SAMHD1-pLNCX2制備抗腫瘤藥物的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及SAMHDl-pLNCX2制備抗腫瘤藥物的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] CRL4泛素連接酶作為Cullin泛素系統(tǒng)中重要的成員之一，在個(gè)體發(fā)育與體內(nèi)穩(wěn) 態(tài)調(diào)節(jié)中起到關(guān)鍵作用。CRL4蛋白復(fù)合體主要由支架蛋白Cullin4A/4B、連接蛋白DDBl和 識(shí)別體蛋白 DCAFs 蛋白家族組成。DCAFs (DDBl_CUL4associated factor proteins)是一類 含有保守的WD40功能域的蛋白，通過(guò)與DDBl結(jié)合，將所識(shí)別的靶蛋白傳遞給泛素系統(tǒng)進(jìn)行 修飾調(diào)控。
[0003] 近年的研究熱點(diǎn)SAMHDl蛋白被鑒定為一種在人體髓系細(xì)胞和⑶4+T細(xì)胞中能夠 特異性抑制艾滋病病毒HIV-I復(fù)制的天然抗病毒因子，SAMHDl通過(guò)自身的脫氧核苷酸水解 酶活性降低了處于靜息期的髓系細(xì)胞內(nèi)dNTPs的濃度抑制了病毒DNA的合成。然而，HIV-2 和一些SIV所編碼的輔助蛋白Vpx能夠通過(guò)篡奪宿主泛素化系統(tǒng)CRL4 (DCAFl) E3連接酶誘 導(dǎo)SAMHDl蛋白泛素化后被體內(nèi)蛋白酶體所降解，從而破壞了宿主天然免疫防線，促進(jìn)病毒 在髓系細(xì)胞中的感染能力。
[0004] 除了作為一個(gè)天然的抗病毒因子，SAMHDl還被證明在人體內(nèi)調(diào)控中具有重要的作 用：SAMHDl是目前為止唯一被發(fā)現(xiàn)的哺乳動(dòng)物脫氧核糖核酸水解酶，對(duì)于細(xì)胞內(nèi)dNTPs濃 度的精準(zhǔn)調(diào)控起到了重要作用；SAMHDl體細(xì)胞突變已被證實(shí)與罕見(jiàn)自身免疫遺傳疾病AGS 和慢性淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)生有關(guān)；同時(shí)科學(xué)家們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)SAMHDl對(duì)于細(xì)胞基因組的完 整性具有重要的穩(wěn)定作用。
[0005] 國(guó)際上對(duì)SAMHDl的關(guān)注于主要集中Vpx-CRL4 (DCAFl) E3連接酶誘導(dǎo)SAMHDl泛素 化降解機(jī)制等研究上。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供SAMHDl-pLNCX2制備抗腫瘤藥物的用途。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：
[0008] SAMHDl-pLNCX2制備抗腫瘤藥物的用途。
[0009] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0010] 實(shí)驗(yàn)證明，SAMHD1-PLNCX2表達(dá)的SAMHDl蛋白能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞系具有明顯的抑制 增長(zhǎng)作用。
【附圖說(shuō)明】
[0011] 圖1為細(xì)胞內(nèi)過(guò)量表達(dá)SAMHDl基因后細(xì)胞的增值動(dòng)力學(xué)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0013] 實(shí)施例1
[0014] SAMHDl基因的表達(dá)載體SAMHDl-pLNCX2的構(gòu)建：
[0015] SAMHDl基因的表達(dá)載體通過(guò)提取人胚胎腎細(xì)胞HEK293T (2010年購(gòu)自 ATCC:http://www. atcc. org/Products/All/CRL-3216· aspx)的 RNA 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到 cDNA，利用PCR擴(kuò)增目的基因 SAMHDl構(gòu)建進(jìn)入逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體pLNCX2(Retr〇-X? system，Clontech)中，得到 SAMHDl_pLNCX2。
[0016] SAMHDl的基因序列用SEQ ID NO. 1所示。
[0017] 實(shí)施例2
[0018] SAMHDl-pLNCX2對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系的抑制作用：
[0019] 將表達(dá)載體SAMHDl-pLNCX2、包裝質(zhì)粒pVPack-GP和包裝質(zhì)粒pVPack-VSVG利用 脂質(zhì)法轉(zhuǎn)染至人胚胎腎細(xì)胞HEK293T中；將表達(dá)載體pLNCX2、包裝質(zhì)粒pVPack-GP和包裝 質(zhì)粒pVPack-VSVG利用脂質(zhì)法轉(zhuǎn)染至人胚胎腎細(xì)胞HEK293T中為陰性對(duì)照；48小時(shí)后，分 別收取病毒上清，分別感染人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系U937 (2010年購(gòu)自ATCC:httD://Ww. atcc. org/Products/All/CRL-1593. 2. aspx),感染 48 小時(shí)后，用 G418 (lmg/mL)進(jìn)行篩選，7 天后得到U937-SAMHDl-pLNCX2細(xì)胞系以及U937-pLNCX2細(xì)胞系。
[0020] 對(duì)構(gòu)建好的U937-pLNCX2細(xì)胞系以及U937-SAMHDl-pLNCX2細(xì)胞系在0小時(shí)，24小 時(shí)，48小時(shí)，72小時(shí)和96小時(shí)分別進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，并統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)結(jié)果，對(duì)細(xì)胞的增值能力進(jìn) 行分析，結(jié)果顯示，穩(wěn)定表達(dá)SAMHDl蛋白的U937細(xì)胞系相比對(duì)照細(xì)胞增長(zhǎng)情況呈抑制細(xì)胞 增長(zhǎng)的趨勢(shì)（見(jiàn)圖1)。
【主權(quán)項(xiàng)】
I. SAMHD1-PLNCX2制備抗腫瘤藥物的用途。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了SAMHD1-pLNCX2制備抗腫瘤藥物的用途。實(shí)驗(yàn)證明，SAMHD1-pLNCX2表達(dá)的SAMHD1蛋白能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞系具有明顯的抑制增長(zhǎng)作用。
【IPC分類】A61P35-00, A61K48-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104587491
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410848583
【發(fā)明人】郭浩然, 于曉方, 魏偉
【申請(qǐng)人】天津大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年5月6日
【申請(qǐng)日】2014年12月30日