尿液中巰基類(lèi)化合物檢測(cè)試劑盒及制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的尿液檢測(cè)試劑，具體設(shè)及一種尿液中琉基類(lèi)化合物檢 測(cè)試劑盒及制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 在全世界危害女性健康的惡性腫瘤中，宮頸癌是全球女性中僅次于乳腺癌的最常 見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一。在一些發(fā)展中國(guó)家其發(fā)病率居首位，據(jù)國(guó)際癌癥研究中屯、估計(jì)，每 年大約有371200的宮頸癌新發(fā)病例，占所有腫瘤的9. 8%，占女性新發(fā)病例的15%，其中 78 %的病例發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家，發(fā)達(dá)國(guó)家僅占4. 4 %。我國(guó)地域廣闊、人口眾多，根據(jù)90年 代衛(wèi)生部全國(guó)腫瘤防治研究辦公室組織的大規(guī)模全國(guó)人口死亡原因調(diào)查顯示，每年有新 發(fā)病例約10萬(wàn)，占世界宮頸癌新發(fā)病例總數(shù)的四分之一。經(jīng)過(guò)幾十年廣泛開(kāi)展婦科普查， 宮頸癌的發(fā)病率及死亡率降低了近68%，但從全國(guó)范圍來(lái)看，宮頸癌的患病率仍居?jì)D科惡 性腫瘤的第一位。
[0003] 宮頸癌前病變和宮頸癌發(fā)病過(guò)程中（早中晚期）整個(gè)琉基分子將不可逆的脫落并 從尿液中排出體外，而機(jī)體正常情況下并無(wú)琉基分子脫落，因此檢測(cè)尿液中的琉基化合物 可用于宮頸癌的篩查和輔助診斷。臨床數(shù)據(jù)及多篇文獻(xiàn)表明：尿液琉基化合物濃度顯著增 高常見(jiàn)于子宮頸組織癌變過(guò)程。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)中存在利用琉基可將憐鶴酸還原成鶴藍(lán)而呈藍(lán)色的特性制備出用于提 示宮頸癌病變的尿液中琉基類(lèi)代謝物檢測(cè)試劑盒，比如CN104181155A中就公開(kāi)了一種相 關(guān)試劑盒及其制備方法，但由于尿液中除了琉基類(lèi)代謝物具有還原性外，尿液中的尿酸和 Vc同樣具有還原性，同樣可W與憐鶴酸反應(yīng)而顯色，該文獻(xiàn)中采用對(duì)照試劑中添加隸離子 排除琉基代謝物的方法，通過(guò)對(duì)照組和檢測(cè)組的顏色深淺的比對(duì)來(lái)排除尿酸和Vc的干擾， 雖然運(yùn)種方法可W排除假陽(yáng)性的問(wèn)題，但是肉眼分辨深淺，很容易造成誤判，特別是在琉基 類(lèi)代謝物含量較低時(shí)對(duì)照組和檢測(cè)組的顯色非常接近，分辨誤差大，容易造成假陰性誤判， 從而大大降低了該檢測(cè)試劑的準(zhǔn)確性和精確性，限制該產(chǎn)品的實(shí)際應(yīng)用，且尿液中含有蛋 白會(huì)對(duì)試劑的準(zhǔn)確性產(chǎn)生干擾

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種尿液中琉基類(lèi)化合物檢測(cè)試劑盒及制備方法和應(yīng)用，用W解決 目前琉基檢測(cè)試劑假陰性誤判突出，檢測(cè)準(zhǔn)確性和精確度低的問(wèn)題。
[0006] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：所述尿液中琉基類(lèi)化合物檢測(cè)試 劑盒，包括檢測(cè)試劑、對(duì)照試劑和顯色試劑；
[0007] 其中，所述檢測(cè)試劑為包含亞隸離子化合物和=氯乙酸的水溶液；
[0008] 所述對(duì)照試劑為包含隸離子化合物、亞隸離子化合物和=氯乙酸的水溶液；
[0009] 所述顯色試劑為包含憐鶴酸、娃鶴酸和裡離子化合物的緩沖溶液。
