一種注射用紫杉醇納米晶體及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種紫杉醇藥物組合物及其制備方法。具體地，本發(fā)明涉及一種注射用紫杉醇納米晶體制劑及其制備方法，以及該制劑用于制備抗腫瘤的藥物中的用途。本發(fā)明的紫杉醇納米晶體屬于納米制劑，粒徑較小，穩(wěn)定性好，且不易析出，紫杉醇的溶解度顯著提高，且體內(nèi)研究證明了紫杉醇納米晶體具有一定的靶向性，能夠用于抗腫瘤治療。
【專利說明】一種注射用紫杉醇納米晶體及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種紫杉醇藥物組合物及其制備方法。具體地，本發(fā)明涉及一種注射用紫杉醇納米晶體制劑及其制備方法，以及該制劑用于制備抗腫瘤的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]紫杉醇(Paclitaxel, PTX)是從紅豆杉屬植物短葉紅豆杉(Taxus brevifolia)的樹皮中提取的一種復(fù)雜的次生代謝產(chǎn)物，化學(xué)名為5β，20-環(huán)氧_1，2α，4，7β，10β，13 α -六羥基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10- 二乙酸酯_2_苯甲酸酯-13 [ (2’R，3’S)_N_苯甲酰-3-苯基異絲氨酸酯]。
[0003]紫杉醇是微管的特異性穩(wěn)定劑，可促進(jìn)微管的裝配和保持微管穩(wěn)定。細(xì)胞接觸紫杉醇后會(huì)在細(xì)胞內(nèi)積累大量的微管，這些微管的積累干擾了細(xì)胞的各種功能，特別是使細(xì)胞分裂停止于有絲分裂期，阻斷了細(xì)胞的正常分裂，是目前所了解的惟一一種能控制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的植物藥(Schiff PB, Fant J, Horwitz SB.Promotion of microtubuleassembly in vitro by Taxol.Nature, 1979, 277(5698):665-667 ；Schiff PB, HorwitzSB.Taxol stabilizes microtubes in mouse fibroblast cells.Proc Natl Acad SciUSA, 1980,77:1561-1565)。通過I1-1II臨床研究，紫杉醇主要適用于卵巢癌、乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌，而且對(duì)食管癌、頭頸癌等其他一些惡性腫瘤也有一定療效，是目前臨床化療藥物的一線用藥(Spencer C，F(xiàn)aulds D.Paclitaxel-a review of its pharmacodynamicand pharmacokinetic properties and therapeutic potential in the treatment ofcancer.Drugs, 1994，48 (5): 794-847 )。
[0004]然而，紫杉醇在水中溶解度極小，臨床應(yīng)用的主要是紫杉醇注射液，是將紫杉醇溶于聚氧乙烯蓖麻油(Cremophore EL)與無水乙醇(1:1)的混合溶劑中制成的。但是大量研究表明，紫杉醇注射液中的聚氧乙烯蓖麻油易引起胃腸道反應(yīng)、過敏反應(yīng)、低血壓、腎毒性、心臟毒性和骨髓抑制等多種毒性反應(yīng)，極大地限制了臨床應(yīng)用?，F(xiàn)在臨床上在給藥前進(jìn)行抗過敏預(yù)處理，在給藥前口服地塞米松、肌注或口服苯海拉明、靜脈注射西咪替丁或雷尼替丁等，因此使患者被動(dòng)接受了大劑量激素帶來了不良反應(yīng)。盡管如此，不同程度的過敏反應(yīng)仍時(shí)有發(fā)生，不良反應(yīng)發(fā)生率仍可高達(dá)30%。
[0005]目前，不含聚氧乙烯蓖麻油注射紫杉醇白蛋白混懸液(AB1-007, Abraxane)于2005年由FDA批準(zhǔn)上市。Abraxane不需要在給藥前進(jìn)行抗過敏預(yù)處理，毒性較低。然而，有研究表明，AB1-007在乳腺癌治療的III期臨床實(shí)驗(yàn)中，體現(xiàn)出了較非AB1-007治療組更高的感覺神經(jīng)病變率。且應(yīng)用Abraxane的整體價(jià)格較傳統(tǒng)的紫杉醇注射液更昂貴，目前應(yīng)用仍然不夠廣泛。注射用 PTX脂質(zhì)體(paclitaxel liposome for injection, L-PTX)于 2003 年由CFDA批準(zhǔn)在國(guó)內(nèi)上市，但紫杉醇脂質(zhì)體相關(guān)載藥體系在國(guó)外主要處于臨床試驗(yàn)和臨床前研究階段。