專利名稱：紫杉化物衍生物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及紫杉化物(taxoid)衍生物的新用途。更確切地說(shuō)，它涉及一種治療表達(dá)多抗藥性P-糖蛋白的不同抗性細(xì)胞系的異常細(xì)胞增殖的方法。這類細(xì)胞是結(jié)腸癌細(xì)胞的代表。本發(fā)明涉及表達(dá)多抗藥性P-糖蛋白的不同抗性細(xì)胞系異常細(xì)胞增殖的治療，還涉及表達(dá)多抗藥性P-糖蛋白的不同抗性細(xì)胞系異常細(xì)胞增殖的治療，還涉及通過(guò)施用通式(Ⅰ)的化合物或其藥物上可接受的鹽或其溶劑合物而治療哺乳動(dòng)物(包括人)的結(jié)腸腫瘤 其中Z表示氫原子或下列通式的基 其中R1表示任選被一個(gè)或多個(gè)相同或不同的原子或基取代的苯甲?；鲈踊蚧x自鹵原子和含1～4個(gè)碳原子的烷基、含1～4個(gè)碳原子的烷氧基或三氟甲基，噻吩甲?；蜻秽柞；蛘呋鵕2-O-CO-，其中，R2表示-含1～8個(gè)碳原子的烷基，-含2～8個(gè)碳原子的烯基，-含3～8個(gè)碳原子的炔基，-含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，-含4～6個(gè)碳原子的環(huán)烯基或-含7～10個(gè)碳原子的二環(huán)烷基，這些基任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的取代基取代鹵原子和羥基，含1～4個(gè)碳原子的烷氧基，二烷基氨基(其中，每個(gè)烷基部分含1～4個(gè)碳原子)，哌啶子基或嗎啉代基，1-哌嗪基(任選在4位被含1～4個(gè)碳原子的烷基取代或被其中烷基部分含1～4個(gè)碳原子的苯基烷基取代)，含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，含4～6個(gè)碳原子的環(huán)烯基，苯基(任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的原子或基取代鹵原子和含1～4個(gè)碳原子的烷基或含1～4個(gè)碳原子的烷氧基)，氰基或羧基或烷氧基羰基(其中，烷基部分含1～4個(gè)碳原子)，-任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的原子或基取代的苯基或者α-或β-萘基鹵原子和含1～4個(gè)碳原子的烷基或含1～4個(gè)碳原子的烷氧基，或者-5元芳雜環(huán)基，優(yōu)選選自呋喃基和噻吩基，-或者含4～6個(gè)碳原子的飽和雜環(huán)基，任選被一個(gè)或多個(gè)含1～4個(gè)碳原子的烷基取代，R3表示含1～8個(gè)碳原子的無(wú)支鏈的或支鏈的烷基，含2～8個(gè)碳原子的無(wú)支鏈的或支鏈的烯基，含2～8個(gè)碳原子的無(wú)支鏈的或支鏈的炔基，含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的原子或基取代的苯基或者α-或β-萘基鹵原子和烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烷硫基、芳氧基、芳硫基、羥基、羥烷基、巰基、甲酰、?；?、酰氨基、芳酰氨基、烷氧基碳酰氨基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧羰基、甲氨酰、烷基甲氨酰、二烷基甲氨酰、氰基、硝基和三氟甲基，或者5元芳雜環(huán)，該芳雜環(huán)包含一個(gè)或多個(gè)選自氮原子、氧原子和硫原子的相同或不同的雜原子，并且任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的相同或不同的取代基取代鹵原子和烷基、芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基碳酰氨基、酰基、芳基羰基、氰基、羧基、甲氨酰、烷基甲氨酰、二烷基甲氨酰或烷氧羰基，條件是在苯基、α-或β-萘基和芳雜環(huán)基的取代基中，烷基和其它基的烷基部分包含1～4個(gè)碳原子，并且烯基和炔基包含2～8個(gè)碳原子，而且芳基是苯基或者α-或β-萘基，R4表示在無(wú)支鏈或支鏈中含1～6個(gè)碳原子的烷氧基，在無(wú)支鏈或支鏈中含3～6個(gè)碳原子的烯氧基，在無(wú)支鏈或支鏈中含3～6個(gè)碳原子的炔氧基，含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷氧基或含4～6個(gè)碳原子的環(huán)烯氧基，這些基任選被一個(gè)或多個(gè)鹵原子或被如下的基取代含1～4個(gè)碳原子的烷氧基，含1～4個(gè)碳原子的烷硫基或羧基，烷氧羰基(其中，烷基部分含1～4個(gè)碳原子)，氰基或甲氨?；騈-烷基甲氨?；騈,N-二烷基甲氨?；?其中，每個(gè)烷基部分含1～4個(gè)碳原子)；或與它所連接的氮原子形成一個(gè)飽和5元或6元雜環(huán)基，該雜環(huán)基任選含選自氧、硫或氮原子的第二個(gè)雜原子，任選被含1～4個(gè)碳原子的烷基，或者苯基或苯基烷基(其中，烷基部分含1～4個(gè)碳原子)取代，R5表示在無(wú)支鏈或支鏈中含1～6個(gè)碳原子的烷氧基，含3～6個(gè)碳原子的烯氧基，含3～6個(gè)碳原子的炔氧基，
