Dtnbp1化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及一種新型化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種血清DTNBPl化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]DTNBPl基因位于6ρ22.3，人類(lèi)DTNBPl基因全長(zhǎng)140kb，包含I個(gè)啟動(dòng)子和10個(gè)外顯子。DTNBPl基因編碼的蛋白約40kDa?50kDa，由352個(gè)氨基酸組成，有I個(gè)Coiled-coil二級(jí)結(jié)構(gòu)，是一種進(jìn)化上保守的蛋白。DTNBPl蛋白在人體的神經(jīng)終板、海馬、小腦等多種組織中均有表達(dá)，主要分布于谷氨酸能通道的突觸前軸突末梢，參與建立和維持神經(jīng)元與肌細(xì)胞之間的聯(lián)系、突觸間化學(xué)信號(hào)傳遞的調(diào)節(jié)及支持和調(diào)節(jié)大腦神經(jīng)元之間的信息聯(lián)系。研究表明DTNBPl基因與精神分裂癥存在密切聯(lián)系，精神分裂癥患者腦回中的DTNBPl表達(dá)量顯著下降，提示DTNBPl可能是精神分裂癥的一個(gè)易感基因和候選功能因子。本課題組經(jīng)前期研究發(fā)現(xiàn)，DTNBPl在消化道患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)顯著上調(diào)，提示其可能和胰腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，可能成為一個(gè)潛在的腫瘤標(biāo)志物。但目前針對(duì)的DTNBPl檢測(cè)主要依賴于多重聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增(PCR)和免疫組織化學(xué)(IHC)，過(guò)程繁瑣且效率不高。因此，發(fā)明一種快捷、高效的檢測(cè)手段以便于DTNBPl的臨床大樣本篩選和分析，對(duì)于闡述DTNBPl的功能和臨床意義有重要的作用。
[0003]目前用于臨床生化指標(biāo)經(jīng)檢測(cè)的方法主要有放射免疫測(cè)定、酶聯(lián)免疫測(cè)定、乳膠凝集試驗(yàn)等，但這些方法都存在明顯的局限性和缺陷。放射免疫測(cè)定雖然具有較高的靈敏度和特異性，但其有效期較短，且具有放射性污染；酶聯(lián)免疫測(cè)定是目前主要檢測(cè)手段，技術(shù)較成熟、應(yīng)用較廣且成本較低，但其反應(yīng)底物大多數(shù)具有毒性或是潛在致癌性；乳膠凝集試驗(yàn)則具有較高的主觀性，結(jié)果誤差大。
[0004]化學(xué)發(fā)光分析法(ChemiLuminescence，簡(jiǎn)稱(chēng)為CL)是依據(jù)化學(xué)檢測(cè)體系中待測(cè)物濃度與體系的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度在一定條件下呈線性定量關(guān)系的原理，利用儀器對(duì)體系化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)，而確定待測(cè)物含量的一種衡量分析方法。隨著化學(xué)發(fā)光技術(shù)的逐漸發(fā)展和成熟，其應(yīng)用領(lǐng)域越來(lái)越廣泛。尤其在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，化學(xué)發(fā)光技術(shù)得到相當(dāng)程度的普及，已廣泛應(yīng)用于多種生物活性物質(zhì)的臨床檢測(cè)，如應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙肝病毒、甲狀腺功能及腫瘤標(biāo)志物等?；瘜W(xué)發(fā)光分析法以其靈敏度高、線性范圍寬、分析快速和容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，已然成為分析化學(xué)中一個(gè)十分話躍的研究熱點(diǎn)，并將取代放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等，成為現(xiàn)代免疫診斷的主要發(fā)展方向。
[0005]由此可見(jiàn)，如何將化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法應(yīng)用于DTNBPl的血清學(xué)定量檢測(cè)，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果對(duì)消化道腫瘤病人的病情程度、治療效果及預(yù)后進(jìn)行判定和預(yù)測(cè)，對(duì)擴(kuò)大DTNBPl的臨床應(yīng)用和腫瘤相關(guān)疾病的大樣本篩查有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本實(shí)用新型的目的是提供一種DTNBPl化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒，可以準(zhǔn)確、快捷又安全的檢測(cè)血清中DTNBPl含量。
[0007]本實(shí)用新型的技術(shù)方案是:一種DTNBPl化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒，其特征在于:包括盒體和盒內(nèi)一塊96孔微孔板、十瓶試劑、一袋固體磷酸-吐溫包被緩沖液，其中所述的96孔微孔板內(nèi)設(shè)有預(yù)包被DTNBPl抗體微孔；十瓶試劑分別為七個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，一瓶酶標(biāo)抗體工作液、一瓶底物發(fā)光液A、一瓶底物發(fā)光液B，其中一瓶酶標(biāo)抗體工作液和一瓶底物發(fā)光液A用黑蓋PE半透明塑料瓶，一瓶底物發(fā)光液B用黑蓋PE黑色塑料瓶，所述盒體是硬紙盒，96孔微孔板放在真空錫箔袋內(nèi)，包被緩沖液放在密封袋內(nèi)。
