一種無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供一種無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器的制備方法，是先用L?半胱氨酸對(duì)多壁碳納米管進(jìn)行功能化，得到Cys?MWCNTs，然后采用電化學(xué)法將銀納米粒子沉積到Cys?MWCNTs修飾電極的表面得到的。本發(fā)明還提供應(yīng)用該方法制備得到的無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器及其應(yīng)用。本發(fā)明首次利用銀納米粒子對(duì)活性氧的催化作用代替SOD酶以達(dá)到對(duì)超氧陰離子的檢測(cè)目的，方法簡(jiǎn)單、易操作，且不易失活，可以長(zhǎng)期保存使用。并且將該修飾電極成功應(yīng)用于檢測(cè)活細(xì)胞（PC12）釋放的超氧陰離子。本發(fā)明構(gòu)建的修飾電極對(duì)O2·?有很好的電化學(xué)響應(yīng)，具有線性范圍寬、靈敏度高、響應(yīng)時(shí)間短、穩(wěn)定性以及重復(fù)性好等特點(diǎn)。
【專利說明】
-種無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 活性氧(ROS)是重要的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子，主要調(diào)節(jié)DNA損傷、蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞調(diào)亡 等等。其中，超氧陰離子(〇2 ?-)作為最重要且最活躍的ROS之一，參與了許多生理和病理過 程，會(huì)對(duì)生物器官造成損傷。近年來，〇2 ? 1 農(nóng)度與人類健康之間的關(guān)系引起了極大關(guān)注，從 體內(nèi)應(yīng)用學(xué)的角度，要求化?-的動(dòng)態(tài)檢測(cè)線性范圍寬，不僅在毫摩爾、微摩爾的摩爾濃度， 甚至需要延伸至納摩爾級(jí)別的摩爾濃度。與此同時(shí)，由于化?-極不穩(wěn)定，很容易衰變?yōu)槠?它活性氧單元，因此，建立高效、可靠的定性定量檢測(cè)方法仍是一個(gè)難點(diǎn)。
[0003] 近年來電化學(xué)方法由于其簡(jiǎn)單易用、低成本、可靠性高、靈敏度高、選擇性好、檢出 限低而受到廣泛關(guān)注。研究較為廣泛的是將銅-鋒超氧化物歧化酶(化-Zn SOD)固定在電極 表面構(gòu)建酶?jìng)鞲衅?。然而，由于酶的活性中屯、被表面蛋白質(zhì)覆蓋，造成電子傳遞困難。此外， 酶的價(jià)格昂貴，容易失活，對(duì)環(huán)境要求較高，酶電極的制備較為繁瑣且不易儲(chǔ)存，運(yùn)些不足 都大大限制了酶?jìng)鞲衅鞯陌l(fā)展。因此，研制具有低檢測(cè)限的無酶化傳感器就顯得尤為重 要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感 器及其制備方法和應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器的制備方法，是先 用心半脫氨酸化-切S)對(duì)多壁碳納米管(MWCNTs)進(jìn)行功能化，得到切S-MWCNTs，然后采用電 化學(xué)法將銀納米粒子(AgNPs)沉積到Cys-MWCNTs修飾電極的表面得到的。
[0006] 作為優(yōu)選，所述用心半脫氨酸化-切S)對(duì)多壁碳納米管(MWCNTs)進(jìn)行功能化的具 體方法為:將純化后的多壁碳納米管與k半脫氨酸分散于超純水中，加入1-乙基-(3-二甲 基氨基丙基)碳酷二亞胺鹽酸鹽和N-徑基班巧酷亞胺，室溫?cái)埌?0-2化，離屯、后水洗，配成 分散液;作為優(yōu)選，所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酷二亞胺鹽酸鹽和N-徑基班巧酷亞 胺的加入量均為多壁碳納米管質(zhì)量的20倍。
