專利名稱：低分子量糖基化硫酸軟骨素及其在抗hiv-1藥物制備中的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種低分子量糖基化硫酸軟骨素(Low molecular weight Glycosylated Chondroitin sulfate, LGC)及其制備方法、含LGC的藥用組合物及其在預防和/或治療艾滋病藥物制備中的用途。
背景技術：
人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV-1)感染所致獲得性免疫缺陷綜合癥(aquired immunodeficiency syndrome, AIDS)是嚴重危害人類生命健康的重大疾病。聯(lián)合國艾滋病規(guī)劃署2010年11月23日發(fā)布報告稱估計全球共有3330萬人感染艾滋病毒，自1981年6月首次確認艾滋病以來共有2500萬人死亡。在中國，截至2009 年底，估計現(xiàn)有74萬成人與兒童感染艾滋病病毒，4. 8萬為2009年新增感染。這些患者中， 估計有10. 5萬為艾滋病病例，2. 6萬在2009年死于艾滋病相關病因。艾滋病的臨床治療除了對并發(fā)癥治療、抗感染治療、免疫調節(jié)治療外，其最主要的有效治療方法是高效抗病毒治療。資料顯示，自1996年聯(lián)合抗逆轉錄病毒療法(HAART，至少三種核苷類/非核苷類抗逆轉錄病毒藥物及蛋白酶抑制劑聯(lián)用)問世至2006年以來，艾滋病人從確診之日起的平均存活時間已從0.26年增加到13. 3年。盡管艾滋病的治療已取得巨大進步，但仍存在難以治愈、治療無應答、耐藥性出現(xiàn)、毒副作用顯著等缺陷。目前，由于治療無應答或耐藥性產生等原因，HAART治療對約30%的艾滋病患者無效。為使HAART治療無效的患者能夠得到有效的藥物治療，臨床迫切需要新型抗 HIV-I藥物，其所述新型抗HIV-I應當與抗逆轉錄病毒藥物及蛋白酶抑制劑的藥理學作用靶點不同。糖基化硫酸軟骨素(Glycosylatedchondroitin sulfate, GCs)是一種存在巖藻糖側鏈取代的糖胺聚糖類似物，其多糖主鏈類似硫酸軟骨素，由己糖醛酸、氨基己糖構成的二糖結構單元順次連接形成，主鏈及側鏈糖羥基均可存在硫酸酯化基團。天然GCs主要來源于棘皮動物體壁或內臟，其具有[—4)D-GlcUA(i3 1 — 3)D-GalNAc (1 —]的主鏈結構單元，其側鏈硫酸巖藻糖則以(α 1 — 3)糖苷鍵連接于D-GlcUA (J Biol Chem, 1988, 263 (34) 18176-83 和 J Biol Chem, 1991, 266 (21) :13530-6)。天然 GCs 具有顯著抗凝血活性，其特點是具有強效抑制內源性因子X酶(internal factor tenase, f. Xase)活性，并存在顯著的HCII依賴的抗凝血酶(f. IIa)活性。如中國專利公開號CN101735336A公開了制備低聚巖藻糖化糖胺聚糖的方法，其是通過在水相介質中用第四周期過渡金屬離子催化的過氧化物解聚法解聚巖藻糖化糖胺聚糖制備得到，該制備方法反應條件溫和、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性好、 裂解選擇性高，產物質量均一可控。獲得的低聚巖藻糖化糖胺聚糖以GalNAc作為還原性末端的聚糖分子數(shù)不低于80%，重均分子量為約6，OOODa 20，OOODa, PDI為1. 0 2. 0。由此可見，研究低分子量糖基化硫酸軟骨素(LGC)及其制備方法、含LGC的藥用組合物及其在預防和/或治療艾滋病藥物制備中的用途，具有重大意義。
發(fā)明內容
本發(fā)明目的首先是提供一種低分子量糖基化硫酸軟骨素(LGC)及其藥學上可接受的鹽在抗1型人類免疫缺陷病毒(HIV-I)藥物制備中的用途，其中所述LGC是具有式⑴ 結構的同系糖胺聚糖衍生物的混合物，
權利要求
1. 一種低分子量糖基化硫酸軟骨素及其藥學上可接受的鹽在抗1型人類免疫缺陷病毒藥物制備中的用途，其特征在于所述的LGC是具有式(I)結構的同系糖胺聚糖衍生物的混合物，
2.如權利要求1所述LGC及其藥學上可接受的鹽在抗HIV-I藥物制備中的用途，其特征在于，所述LGC是具有式(I)結構的同系糖胺聚糖衍生物的混合物，其中含有限定比例的 R2為式(II)或(III)基團的式(I)化合物。
3.如權利要求2所述LGC及其藥學上可接受的鹽在抗HIV-I藥物制備中的用途，其特征在于，所述限定比例是指，以摩爾百分比計，&為式(II)或(III)基團的式(I)化合物占全部式⑴化合物的30% 100%。