含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷氧基或含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烯氧基，這些基任選被一個(gè)或多個(gè)鹵原子或被如下的基取代含1～4個(gè)碳原子的烷氧基，含2～4個(gè)碳原子的烷硫基或羧基，烷氧羰基(其中，烷基部分含1～4個(gè)碳原子)，氰基或甲氨酰基或N-烷基甲氨?；騈,N-二烷基甲氨?；?其中，每個(gè)烷基部分含1～4個(gè)碳原子)；或與它所連接的氮原子形成一個(gè)飽和5元或6元雜環(huán)基，該雜環(huán)基任選含選自氧、硫或氮原子的第二個(gè)雜原子，任選被含1～4個(gè)碳原子的烷基，或者苯基或苯基烷基(其中，烷基部分含1～4個(gè)碳原子)取代。
優(yōu)選地，可由R3表示的芳基是任選被選自如下的一個(gè)或多個(gè)原子或基取代的苯基或者α-或β-萘基鹵原子(氟、氯、溴、碘)和烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烷硫基、芳氧基、芳硫基、羥基、羥烷基、巰基、甲酰、?；?、酰氨基、芳酰氨基、烷氧基碳酰氨基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧羰基、甲氨酰、二烷基甲氨酰、氰基、硝基和三氟甲基，條件是烷基和其它基的烷基部分包含1～4個(gè)碳原子，烯基和炔基包含2～8個(gè)碳原子，并且芳基是苯基或者α-或β-萘基。
優(yōu)選地，可由R3表示的雜環(huán)基是包含一個(gè)或多個(gè)選自氮、氧和硫原子的相同或不同原子的5元芳雜環(huán)基，該芳雜環(huán)基任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的相同或不同的取代基取代鹵原子(氟、氯、溴、碘)和含1～4個(gè)碳原子的烷基、含6～10個(gè)碳原子的芳基、含1～4個(gè)碳原子的烷氧基、含6～10個(gè)碳原子的芳氧基、氨基、含1～4個(gè)碳原子的烷基氨基、二烷基氨基(其中，每個(gè)烷基部分含1～4個(gè)碳原子)、酰氨基(其中，?；糠趾?～4個(gè)碳原子)、含1～4個(gè)碳原子的烷氧基碳酰氨基、含1～4個(gè)碳原子的酰基、芳基羰基(其中，芳基部分含6～10個(gè)碳原子)、氰基、羧基或甲氨酰基、烷基甲氨酰基(其中，烷基部分含1～4個(gè)碳原子)、二烷基甲氨?；?其中，每個(gè)烷基部分含1～4個(gè)碳原子)或烷氧羰基(其中，烷氧基部分含1～4個(gè)碳原子)。
優(yōu)選地，基R4和R5(它們可能相同或不同)表示含1～6個(gè)碳原子的無(wú)支鏈或支鏈烷氧基，任選被下列基取代甲氧基、乙氧基、乙硫基、羧基、甲氧羰基、乙氧羰基、氰基、甲氨酰、N-甲基甲氨酰、N-乙基甲氨酰、N,N-二甲基甲氨酰、N,N-二乙基甲氨酰、N-吡咯烷羰基或N-哌啶子基羰基。
更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及通式(Ⅰ)的產(chǎn)品，其中，Z表示氫原子或通式(Ⅱ)的基，其中，R1表示苯甲酰基或基R2-O-CO-，其中，R2表示叔丁基，并且，R3表示含1～6個(gè)碳原子的烷基，含2～6個(gè)碳原子的烯基，含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的相同或不同原子或基取代的苯基鹵原子(氟、氯)和烷基(甲基)，烷氧基(甲氧基)，二烷基氨基(二甲氨基)，酰氨基(乙酰氨基)，烷氧基碳酰氨基(叔丁氧基碳酰氨基)或三氟甲基；或者2-或3-呋喃基，2-或3-噻吩基或者2-、4-或5-噻唑基，并且R4和R5(它們可能相同或不同)各自表示含1～6個(gè)碳原子的無(wú)支鏈或支鏈烷氧基。
更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及通式(Ⅰ)的產(chǎn)品，其中，Z表示氫原子或通式(Ⅱ)的基，其中，R1表示苯甲?；蚧鵕2-O-CO-，其中，R2表示叔丁基，并且，R3表示異丁基、異丁烯基、丁烯基、環(huán)己基、苯基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基，并且R4和R5(它們可能相同或不同)各自表示甲氧基、乙氧基或丙氧基。