[0007] 作為優(yōu)選，所述多壁碳納米管與心半脫氨酸的質(zhì)量比為1:1。
[000引作為優(yōu)選，所述采用電化學(xué)法將銀納米粒子(AgNPs)沉積到切S-MWCNTs修飾電極 的表面的具體方法為:將心半脫氨酸功能化的多壁碳納米管分散液滴涂于預(yù)處理的裸玻碳 電極，烤干后，得到k半脫氨酸功能化多壁碳納米管修飾的玻碳電極;再將此修飾電極插入 含有硝酸銀的硝酸鐘電解質(zhì)溶液中，進(jìn)行電化學(xué)沉積，制得沉積有銀納米粒子的無酶超氧 陰離子電化學(xué)傳感器。
[0009]作為優(yōu)選，所述電化學(xué)沉積是在OV下用計(jì)時(shí)電流法電化學(xué)沉積1-300S;作為優(yōu)選， 電化學(xué)沉積200s。
[0010]在該電化學(xué)沉積時(shí)間內(nèi)，均能得到修飾電極，當(dāng)電化學(xué)沉積時(shí)間為200s時(shí)，修飾電 極對(duì)超氧陰離子的電化學(xué)響應(yīng)峰電流最大。
[0011]作為優(yōu)選，所述硝酸銀的濃度為0.01-3111111〇1/1;作為優(yōu)選，濃度為1mmol/L。
[0012] 在該濃度范圍內(nèi)，均能得到修飾電極，當(dāng)硝酸銀的濃度為1mmol/L時(shí)，修飾電極對(duì) 超氧陰離子的電化學(xué)響應(yīng)峰電流最大。
[0013] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供應(yīng)用上述方法制備得到的無酶超氧陰離子電化學(xué)傳 感器。
[0014] 本發(fā)明的第=個(gè)目的是提供上述無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器在檢測(cè)超氧陰離 子中的應(yīng)用。
[0015] 作為優(yōu)選，所述超氧陰離子為被AA刺激的PC12細(xì)胞釋放的。
[0016] 作為優(yōu)選，所述超氧陰離子為細(xì)胞PC12直接釋放的。
[0017] 本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)和產(chǎn)生的有益效果是： 1、本發(fā)明構(gòu)建了一個(gè)基于心半脫氨酸功能化碳納米管和銀納米粒子的無酶化傳感 器，首次利用銀納米粒子對(duì)活性氧的催化作用代替SOD酶W達(dá)到對(duì)超氧陰離子的檢測(cè)目的， 相比于傳統(tǒng)酶?jìng)鞲衅鞯膬r(jià)格昂貴，容易失活，制備繁瑣且不易儲(chǔ)存等缺點(diǎn)，該傳感器制備方 法簡(jiǎn)單，易操作，且不易失活，可W長(zhǎng)期保存使用。
[001引2、本發(fā)明的修飾電極對(duì)化?-有超靈敏的電化學(xué)響應(yīng)，響應(yīng)時(shí)間短，寬的線性范圍： 7X10-ll~7.41X10-5mol/L，低的檢測(cè)限：2.33X10-llmol/L，W及好的穩(wěn)定性和重復(fù)性等 優(yōu)點(diǎn)。
[0019] 3、本發(fā)明的傳感器不僅能夠檢測(cè)到被AA刺激的PC12細(xì)胞釋放的〇2' -，還能直接檢 測(cè)細(xì)胞PC12釋放的化運(yùn)表明該修飾電極在生命病理分析中具有極大的潛在價(jià)值，并有望 應(yīng)用于與化?-有關(guān)的醫(yī)學(xué)疾病診斷。
[0020]表1本發(fā)明與現(xiàn)有的〇2?節(jié)感器對(duì)測(cè)性能的比較

【附圖說明】