[0008]所述的96孔微孔板是由外框支架和放置其上的可拆卸的八條酶標(biāo)條組成，每個(gè)可拆卸的酶標(biāo)條有十二個(gè)微孔。
[0009]本實(shí)用新型的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的:以雙抗體夾心法為基礎(chǔ)，于微孔板上預(yù)包被DTNBPl單克隆抗體捕獲血清DTNBPl抗原，再加入HRP標(biāo)記DTNBPl抗體，形成抗體-DTNBPl抗原-抗體HRP標(biāo)記物復(fù)合物，洗板加入魯米諾-H2O2反應(yīng)試劑，用化學(xué)發(fā)光分析儀測(cè)量發(fā)光值。血清中DTNBPl含量越高，結(jié)合的酶標(biāo)抗體越多，則化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度越強(qiáng)；反之亦然。因此，可以根據(jù)檢測(cè)到的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度來(lái)間接定量人血清中DTNBPl的水平。將結(jié)果與正常體檢血清值相比較，從而判斷陰陽(yáng)性。
[0010]試劑組成
[0011]1.發(fā)光底物:A液為H2O2, B液為魯米諾。
[0012]2.包被緩沖液:0.01M, pH7.4PBS_Tween20 緩沖液。
[0013]本實(shí)用新型的有益效果在于能夠更快速、靈敏檢測(cè)血清DTNBPl的含量。
【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1是本實(shí)用新型盒體示意圖。
[0015]圖2是本實(shí)用新型96孔微孔板的示意圖。
[0016]圖3是本實(shí)用新型包被緩沖液的示意圖。
[0017]圖4是本實(shí)用新型試劑瓶示意圖。
[0018]圖5是本實(shí)用新型整體結(jié)構(gòu)示意圖。
[0019]其中I為盒體；2為預(yù)包被DTNBPl抗體的96孔微孔板；3為包被緩沖液；4為標(biāo)準(zhǔn)品溶液，5為酶標(biāo)抗體工作液，6為底物發(fā)光液A ;7為底物發(fā)光液B。
【具體實(shí)施方式】
[0020]如圖1、圖2、圖3、圖4和圖5所示，一種DTNBPl化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒，包括盒體I和盒內(nèi)一塊96孔微孔板2，96孔微孔板為固體載體，預(yù)包被DTNBPl抗體微孔；十瓶試劑，分別為七瓶標(biāo)準(zhǔn)品溶液4，一瓶酶標(biāo)抗體工作液5、一瓶底物發(fā)光液A6、一瓶底物發(fā)光液B70盒體I是硬紙盒，96孔微孔板2放在真空錫箔袋內(nèi)，一瓶酶標(biāo)抗體工作液5和一瓶底物發(fā)光液A6用黑蓋PE半透明塑料瓶，一瓶底物發(fā)光液B7用黑蓋PE黑色塑料瓶。96孔微孔板2是由外框支架和放置其上的可拆卸的八條酶標(biāo)條組成，每個(gè)可拆卸的酶標(biāo)條有十二個(gè)微孔。
[0021]將人血漿按50 μ I/孔加入預(yù)包被DTNBPl抗體的微孔板內(nèi)，水浴、洗板，加入酶標(biāo)抗體工作液50 μ I/孔，洗板，加入底物發(fā)光Α、B液，化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)，即得DTNBPl濃度。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種DTNBPl化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒，其特征在于:包括盒體(I)和盒內(nèi)一塊96孔微孔板(2)、十瓶試劑、一袋固體磷酸-吐溫包被緩沖液(3)，其中所述的96孔微孔板內(nèi)設(shè)有預(yù)包被DTNBPl抗體微孔；十瓶試劑分別為七個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(4)，一瓶酶標(biāo)抗體工作液(5)、一瓶底物發(fā)光液A^)、一瓶底物發(fā)光液B (7)，其中一瓶酶標(biāo)抗體工作液(5)和一瓶底物發(fā)光液A(6)用黑蓋PE半透明塑料瓶，一瓶底物發(fā)光液B(7)用黑蓋PE黑色塑料瓶，所述盒體(I)是硬紙盒，96孔微孔板(2)放在真空錫箔袋內(nèi)，包被緩沖液(3)放在密封袋內(nèi)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種DTNBPl化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述的96孔微孔板(2)是由外框支架和放置其上的可拆卸的八條酶標(biāo)條組成，每個(gè)可拆卸的酶標(biāo)條有十二個(gè)微孔。
【專(zhuān)利摘要】本實(shí)用新型公開(kāi)了一種DTNBP1化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括：微孔板、酶標(biāo)抗體工作液、七個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物發(fā)光液A、底物發(fā)光液B、包被緩沖液。本實(shí)用新型采用化學(xué)發(fā)光法，在微孔板微孔條上預(yù)包DTNBP1抗體，與樣本中的DTNBP1抗原結(jié)合，后者與辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗結(jié)合，用底物發(fā)光液發(fā)光，利用發(fā)光值與其所含DTNBP1量成正比關(guān)系，即可得出樣品中DTNBP1的含量。本實(shí)用新型具有快速、高靈敏度等特點(diǎn)，在檢測(cè)生物樣品中DTNBP1的含量中發(fā)揮重要作用。
【IPC分類(lèi)】G01N33/577, G01N21/76
【公開(kāi)號(hào)】CN204924948
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201520709580
【發(fā)明人】陳勇, 白泉, 姚雪彪, 趙寧, 方誠(chéng), 郭欣, 呂行
【申請(qǐng)人】陳勇
【公開(kāi)日】2015年12月30日
【申請(qǐng)日】2015年9月14日