基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種草甘膦農(nóng)藥的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]農(nóng)藥的快速檢測(cè)是在食品安全和環(huán)境保護(hù)背景下日益要求的技術(shù)。線蟲能夠較靈敏地感受周圍環(huán)境變化，可在短時(shí)間內(nèi)對(duì)環(huán)境變化產(chǎn)生指示作用。線蟲由于易于保存和便于試驗(yàn)操作，作為一種典型模式生物在科研領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。線蟲的幼蟲分為4個(gè)時(shí)期，分別為L(zhǎng)1、L2、L3和L4期，處于不同生長(zhǎng)期的線蟲，會(huì)對(duì)相應(yīng)的環(huán)境脅迫具有特殊的耐受度和敏感度。
[0003]現(xiàn)有草甘膦常用檢測(cè)方法包括高效液相色譜法、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜法、化學(xué)分析法、子印跡-化學(xué)發(fā)光分析法、免疫分析法等，但一般都需要復(fù)雜的分析儀器，操作過(guò)程復(fù)雜。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有草甘膦鑒定方法存在的靈敏度低、操作復(fù)雜、成本高的問(wèn)題，而提供一種基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法。
[0005]本發(fā)明基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法按下列步驟實(shí)現(xiàn):
[0006]一、稱取2?3g瓊脂于錐形瓶中，加入100mL純水中，用封口膜密封后放入高壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行滅菌處理，冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入滅菌處理后的瓊脂液，在室溫下冷卻凝固得到瓊脂皿；
[0007]二、在步驟一得到的瓊脂皿的圓周邊緣間隔等距離取4個(gè)觀測(cè)點(diǎn)，在第一觀測(cè)點(diǎn)、第二觀測(cè)點(diǎn)和第三觀測(cè)點(diǎn)上分別滴入I μ L待測(cè)農(nóng)藥，I μ L大腸桿菌菌液和I μ L純水，在第四觀測(cè)點(diǎn)上加入80?200只Tretocephalus線蟲L2期幼蟲；
[0008]三、觀測(cè)1.5?2.5小時(shí)后，當(dāng)?shù)谝挥^測(cè)點(diǎn)上聚有大于30%的Tretoc印halus線蟲L2期幼蟲時(shí)，表明待測(cè)農(nóng)藥中含有草甘膦。
[0009]Tretocephalus線蟲為一類食細(xì)菌土壤線蟲，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)Tretocephalus線蟲L2期幼蟲，在草甘膦刺激下無(wú)回避響應(yīng)，反而有趨向性反應(yīng)。因此，利用此類線蟲鑒定對(duì)草甘膦進(jìn)行定性判斷。本發(fā)明具有快捷、直觀、高效低價(jià)的特點(diǎn)，能夠檢測(cè)出濃度為0.005%的草甘膦。本發(fā)明的檢測(cè)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求低，不需要特殊的高精分析儀器和檢測(cè)設(shè)備，實(shí)驗(yàn)操作方便，成本低廉，易于掌握。
【附圖說(shuō)明】
[0010]圖1為實(shí)施例一中所述的瓊脂皿的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0011]【具體實(shí)施方式】一:本實(shí)施方式基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法按下列步驟實(shí)施:
[0012]一、稱取2?3g瓊脂于錐形瓶中，加入100mL純水中，用封口膜密封后放入高壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行滅菌處理，冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入滅菌處理后的瓊脂液，在室溫下冷卻凝固得到瓊脂皿；
[0013]二、在步驟一得到的瓊脂皿的圓周邊緣間隔等距離取4個(gè)觀測(cè)點(diǎn)，在第一觀測(cè)點(diǎn)、第二觀測(cè)點(diǎn)和第三觀測(cè)點(diǎn)上分別滴入I μ L待測(cè)農(nóng)藥，I μ L大腸桿菌菌液和I μ L純水，在第四觀測(cè)點(diǎn)上加入80?200只Tretocephalus線蟲L2期幼蟲；
[0014]三、觀測(cè)1.5?2.5小時(shí)后，當(dāng)?shù)谝挥^測(cè)點(diǎn)上聚有大于30%的Tretoc印halus線蟲L2期幼蟲時(shí)，表明待測(cè)農(nóng)藥中含有草甘膦。
[0015]本實(shí)施方式草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求低，不需要特殊的高精分析儀器和檢測(cè)設(shè)備，實(shí)驗(yàn)操作方便，靈敏度高。