[0010] 其中對(duì)照試劑與檢測(cè)試劑中=氯醋酸可破壞尿液中蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)，使得干擾 蛋白質(zhì)沉淀，避免假陽(yáng)性產(chǎn)生，在=氯醋酸和憐鶴酸的分步作用下，近100%的蛋白質(zhì)可W被除去，提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，試劑中亞隸離子可與尿液中的無(wú)機(jī)鹽結(jié)合，防止其干擾整 個(gè)反應(yīng)過(guò)程，加強(qiáng)試劑測(cè)定的穩(wěn)定性。對(duì)照試劑中隸離子可選擇性與尿液中琉基代謝物反 應(yīng)，與檢測(cè)試劑比對(duì)后排出假陽(yáng)性問(wèn)題。顯色試劑中的娃鶴酸可優(yōu)先與尿液中的還原性物 質(zhì)如尿酸、Vc等反應(yīng)，避免其與憐鶴酸發(fā)生還原反應(yīng)，從而有效避免了因尿酸、Vc顯色干擾 對(duì)照組和檢測(cè)組的顯色比對(duì)，導(dǎo)致假陰性誤判。
[0011] 進(jìn)一步的，所述亞隸離子化合物選自硝酸亞隸或氯化亞隸，所述隸離子化合物選 自硫酸隸、硝酸隸或氯化隸，所述裡離子化合物選自硫酸裡或碳酸裡。
[0012] 進(jìn)一步的，所述亞隸離子化合物為氯化亞隸，所述隸離子化合物為氯化隸，所述裡 離子化合物為碳酸裡。
[0013] 進(jìn)一步的，所述檢測(cè)試劑中，亞隸離子的濃度為0. 001mo1/LS氯醋酸的質(zhì) 量濃度為lOwt%;所述對(duì)照試劑中，亞隸離子的濃度為0.OOlmol/l，隸離子的濃度為 0. 04-0. 045mol/l，S氯醋酸質(zhì)量濃度為lOwt%;所述顯色試劑中，憐鶴酸的濃度為36-57g/ 以娃鶴酸的濃度為8. 5-20邑/1，裡離子的濃度為1-2. 7mmol/L。所述離子濃度是指W亞隸 離子、隸離子或裡離子的濃度，相應(yīng)亞隸離子化合物、隸離子化合物或裡離子化合物的濃度 要根據(jù)上述離子濃度進(jìn)行換算，比如亞隸離子的濃度為0.OOlmol/l，則氯化亞隸的濃度為 0.OOlmol/l，隸離子濃度為0. 04-0. 045mol/l，則氯化隸的濃度為0. 04-0. 045mol/l，裡離 子的濃度為1-2. 7mmol/l，則碳酸裡的濃度為0. 5-1. 35mmol/L。所述隸離子的濃度如果低 于0. 04mol/L時(shí)，則在琉基代謝物濃度較高時(shí)，存在不能完全反應(yīng)的情況，則之后還是會(huì)與 憐鶴酸反應(yīng)顯色，則會(huì)做出陰性的誤判。
[0014] 進(jìn)一步的，所述緩沖溶液為乙酸鋼/乙酸緩沖體系，抑值為4. 8-5. 6。在此區(qū)間憐 鶴酸試劑有良好的顯色反應(yīng)。
[0015] 進(jìn)一步的，所述檢測(cè)試劑的量為1ml，對(duì)照試劑的量為1ml，顯色試劑的量為4ml。
[0016] 本發(fā)明還提供了上述尿液中琉基類(lèi)化合物檢測(cè)試劑盒的制備方法，包括如下步 驟：
[0017] 1)檢測(cè)試劑的制備：將亞隸離子化合物和S氯醋酸溶于蒸饋水中，保持無(wú)菌環(huán)境 將其分裝入5ml安飯瓶并拉絲灌封；
[0018] 2)對(duì)照試劑的制備：將隸離子化合物、亞隸離子化合物和=氯醋酸溶于蒸饋水 中，而后在無(wú)菌環(huán)境下將其分裝入5ml安飯瓶中并拉絲灌封；
[0019] 扣顯色試劑制備：
[0020] a、稱取憐鶴酸溶于蒸饋水中，然后加入裡離子化合物；
[0021] b、稱取娃鶴酸溶于蒸饋水中；
[0022] C、配置乙酸鋼/乙酸緩沖體系的緩沖溶液，所述緩沖溶液中乙酸鋼濃度為 0. 2mol/l，乙酸濃度為 0. 3mol/L;
[0023] t將a、b、C步驟所制備的試劑案按1: (1~1. 5) : (1. 5~2. 0)的體積比混合均 勻，并分裝入5ml安飯瓶并拉絲灌封。
[0024] 進(jìn)一步的，所述顯色試劑制備中步驟a配置的試劑中，所述憐鶴酸的濃度為 160g-200g/l，所述裡離子化合物的濃度為2. 3-4. 7mmol/L。
[00巧]進(jìn)一步的，所述顯色試劑制備中步驟b配置的試劑中，所述娃鶴酸的濃度為 30g-60g/L〇