且紫杉醇脂質(zhì)體存在包封率低，紫杉醇易泄露等問題。近年來的研究又發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)體較大的粒子半徑及其脂質(zhì)雙分子層中大量的膽固醇能夠激活體內(nèi)的補(bǔ)體系統(tǒng)，引起補(bǔ)體系統(tǒng)介導(dǎo)的假變態(tài)反應(yīng) CARPA (complement activation-related pseudoallergy)。這種反應(yīng)在臨床上多表現(xiàn)為心肺功能的損傷，因此限制了紫杉醇脂質(zhì)體在臨床上的應(yīng)用。
[0006]因此，設(shè)計(jì)安全有效且使用方便的紫杉醇新制劑具有重要的臨床價(jià)值。
[0007]在20世紀(jì)末，納米系統(tǒng)發(fā)展起來了一種納米微粒藥物傳遞系統(tǒng):納米晶體藥物。其特點(diǎn)為:1.不受包封率的制約，藥物劑量可調(diào)范圍寬:因?yàn)閷⑺幬镏苯蛹{米化，無需借助載體材料，所以不存在包封率及載藥量的障礙，容易滿足臨床需求，大劑量藥物(治療劑量>500mg)亦可制備成納米制劑；2.劑型多樣化:納米晶體混懸液通過噴霧干燥、冷凍干燥和流化床干燥可進(jìn)一步固化，制備成膠囊、片劑等固體劑型，或凍干粉劑等注射劑型；3.納米粒徑精確可控:粒徑大小是納米制劑的重要參數(shù)，與增溶效果、口服吸收生物利用度密切相關(guān)。由于藥物自身納米化，實(shí)測(cè)值為藥物粒子的粒徑，可真實(shí)反映納米化藥物的粒子大小；
4.制備方法操作簡(jiǎn)單，易于工業(yè)化大生產(chǎn)，常規(guī)設(shè)備如高壓均質(zhì)機(jī)、高壓微射流或濕磨機(jī)等均可以制備納米晶體藥物。
[0008]但是，由于納米晶體混合液中的紫杉醇納米晶體容易析出，會(huì)發(fā)生團(tuán)聚現(xiàn)象難以復(fù)溶或粒徑增大，無法達(dá)到提高溶解度和生物利用度的目的。因此，目前尚難以得到穩(wěn)定的納米晶體混懸液。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明人通過深入的研究和創(chuàng)造性的勞動(dòng)，得到了一種紫杉醇藥物組合物特別是一種注射用紫杉醇納米晶體。本發(fā)明`人驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過例如選擇合適的配方特別是合適的穩(wěn)定劑組方，得到紫杉醇納米晶體的粒徑較小，穩(wěn)定性好，且不易析出，紫杉醇的溶解度顯著提高。本發(fā)明人還在體內(nèi)研究中驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的紫杉醇藥物組合物(紫杉醇納米晶體制劑)具有一定的靶向性。由此提供了下述發(fā)明:
[0010]本發(fā)明的一個(gè)方面涉及一種紫杉醇藥物組合物，其包含紫杉醇、穩(wěn)定劑以及適量的水。其中，紫杉醇為藥效成分或有效成分。
[0011]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述紫杉醇藥物組合物，其由紫杉醇、穩(wěn)定劑以及適量的水組成。
[0012]所述藥物組合物亦為藥用組合物；具體地，為紫杉醇納米分子藥用組合物或者紫杉醇納米晶體藥用組合物；在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，其為注射用紫杉醇納米晶體(制劑)，例如紫杉醇納米晶體混懸液或其凍干制劑(紫杉醇納米晶體凍干制劑)。
[0013]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物，其中，紫杉醇(或紫杉醇晶體)的平均粒徑為 10 — 800nm ;優(yōu)選為 50 — 500nm ;更優(yōu)選為 100 — 400nm、100 — 350nm、100 —300nm,例如，100 — 200nm、100 — 250nm、200 — 300nm、150 — 250nm、150 — 200nm、200 —250nmo
[0014]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物,其F1DI (polydispersity index,多分散指數(shù))小于0.5。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述PDI為0.1 — 0.5、0.1 — 0.4、0.1 —0.3、0.2 一 0.5、0.2 一 0.4、0.3 一 0.3、0.15 一 0.2、0.15 一 0.25、0.2 一 0.25。