[0021] 附圖用來提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與本發(fā)明的實(shí) 施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中： 圖1為本發(fā)明的修飾電極Ag化s/切s-MWCNTs/GCE的掃描電鏡圖（SEM); 圖2為a:裸電極;b: AgNPs/切s-MWCNTs/GCE分別在含有l(wèi).OmM的化?-的化飽和的0.2M PBS(pH=7.0)中的循環(huán)伏安曲線。C是Ag化s/切s-MWCNTs/GCE在不含〇2 ?-的化飽和的0.2M PBS(pH=7.0)中的循環(huán)伏安曲線。掃速:50mV/s; 圖3為AgNPs/切s-MWCNTs/GCE對(duì)不同濃度的化?-檢測(cè)的計(jì)時(shí)電流曲線圖（圖3A，3B， 3D，3E)及化?-的還原峰電流與其濃度之間的線性關(guān)系圖（圖3C，3巧； 圖4為Ag化s/切s-MWCNTs/GCE在含有1 X IO5個(gè)鼠腎上腺嗜銘細(xì)胞(PC12)的生理PBS緩 沖溶液中，通過連續(xù)滴加 IyM抗壞血酸(AA)刺激，檢測(cè)PC12釋放出的化?的計(jì)時(shí)電流曲線 圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] W下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn) 方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為市 售。
[0023] 本發(fā)明實(shí)施過程中所使用的儀器和藥品： CHI 660C電化學(xué)工作站(上海辰華儀器公司）用于進(jìn)行循環(huán)伏安、計(jì)時(shí)電流的實(shí)驗(yàn)，石 英管加熱式自動(dòng)雙重純水蒸饋器（1810B，上海亞太技術(shù)玻璃公司）用于蒸超純水。電子天平 (北京賽多利斯儀器有限公司），用于稱量藥品。超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司）。 =氧化二侶打磨粉(0.30曲1，0.05曲1，上海辰華儀器試劑公司）用于處理玻碳電極。飽和甘隸 參比電極，銷對(duì)電極，憐酸二氨鋼、憐酸氨二鋼、氯化鐘、硝酸銀、硝酸鐘(西安化學(xué)試劑廠）； 多壁碳納米管(深圳納米港有限公司）。實(shí)驗(yàn)過程中使用的水均為超純水，實(shí)驗(yàn)所用的試劑 均為分析純。
[0024] 本發(fā)明的一種無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器的制備方法如下： a. 多壁碳納米管的純化：W混酸為氧化劑對(duì)多壁碳納米管(MWCNTs)進(jìn)行純化，將 MWCNTs與體積比為3:1的濃硫酸和濃硝酸的混合溶液超聲后，70°C加熱回流化，用超純水洗 涂至中性，50°C真空干燥； b. 制備k半脫氨酸-多壁碳納米管復(fù)合材料:取等質(zhì)量純化后的多壁碳納米管與心半 脫氨酸分散于超純水中，隨后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酷二亞胺鹽酸鹽和N-徑 基班巧酷亞胺，兩者的加入量均為碳納米管(或心半脫氨酸）質(zhì)量的20倍。1-乙基-(3-二甲 基氨基丙基)碳酷二亞胺鹽酸鹽和N-徑基班巧酷亞胺為交聯(lián)劑，可W促進(jìn)碳納米管上的簇 基和k半脫氨酸上的氨基發(fā)生酷胺化反應(yīng)產(chǎn)生酷胺鍵，室溫?cái)埌?地，12000rmp離屯、，水洗4 次，配成l.Omg ? mL-i的分散液，待用； C.制備Ag化s/切S-MWCNTs修飾電極:將化L的心半脫氨酸功能化的多壁碳納米管分 散液滴涂于預(yù)處理的裸玻碳電極，置于紅外燈下烤干，制得k半脫氨酸功能化多壁碳納米 管修飾的玻碳電極;再將此修飾電極插入含有0.01-3mM硝酸銀的0 . IM硝酸鐘電解質(zhì)溶液 中，在OV下用計(jì)時(shí)電流法電化學(xué)沉積1-300S，從而制得沉積有銀納米粒子的心半脫氨酸功 能化多壁碳納米管修飾的玻碳電極(AgNPs/Cys-MWCNTs/GCE)。