甚至更特別有意義的是通式(Ⅰ)的產(chǎn)品，其中，R3表示苯基，并且R1表示叔丁氧羰基，R4和R5(它們可能相同或不同)表示甲氧基、乙氧基或丙氧基。
在進(jìn)一步更高的意義上，本發(fā)明涉及式(Ⅰa)的4α-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β,20-環(huán)氧-1β-羥基-7β,10β-二甲氧基-9-氧代-11-紫杉烯-13α-基(11-taxen-13α-yl)(2R,3S)-3-叔丁氧基碳酰氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯。
從專利W096/30355已知通過(guò)兩個(gè)過(guò)程制備本發(fā)明的衍生物。按第一個(gè)多步過(guò)程，從下式的10-脫乙酰漿果赤霉素Ⅲ開始 在7位和13位選擇性地保護(hù)它，例如呈甲硅烷基二醚的形式，接著，通過(guò)如下通式的產(chǎn)品的作用R-X (Ⅳ)其中，R表示如上定義的基，X表示活性酯殘基(例如硫酸酯或磺酸酯殘基)或者鹵原子，從而給出在10位具有單元-OR并且在7位和13位具有甲硅烷基的產(chǎn)物。然后，用氫原子替代甲硅烷基保護(hù)基而給出在10位仍具有基-OR并且在7位和13位具有OH基的化合物。后面的衍生物通過(guò)與式Ⅳ的衍生物反應(yīng)在7位被選擇性地醚化而給出式(Ⅰ)的衍生物(其中，Z等于氫)。
最后的步驟包括按本來(lái)已知的方法在13位酯化式(Ⅰa)的衍生物(其中，Z表示氫)，即，在β-內(nèi)酰胺的存在下，例如，按專利EP617,018中描述的方法；或者在噁唑烷的存在下，例如，在上述專利WO96/30355中描述的那樣。在7位和10位的保護(hù)基去保護(hù)后，獲得式(Ⅰa)的酯(其中，Z不是氫，而R表示氫)。下一步包括通過(guò)從式(Ⅴ)的亞砜和乙酸酐就地形成的試劑的作用在7位和10位同時(shí)反應(yīng)(Pummerer型反應(yīng))，R-SO-R (Ⅴ)其中，R具有上述相同的含義，在7位和10位形成烷硫基烷氧基型中間體。
最后的步驟(它能獲得所需的式(Ⅰa)化合物)是通過(guò)活性阮內(nèi)鎳的作用在前面獲得的中間體化合物上進(jìn)行的。
通常，從通式(Ⅴ)的亞砜(優(yōu)選為二甲亞砜)和乙酸酐就地形成的試劑的作用是在乙酸或乙酸衍生物(例如鹵代乙酸)的存在下、在0和50℃之間的溫度下進(jìn)行的。
通常，活性阮內(nèi)鎳在脂族醇或醚存在下的作用是在-10和60℃之間的溫度下進(jìn)行的。
在FR97-14442申請(qǐng)中描述了又一種方法。該發(fā)明能在一步中實(shí)現(xiàn)10-脫乙酰漿果赤霉素或其在13位酯化的式(Ⅵ)衍生物的7位和10位上兩個(gè)羥基官能基的直接的、選擇性的和同時(shí)的烷基化 其中，A表示氫或下式(Ⅱa)的側(cè)鏈 其中，G表示羥基官能的保護(hù)基，R1和R3具有與式(Ⅱ)中相同的含義或者式(Ⅰd)的噁唑烷單元 其中，R1和R3具有與式(Ⅱ)中相同的含義，Ra和Rb(它們可能相同或不同)表示氫或烷基、芳基、鹵、烷氧基、芳烷基、烷氧芳基、鹵代烷基、鹵代芳基，這些取代基有可能任選形成4元到7元環(huán)。
優(yōu)選應(yīng)用10-脫乙酰漿果赤霉素[即，式(Ⅲ)的產(chǎn)品]作原料，它能使顯著節(jié)約操作方法的費(fèi)用，此外，避免舊方法中必要的中間體保護(hù)和去保護(hù)步驟。
在保護(hù)式(Ⅱa)的羥基官能的基G中，通常優(yōu)選選擇描述于例如下列專著中的所有保護(hù)基Greene和Wuts，“有機(jī)合成中的保護(hù)基”(Protective Groups in Organic Synthesis),1991,John Wiley &Sons，以及MacOmie，“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基”(Protective Groups inOrganic Chemistry),1975,Plenum Press，它們?cè)诤苌俳到饣蚋静唤到夥肿拥钠渌糠值臈l件下被去保護(hù)，例如●醚，優(yōu)選是例如下列醚甲氧基甲基醚、1-乙氧基乙基醚、芐氧基甲基醚、對(duì)-甲氧基芐氧基甲基醚、任選被一個(gè)或多個(gè)基(例如甲氧基、氯、硝基)取代的芐基醚、1-甲基-1-甲氧基乙基醚、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基醚、四氫吡喃基醚和甲硅烷基醚(例如三烷基甲硅烷基醚)，●碳酸酯(例如三氯乙基碳酸酯)。