[0015]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物，其中，紫杉醇的含量為0.1% - 5%(W/V, g/ml);優(yōu)選為 0.2% — 2% (ff/V, g/ml);更優(yōu)選為 0.5% — 1.5% (ff/V, g/ml);特別優(yōu)選為 0.5% — 1% (ff/V, g/ml)或 0.5% — 0.8% (ff/V, g/ml)。例如 0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9% 或 1% (ff/V, g/ml)O
[0016]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物，其中，紫杉醇與穩(wěn)定劑的重量配比為(I — 10): (I — 20);優(yōu)選為(1- 10):1 - 10);更優(yōu)選為(1- 5):(1 - 10);特別優(yōu)選為(I — 5): (I — 5)。例如，5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5，以及這些具體
比例任意兩兩之間構(gòu)成的數(shù)值范圍。
[0017]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物，其中，所述穩(wěn)定劑包括穩(wěn)定劑I和穩(wěn)定劑2，或單用穩(wěn)定劑1，其中，
[0018]所述穩(wěn)定劑I選自羥丙甲纖維素、普朗尼克、聚維酮、泊洛沙姆、羥丙纖維素、阿拉伯膠、西黃蓍膠、海藻酸鈉、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素和糖類(例如葡萄糖、果糖或蔗糖)中的任意一種或多種，所述穩(wěn)定劑2選自十二烷基硫酸鈉、多庫(kù)酯鈉和精氨酸鹽中的任意一種或多種；
[0019]優(yōu)選地，所述穩(wěn)定劑I選自羥丙甲纖維素、泊洛沙姆和羥丙纖維素中的任意一種或多種，所述穩(wěn)定劑2選自十二烷基硫酸鈉/多庫(kù)酯鈉和精氨酸鹽中的任意一種或多種；
[0020]更優(yōu)選地，所述穩(wěn)定劑I選自羥丙甲纖維素和/或泊洛沙姆，所述穩(wěn)定劑2為多庫(kù)酯鈉。
[0021]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物，其中，穩(wěn)定劑I與穩(wěn)定劑2的的重量配比為(1- 20):(1 - 10);優(yōu)選為(1- 20):(1 - 5)，更優(yōu)選為(I — 10): (I — 5);特別優(yōu)選為(1- 5):(1 - 2)。例如，(5 — 8):2、5:2、5:1、4:1、3:1、2.5:1、2:1、1:1、1:2，以及這些具體比例任意兩兩之間構(gòu)成的數(shù)值范圍。
[0022]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物，其處方組成如下:
[0023]
紫衫薄SOmg
_洛沙姆5img
多庫(kù)齡_2#mg
錄水liml.
[0024]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物，其處方組成如下:
[0025]
紫杉醇50mg
泊洛沙姆_mg
多庫(kù)瞻偏2 Om ο
純水IOmle
[0026]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物，其為注射用紫杉醇納米晶體制劑、紫杉醇納米晶體混懸液或紫杉醇納米晶體凍干制劑。
[0027]所述紫杉醇納米晶體凍干制劑通過加入生理鹽水或葡萄糖復(fù)溶之后可用于靜脈注射。
[0028]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物，其中，所述紫杉醇納米晶體凍干制劑的凍干保護(hù)劑選自葡萄糖、蔗糖、甘露醇、乳糖中的任意一種或多種；優(yōu)選地，所述凍干保護(hù)劑選自葡糖糖和/或甘露醇；更優(yōu)選地，所述凍干保護(hù)劑選自甘露醇。
[0029]根據(jù)本發(fā)明任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物，其中，凍干保護(hù)劑的用量為紫杉醇納米晶體混懸液的0.5% — 10% (W/V，g/ml);優(yōu)選為1% — 10% (W/V，g/ml)，更優(yōu)選為1% —5% ;特別優(yōu)選為2% — 5%ο例如，2%、3%、4%或5%ο
