專利名稱：一種低分子硫酸皮膚素及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一種低分子硫酸皮膚素及其制備方法。
背景技術(shù)：
硫酸皮膚素為一類結(jié)構(gòu)復(fù)雜、硫酸化的糖胺聚糖，天然產(chǎn)物分子量一般在15kD～5kD，廣泛存在于動(dòng)物組織中。國(guó)內(nèi)外研究表明，硫酸皮膚素抗凝活性低于未分級(jí)肝素，其抗血栓活性卻明顯比未分級(jí)肝素高，出血副作用明顯比未分級(jí)肝素小，因此硫酸皮膚素已成為一種新型抗血栓藥物。然而，硫酸皮膚素存在兩個(gè)主要藥動(dòng)學(xué)問(wèn)題一個(gè)是半衰期較短，另一個(gè)是皮下和肌肉注射途徑給藥時(shí)，生物利用度低。隨著硫酸皮膚素分子量的升高，其生物利用度降低。Mascellani等人曾在美國(guó)專利“具有抗血栓形成作用、纖維蛋白溶解作用和抗炎活性的降解的硫酸皮膚素及其藥物制劑成分”(專利號(hào)US4973580)報(bào)道了一種低分子硫酸皮膚素的制備方法，該法是用重金屬離子作催化劑降解硫酸皮膚素，具有工藝復(fù)雜、收率低，并且引入了對(duì)人體有害的重金屬離子等缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，單用過(guò)氧化氫降解硫酸皮膚素，提供一種具有較強(qiáng)的抗血栓作用和一定的溶栓作用的低分子硫酸皮膚素及其制備方法。
本發(fā)明是通過(guò)以下途徑實(shí)現(xiàn)的一種低分子硫酸皮膚素，一種低分子硫酸皮膚素，分子結(jié)構(gòu)中含有艾杜糖醛酸衍生物和乙酰氨基半乳糖衍生物，其特征是分子結(jié)構(gòu)由2-O-硫酸基-艾杜糖醛酸-(1→3)-2-N-乙?；?2-脫氧-4-0-硫酸基半乳糖組成，糖鏈中還含有2-N-乙?；?2-脫氧-4，6-0-二硫酸基半乳糖，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下 上述低分子硫酸皮膚素，其特征是分子量為3000～8000道爾頓，硫酸根與羧酸根的比值為0．8～1．2，激活肝素輔因子II活性為100～200U/mg，抗凝效價(jià)≤10 IU/mg。
本發(fā)明建立的過(guò)氧化氫降解法引起硫酸皮膚素主鏈(1→4)糖苷鍵斷裂，獲得低分子硫酸皮膚素，不引入其它雜質(zhì)，提高反應(yīng)溫度和增加過(guò)氧化氫濃度有利于降低硫酸皮膚素的分子量，控制反應(yīng)時(shí)間，即可得到所需分子量的產(chǎn)品。
一種制備上述低分子硫酸皮膚素的方法，其特征是包括以下步驟(1)硫酸皮膚素的降解硫酸皮膚素水溶液的濃度為1％～10％，溶液的pH值在4～10，過(guò)氧化氫的濃度為1％～20％，溫度為20～80℃，反應(yīng)時(shí)間為2～18小時(shí)，降解完畢用有機(jī)溶劑沉淀，常用的有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇等；(2)分離所需要的低分子硫酸皮膚素片段上述降解產(chǎn)物配成水溶液后，用超濾法和凝膠層析法分離所需要的片段，常用的凝膠為Sephadex G-50、Sephadex G-75、Sephadex G-100、Superdex 200等，用氯化鈉溶液進(jìn)行洗脫，氯化鈉的濃度為0.01～1.0mol/L。收集低分子硫酸皮膚素含量高的部分，用Sephadex G-10脫鹽，冷凍干燥得低分子硫酸皮膚素。
本發(fā)明制得的低分子硫酸皮膚素具有較強(qiáng)的抗血栓作用和一定溶栓作用，還有口服易吸收、半衰期長(zhǎng)和生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
下面給出本發(fā)明實(shí)施的一個(gè)最佳例子。
低分子硫酸皮膚素制備的關(guān)鍵是控制分子量，此法采用過(guò)氧化氫降解法，獲得降解程度可控制的低分子硫酸皮膚素。