更具體地說(shuō)，通式(Ⅱb)的基Ra和Rb選自專利WO94/07878中描述的那些，并且所述衍生物尤其更優(yōu)選的是那些(其中，Ra是氫，Rb是對(duì)-甲氧基苯基)。
所述烷基化劑選自●烷基鹵，優(yōu)選選自烷基碘(RI)●烷基硫酸酯(例如硫酸二甲酯)●氧鎓，例如三烷基氧鎓硼酸鹽，特別是三甲基氧鎓四氟硼酸鹽(Me3OBF4)。
優(yōu)選應(yīng)用甲基碘。
在陰離子化劑(例如一種或多種強(qiáng)堿)存在下，在無(wú)水介質(zhì)中應(yīng)用烷基化劑。
可在無(wú)水介質(zhì)中應(yīng)用的堿中，下列堿值得一提●堿金屬氫化物，例如氫化鈉或氫化鉀●堿金屬醇鹽，例如叔丁醇鉀●氧化銀Ag2O●1,8-雙(二甲氨基)萘●一金屬堿或二金屬堿混合物，例如下列出版物中描述的那些P.Caubère，化學(xué)評(píng)論(Chem.Rev.),1993,93,2317～2334或者M(jìn).Schlosser，現(xiàn)代合成方法(Mod.Synth.Methods)(1992),6,227～271；尤其烷基鋰/叔丁醇?jí)A金屬鹽或者氨基堿金屬/叔丁醇?jí)A金屬鹽組合是優(yōu)選的。這兩種堿之一可“就地”生成。
在烷基化劑和陰離子化劑的全部可能的組合中，優(yōu)選在氫化鉀存在下應(yīng)用甲基碘。
反應(yīng)優(yōu)選在有機(jī)介質(zhì)(它在反應(yīng)條件下呈惰性)中進(jìn)行。在溶劑中，優(yōu)選應(yīng)用●醚，例如四氫呋喃或二甲氧基乙烷●當(dāng)應(yīng)用氧化銀時(shí)，優(yōu)選應(yīng)用極性非質(zhì)子溶劑(例如二甲基甲酰胺)，或者芳族溶劑(例如甲苯)●當(dāng)應(yīng)用1,8-雙(二甲氨基)萘?xí)r，優(yōu)選應(yīng)用烷基酯(例如乙酸乙酯)。
為了更好地實(shí)施本發(fā)明，優(yōu)選應(yīng)用大于2、更優(yōu)選應(yīng)用2和20之間的陰離子化劑與底物的摩爾比。
還優(yōu)選應(yīng)用大于2、更優(yōu)選應(yīng)用2和40之間的烷基化劑與底物的摩爾比。
優(yōu)選應(yīng)用-30℃和80℃之間的反應(yīng)溫度。
反應(yīng)時(shí)間有利地在數(shù)小時(shí)和48小時(shí)的范圍內(nèi)，這取決于選定的試劑。
在烷基化步驟之后，當(dāng)后者是在10-脫乙酰漿果赤霉素上進(jìn)行時(shí)，該操作然后按已知方式轉(zhuǎn)到酯化步驟，例如按上述專利EP617,018或WO96/30355中描述的方法。
例如，根據(jù)第一種3步法，該操作首先始于10-脫乙酰漿果赤霉素的二烷基化，即，在強(qiáng)堿存在下應(yīng)用烷基化劑進(jìn)行烷基化，在第二步中，在選自叔胺和金屬堿(它們保證在13位形成醇鹽)的活化劑存在下，在13位將7位和10位二醚化了的10-脫乙酰漿果赤霉素與適當(dāng)保護(hù)的β-內(nèi)酰胺偶聯(lián)。然后，通過(guò)無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸的作用實(shí)現(xiàn)側(cè)鏈的去保護(hù)。
例如，根據(jù)第二種3步法，該操作首先始于10-脫乙酰漿果赤霉素的二烷基化，即，在強(qiáng)堿存在下應(yīng)用烷基化劑進(jìn)行烷基化，在第二步中，在活化劑(例如二烷基氨基吡啶)存在下，在偶聯(lián)劑(例如二酰亞胺)存在下，在13位將7位和10位二醚化了的10-脫乙酰漿果赤霉素與噁唑烷偶聯(lián)。通過(guò)無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸的作用實(shí)現(xiàn)噁唑烷的裂開。
根據(jù)第三種方法，該操作始于在7位和10位適當(dāng)保護(hù)的漿果赤霉素的13位酯化，即，在上述兩種方法中所述偶聯(lián)劑和/或活化劑存在下與β-內(nèi)酰胺或噁唑烷反應(yīng)。在7位和10位去保護(hù)后，在強(qiáng)堿存在下，通過(guò)烷基化劑進(jìn)行7位和10位的二醚化。然后，通過(guò)無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸的作用實(shí)現(xiàn)側(cè)鏈的去保護(hù)。
通式(Ⅰ)的產(chǎn)品具有顯著的生物特性。
在體內(nèi)，證實(shí)了通式(Ⅰ)的產(chǎn)品在移植有結(jié)腸腺癌C51或C38的小鼠中顯示活性(在1～30mg/kg的劑量下)，并且對(duì)其它液態(tài)瘤或?qū)嶓w瘤顯示活性。