[0030]本發(fā)明制備得到的紫杉醇納米晶體混懸液無晶體析出并且不分層，混懸液穩(wěn)定性好。不拘于理論的限制，本發(fā)明的納米晶體混懸液直接將藥物本身納米化，無需載體材料，是將純藥物形成亞微米顆粒的膠狀分散體系。
[0031]不拘于理論的限制，紫杉醇納米晶體是單一的化合物，紫杉醇納米晶體混懸液是混合物，由紫杉醇納米晶體、穩(wěn)定劑和水組成，其中穩(wěn)定劑的應(yīng)用對(duì)于獲得物理穩(wěn)定的納米晶體混懸劑至關(guān)重要。穩(wěn)定劑主要分為電荷保護(hù)劑和立體保護(hù)劑，在穩(wěn)定劑的保護(hù)下才能夠形成穩(wěn)定的納米晶體混懸液，否則獲得的納米晶體容易聚集使粒徑變大，甚至析出，無法達(dá)到提高溶解度和生物利用度的目的。
[0032]本發(fā)明的另一方面涉及本發(fā)明的紫杉醇藥物組合物的制備方法，包括將紫杉醇、穩(wěn)定劑和水制成納米晶體混懸液的步驟；具體地，將紫杉醇、穩(wěn)定劑和水采用沉淀法制成紫杉醇納米晶體混懸液；更具體地，包括下述步驟:
[0033](I)在室溫條件下，將含有穩(wěn)定劑的水性混合物在500rpm — 1500rpm之間高速攪拌混勻，作為水相；
[0034](2)將紫杉醇溶于乙醇中作為有機(jī)相，然后在500rpm — 1500rpm之間高速攪拌的條件下，向上述水相中加入1% - 20% (V/V)的有機(jī)相，之后繼續(xù)在500rpm — 1500rpm之間高速攪拌I 一 60min ；
[0035](3)將步驟(2)中 得到的產(chǎn)物在20W — 360W之間超聲I — 60min ；
[0036]可選地，還包括下面的步驟(4)至(6):
[0037](4)向步驟(3)中得到的產(chǎn)物中加入0.5% - 10% (W/V，g/ml)的凍干保護(hù)劑；
[0038](5)混勻后進(jìn)行滅菌處理；
[0039](6 )在-40 V至-80 V之間冷凍，并最終在+5 °C至+25 °C之間的穩(wěn)定下加熱升華，得到紫杉醇納米晶體凍干制劑。
[0040]紫杉醇納米晶體凍干制劑通過加入生理鹽水或葡萄糖復(fù)溶之后用于靜脈注射。
[0041]實(shí)驗(yàn)例I的結(jié)果表明，本發(fā)明的紫杉醇納米晶體凍干制劑在復(fù)溶后，紫杉醇仍然是納米晶體的形式，粒徑基本與原先的紫杉醇納米晶體混懸液相同。
[0042]本發(fā)明的再一方面涉及本發(fā)明中任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物在制備抗腫瘤的藥物或者抑制癌細(xì)胞的藥物或者預(yù)防和/或治療和/或輔助治療癌癥的藥物中的用途；具體地，所述癌癥為卵巢癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、食管癌或頭頸癌；具體地，所述癌細(xì)胞為卵巢癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞、食管癌細(xì)胞或頭頸癌細(xì)胞。
[0043]本發(fā)明的再一方面涉及一種在體內(nèi)或者體外抑制癌細(xì)胞的方法，包括使用有效量的本發(fā)明中任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物的步驟；具體地，所述癌細(xì)胞為卵巢癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞、食管癌細(xì)胞或頭頸癌細(xì)胞。
[0044]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述在體外抑制癌細(xì)胞的方法是非治療目的的。
[0045]本發(fā)明的再一方面涉及一種抗腫瘤或者治療和/或預(yù)防和/或輔助治療癌癥的方法，包括使用有效量的本發(fā)明中任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物的步驟；具體地，所述癌癥為卵巢癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、食管癌或頭頸癌。
[0046]本發(fā)明中的粒徑(或平均粒徑)以及PDI可以本領(lǐng)域人員知曉的方法進(jìn)行測(cè)定，例如通過Malvern納米粒度儀和/或ZETA電位儀(NAN0-ZS90)測(cè)得。
[0047]本發(fā)明中，各成分的含量，如果沒有特別說明，均是指重量/體積(w/v)(g/100ml)。
[0048]本發(fā)明中，術(shù)語“納米晶體”是意譯，由nanocrystal翻譯而來，強(qiáng)調(diào)“納米”狀態(tài)，而非強(qiáng)調(diào)“晶體”形式，只是自然界中大部分藥物以晶體形式存在，但是不排除非晶體形式，如無定形態(tài)。國(guó)內(nèi)也有將其翻譯為納米分子藥物，這種名稱相對(duì)于納米載體藥物可能更具有對(duì)比性。