[0025] 實(shí)施例1 本發(fā)明的一種無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器的制備方法如下： a. 多壁碳納米管的純化：W混酸為氧化劑對(duì)多壁碳納米管(MWCNTs)進(jìn)行純化，將 MWCNTs與體積比為3:1的濃硫酸和濃硝酸的混合溶液超聲后，70°C加熱回流化，用超純水洗 涂至中性，50°C真空干燥； b. 制備k半脫氨酸-多壁碳納米管復(fù)合材料:取等質(zhì)量純化后的多壁碳納米管與心半 脫氨酸分散于超純水中，隨后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酷二亞胺鹽酸鹽和N-徑 基班巧酷亞胺，兩者的加入量均為碳納米管(或心半脫氨酸）質(zhì)量的20倍。1-乙基-(3-二甲 基氨基丙基)碳酷二亞胺鹽酸鹽和N-徑基班巧酷亞胺為交聯(lián)劑，可W促進(jìn)碳納米管上的簇 基和k半脫氨酸上的氨基發(fā)生酷胺化反應(yīng)產(chǎn)生酷胺鍵，室溫?cái)埌?地，12000rmp離屯、，水洗4 次，配成l.Omg ? mL-i的分散液，待用； C.制備Ag化s/切S-MWCNTs修飾電極:將化L的心半脫氨酸功能化的多壁碳納米管分 散液滴涂于預(yù)處理的裸玻碳電極，置于紅外燈下烤干，制得k半脫氨酸功能化多壁碳納米 管修飾的玻碳電極;再將此修飾電極插入含有0.1 mM硝酸銀的0.1 M硝酸鐘電解質(zhì)溶液中，在 OV下用計(jì)時(shí)電流法電化學(xué)沉積200s，從而制得沉積有銀納米粒子的心半脫氨酸功能化多壁 碳納米管修飾的玻碳電極(AgNPs/Cys-MWCNTs/GCE)。
[0026] 圖1為本發(fā)明所制備修飾電極(Ag化s/切s-MWCNTs/GCE)的掃描電鏡圖（SEM)。從圖 中可W看出通過電沉積合成銀納米粒子-1^-半脫氨酸功能化多壁碳納米管修飾電極中，尺 寸約在20nm的球形銀納米粒子均勻地分布在多壁碳納米管壁上，且沒有團(tuán)聚現(xiàn)象。
[0027] d.采用步驟C所得到的修飾電極為工作電極、銷柱為對(duì)電極、飽和甘隸電極為參 比電極，組成S電極體系，將其共同浸入含有l(wèi).OmM化的化飽和的0.2M pH=7.0的憐酸鹽 緩沖溶液中進(jìn)行循環(huán)伏安掃描，循環(huán)伏安技術(shù)的電位窗設(shè)置為-0.8V-0.2V，得到修飾電極 對(duì)化?的電化學(xué)響應(yīng)。
[002引圖2為a:裸電極;b: AgNPs/切s-MWCNTs/GCE分別在含有l(wèi).OmM的02 ?-的化飽和的 0.2M PBS(pH=7.0)中的循環(huán)伏安曲線。C是Ag化s/切s-MWCNTs/GCE在不含02 ?-的化飽和的 0.2M PBS(pH=7.0)中的循環(huán)伏安曲線，掃速為50mV/s。
[0029] 由圖可得:相比于裸電極，〇2 ?-在AgNPs /切s-MWCNTs/GCE上的還原峰電位發(fā)生了 明顯的正移，且還原峰電流顯著的增大，運(yùn)表明AgNPs /切s-MWCNTs/GCE對(duì)化?-的還原有明 顯的電催化作用，運(yùn)主要?dú)w因于銀納米粒子對(duì)化的還原有很強(qiáng)的催化性能，而且Cys- MWCNTs作為支持基質(zhì)，不僅可W有效的提高修飾電極的導(dǎo)電性，其大的比表面積還可W負(fù) 載更多的的銀納米粒子，運(yùn)將進(jìn)一步提高化?-在修飾電極上的電化學(xué)響應(yīng)。
[0030] 實(shí)施例2 本實(shí)施例與實(shí)施例1的不同之處在于:硝酸銀的濃度為0.0 lmM,在OV下用計(jì)時(shí)電流法電 化學(xué)沉積時(shí)間為300s。其余步驟均與實(shí)施例1相同。
[0031] 實(shí)施例3 本實(shí)施例與實(shí)施例1的不同之處在于:硝酸銀的濃度為3mM，在OV下用計(jì)時(shí)電流法電化 學(xué)沉積時(shí)間為1S。其余步驟均與實(shí)施例1相同。
[0032] 實(shí)施例4 本實(shí)施例與實(shí)施例1的不同之處在于:硝酸銀的濃度為2mM，在OV下用計(jì)時(shí)電流法電化 學(xué)沉積時(shí)間為20s。其余步驟均與實(shí)施例1相同。
[0033] 實(shí)施例5 本實(shí)施例與實(shí)施例1的不同之處在于:硝酸銀的濃度為1.5mM，在OV下用計(jì)時(shí)電流法電 化學(xué)沉積時(shí)間為100s。其余步驟均與實(shí)施例1相同。