[0016]【具體實(shí)施方式】二:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一不同的是步驟一所述的滅菌處理是在120°C下滅菌20min。其它步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一相同。
[0017]【具體實(shí)施方式】三:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一或二不同的是步驟一所述的培養(yǎng)皿的直徑尺寸為6cm。其它步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一或二相同。
[0018]【具體實(shí)施方式】四:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至三之一不同的是步驟一冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入18?24mL滅菌處理后的瓊脂液。其它步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一至三之一相同。
[0019]【具體實(shí)施方式】五:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】四不同的是步驟一冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入20mL滅菌處理后的瓊脂液。其它步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】四相同。
[0020]【具體實(shí)施方式】六:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至五之一不同的是步驟二所述的大腸桿菌菌液中大腸桿菌的濃度為IX 19個(gè)/mL?2X 10 9個(gè)/mL。其它步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一至五之一相同。
[0021]【具體實(shí)施方式】七:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至六之一不同的是步驟二在第四觀測(cè)點(diǎn)上加入80?120只Tretoc^phalus線蟲L2期幼蟲。其它步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一至六之一相同。
[0022]【具體實(shí)施方式】八:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】七不同的是步驟二在第四觀測(cè)點(diǎn)上加入100只Tretocephalus線蟲L2期幼蟲。其它步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】七相同。
[0023]【具體實(shí)施方式】九:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至八之一不同的是步驟三觀測(cè)2小時(shí)后，當(dāng)?shù)谝挥^測(cè)點(diǎn)上聚有大于30%的Tretocephalus線蟲L2期幼蟲時(shí)，表明待測(cè)農(nóng)藥中含有草甘膦。其它步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一至八之一相同。
[0024]實(shí)施例一:本實(shí)施例基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法按下列步驟實(shí)現(xiàn):
[0025]—、稱取3g瓊脂于錐形瓶中，加入100mL純水中，用封口膜密封后放入高壓蒸汽滅菌鍋中在120°C下滅菌20min，冷卻至50°C后在直徑為6cm培養(yǎng)皿中加入20mL滅菌處理后的瓊脂液，在室溫下冷卻凝固得到瓊脂皿；
[0026]二、在步驟一得到的瓊脂皿的圓周邊緣間隔等距離取4個(gè)觀測(cè)點(diǎn)，在第一觀測(cè)點(diǎn)A、第二觀測(cè)點(diǎn)B和第三觀測(cè)點(diǎn)C上分別滴入I μ L待測(cè)農(nóng)藥，I μ L濃度為2Χ 19個(gè)/mL的大腸桿菌菌液和I μ L純水，在剩余的第四觀測(cè)點(diǎn)O上加入100只Tretoaphalus線蟲L2期幼蟲；
[0027]三、觀測(cè)2小時(shí)后，第一觀測(cè)點(diǎn)A上聚有35%的Tretoc^phalus線蟲L2期幼蟲，表明待測(cè)農(nóng)藥中含有草甘膦。
[0028]本實(shí)施例表明Tretocephalus線蟲對(duì)草甘膦具有趨向性反應(yīng)。本實(shí)施例4個(gè)觀測(cè)點(diǎn)分別在6點(diǎn)鐘、9點(diǎn)鐘、12點(diǎn)鐘和3點(diǎn)鐘方向。
[0029]本實(shí)施例基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法的靈敏度高，能達(dá)到0.005%。
[0030]實(shí)施例二:本實(shí)施例基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法按下列步驟實(shí)現(xiàn):
[0031]—、稱取3g瓊脂于錐形瓶中，加入100mL純水中，用封口膜密封后放入高壓蒸汽滅菌鍋中在120°C下滅菌20min，冷卻至50°C后在6cm培養(yǎng)皿中加入20mL滅菌處理后的瓊脂液，在室溫下冷卻凝固得到瓊脂皿；