[0049]本發(fā)明中，給藥的對(duì)象為受試者，例如哺乳動(dòng)物，包括但不限于:人、猴子、豬、牛、
羊雄雄
[0050]在本發(fā)明中，術(shù)語“有效量”是指可在受試者中實(shí)現(xiàn)治療、預(yù)防、減輕和/或緩解本發(fā)明所述疾病或病癥的劑量。
[0051]發(fā)明的有益效果
[0052]本發(fā)明的紫杉醇納米晶體混懸液顯著提高了紫杉醇的溶解度和穩(wěn)定性良好，具有對(duì)腫瘤的靶向性，其在腫瘤部位的紫杉醇濃度要高于紫杉醇市售注射液，并且紫杉醇納米晶體混懸液在腫瘤部位能夠在較長(zhǎng)的時(shí)間維持較高的濃度。體內(nèi)組織分布顯示了紫杉醇納米晶體混懸液在心、腎的藥物濃度要低于紫杉醇市售注射液，說明紫杉醇納米晶體混懸液能夠降低心毒性和腎毒性，有利于減輕藥物不良反應(yīng)。本發(fā)明具有良好的應(yīng)用前景。此外，本發(fā)明還克服了現(xiàn)有技術(shù)的紫杉醇制劑在臨床應(yīng)用中所存在的嚴(yán)重不良反應(yīng)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0053]圖1 (A-B):實(shí)施例1制備的紫杉醇納米晶體混懸液測(cè)得的粒徑。
[0054]圖2 (A-B):實(shí)施例7制備的紫杉醇納米晶體凍干粉末加水復(fù)溶后測(cè)得的粒徑。
[0055]圖3:BALB/c-nu荷瘤裸鼠靜脈注射給藥后，各時(shí)間點(diǎn)的血漿及組織濃度隨時(shí)間變化的曲線。圖3A為紫杉醇納米晶體混懸液在體內(nèi)的藥物濃度隨時(shí)間變化的曲線；圖3B為紫杉醇市售注射液在體內(nèi)的藥物濃度隨時(shí)間變化的曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0056]下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0057]實(shí)施例1:紫杉醇納米晶體混懸液(I)的制備
[0058]處方組成:
[0059]紫杉醇50 mg
泊洛沙姆50 mg
多庳瞻補(bǔ)2img
It 水liml
[0060]制備方法:
[0061]按上述配比，在室溫條件下，將泊洛沙姆和多庫(kù)酯鈉兩種穩(wěn)定劑溶于IOml水中，形成的水性混合物在1200rpm下高速攪拌混勻，作為水相。將適量紫杉醇溶于乙醇中作為有機(jī)相，濃度為50mg/ml。然后在1200rpm高速攪拌的條件下，向上述水相中加入Iml的有機(jī)相，之后繼續(xù)在1200rpm下高速攪拌20min，大部分乙醇被除去。然后得到的紫杉醇納米晶體混懸液在100W下超聲20min使其充分穩(wěn)定。紫杉醇納米晶體混懸液粒徑可達(dá)200.9nm。
[0062]實(shí)施例2:紫杉醇納米晶體混懸液(2)的制備
[0063]處方組成:
[0064]
紫杉醇SOnig
泊洛沙姆80mg
多庫(kù)酯鈉20mg
應(yīng)求10ml
[0065]制備方法:
[0066]按上述配比，在室溫條件下，將泊洛沙姆和多庫(kù)酯鈉兩種穩(wěn)定劑溶于IOml水中，形成的水性混合物在1000rpm下高速攪拌混勻，作為水相。將適量紫杉醇溶于乙醇中作為有機(jī)相，濃度為100mg/ml。然后在1000rpm高速攪拌的條件下，向上述水相中加入0.5ml的有機(jī)相，之后繼續(xù)在1000rpm下高速攪拌30min，大部分乙醇被除去。然后得到的紫杉醇納米晶體混懸液在IOOW下超聲30min使其充分穩(wěn)定。紫杉醇納米晶體混懸液粒徑可達(dá)217.5nm。
[0067]實(shí)施例3:紫杉醇納米晶體混懸y攸(3)的制備
[0068]處方組成:
[0069]
紫杉醇1OOmg
羥丙曱纖維素50mg
十二烷基硫酸鈉 1Omg
純水1Oml
[0070]制備方法:
[0071]按上述配比，在室溫條件下，將羥丙甲纖維素和十二烷基硫酸鈉兩種穩(wěn)定劑溶于IOml水中，形成的水性混合物在SOOrpm下高速攪拌混勻，作為水相。將適量紫杉醇溶于乙醇中作為有機(jī)相，濃度為100mg/ml。然后在800rpm高速攪拌的條件下，向上述水相中加入Iml的有機(jī)相，之后繼續(xù)在SOOrpm下高速攪拌60min，大部分乙醇被除去。然后得到的紫杉醇納米晶體混懸液在120W下超聲IOmin使其充分穩(wěn)定。紫杉醇納米晶體混懸液粒徑可達(dá)264.5nm。
[0072]實(shí)施例4:紫杉醇納米晶體混懸y攸(4)的制備
[0073]處方組成:
[0074]
紫杉醇80m<?
