溶媒易產(chǎn)生不良反應(yīng)并引起較多的并發(fā)癥，如嚴重的過敏反應(yīng)、體液 潴留等，臨床給藥時需預(yù)先采用藥物防止過敏，且輸注時間長（通常在1小時以上），這給臨 床使用帶來極大不便和眾多安全性問題。
[0003] 為了解決卡巴他賽注射液毒副作用等缺陷，一個行之有效的方法就是將卡巴他賽 制備成微粒系統(tǒng)，可以延長其體內(nèi)半衰期，提高靶向性，降低毒副作用。
[0004] 藥物新型微粒系統(tǒng)中，白蛋白載藥技術(shù)隨著Abraxane廣泛使用已得到認可。 CN102458112A公開紫杉烷類藥物白蛋白納米顆粒組合物，但其包載效率不高，組合物中小 于約25%的白蛋白是以納米顆粒形式包載，大多白蛋白與藥物是以非納米顆粒形式存在， 大大降低納米顆粒靶向性，因此使用該技術(shù)制備Abraxane產(chǎn)品在組織分布中并未表現(xiàn)非 常好的組織靶向性。CN103393632A也公開卡巴他賽白蛋白組合物，但其組合物載藥量低于 12. 5%，大大增大白蛋白人體注入量，相應(yīng)會帶來一定白蛋白使用的副作用，包括寒顫、發(fā) 熱、顏面潮紅、皮疹、惡心嘔吐等癥狀。因此開發(fā)高載藥白蛋白組合物更易產(chǎn)品安全。
[0005] 白蛋白納米粒制備新技術(shù)逐漸被開發(fā)，專利CN1515244A的高壓均質(zhì)法、專利 CN102048695A的蛋白折疊變性復(fù)性法等均可有效制備卡巴他賽白蛋白納米顆粒，但藥物卡 巴他賽大多為與白蛋白結(jié)合的非納米顆粒形式存在，大大降低納米粒的靶向性。本發(fā)明通 過研究制備卡巴他賽白蛋白組合物，以納米顆粒形式存在的載體白蛋白占總白蛋白載體的 重量百分含量大于50%，大大提高使用時的納米顆粒的靶向性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對現(xiàn)有制劑、技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種高載卡巴他賽藥物的白蛋白組合 物。
[0007] 本發(fā)明的組合物中，以白蛋白納米顆粒和非納米顆粒形式的載體白蛋白包載卡巴 他賽載藥量達13%~25% (重量），優(yōu)選15%~25% (重量），更優(yōu)選20%-25% (重量）； 且以納米顆粒形式存在的載體白蛋白占總白蛋白載體的重量百分含量為50%以上，優(yōu)選為 80%以上。
[0008] 作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述白蛋白為重組白蛋白、動物血清白蛋白或人血清白蛋白， 優(yōu)選為人血清白蛋白。
[0009] 作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述白蛋白納米顆粒的平均粒徑范圍為50~200nm，更優(yōu)選 為 80 ~150nm ;pH 為 5. 0 ~8. 0, Zeta 電位為-10 ~_40mv。
[0010] 作為本發(fā)明的優(yōu)選，組合物中卡巴他賽藥物的包封率>80%，更優(yōu)選包封率 >90 % 〇
[0011] 本發(fā)明的組合物能夠大大降低了白蛋白輔料的用量，且避免了卡巴他賽注射液中 使用乙醇和吐溫80,降低了過敏反應(yīng)的發(fā)生，解決了普通制劑溶血等毒副作用和輸注時間 長等問題，同時還延長了卡巴他賽在體內(nèi)的循環(huán)時間，提高了靶向性，降低了毒性，臨床使 用更加方便，能夠更安全、高效地包載藥物并遞送藥物至病灶從而發(fā)揮作用。并且，白蛋白 納米顆粒的平均粒徑不大于200nm，易于除菌過濾，更有利于產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明進一步提供了一種制備上述高載卡巴他賽藥物的白蛋白組合物的方法。
