本發(fā)明屬于保健品領域，具體的涉及一種具有抗肺癌功能的含有米糠多酚的保健品。

背景技術：

肺癌是我國乃至世界發(fā)病率最高的惡性腫瘤,已成為人類癌癥主要死亡原因之一。肺癌的治療有外科治療、放射治療、化學療法和免疫療法等。大多數(shù)化療藥物,無論單獨還是聯(lián)合,對肺癌療效均不佳，且存在較大的副作用，因此,尋求新的且副作用小的化療藥物備受關注。從植物中開發(fā)抗腫瘤藥物,是國內外抗腫瘤新藥開發(fā)的一個熱點?，F(xiàn)代醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)多酚類化合物具有較強的抗腫瘤生物活性,體內外實驗研究均表明多酚類化合物對肺癌不同階段都具有明顯的抑制作用。中藥是祖國醫(yī)學用來防治疾病的有力武器，與化學合成藥物相比，中藥除了具有取材方便、價格低廉和毒副作用小等優(yōu)點外，更重要的是，在減輕臨床癥狀，提高生存質量，防止復發(fā)轉移，延長生存期，預防腫瘤，提高患者免疫力，增強放、化療敏感性，減輕放、化療不良反應等很多方面發(fā)揮著重要作用。因此隨著社會的進步，生產力的發(fā)展，現(xiàn)代人越來越把注意力從化合成藥轉向天然藥，希望從天然藥物中開發(fā)出更為安全有效的新藥以替代前者，從而減少藥源疾病的發(fā)生。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是以我國廣泛種植的禾本科糧食作物水稻的加工副產物米糠出發(fā)，制備米糠多酚和其他中藥提取物混合，提供一種抗肺癌的天然保健品。

本發(fā)明采用的技術方案是：

含有米糠多酚的抗肺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

米糠多酚50-70％，黃精提取物5-10％，夏枯草提取物5-10％，

青蒿提取物5-10％，桑白皮提取物5-10％，白花蛇舌草提取物5-10％。

所述含有米糠多酚的抗肺癌保健品，所述米糠多酚的制備方法如下：

1)纖維素酶酶解提?。毫弦罕劝促|量比1:10-1:30，將米糠粉末溶于水，纖維素酶加入量為120-180u/g，進行熱水浸提，控制溫度為50-60℃，ph范圍值5.0-6.0，酶解時間為1-2h，離心，過濾，得纖維素酶酶解提取液備用，沉淀物a繼續(xù)進行乙醇輔助提??；

2)乙醇輔助提?。毫弦罕劝促|量比1:10-1:30，將沉淀物a溶于乙醇，乙醇體積分數(shù)為50-70％，提取時間為2-3h，離心，過濾，得乙醇輔助提取液備用，沉淀物b繼續(xù)進行超聲浸提；

3)超聲浸提：料液比按質量比1:10-1:30，將沉淀物b溶于乙醇，乙醇體積分數(shù)為50-70％，超聲波功率為160-200w，超聲時間為20-30min，抽濾，得超聲浸提提取液備用；

4)合并纖維素酶酶解提取液、乙醇輔助提取液和超聲浸提提取液，將總提取液旋轉蒸發(fā)濃縮，濾紙初過濾后，用濾膜進行超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得到粗米糠多酚干粉。

所述含有米糠多酚的抗肺癌保健品，所述黃精提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的黃精固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取黃精固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得黃精提取物。

所述含有米糠多酚的抗肺癌保健品，所述夏枯草提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的夏枯草固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取夏枯草固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得夏枯草提取物。

所述的含有米糠多酚的抗肺癌保健品，所述青蒿提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的青蒿固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取青蒿固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得青蒿提取物。

所述的含有米糠多酚的抗肺癌保健品，所述的桑白皮提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的桑白皮固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取桑白皮固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得桑白皮提取物。

所述的含有米糠多酚的抗肺癌保健品，所述的白花蛇舌草提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的白花蛇舌草固體粉末；分別按質量比1:10比例稱取白花蛇舌草固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得白花蛇舌草提取物。

本發(fā)明的有益效果是：采用水稻加工副產物米糠粉末提取的多酚作為活性物質，制備抗肺癌保健品或藥品，來源廣泛，安全性高，生產成本低，而且服用和攜帶十分的方便，吸收快速且效果好，因此擁有十分廣闊市場前景。

本發(fā)明原料豐富，組方科學，易生產制備，成本低，效果好，創(chuàng)新之處是將米糠多酚作為抗肺癌的核心功能性原料，提出的用于治療肺癌的中藥組合物，配伍合理，形成具有抗肺癌的多酚、中草藥混合保健品。本發(fā)明通過對人體外肺癌細胞的實驗研究，發(fā)現(xiàn)米糠多酚的組合物對體外腫瘤細胞具有較好的抑制作用，對于肺癌的防治有著非常顯著的效果，不僅可以避免過多的化學合成藥物造成的毒副作用，也使得米糠多酚組合物具有更廣闊的發(fā)展前景。

附圖說明

圖1是米糠多酚組合物對人肺癌細胞株973細胞生長影響。

圖2是米糠多酚組合物抑制973細胞集落形成的集落試驗結果。

圖3是米糠多酚組合物抑制973細胞遷移試驗結果。

具體實施方式

實施例1含有米糠多酚的抗肺癌保健品

(一)米糠多酚的制備

采用纖維素酶酶解—乙醇浸提—超聲波分步法的工藝組合提取米糠多酚，步驟如下：

1)纖維素酶酶解：將米糠去除雜質，干燥，經粉碎機粉碎，過60目篩，制成米糠粉末。料液比按質量比1:20，將米糠粉末溶于水，纖維素酶加入量為150u/g，進行熱水浸提，控制溫度為50℃，ph5.0，酶解時間為2h，4000r/min進行離心10min，過濾，得纖維素酶酶解提取液備用，沉淀物a繼續(xù)進行乙醇浸提；