[0032]二、在步驟一得到的瓊脂皿的圓周邊緣間隔等距離取4個(gè)觀測(cè)點(diǎn)，在第一觀測(cè)點(diǎn)A、第二觀測(cè)點(diǎn)B和第三觀測(cè)點(diǎn)C上分別滴入I μ L純水，I μ L濃度為2Χ 19個(gè)/mL的大腸桿菌菌液和I μ L純水，在剩余的第四觀測(cè)點(diǎn)O上加入100只Tretoaphalus線蟲L2期幼蟲；
[0033]三、觀測(cè)2小時(shí)后，第二觀測(cè)點(diǎn)B上聚有90%的Tretocephalus線蟲L2期幼蟲，聚于A點(diǎn)的線蟲小于5%，表明在沒(méi)有草甘膦農(nóng)藥的吸引下，Tretocephalus線蟲只對(duì)作為食物的大腸桿菌具有趨向性反應(yīng)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法，其特征在于是按下列步驟實(shí)現(xiàn): 一、稱取2?3g瓊脂于錐形瓶中，加入100mL純水中，用封口膜密封后放入高壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行滅菌處理，冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入滅菌處理后的瓊脂液，在室溫下冷卻凝固得到瓊脂皿； 二、在步驟一得到的瓊脂皿的圓周邊緣間隔等距離取4個(gè)觀測(cè)點(diǎn)，在第一觀測(cè)點(diǎn)、第二觀測(cè)點(diǎn)和第三觀測(cè)點(diǎn)上分別滴入I μ L待測(cè)農(nóng)藥，I μ L大腸桿菌菌液和I μ L純水，在第四觀測(cè)點(diǎn)上加入80?200只Tretocephalus線蟲L2期幼蟲； 三、觀測(cè)1.5?2.5小時(shí)后，當(dāng)?shù)谝挥^測(cè)點(diǎn)上聚有大于30%的Tretocephalus線蟲L2期幼蟲時(shí)，表明待測(cè)農(nóng)藥中含有草甘膦。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法，其特征在于步驟一所述的滅菌處理是在120°C下滅菌20min。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法，其特征在于步驟一培養(yǎng)皿的直徑尺寸為6cm。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法，其特征在于步驟一冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入18?24mL滅菌處理后的瓊脂液。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法，其特征在于步驟一冷卻至40?50°C后在培養(yǎng)皿中加入20mL滅菌處理后的瓊脂液。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法，其特征在于步驟二所述的大腸桿菌菌液中大腸桿菌的濃度為I X 19個(gè)/mL?2X 10 9個(gè)/mL。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法，其特征在于步驟二在第四觀測(cè)點(diǎn)上加入80?120只Tretoc^phalus線蟲L2期幼蟲。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法，其特征在于步驟二在第四觀測(cè)點(diǎn)上加入100只Tretocephalus線蟲L2期幼蟲。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法，其特征在于步驟三觀測(cè)2小時(shí)后，當(dāng)?shù)谝挥^測(cè)點(diǎn)上聚有大于30%的Tretoaphalus線蟲L2期幼蟲時(shí)，表明待測(cè)農(nóng)藥中含有草甘膦。
【專利摘要】基于線蟲趨避行為的草甘膦農(nóng)藥檢測(cè)方法，本發(fā)明涉及一種草甘膦農(nóng)藥的檢測(cè)方法，它為了解決現(xiàn)有草甘膦鑒定方法存在的靈敏度低、操作復(fù)雜、成本高的問(wèn)題。檢測(cè)方法：瓊脂置于錐形瓶中，用封口膜密封后進(jìn)行滅菌處理，滅菌處理后置于培養(yǎng)皿中，凝固得到瓊脂皿；二、在瓊脂皿表面取4個(gè)觀測(cè)點(diǎn)，分別加入待測(cè)農(nóng)藥，大腸桿菌菌液，純水和Tretocephalus線蟲L2期幼蟲；三、當(dāng)待測(cè)農(nóng)藥聚有大于30％的幼蟲時(shí)，表明農(nóng)藥中含有草甘膦。本發(fā)明的檢測(cè)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求低，不需要特殊的高精分析儀器和檢測(cè)設(shè)備，操作方便，檢測(cè)靈敏度高。
【IPC分類】G01N33/00
【公開號(hào)】CN104977389
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510367475
【發(fā)明人】王云彪, 阿娜莎, 陳展彥, 武海濤
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所
【公開日】2015年10月14日
【申請(qǐng)日】2015年6月29日