[00%] 本發(fā)明還提供了上述尿液中琉基類(lèi)化合物檢測(cè)試劑盒在宮頸癌的篩查和輔助診 斷方面的應(yīng)用。
[0027] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案利用琉基能將憐鶴酸還原成鶴藍(lán)而呈現(xiàn)藍(lán)色的特性來(lái)檢 測(cè)尿液中琉基，但憐鶴酸能夠破壞了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生蛋白質(zhì)沉淀，干擾檢測(cè)結(jié)果，出現(xiàn) 假陽(yáng)性現(xiàn)象，在=氯醋酸和憐鶴酸的分步作用下，近100%的蛋白質(zhì)可W被除去，提高測(cè)定 結(jié)果的準(zhǔn)確性；；試劑中的碳酸裡或硫酸裡對(duì)憐鶴酸的還原反應(yīng)有很好的催化作用；對(duì)照 試劑與檢測(cè)試劑中的亞隸離子可先與尿液中的無(wú)機(jī)鹽結(jié)合，防止其干擾整個(gè)反應(yīng)過(guò)程，加 強(qiáng)試劑測(cè)定的穩(wěn)定性；對(duì)照試劑中隸離子能與尿液中琉基結(jié)合，而檢測(cè)試劑中不含隸離子 故尿液中若含琉基將還原憐鶴酸從而使其變藍(lán)；最為重要的是顯色試劑中的娃鶴酸可與尿 液中的還原性物質(zhì)如尿酸、Vc等優(yōu)先反應(yīng)，從而排除因尿酸、Vc的干擾導(dǎo)致的假陰性問(wèn)題， 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案工藝簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性高，檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性率和假陰性 率低等特點(diǎn)，適合用于宮頸癌的篩查和輔助診斷。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 本發(fā)明中所用試劑和器皿均為市購(gòu)商品。 陽(yáng)〇29] 實(shí)施例1
[0030] 制作1000個(gè)尿液中琉基類(lèi)化合物檢測(cè)試劑盒，過(guò)程如下：
[0031] 一、檢測(cè)試劑的制備：將氯化亞隸和=氯醋酸分別溶于蒸饋水，配置亞氯化亞隸濃 度為0.OOlmol/l，=氯醋酸質(zhì)量濃度為lOwt%，保持無(wú)菌環(huán)境將其分裝入5ml安飯瓶并拉 絲灌封，每個(gè)安飯瓶裝量1ml，據(jù)此制備檢測(cè)試劑1000支；
[0032] 二、對(duì)照試劑的制備：將氯化隸、氯化亞隸和=氯醋酸溶于蒸饋水，配置氯化隸的 濃度為0. 〇4mol/l，氯化亞隸的濃度為0. 001mol/l，S氯醋酸質(zhì)量濃度為lOwt%，在無(wú)菌環(huán) 境下將其分裝入5ml安飯瓶中并拉絲灌封，每個(gè)安飯瓶裝量1ml，據(jù)此制備對(duì)照試劑1000 支；
[0033] S、顯色試劑的制備：其中憐鶴酸的濃度為38旨/1，碳酸裡的濃度為1. 13mmol/l， 娃鶴酸的濃度為11.4g/L。
[0034]a、稱取適量憐鶴酸充分溶于蒸饋水中，最后加入碳酸裡，其中憐鶴酸濃度為160g/ 以碳酸裡的濃度為350mg/l，4°C冷藏備用；
[0035] b、稱取適量娃鶴酸充分溶于蒸饋水中，其中娃鶴酸濃度為40g/l，4°C冷藏備用；
[0036] C、緩沖溶液的制備：將0. 2mol/L乙酸鋼水溶液與0. 3mol/L乙酸水溶液按 5. 9:4. 1的體積比混合，pH值為4. 8,置2°C- 8°C冷藏保存?zhèn)溆茫?br>[0037] t將a、b、c步驟所制備的試劑按1:1. 2:2. 0混合，并將混合均勻的試劑分裝入5ml 安飯瓶并拉絲灌封，每個(gè)安飯瓶裝量為4ml，制備1000支。
[003引四、將一、二、S制備好的安飯瓶分別按檢測(cè)試劑1支、對(duì)照試劑1支，顯色試劑1 支，即可制作試劑盒1000盒。
[0039] 實(shí)施例2
[0040] 制作1000個(gè)尿液中琉基類(lèi)化合物檢測(cè)試劑盒，過(guò)程如下：
[0041] 一、檢測(cè)試