式Ⅰ的化合物具有抗腫瘤特性，更具體地說(shuō)，具有抗腫瘤(它們抗Taxol和Taxotere)的活性。這樣的腫瘤例如包括結(jié)腸瘤，它們高量表達(dá)多抗藥性P-糖蛋白?！岸嗫顾幮浴笔且粋€(gè)通常的術(shù)語(yǔ)，它涉及腫瘤對(duì)具有不同結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制的各種化合物的抗性。通常已知紫杉化物被實(shí)驗(yàn)瘤(例如P388/DOX)高度識(shí)別，P388/DOX是針對(duì)阿霉素(DOX)抗性選定的P388鼠白血病細(xì)胞系，它表達(dá)P-糖蛋白。本發(fā)明的化合物更少被P388/DOX識(shí)別。更具體地說(shuō)，所述化合物比Taxotere更小程度地被識(shí)別。
式(Ⅰ)的化合物主要用于制備用來(lái)治療表達(dá)多抗藥性P-糖蛋白的細(xì)胞系的異常細(xì)胞增殖的藥物。式Ⅰ的化合物主要被用于制備治療結(jié)腸癌的藥物。
所述化合物，主要是式(Ⅰ)的化合物(其中，R4和R5各自是甲氧基)具有活性比其它已知紫杉化物化合物(例如Taxol或Taxotere，用于治療表達(dá)多抗藥性P-糖蛋白的癌細(xì)胞系)高的特性。它還具有抗(抗阿霉素或抗長(zhǎng)春新堿的)腫瘤細(xì)胞的活性。
式(Ⅰ)的產(chǎn)品可與至少其它的治療處理同時(shí)應(yīng)用。更優(yōu)選與包括如下的治療處理結(jié)合應(yīng)用抗腫瘤藥、單克隆抗體、免疫療法、放射療法或生物應(yīng)答調(diào)節(jié)物。
式(Ⅰ)的產(chǎn)品優(yōu)選通過(guò)腸胃外施藥法(例如靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)或皮下施藥)被施用。
應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)方法，與連續(xù)暴露4天后的docetaxel相比較，檢測(cè)了產(chǎn)品Ⅰa對(duì)表達(dá)多抗藥性P-糖蛋白的不同抗性細(xì)胞系的細(xì)胞毒性。
通過(guò)將關(guān)于抗性細(xì)胞獲得的IC50值除以關(guān)于敏感細(xì)胞獲得的IC50值計(jì)算了抗性因子。
發(fā)現(xiàn)式Ⅰa的產(chǎn)品對(duì)已被評(píng)價(jià)的全部抗性腫瘤細(xì)胞系比docetaxel活性更大。有趣的是，發(fā)現(xiàn)式Ⅰa的產(chǎn)品在P388/TXT、P388/VCR、HL60/TAX和Calc18/TXT細(xì)胞系中具有極小的交差抗性(抗性因子1.8～4.3)，所述細(xì)胞系對(duì)docetaxel呈適中交差抗性(抗性因子4.8～23.5)，所以，它們可以更能代表臨床情況。
此外，發(fā)現(xiàn)式Ⅰa的產(chǎn)品在兩種最抗docetaxel的細(xì)胞系KB V1和P388/DOX(抗性因子59和50)中交差抗性急劇降低了(抗性因子7.6和10)。
還對(duì)鼠P388/CPT5細(xì)胞系(已獲得對(duì)喜樹堿的抗性，不表達(dá)P-糖蛋白)評(píng)價(jià)了式Ⅰa的產(chǎn)品。發(fā)現(xiàn)與喜樹堿(抗性因子286)相比，式Ⅰa的產(chǎn)品和docetaxel的交差抗性急劇降低了(抗性因子4.8和10.5)。該結(jié)果啟示式Ⅰa的產(chǎn)品在獲得了對(duì)喜樹堿衍生物的抗性的腫瘤治療方面的潛在應(yīng)用。表0.1式Ⅰa的產(chǎn)品和docetaxel對(duì)表達(dá)P-糖蛋白的抗性細(xì)胞系的相對(duì)抗性
*應(yīng)用人mdr1基因作為探針從RNA印跡試驗(yàn)獲得的相對(duì)表達(dá)。CaCo2對(duì)人結(jié)腸腺癌CaCo-2細(xì)胞系(ATCC HTB37)(證實(shí)了它表現(xiàn)由mdr1基因編碼的P-糖蛋白的表達(dá)基礎(chǔ)水平)檢測(cè)了式Ⅰa的產(chǎn)品和docetaxel的抗增殖特性。應(yīng)用了方法學(xué)，即，96孔板，藥物的接觸時(shí)間(96小時(shí))和活細(xì)胞的中性紅著色。以IC50表示結(jié)果，歸納于下表中。式Ⅰa的產(chǎn)品和docetaxel對(duì)CaCo-2細(xì)胞系的體外生長(zhǎng)抑制效果