[0034] 實(shí)施例6本發(fā)明的修飾電極AgNPs/Cys-MWCNTs/GCE對(duì)化測(cè)的線性范圍 W本發(fā)明實(shí)施例1制備的修飾電極為工作電極，銷柱為對(duì)電極、飽和甘隸電極為參比電 極，組成S電極體系，在化飽和的0.2M pH=7.0的憐酸鹽緩沖溶液中，對(duì)不同濃度化?-進(jìn)行 循環(huán)伏安掃描，電位窗設(shè)置為-0.8V-0.2V，結(jié)果參見圖3。
[0035] 圖3為AgNPs/Cys-MWCNTs/GCE對(duì)不同濃度的〇2 ?-檢測(cè)的計(jì)時(shí)電流曲線圖（A、B、D、 E，圖B為圖A的局部放大圖，圖E為圖D的局部放大圖）、化的還原峰電流與其濃度的線性關(guān) 系圖（C、F)。由圖可知，對(duì)02?-檢測(cè)的線性范圍為7X10-ll~7.57X10-8mol/L、5.59X10-7 ~7.41X10-5mol/L，檢測(cè)限為2.33X10-llmol/L。本發(fā)明與其他02?-傳感器相比，檢測(cè)范圍 寬，檢測(cè)限低，檢測(cè)過程簡(jiǎn)單，靈敏度高、快速簡(jiǎn)便。
[0036] 實(shí)施例7應(yīng)用本發(fā)明的修飾電極AgNPs/切s-MWCNTs/GCE對(duì)活細(xì)胞中超氧陰離子 (化?-)的電化學(xué)檢測(cè) a. 鼠腎上腺嗜銘細(xì)胞(PCl2)在濕度為95%的37°C恒溫的DMEM培養(yǎng)基中培育24小時(shí)，該 培養(yǎng)基的主要成分包括：10%熱滅活的胎牛血清，lOOU/mL的青霉素，lOOmg/mL的鏈霉素，5% 的C〇2。將培養(yǎng)好的PC12細(xì)胞的培養(yǎng)基移除，用憐酸鹽緩沖溶液洗涂S次，后加入3mL憐酸鹽 緩沖溶液于待測(cè)細(xì)胞中。PC12細(xì)胞數(shù)目約為1 X IO5個(gè)/孔板； b. W本發(fā)明實(shí)施例1制備的修飾電極為工作電極、銷柱為對(duì)電極、飽和甘隸電極為參 比電極，組成S電極體系，將此S電極體系共同浸入含有鼠腎上腺嗜銘細(xì)胞(PC12)的0.2M PBS(PH=7.4)中，連續(xù)滴加化M心抗壞血酸(AA)刺激PC12釋放化?-，并用計(jì)時(shí)電流法進(jìn)行檢 ，得到修飾電極對(duì)化的計(jì)時(shí)電流曲線； C.采用origin軟件作圖，繪制步驟a、b所得循環(huán)伏安曲線、計(jì)時(shí)電流曲線W及化? 電流與其濃度對(duì)數(shù)、濃度之間的線性關(guān)系圖。
[0037] 圖4顯示了 Ag化s/Cys-MWCNTs/GCE在含有1X105個(gè)鼠腎上腺嗜銘細(xì)胞(PC12)的 0.2M PBS(PH=7.4)中，通過連續(xù)滴力日IiiM抗壞血酸(AA)刺激，檢測(cè)PC12釋放出的化?-的計(jì)時(shí) 電流曲線圖。作為對(duì)照實(shí)驗(yàn)，圖曰，b，d分別對(duì)應(yīng)著在空白0.2M PBS(pH=7.0)中滴加 IiiM AA, PC12W及在含有300U/mL SOD的PC12中滴力日化M AA的計(jì)時(shí)電流檢測(cè)圖。
[003引由圖可知，當(dāng)在空白PBS中滴加 IiiM AA(圖a)或未刺激的PCm圖b)時(shí)，均無明顯電 流變化產(chǎn)生，且圖b的穩(wěn)態(tài)電流明顯高于圖曰，運(yùn)可能是因?yàn)槌`敏的修飾電極可W檢測(cè)到 PC12自身所產(chǎn)生的R0S。當(dāng)連續(xù)加入化M AA刺激PC12時(shí)，電流響應(yīng)明顯增加（圖C)。運(yùn)說明 PC12在刺激下能夠短時(shí)間內(nèi)釋放大量化?-。為了證實(shí)增加的電流響應(yīng)是由刺激的PC12所釋 放的化?-引起的，將300U/血超氧陰離子的特異性酶(SOD)與PC12混合，并加入化M AA刺激。 由圖d可知，此時(shí)響應(yīng)電流變?yōu)槠骄?，說明本修飾電極能夠成功檢測(cè)到PC12所釋放的化?-， 且圖d的穩(wěn)態(tài)電流依舊高于空白PBS(圖曰），運(yùn)說明SOD酶特異性消除了細(xì)胞溶液中的化?-， 其他ROS仍然存在。運(yùn)為進(jìn)一步研究與化?-相關(guān)的生理學(xué)及病理學(xué)奠定了基礎(chǔ)。