_丙甲纖維素 30mg
多庫(kù)醋鈉Wnig
隱水Wnil
[0075]制備方法:
[0076]按上述配比，在室溫條件下，將羥丙甲纖維素和多庫(kù)酯鈉兩種穩(wěn)定劑溶于IOml水中，形成的水性混合物在1500rpm下高速攪拌混勻，作為水相。將適量紫杉醇溶于乙醇中作為有機(jī)相，濃度為100mg/ml。然后在1500rpm高速攪拌的條件下，向上述水相中加入0.8ml的有機(jī)相，之后繼續(xù)在1500rpm下高速攪拌lOmin，大部分乙醇被除去。然后得到的紫杉醇納米晶體混懸液在80W下超聲20min使其充分穩(wěn)定。紫杉醇納米晶體混懸液粒徑可達(dá)258.9nm。
[0077]實(shí)施例5:紫杉醇納米晶體混懸y攸(5`)的制備
[0078]處方組成:`
[0079]
紫杉醇UM) mg
羧甲基纖維素鈉 40mg
十二烷基硫酸鈉 2Cteig
純水_議1
[0080]制備方法:
[0081]按上述配比，在室溫條件下，將羧甲基纖維素鈉和十二烷基硫酸鈉兩種穩(wěn)定劑溶于IOml水中，形成的水性混合物在1300rpm下高速攪拌混勻，作為水相。將適量紫杉醇溶于乙醇中作為有機(jī)相，濃度為100mg/ml。然后在1300rpm高速攪拌的條件下，向上述水相中加入Iml的有機(jī)相，之后繼續(xù)在1300rpm下高速攪拌20min，大部分乙醇被除去。然后得到的紫杉醇納米晶體混懸液在60W下超聲30min使其充分穩(wěn)定。紫杉醇納米晶體混懸液粒徑可達(dá) 326.8nm。
[0082]實(shí)施例6:紫杉醇納米晶體混懸液(6)的制備
[0083]處方組成:
[0084]紫杉醇50mg
羥丙基纖維素 SOmg
精氣釀釐20mg
純水I Om丨
[0085]制備方法:
[0086]按上述配比，在室溫條件下，將羥丙基纖維素和精氨酸鹽兩種穩(wěn)定劑溶于IOml水中，形成的水性混合物在1200rpm下高速攪拌混勻，作為水相。將適量紫杉醇溶于乙醇中作為有機(jī)相，濃度為50mg/ml。然后在1200rpm高速攪拌的條件下，向上述水相中加入Iml的有機(jī)相，之后繼續(xù)在1200rpm下高速攪拌20min，大部分乙醇被除去。然后得到的紫杉醇納米晶體混懸液在80W下超聲20min使其充分穩(wěn)定。紫杉醇納米晶體混懸液粒徑可達(dá)298.5nm。
[0087]實(shí)施例7:紫杉醇納米晶體凍干粉末及其制備方法
[0088]制備方法:
[0089]在潔凈條件下，按照實(shí)施例1所述的制備方法，水相選擇注射用水作為溶劑，制備紫杉醇納米晶體混懸液，再加入2%的凍干保護(hù)劑葡萄糖，混合均勻后，經(jīng)粗濾、超濾，得無熱源的溶液，置于管制抗生素瓶中，在_80°C下冷凍，并最終在+10°C穩(wěn)定下加熱升華，得到0.1g/瓶的紫杉醇納米晶體凍干粉末。
[0090]實(shí)施例8:紫杉醇納米 晶體凍干粉末及其制備方法
[0091]制備方法:
[0092]在潔凈條件下，按照實(shí)施例2所述的制備方法，水相選擇注射用水作為溶劑，制備紫杉醇納米晶體混懸液，再加入5%的凍干保護(hù)劑甘露醇，混合均勻后，經(jīng)粗濾、超濾，得無熱源的溶液，置于管制抗生素瓶中，在_70°C下冷凍，并最終在+15°C穩(wěn)定下加熱升華，得到
0.1g/瓶的紫杉醇納米晶體凍干粉末。
[0093]實(shí)駘例1:粒徑測(cè)量實(shí)駘(I)
[0094]1.實(shí)驗(yàn)材料
[0095]樣品:實(shí)施例1制備的紫杉醇納米晶體混懸液、純水。
[0096]儀器:Malvern納米粒度儀及ZETA電位儀。
[0097]2.實(shí)驗(yàn)方法
[0098]取0.4ml制備的紫杉醇納米晶體混懸液于西林瓶中，加入1.6ml純水稀釋五倍，得到有藍(lán)色乳光的澄清溶液，用Malvern納米粒度儀及ZETA電位儀測(cè)定粒徑(平均粒徑)和PDI。
[0099]3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0100]實(shí)施例1制備的紫杉醇納米晶體混懸液測(cè)得的粒徑見圖1A和圖1B。
[0101]結(jié)果顯示，本發(fā)明的紫杉醇納米晶體混懸液的粒徑為200.9nm，PDI為0.179，制得的紫杉醇納米晶體混懸液較穩(wěn)定。
[0102]實(shí)駘例2:粒徑測(cè)量實(shí)駘(2)
[0103]1.實(shí)驗(yàn)材料