4.如權利要求1至3所述LGC及其藥學上可接受的鹽在抗HIV-I藥物制備中的用途， 其特征在于，所述LGC為棘皮動物門海參綱動物體壁提取的糖基化硫酸軟骨素的解聚產物和/或所述解聚產物還原端被全部或部分還原酪氨基化的產物。
5.一種低分子量糖基化硫酸軟骨素及其藥學上可接受的鹽，所述LGC是權利要求1定義的式(I)結構的同系糖胺聚糖衍生物的混合物，并且，以摩爾百分比計，&為式(II)或 (III)基團的式(I)化合物占全部式(I)化合物的30% 100%。
6.如權利要求5所述的LGC及其藥學上可接受的鹽，其特征在于，所述式(I)結構的同系糖胺聚糖衍生物的混合物中，&為式(II)或(III)基團。
7.如權利要求5至6所述的所述的LGC及其藥學上可接受的鹽，其特征在于，所述LGC 重均分子量(Mw)范圍為5000 8000Da。
8.如權利要求5至7所述的低分子量糖基化硫酸軟骨素及其藥學上可接受的鹽，其特征在于，所述LGC為棘皮動物門海參綱動物體壁提取的糖基化硫酸軟骨素的解聚產物和/ 或所述解聚產物還原端被全部或部分還原酪氨基化的產物。
9.如權利要求1至8所述的所述的LGC及其藥學上可接受的鹽的制備方法，包括如下步驟(1)從棘皮動物門海參綱動物體壁中提取獲得酸性粘多糖，即原型糖基化硫酸軟骨素GCs ；(2)過氧化解聚步驟(1)所得GCs，收集和純化所需分子量范圍的GCs解聚產物，將所得解聚產物進一步轉化為所需的堿金屬離子鹽，由此得到權利要求1所述LGC ；(3)步驟( 所述GCs解聚產物任選進行末端糖基的還原氨基化，其方法是，所述GCs 解聚產物在氰基硼氫化鈉存在下與化學計量的酪胺反應，獲得權利要求4 5所述的還原端被全部或部分還原酪氨基化的產物。
10.如權利要求9所述LGC制備方法，其特征在于所述的步驟( 所述過氧化解聚方法是將海參綱動物體壁來源的GCs配成質量分數(shù)為0. 05% 10%的水溶液，向所得水溶液中加入過氧化物GCs至質量分數(shù)0. 05% 5%，加入用作催化劑的過渡金屬離子鹽GCs 至質量分數(shù)0. 01% 1%，在20 60°C下反應至GCs被解聚到所需分子量范圍；向反應液中加乙醇或丙酮使解聚產物沉淀，沉淀重新溶解后，超濾膜透析和/或過凝膠柱層析法除去小分雜質，離子交換法將所得產物進一步轉化為所需的堿金屬離子鹽。
11.如權利要求9所述LGC制備方法，其特征在于所述的步驟(3)所述GCs解聚產物的末端還原氨基化的方法是將步驟(2)所得GCs解聚產物溶解于pH 7 9的緩沖液中， 依次加入化學計量的酪胺和氰基硼氫化鈉，常溫或加熱反應。反應完畢后，分離純化反應產物，并將其轉化為所需的堿金屬離子鹽。
12.如權利要求11所述LGC制備方法，其特征在于所述的步驟(3)的反應產物的分離純化是指純化產物中，以摩爾比計，&為式(II)或(III)基團的式⑴化合物占全部式 (I)化合物的30% 100%。
13.—種抗HIV-I的藥物組合物，所述藥物組合物含有有效抗HIV-I劑量的權利要求 1 7所述LGC或其藥學上可接受的鹽，以及藥用賦形劑。
14.如權利要求13所述藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物的劑型為注射用水溶液、注射用凍干粉針劑或局部給藥用栓劑、軟膏劑或凝膠劑。
15.如權利要求10至11所述藥物組合物用作艾滋病預防和/或治療藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種低分子量糖基化硫酸軟骨素，其重均分子量為3000～15000Da，單糖組成為乙酰氨基半乳糖(D-GalNAc)、葡萄糖醛酸(D-GlcUA)、巖藻糖(L-Fuc)、或其硫酸酯(-OSO3-表示)，D-GalNAc∶D-GlcUA∶L-Fuc∶-OSO3-的摩爾比例約為1∶(1±0.3)∶(1±0.3)∶(3.5±0.5)。所述低分子量糖基化硫酸軟骨素具有強效抗HIV-1病毒活性，為gp120侵入抑制劑，可用于預防和/或治療艾滋病。本發(fā)明還提供制備所述低分子量糖基化硫酸軟骨素及其藥用組合物制劑的方法，采用過氧化物法解聚糖基化硫酸軟骨素以獲得低分子量產物，然后通過凝膠分離或超濾方法除去產物中的低分子和/或高分子雜質成分。所述低分子量糖基化硫酸軟骨素及其藥用組合物可制備成注射劑、凍干粉針或栓劑。
文檔編號A61K31/737GK102247401SQ201110114860
公開日2011年11月23日 申請日期2011年5月5日 優(yōu)先權日2011年5月5日
發(fā)明者何江波, 劉吉開, 吳明一, 李姿, 趙金華, 鄭永唐, 黃寧 申請人:中國科學院昆明動物研究所, 中國科學院昆明植物研究所