(1)低分子硫酸皮膚素的制備將硫酸皮膚素精品1g以蒸餾水配成1.0％的溶液，調(diào)節(jié)pH4～5，滴加30％的過(guò)氧化氫使終濃度達(dá)2％，于70℃水浴攪拌15小時(shí)，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH7，3倍量甲醇沉淀；(2)低分子硫酸皮膚素的純化將步驟(1)的沉淀物配成0.5％的溶液，用分子截留值為8kD的膜超濾，收集透過(guò)液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，上Sephadex G-100制備層析柱(2.6×82cm)，以0.3mol/L氯化鈉溶液洗脫，206nm紫外檢測(cè)，收集低分子硫酸皮膚素含量高的部分，用Sephadex G-10脫鹽，冷凍干燥得所需低分子硫酸皮膚素。
將上述所得的低分子硫酸皮膚素分別進(jìn)行分子量測(cè)定、結(jié)構(gòu)測(cè)定和抗凝效價(jià)測(cè)定得到一種低分子硫酸皮膚素，分子結(jié)構(gòu)中含有艾杜糖醛酸衍生物和乙酰氨基半乳糖衍生物，分子結(jié)構(gòu)由2-O-硫酸基-艾杜糖醛酸-(1→3)-2-N-乙?；?2-脫氧-4-O-硫酸基半乳糖組成，糖鏈中還含有2-N-乙?；?2-脫氧-4，6-O-二硫酸基半乳糖，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下 該低分子硫酸皮膚素的相對(duì)分子量為3000～8000道爾頓，硫酸根與羧酸根的比值為0.8～1.2，激活肝素輔因子II活性為100～200U/mg，抗凝效價(jià)≤10IU/mg。
權(quán)利要求
1.一種低分子硫酸皮膚素，分子結(jié)構(gòu)中含有艾杜糖醛酸衍生物和乙酰氨基半乳糖衍生物，其特征是分子結(jié)構(gòu)由2-O-硫酸基-艾杜糖醛酸-(1→3)-2-N-乙?；?2-脫氧-4-O-硫酸基半乳糖組成，糖鏈中還含有2-N-乙?；?2-脫氧-4，6-O-二硫酸基半乳糖，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的低分子硫酸皮膚素，其特征是分子量為3000～8000道爾頓，硫酸根與羧酸根的比值為0.8～1.2，激活肝素輔因子II活性為100～200U/mg，抗凝效價(jià)≤10IU/mg。
3.一種制備權(quán)利要求1或2所述低分子硫酸皮膚素的方法，其特征是包括以下步驟(1)低分子硫酸皮膚素的制備將硫酸皮膚素精品用蒸餾水配成1.0％～10％的溶液，調(diào)節(jié)pH4～10，滴加30％的過(guò)氧化氫使終濃度達(dá)1％～20％，在溫度為20～70℃水浴攪拌2～18小時(shí)，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH7，3倍量甲醇沉淀。(2)低分子硫酸皮膚素的純化將步驟(1)的沉淀物配成0.5％的溶液，用分子截留值為8kD的膜超濾，收集透過(guò)液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，上SephadexG-75制備層析柱，以0.01～1.0mol/L氯化鈉溶液洗脫，收集低分子硫酸皮膚素含量高的部分，用Sephadex G-10脫鹽，冷凍干燥得所需低分子硫酸皮膚素。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一種低分子硫酸皮膚素及其制備方法。低分子硫酸皮膚素由硫酸皮膚素降解獲得，分子量3000～8000道爾頓。其制備方法是將硫酸皮膚素在溫和的條件下用過(guò)氧化氫降解，用超濾和凝膠層析分離純化得低分子硫酸皮膚素。本發(fā)明制得的低分子硫酸皮膚素具有較強(qiáng)的抗血栓作用和一定的溶栓作用，還有口服易吸收、半衰期長(zhǎng)和生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P7/00GK1445245SQ03112180
公開(kāi)日2003年10月1日 申請(qǐng)日期2003年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月18日
發(fā)明者姬勝利, 王鳳山, 遲延青, 謝繼青 申請(qǐng)人:山東大學(xué)