[0104]樣品:實(shí)施例7制備的紫杉醇納米晶體凍干粉末、生理鹽水。
[0105]儀器:Malvern納米粒度儀及ZETA電位儀。[0106]2.實(shí)驗(yàn)方法
[0107]取一瓶紫杉醇納米晶體凍干粉末產(chǎn)品，規(guī)格為0.1g/瓶，加入2ml生理鹽水復(fù)溶，超聲使分散均勻，得到有藍(lán)色乳光的澄清溶液，用Malvern納米粒度儀及ZETA電位儀測(cè)定粒徑和roi。
[0108]3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0109]實(shí)施例7制備的紫杉醇納米晶體凍干粉末加水復(fù)溶后測(cè)得的粒徑見圖2A和圖2B。
[0110]結(jié)果顯示，本發(fā)明的紫杉醇納米晶體混懸液的粒徑為202.7nm, PDI為0.157，制得的紫杉醇納米晶體混懸液較穩(wěn)定。
[0111]可見，制備成固體制劑時(shí)，紫杉醇仍然是納米晶體的形式。
[0112]實(shí)驗(yàn)例3:穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
[0113]1.實(shí)驗(yàn)材料
[0114]試驗(yàn)用樣品:實(shí)施例1 一 6制備的紫杉醇納米晶體混懸液、純水。
[0115]儀器:Malvern納米粒度儀及ZETA電位儀。
[0116]2.實(shí)驗(yàn)方法
[0117]實(shí)施例1 一 6制備的紫杉醇納米晶體混懸液，室溫條件下分別放置O天、I天、3天、5天、7天,用Malvern納米粒度儀及ZETA電位儀測(cè)定粒徑和F1DI。
[0118]測(cè)量前，分別取0.4ml實(shí)施例1 一 6制備的紫杉醇納米晶體混懸液于西林瓶中，加入1.6ml純水稀釋五倍，得到有藍(lán)色乳光的澄清溶液，用Malvern納米粒度及ZETA電位儀測(cè)定粒徑和roi。
[0119]3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0120]如表1—6所示。
[0121]表1:實(shí)施例1制備的紫杉醇納米晶體混懸液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
[0122]
【權(quán)利要求】
1.一種紫杉醇藥物組合物，其包含紫杉醇、穩(wěn)定劑以及適量的水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇藥物組合物，其中，紫杉醇的平均粒徑為10- 800nm ；優(yōu)選為50 - 500nm ;更優(yōu)選為100 — 300nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇藥物組合物，其中，其中，紫杉醇的含量為0.1% - 5%(g/ml);優(yōu)選為 0.2% — 2% (g/ml);更優(yōu)選為 0.5% — 1.5% (g/ml);特別優(yōu)選為 0.5% — 1%(g/ml)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇藥物組合物，其中，紫杉醇與穩(wěn)定劑的重量配比為(1- 10):(1 - 20);優(yōu)選為(1- 10):(1 - 10);更優(yōu)選為(1- 5):(1 - 10);特別優(yōu)選為(I — 5):(1 — 5)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇藥物組合物，其中，所述穩(wěn)定劑包括穩(wěn)定劑I和穩(wěn)定劑2，或單用穩(wěn)定劑1，其中， 所述穩(wěn)定劑I選自羥丙甲纖維素、普朗尼克、聚維酮、泊洛沙姆、羥丙纖維素、阿拉伯膠、西黃蓍膠、海藻酸鈉、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素和糖類(例如葡萄糖、果糖或蔗糖)中的任意一種或多種，所述穩(wěn)定劑2選自十二烷基硫酸鈉、多庫(kù)酯鈉和精氨酸鹽中的任意一種或多種； 優(yōu)選地，所述穩(wěn)定劑I選自羥丙甲纖維素、泊洛沙姆和羥丙纖維素中的任意一種或多種，所述穩(wěn)定劑2選自十二烷基硫酸鈉/多庫(kù)酯鈉和精氨酸鹽中的任意一種或多種； 更優(yōu)選地，所述穩(wěn)定劑I選自羥丙甲纖維素和/或泊洛沙姆，所述穩(wěn)定劑2為多庫(kù)酯鈉。`