*括號(hào)內(nèi)的值實(shí)驗(yàn)數(shù)式Ⅰa的產(chǎn)品對(duì)CaCo-2細(xì)胞呈細(xì)胞毒性，IC50值包括于關(guān)于測(cè)試的其它人細(xì)胞系[即，HL60、Calc18和KB(見(jiàn)前一節(jié))]描述的范圍內(nèi)。反之，docetaxel對(duì)CaCo-2細(xì)胞表現(xiàn)更高的IC50，相當(dāng)于關(guān)于式Ⅰa的產(chǎn)品觀察到的值的4.9倍。因此，式Ⅰa的產(chǎn)品比docetaxel對(duì)CaCo-2細(xì)胞更高的抗增殖活性與通過(guò)該細(xì)胞系本身表達(dá)的P-糖蛋白識(shí)別式Ⅰa產(chǎn)品的能力比識(shí)別docetaxel的能力更低是一致的。
體內(nèi)抗腫瘤活性應(yīng)用式Ⅰa的產(chǎn)品在乙醇∶聚山梨酯80(50∶50,v/v)中的臨床前標(biāo)準(zhǔn)配方進(jìn)行了體內(nèi)施藥計(jì)劃和抗腫瘤效能研究。稀釋后，最終濃度是5％乙醇，5％聚山梨酯，90％葡萄糖-5％于水中。
接著，設(shè)計(jì)了臨床配方，其中，將式Ⅰa的產(chǎn)品溶于聚山梨酯80。稀釋后，最終聚山梨酯80濃度是5％。在隨后的歸納中，除非另外說(shuō)明，都應(yīng)用臨床前標(biāo)準(zhǔn)配方進(jìn)行了體內(nèi)研究。
通過(guò)靜脈內(nèi)途徑(i.v.)施用式Ⅰa的產(chǎn)品。按標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行了試驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析。
用于評(píng)定皮下植入的實(shí)體瘤的活性終點(diǎn)是-腫瘤生長(zhǎng)抑制(T/C)，其中，T和C分別是處理組和對(duì)比組平均腫瘤重量(以mg表示)。按NCI標(biāo)準(zhǔn)，T/C＞42％,-，是不活潑的，T/C≤42％,+，是活性的最低水平。T/C＜10％,++，被認(rèn)為是高抗腫瘤活性水平，它證明有進(jìn)一步的進(jìn)步(DN-2水平)。
在高抗腫瘤活性的情況下，還應(yīng)用了如下兩個(gè)終點(diǎn)-腫瘤生長(zhǎng)延遲，T-C，其中，T和C是處理組和對(duì)比組腫瘤達(dá)到預(yù)定尺寸(750～1500mg)所需的平均時(shí)間(以天表示)。-log(殺傷的細(xì)胞)，它是通過(guò)處理殺傷的細(xì)胞總數(shù)的對(duì)數(shù)?？砂碨outhern Research Institute(SRI)將該值轉(zhuǎn)化成人為評(píng)定的活性log(殺傷的細(xì)胞總數(shù))＜0.7=-不活潑；0.7～1.2=+；1.3～1.9=++；2.0～2.8=+++；＞2.8=++++高度活潑。
至于晚期腫瘤，消退可以是部分的(腫瘤質(zhì)量減輕50％以上)或者是完全的。完全消退包括于部分消退中。
用于估測(cè)在腹膜內(nèi)植入的白血病中的活性的終點(diǎn)是宿主壽命增大的百分?jǐn)?shù)(％ILS)(相對(duì)于死亡的平均天數(shù)計(jì)算的)。
關(guān)于活性的NCI判據(jù)如下-P388高度活潑，++≥75％ILS；活潑，+27～74％ILS；不活潑，-＜27％ILS。
毒性基于藥物致死(≥10％)或重量損失最低點(diǎn)＞20％。
需要時(shí)，將docetaxel用于對(duì)比試驗(yàn)。結(jié)腸瘤結(jié)腸51在第4、6、8天靜脈內(nèi)注射式Ⅰa的產(chǎn)品。在HNTD(9.3mg/kg/注射)下，發(fā)現(xiàn)高度活潑，0％T/C和2.6 log(殺傷的細(xì)胞)。更低的劑量給出2.2 log(殺傷的細(xì)胞)。還發(fā)現(xiàn)docetaxel高度活潑，3.1 log(殺傷的細(xì)胞)。評(píng)價(jià)對(duì)BALB/c雌性小鼠靜脈內(nèi)注射式Ⅰa產(chǎn)品抗結(jié)腸腺癌C51的效果
對(duì)比組中腫瘤達(dá)到750mg的平均時(shí)間=15.1天。應(yīng)用的縮寫HNTD=最高無(wú)毒劑量，bwl=體重?fù)p失，DD=藥物致死，bwl=體重?fù)p失。晚期結(jié)腸38對(duì)具有200～400mg腫瘤的小鼠靜脈內(nèi)注射式Ⅰa的產(chǎn)品。在HNTD(20mg/kg/注射)下，發(fā)現(xiàn)高度活潑，產(chǎn)生5/5完全消退，所有小鼠在第139天都成為無(wú)腫瘤的存活者。更低的劑量(12.4mg/kg/注射)引起相同的完全消退數(shù)目和80％無(wú)腫瘤的存活者。相比之下，在相同試驗(yàn)中，docetaxel在HNTD下只產(chǎn)生40％部分消退。評(píng)價(jià)對(duì)B6D2F1雌性小鼠靜脈內(nèi)注射式Ⅰa產(chǎn)品抗晚期結(jié)腸腺癌C38的效果
對(duì)比組中腫瘤達(dá)到1000mg的平均時(shí)間=18.5天。應(yīng)用的縮寫HNTD=最高無(wú)毒劑量，bwl=體重?fù)p失，DD=藥物致死，TFS=第139天觀察到的無(wú)腫瘤存活者。
