豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)卡及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測(cè)卡，特別是涉及一種用于快速定量檢測(cè)豬血清中豬圓環(huán)病毒抗體的檢測(cè)卡及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)是20世紀(jì)90年代，世界范圍內(nèi)人們?cè)诓∝i及一些無明顯臨床癥狀豬體內(nèi)檢測(cè)到了一種新型豬小環(huán)狀樣病毒(Allan和Ellis，2000)。該病毒與已知的由PK-15細(xì)胞培養(yǎng)污染而分離的PCV不同，有人建議將原來的PCV命名為圓環(huán)病毒I型(PCV-1)，將新出現(xiàn)的與臨床疾病相關(guān)的PCV命名為圓環(huán)病毒Π型(PCVD13PCVj感染后會(huì)出現(xiàn)斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、豬皮炎腎病綜合征(PNDS)、豬呼吸系統(tǒng)混合疾病、繁殖障礙綜合征等?，F(xiàn)在把由PCV2引起的多種病癥均叫“豬圓環(huán)病毒病”。PCV2中，PMWS對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成的危害最為嚴(yán)重，它主要引起豬漸進(jìn)性消瘦、腹瀉、呼吸道癥狀、皮膚蒼白或出現(xiàn)黃疸、生產(chǎn)性能降低。另外PCV2還侵害豬的免疫系統(tǒng)，抑制豬的免疫功能，還能與豬藍(lán)耳病、流感、支原體肺炎、副豬嗜血桿菌和鏈球菌等疫病病原相互作用，加重這些病的危害。給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
[0003]疫苗免疫是我國(guó)豬圓環(huán)防控的主要手段，采集免疫后豬血清，并檢測(cè)血清中豬圓環(huán)2病毒抗體的效價(jià)是監(jiān)控豬圓環(huán)的主要方法，也就是評(píng)價(jià)豬圓環(huán)疫苗免疫效果、免疫程序和監(jiān)控豬圓環(huán)病毒的抵抗能力，也是適時(shí)注射疫苗的主要依據(jù)。
[0004]市面上有豬圓環(huán)病毒抗體膠體金快速檢測(cè)卡，通過對(duì)樣品的檢測(cè)，即可粗略判斷豬體內(nèi)是豬圓環(huán)抗體含量，獸醫(yī)根據(jù)檢測(cè)結(jié)果判斷是否需要注射豬圓環(huán)疫苗。
[0005]同樣市場(chǎng)上也大量使用檢測(cè)豬圓環(huán)病毒抗體酶標(biāo)試劑盒，S卩ELISA酶標(biāo)試劑盒，ELISA試劑盒需要酶標(biāo)儀、溫育反應(yīng)條件、洗板條件，操作工作環(huán)境和專業(yè)技術(shù)人員，另外檢測(cè)樣本還需要需要復(fù)雜的前處理，如采集血液，分離血清等;而快速膠體金雖然檢測(cè)方便，不需專業(yè)技術(shù)人員和工作環(huán)境，但其檢測(cè)的靈敏度低，且只能定性，檢測(cè)范圍窄。而本專利豬圓環(huán)抗體試劑盒就克服了以上兩類試劑盒的各自缺點(diǎn)，操作簡(jiǎn)單，實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)、快速、準(zhǔn)確、高靈敏地定量(半定量)檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的就是提供一種豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)卡及其制備方法，能完全解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處。
[0007]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):
一種豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)卡，包括裝配在外殼內(nèi)的檢測(cè)卡本體，所述檢測(cè)卡本體包括底板，在底板上從左至右依次粘貼樣品墊、標(biāo)記墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，且樣品墊的右端搭在標(biāo)記墊的左端上，標(biāo)記墊的右端搭在硝酸纖維素膜的左端上，吸水紙左端搭在硝酸纖維素膜的右端上，所述標(biāo)記墊由載體基層和標(biāo)記物組成，標(biāo)記物為載體基層上噴涂鑭系熒光檢測(cè)微球和鑭系熒光質(zhì)控微球形成的一層膜，所述檢測(cè)微球和質(zhì)控微球均為表面帶有羥基或氨基的硅膠微球或聚苯乙烯微球，所述硝酸纖維素膜上包被豬圓環(huán)抗原為檢測(cè)線，包被羊抗雞抗體為質(zhì)控線，在外殼上對(duì)應(yīng)樣品墊開設(shè)加樣孔，對(duì)應(yīng)硝酸纖維素膜上的檢測(cè)線和質(zhì)控線開設(shè)視窗孔。
[0008]作為優(yōu)選，所述檢測(cè)微球?yàn)闃?biāo)記有豬圓環(huán)抗原的微球，質(zhì)控微球?yàn)闃?biāo)記有雞IgY或兔IgG的質(zhì)控微球。
[0009]作為優(yōu)選，所述硝酸纖維素膜上的檢測(cè)線和標(biāo)記墊上采用的豬圓環(huán)抗原均為滅活豬圓環(huán)病毒抗原、豬圓環(huán)疫苗、豬圓環(huán)病毒衣殼蛋白PCV2_Cap或豬圓環(huán)病毒2多肽;所述硝酸纖維素膜上質(zhì)控線采用的羊抗雞抗體為羊抗雞IgY的IgG或者羊抗兔lgG。