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的紫杉醇藥物組合物，其中，穩(wěn)定劑I與穩(wěn)定劑2的的重量配比為(I 一 20):(1 — 10);優(yōu)選為(I 一 20):(1 — 5),更優(yōu)選為(I 一 10): (I 一 5);特別優(yōu)選為(I — 5):(1 — 2)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物，其為注射用紫杉醇納米晶體制劑、紫杉醇納米晶體混懸液或紫杉醇納米晶體凍干制劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的紫杉醇藥物組合物，其中，所述紫杉醇納米晶體凍干制劑的凍干保護(hù)劑選自葡萄糖、蔗糖、甘露醇、乳糖中的任意一種或多種；優(yōu)選地，所述凍干保護(hù)劑選自葡糖糖和/或甘露醇；更優(yōu)選地，所述凍干保護(hù)劑選自甘露醇。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的紫杉醇藥物組合物，其中，凍干保護(hù)劑的用量為紫杉醇納米晶體混懸液的 0.5% — 10% (W/V，g/ml);優(yōu)選為 1% — 10% (W/V，g/ml),更優(yōu)選為 1% — 5% ；特別優(yōu)選為2% - 5%。
10.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物的制備方法，其包括將紫杉醇、穩(wěn)定劑和水制成納米晶體混懸液的步驟； 具體地，將紫杉醇、穩(wěn)定劑和水采用沉淀法制成紫杉醇納米晶體混懸液； 更具體地，包括下述步驟: (1)在室溫條件下，將含有穩(wěn)定劑的水性混合物在500rpm— 1500rpm之間高速攪拌混勻，作為水相； (2)將紫杉醇溶于乙醇中作為有機(jī)相，然后在500rpm— 1500rpm之間高速攪拌的條件下，向上述水相中加入1% - 20% (V/V)的有機(jī)相，之后繼續(xù)在500rpm — 1500rpm之間高速攬祥 I 一 60min ；(3)將步驟(2)中得到的產(chǎn)物在20W- 360W之間超聲I 一 60min ； 可選地，還包括下面的步驟(4)至(6): (4)向步驟(3)中得到的產(chǎn)物中加入0.5% - 10% (W/V，g/ml)的凍干保護(hù)劑； (5)混勻后進(jìn)行滅菌處理； (6)在-40V至-80 V之間冷凍，并最終在+5 V至+25°C之間的穩(wěn)定下加熱升華，得到紫杉醇納米晶體凍干制劑。
11.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物在制備抗腫瘤的藥物或者抑制癌細(xì)胞的藥物或者預(yù)防和/或治療和/或輔助治療癌癥的藥物中的用途；具體地，所述癌癥為卵巢癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、食管癌或頭頸癌；具體地，所述癌細(xì)胞為卵巢癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞、食管癌細(xì)胞或頭頸癌細(xì)胞。
12.—種在體內(nèi)或者體外抑制癌細(xì)胞的方法，包括使用有效量的權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的紫杉醇藥物組合物的步驟；具體地，所述癌細(xì)胞為卵巢癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞、食管癌細(xì)胞或頭頸癌`細(xì)胞。
【文檔編號(hào)】A61K9/19GK103768046SQ201410059118
【公開日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2014年2月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月21日
【發(fā)明者】鄭愛萍, 魏麗莎, 張曉燕, 孫建緒 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所