權(quán)利要求
1．式(Ⅰ)的化合物在制備用于治療表達(dá)多抗藥性P-糖蛋白的細(xì)胞系異常細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用，所述應(yīng)用包括給哺乳動(dòng)物施用有效量式(Ⅰ)的化合物或藥物上可接受的鹽或溶劑合物 其中Z表示氫原子或如下通式的基 其中R1表示任選被一個(gè)或多個(gè)相同或不同的原子或基取代的苯甲?；?，所述原子或基選自鹵原子和含1～4個(gè)碳原子的烷基、含1～4個(gè)碳原子的烷氧基或三氟甲基，噻吩甲?；蜻秽柞；蛘呋鵕2-O-CO-，其中，R2表示含1～8個(gè)碳原子的烷基，含2～8個(gè)碳原子的烯基，含3～8個(gè)碳原子的炔基，含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，含4～6個(gè)碳原子的環(huán)烯基或含7～10個(gè)碳原子的二環(huán)烷基，這些基任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的取代基取代鹵原子和羥基，含1～4個(gè)碳原子的烷氧基，其中每個(gè)烷基部分含1～4個(gè)碳原子的二烷基氨基，哌啶子基或嗎啉代基，1-哌嗪基(任選在4位被含1～4個(gè)碳原子的烷基取代或被其中烷基部分含1～4個(gè)碳原子的苯基烷基取代)，含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，含4～6個(gè)碳原子的環(huán)烯基，苯基(任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的原子或基取代鹵原子和含1～4個(gè)碳原子的烷基或含1～4個(gè)碳原子的烷氧基)，氰基或羧基或其中烷基部分含1～4個(gè)碳原子的烷氧基羰基，-任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的原子或基取代的苯基或者α-或β-萘基鹵原子和含1～4個(gè)碳原子的烷基或含1～4個(gè)碳原子的烷氧基，或者-5元芳雜環(huán)基，優(yōu)選選自呋喃基和噻吩基，-或者含4～6個(gè)碳原子的飽和雜環(huán)基，任選被一個(gè)或多個(gè)含1～4個(gè)碳原子的烷基取代，R3表示含1～8個(gè)碳原子的無(wú)支鏈的或支鏈的烷基，含2～8個(gè)碳原子的無(wú)支鏈的或支鏈的烯基，含2～8個(gè)碳原子的無(wú)支鏈的或支鏈的炔基，含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的原子或基取代的苯基或者α-或β-萘基鹵原子和烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烷硫基、芳氧基、芳硫基、羥基、羥烷基、巰基、甲酰、?；?、酰氨基、芳酰氨基、烷氧基羰基氨基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧羰基、甲氨酰、烷基甲氨酰、二烷基甲氨酰、氰基、硝基和三氟甲基，或者5元芳雜環(huán)，該芳雜環(huán)包含一個(gè)或多個(gè)選自氮、氧和硫原子的相同或不同的雜原子，并且任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的相同或不同的取代基取代鹵原子和烷基、芳基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基羰基氨基、?；⒎蓟驶?、氰基、羧基、甲氨酰、烷基甲氨酰、二烷基甲氨?；蛲檠豸驶?，條件是在苯基、α-或β-萘基和芳雜環(huán)基的取代基中，烷基和其它基的烷基部分包含1～4個(gè)碳原子，并且烯基和炔基包含2～8個(gè)碳原子，而且芳基是苯基或者I-或9-萘基，R4表示在無(wú)支鏈或支鏈中含1～6個(gè)碳原子的烷氧基，在無(wú)支鏈或支鏈中含3～6個(gè)碳原子的烯氧基，在無(wú)支鏈或支鏈中含3～6個(gè)碳原子的炔氧基，含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷氧基或含4～6個(gè)碳原子的環(huán)烯氧基，這些基任選被一個(gè)或多個(gè)鹵原子或被如下的基取代含1～4個(gè)碳原子的烷氧基，含1～4個(gè)碳原子的烷硫基或羧基，其中烷基部分含1～4個(gè)碳原子的烷氧羰基，氰基或甲氨?；騈-烷基甲氨酰基或其中每個(gè)烷基部分含1～4個(gè)碳原子的N,N-二烷基甲氨?；?