2)乙醇輔助提?。毫弦罕劝促|量比1：20，將沉淀物a溶于乙醇，乙醇體積分數(shù)為60％，提取時間為2h，離心，過濾，得乙醇輔助提取液備用，沉淀物b繼續(xù)進行超聲提??；

3)超聲浸提：料液比按質量比1:20，將沉淀物b溶于乙醇，乙醇體積分數(shù)為60％，超聲波功率為160w，超聲時間為30min，抽濾，得超聲浸提提取液備用；

4)合并纖維素酶酶解提取液、乙醇輔助提取液和超聲浸提提取液，提取液旋轉蒸發(fā)濃縮，濾紙初過濾后，用濾膜進行超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得到粗米糠多酚干粉。

(二)黃精提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的黃精固體粉末；按質量比1:10比例稱取黃精固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得黃精提取物。

(三)夏枯草提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的夏枯草固體粉末；按質量比1:10比例稱取夏枯草固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得夏枯草提取物。

(四)青蒿提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的青蒿固體粉末；按質量比1:10比例稱取青蒿固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得青蒿提取物。

(五)桑白皮提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的桑白皮固體粉末；按質量比1:10比例稱取桑白皮固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得桑白皮提取物。

(六)白花蛇舌草提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的白花蛇舌草固體粉末；按質量比1:10比例稱取白花蛇舌草固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無菌冷凍干燥，得白花蛇舌草提取物。

(七)含有米糠多酚的抗肺癌保健品組合物(簡稱米糠多酚組合物)

由以下原料按重量百分比組成：

米糠多酚60％,黃精提取物5％,夏枯草提取物10％，

青蒿提取物5％，桑白皮提取物10％，白花蛇舌草提取物10％。

(八)mtt實驗

本實施例使用人肺癌細胞株973細胞，采用mtt法檢測米糠多酚組合物體外抗癌活性，實驗步驟如下：

1)取對數(shù)生長期的肺癌細胞系(973)細胞接種于96孔板，過夜培養(yǎng)使其貼壁；

2)米糠多酚組合物的濃度(6.25、12.5和25mg/ml)；

3)在24h后加入mtt(5mg/ml)；

4)然后將96孔板放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h；

5)處理結束后，將mtt吸出，加入150μl的dmso，使甲瓚晶體完全溶解；

6)通過測量每個孔在490nm處的吸光度值來評估973細胞的增值；結果如圖1所示。

如圖1所示，不同濃度的米糠多酚組合物(6.25、12.5和25mg/ml)分別孵育973細胞24h，然后利用mtt比色法檢測。結果顯示，處理肺癌細胞一段時間后，濃度為12.5、25mg/ml的米糠多酚組合物均表現(xiàn)出顯著的抑制作用，濃度為25mg/ml組抑制率在24h后達到了79.5％，結果表明，米糠多酚組合物在體外可抑制人肺癌細胞生長。

(九)集落形成實驗

不同的處理組的肺癌細胞以每孔1000個細胞的密度接種于孔板上，培養(yǎng)過夜使其貼壁。分別加入12.5和25mg/ml的米糠多酚組合物培養(yǎng)10d，吸出培養(yǎng)基，每孔用pbs仔細洗兩次。使用甲醇將集落固定20min，然后用0.5％結晶紫染色15min，用清水沖洗并拍照，結果如圖2所示。

如圖2所示，米糠多酚組合物抑制肺癌細胞集落形成的集落試驗結果。米糠多酚組合物孵育973細胞一段時間后，集落數(shù)量與對照組相比明顯降低。24h后濃度為12.5mg/ml時能夠減少肺癌細胞形成的集落，濃度為25mg/ml時集落的減少極顯著。

(十)transwell實驗

腫瘤細胞遷移實驗采用直徑為6.5mm的transwell小室，其中內孔大小為8.0μm。將肺癌細胞血清饑餓24h，然后使用胰蛋白酶消化，計數(shù)，并用無血清1640培養(yǎng)基重懸。大約1×10⁵細胞被接種到上層小室，下層小室加入含有10％胎牛血清的1640培養(yǎng)基。細胞放在37℃培養(yǎng)24h。培養(yǎng)后，上層小室內表面的細胞被遷移。將穿過小室的細胞固定和染色并在顯微鏡下統(tǒng)計。每個實驗組做三個平行取其平均值，結果如圖3所示。

由圖3可見，腫瘤細胞的一個重要特點是他們具有入侵和遷移到遠端器官的能力，這是幾乎所有癌癥死亡的主要原因，利用transwell實驗分析米糠多酚組合物對973細胞的遷移影響。如圖3所示，與對照組相比，米糠多酚組合物處理組973細胞跨膜遷移的數(shù)量大幅下降，結果顯示米糠多酚組合物可以顯著抑制973細胞遷移。

實施例2含有米糠多酚的抗肺癌保健品

含有米糠多酚的抗肺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

米糠多酚70％，黃精提取物10％，夏枯草提取物5％，

青蒿提取物5％，桑白皮提取物5％,白花蛇舌草提取物5％。

實施例3含有米糠多酚的抗肺癌保健品

含有米糠多酚的抗肺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

米糠多酚50％,黃精提取物10％，夏枯草提取物10％，

青蒿提取物10％，桑白皮提取物10％,白花蛇舌草提取物10％。