[0039]最后應(yīng)說明的是：W上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明， 盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可 W對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。 凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的 保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器的制備方法，其特征在于:是先用L-半胱氨酸對(duì) 多壁碳納米管進(jìn)行功能化，得到Cys-MWCNTs，然后采用電化學(xué)法將銀納米粒子沉積到Cys-MffCNTs修飾電極的表面得到的。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述用L-半胱氨酸對(duì)多壁碳納米管進(jìn) 行功能化的具體方法為:將純化后的多壁碳納米管與L-半胱氨酸分散于超純水中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺，室溫?cái)嚢?0-28h，離心 后水洗，配成分散液;作為優(yōu)選，所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的加入量均為多壁碳納米管質(zhì)量的20倍。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于:所述多壁碳納米管與L-半胱氨酸的質(zhì) 量比為1: 1。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的制備方法，其特征在于:所述采用電化學(xué)法將銀納米粒 子沉積到Cys-MffCNTs修飾電極的表面的具體方法為:將L-半胱氨酸功能化的多壁碳納米管 分散液滴涂于預(yù)處理的裸玻碳電極，烤干后，得到L-半胱氨酸功能化多壁碳納米管修飾的 玻碳電極;再將此修飾電極插入含有硝酸銀的硝酸鉀電解質(zhì)溶液中，進(jìn)行電化學(xué)沉積，制得 沉積有銀納米粒子的無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:所述電化學(xué)沉積是在OV下用計(jì)時(shí)電流法電 化學(xué)沉積l-300s;作為優(yōu)選，電化學(xué)沉積200s。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:所述硝酸銀的濃度為0.01-3mmol/L;作為 優(yōu)選，濃度為lmmol/Lo7. 應(yīng)用權(quán)利要求1-6任一所述的方法制備得到的無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器。8. 權(quán)利要求7所述的無酶超氧陰離子電化學(xué)傳感器在檢測(cè)超氧陰離子中的應(yīng)用。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于:所述超氧陰離子為被AA刺激的PC12細(xì)胞釋 放的。10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于:所述超氧陰離子為細(xì)胞PC12直接釋放的。
【文檔編號(hào)】G01N27/333GK105954336SQ201610291747
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年5月5日
【發(fā)明人】劉秀輝, 劉岳麟, 郭志盼, 劉丹, 劉一丹, 盧小泉
【申請(qǐng)人】西北師范大學(xué)