；或者與它所連接的氮原子形成一個(gè)飽和5元或6元雜環(huán)基，該雜環(huán)基任選含選自氧、硫或氮原子的第二個(gè)雜原子，任選被含1～4個(gè)碳原子的烷基，或者苯基或其中烷基部分含1～4個(gè)碳原子的苯基烷基取代，R5表示在無(wú)支鏈或支鏈中含1～6個(gè)碳原子的烷氧基，含3～6個(gè)碳原子的烯氧基，含3～6個(gè)碳原子的炔氧基，含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷氧基或含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烯氧基，這些基任選被一個(gè)或多個(gè)鹵原子或被如下的基取代含1～4個(gè)碳原子的烷氧基，含2～4個(gè)碳原子的烷硫基或羧基，其中烷基部分含1～4個(gè)碳原子的烷氧羰基，氰基或甲氨?；騈-烷基甲氨酰基或其中每個(gè)烷基部分含1～4個(gè)碳原子的N,N-二烷基甲氨?；蛘吲c它所連接的氮原子形成一個(gè)飽和5元或6元雜環(huán)基，該雜環(huán)基任選含選自氧、硫或氮原子的第二個(gè)雜原子，任選被含1～4個(gè)碳原子的烷基，或者苯基或其中烷基部分含1～4個(gè)碳原子的苯基烷基取代。
2．權(quán)利要求1的化合物的應(yīng)用，其中，Z表示氫原子或通式(Ⅱ)的基，其中，R1表示苯甲?；蚧鵕2-O-CO-，其中，R2表示叔丁基，并且，R3表示含1～6個(gè)碳原子的烷基，含2～6個(gè)碳原子的烯基，含3～6個(gè)碳原子的環(huán)烷基，任選被一個(gè)或多個(gè)選自如下的相同或不同原子或基取代的苯基鹵原子和烷基，烷氧基，二烷基氨基，酰氨基，烷氧基羰基氨基或三氟甲基；或者2-或3-呋喃基，2-或3-噻吩基或者2-、4-或5-噻唑基，并且R4和R5，它們可能相同或不同，各自表示含1～6個(gè)碳原子的無(wú)支鏈或支鏈烷氧基。
3．權(quán)利要求2的化合物的應(yīng)用，其中，Z表示氫原子或通式(Ⅱ)的基，其中，R1表示苯甲?；蚧鵕2-O-CO-，其中，R2表示叔丁基，并且，R3表示異丁基、異丁烯基、丁烯基、環(huán)己基、苯基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基，并且R4和R5，它們可能相同或不同，各自表示甲氧基、乙氧基或丙氧基。
4．4α-乙酸基-2α-苯甲酸基-5β,20-環(huán)氧-1β-羥基-7β,10β-二甲氧基-9-氧代-11-紫杉烯-13α-基(2R,3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯在制備用于治療表達(dá)多抗藥性P-糖蛋白的細(xì)胞系的異常細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用。
5．權(quán)利要求1～4的化合物在制備可用于治療結(jié)腸癌的藥物中的應(yīng)用。
6．權(quán)利要求5的化合物的應(yīng)用，其中，該應(yīng)用是與至少其它治療處理同時(shí)進(jìn)行的。
7．權(quán)利要求6的化合物的應(yīng)用，其中，其它治療處理包括抗腫瘤藥、單克隆抗體、免疫療法、放射療法或生物應(yīng)答調(diào)節(jié)物。
8．權(quán)利要求1的化合物的應(yīng)用，其中，所述藥物通過(guò)腸胃外施藥法被施用。
9．權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)的化合物的應(yīng)用，其中，式(Ⅰ)的化合物通過(guò)靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)或皮下施藥法被施用。
全文摘要
本發(fā)明涉及紫杉化物衍生物的新用途。更確切地說(shuō),它涉及一種治療表達(dá)多抗藥性P－糖蛋白的不同抗性細(xì)胞系的異常細(xì)胞增殖的方法。這類細(xì)胞是結(jié)腸癌細(xì)胞的代表。本發(fā)明的產(chǎn)品還可用于治療哺乳動(dòng)物(包括人)的結(jié)腸癌。優(yōu)選的化合物是:4α－乙酸基－2α－苯甲酸基－5β,20－環(huán)氧－1β－羥基－7β－二甲氧基－9－氧代－11－紫杉烯－13α－基(2R,3S)－3－叔丁氧基碳酰氨基－2－羥基－3－苯基丙酸酯。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1313764SQ99809900
公開日2001年9月19日 申請(qǐng)日期1999年8月18日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月20日
發(fā)明者M－C·比瑟里, P·維里格諾德, S·羅伯茨, C·布雷利 申請(qǐng)人:阿文蒂斯藥物股份有限公司