[0013] 所述方法是采用均質(zhì)乳化法制備上述高載卡巴他賽藥物的白蛋白組合物。該方法 包括以下步驟：
[0014] 1)將卡巴他賽或其溶劑合物，如，丙酮溶劑合物，溶于有機溶劑，如三氯甲烷、乙 醇、丙酮或其任意組合的混合溶劑中，形成有機相；在有機相中卡巴他賽的濃度為10~ 45mg/ml ；
[0015] 2)將白蛋白分散于水、生理鹽水、5%葡萄糖溶液或pH5. 0~8. 0的緩沖液中，形成 水相；在所述水相中，白蛋白的濃度為1~50mg/ml ;
[0016] 3)將步驟1)的有機相與步驟2)的水相混合，將該混合物置于高速剪切機內(nèi)以 20, 000~40, OOOrpm的轉(zhuǎn)速剪切后轉(zhuǎn)入均質(zhì)機內(nèi)，在15, 000~25, OOOpsi的壓力下進行均 質(zhì)，優(yōu)選至少3個循環(huán)，制備得到顆粒平均直徑不大于200nm的混懸液，其中卡巴他賽藥物 的濃度為〇. 1~6mg/ml，優(yōu)選0. 5~3mg/ml ;
[0017] 4)將步驟3)所得溶液進行超濾濃縮，優(yōu)選濃縮2~20倍，即得到卡巴他賽藥物的 白蛋白組合物。
[0018] 可選地，本方法還包括：
[0019] 5)將步驟4)中所得的組合物進行過濾除菌，然后冷凍干燥，即制得卡巴他賽蛋白 質(zhì)藥物組合物無菌冷凍干燥制劑。
[0020] 上述經(jīng)除菌過濾后進行冷凍干燥得到卡巴他賽的蛋白納米顆粒凍干制劑，其中以 納米顆粒形式存在的載體白蛋白占總白蛋白載體的重量百分含量在50%以上。由于經(jīng)過濃 縮后得到的納米顆粒組合物較濃縮前具有較好的化學(xué)穩(wěn)定性與物理穩(wěn)定性，因此需經(jīng)過步 驟4)的濃縮步驟。
[0021] 本發(fā)明還提供了另外一種制備上述高載卡巴他賽藥物的白蛋白組合物的方法。
[0022] 該方法通過加入蛋白結(jié)構(gòu)展開劑，利用蛋白及多肽結(jié)構(gòu)展開后，將藥物包入蛋白 納米顆粒。
[0023] 所述制備方法包括以下步驟：
[0024] 1)用水、生理鹽水、5%葡萄糖溶液或pH5. 0~8. 0緩沖液溶解白蛋白，獲得白蛋白 溶液，其中，所述白蛋白的濃度優(yōu)選為1~50mg/ml ;
[0025] 2)將卡巴他賽或其溶劑合物溶于有機溶劑如乙醇、丙酮或這兩種混合溶劑中，形 成有機相；卡巴他賽的濃度為10~45mg/ml ;
[0026] 3)將蛋白結(jié)構(gòu)展開劑添加到步驟1)所得的白蛋白溶液中，進行孵育反應(yīng)，優(yōu)選孵 育反應(yīng)在37~80°C下進行，孵育時間為0. 1~10小時；所述蛋白結(jié)構(gòu)展開劑選自巰基乙 醇、谷胱甘肽、乙酰半胱氨酸、二硫蘇糖醇或它們的組合；
[0027] 4)將步驟2)所得有機相加入到步驟3)孵育反應(yīng)后所得的溶液中，在加入的同時 剪切，剪切的轉(zhuǎn)速為1，〇〇〇~10, OOOrpm，即得卡巴他賽的白蛋白納米顆粒稀溶液；
[0028] 5)將步驟4)所得的溶液進行超濾濃縮，優(yōu)選濃縮2~20倍，即可得到卡巴他賽藥 物的白蛋白組合物。
[0029] 可選地，本方法還包括：
[0030] 6)將步驟5)中所得的組合物進行過濾除菌，然后冷凍干燥，即制得卡巴他賽藥物 的白蛋白組合物的無菌冷凍干燥制劑。
[0031] 由于高壓均質(zhì)機在生產(chǎn)過程中一般處理速度有限，因此其處理速度往往成為生產(chǎn) 產(chǎn)量的限速步驟，因此本方法巧妙地避免了在卡巴他賽白蛋白納米粒的制備過程中使用高 壓均質(zhì)乳化。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在沒有使用高壓均質(zhì)乳化的情況下，蛋白納米顆粒仍然保持了 相當?shù)姆€(wěn)定性，Zeta電位在-10~-30mv之間，室溫穩(wěn)定性可達48小時。<