[0010]作為優(yōu)選，所述檢測(cè)微球和質(zhì)控微球均為表面帶有羥基或氨基的硅膠微球或聚苯乙烯微球。
[0011]作為優(yōu)選，所述標(biāo)記在生物原料上的鑭系熒光微球的鑭系熒光是指鑭系元素Eu、Sm或Tb與β— 二酮配基產(chǎn)生的熒光。其發(fā)光效率高、吸收光譜寬、發(fā)射光譜很窄、斯特克斯位移寬，使其熒光光譜分析的靈敏度很高。
[0012]作為優(yōu)選，所述樣品墊為檢測(cè)血清或血漿的樣品墊，或者為檢測(cè)全血的樣品墊。
[0013]作為優(yōu)選，本檢測(cè)卡利用豬血樣品中豬圓環(huán)病毒抗體、豬圓環(huán)病毒抗原的標(biāo)記物和硝酸纖維素膜上包被豬圓環(huán)病毒抗原通過雙抗原夾心法來檢測(cè)豬血樣本中豬圓環(huán)病毒抗體。
[0014]作為優(yōu)選，本檢測(cè)卡為定量層析檢測(cè)卡，它是通過檢測(cè)儀檢測(cè)層析后檢測(cè)卡的檢測(cè)線和質(zhì)控線發(fā)出的熒光信號(hào)，然后根據(jù)此批檢測(cè)卡的IC卡儲(chǔ)存的標(biāo)準(zhǔn)曲線，再由檢測(cè)線和質(zhì)控線的熒光信號(hào)從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待檢物的濃度。
[0015]—種豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)卡的制備方法，其特征在，包括以下步驟:
步驟一，把硝酸纖維素膜粘貼在PVC底板上，并在硝酸纖維素膜上噴涂已稀釋至0.2?
0.5mg/ml的羊抗雞IgY的IgG形成質(zhì)控線和已稀釋至0.3?1.0mg/ml的豬圓環(huán)抗原形成檢測(cè)線，烘制后備用；
步驟二，用封閉液封閉硝酸纖維素膜10?30分鐘，用1mM磷酸緩沖液清洗硝酸纖維素膜10?30分鐘，干燥后備用；
步驟三，制備標(biāo)記有雞IgY的鑭系熒光微球和標(biāo)記有豬圓環(huán)抗原的鑭系熒光微球；步驟四，把標(biāo)記有雞IgY和標(biāo)記有豬圓環(huán)抗原的鑭系熒光微球并分別稀釋至濃度0.05?0.4yg/ml和I?8yg/ml，并將其噴涂在載體基層上構(gòu)成標(biāo)記墊，烘制后備用；
步驟五，把樣品墊、標(biāo)記墊、吸水紙依次粘在PVC底板上，組裝成大卡，再用剪切機(jī)切割成試紙條，裝配在檢測(cè)卡外殼內(nèi)，即得到豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)卡。
[0016]名詞解釋:
羊抗雞IgY的IgG:羊抗雞IgY的免疫球蛋白G;
羊抗兔IgG:羊抗兔IgG的免疫球蛋白G;
雞IgY:雞卵黃抗體；
兔IgG:兔免疫球蛋白G;
抗豬RBC:抗豬紅細(xì)胞表面蛋白抗體。
[0017]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于:靈敏度高，檢測(cè)的批內(nèi)差及批間差小，有較好的重復(fù)性，性能穩(wěn)定，既可檢測(cè)全血樣本，也可以檢測(cè)血清和血漿樣本，與PRRSV(豬生殖與呼吸綜合征病毒)、CSFV豬瘟病毒、PPV(豬細(xì)小病毒)、PRV(豬輪狀病毒)等抗體沒有交叉反應(yīng)?？蓪?shí)現(xiàn)豬圓環(huán)病毒抗體現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，具有較高的實(shí)用價(jià)值。
【附圖說明】
[0018]圖1是本發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖2是圖1中檢測(cè)卡本體的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖3是圖2的俯視圖；
圖4是豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合具體實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0020]如圖1至圖4所示，一種豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)卡，包括裝配在外殼10內(nèi)的檢測(cè)卡本體，所述檢測(cè)卡本體包括PVC底板I，在PVC底板I上從左至右依次粘貼樣品墊2、標(biāo)記墊3、硝酸纖維素膜4和吸水紙5，且樣品墊2的右端搭在標(biāo)記墊3的左端上，標(biāo)記墊3的右端搭在硝酸纖維素膜4的左端上，吸水紙5左端搭在硝酸纖維素膜4的右端上。所述硝酸纖維素膜4上包被豬圓環(huán)抗原為檢測(cè)線6，包被羊抗雞抗體為質(zhì)控線7。在外殼10上對(duì)應(yīng)樣品墊2開設(shè)加樣孔11，對(duì)應(yīng)硝酸纖維素膜4上的檢測(cè)線6和質(zhì)控線7開設(shè)視窗孔12。
[0021]所述硝酸纖維素膜4上質(zhì)控線4采用的羊抗雞抗體為羊抗雞IgY的IgG或者羊抗兔IgG0
[0022]所述標(biāo)記墊3由載體基層和標(biāo)記物組成，標(biāo)記物為載體基層上噴涂鑭系熒光檢測(cè)微球和鑭系熒光質(zhì)控微球形成的一層膜，且檢測(cè)微球?yàn)闃?biāo)記有豬圓環(huán)抗原的微球，質(zhì)控微球?yàn)闃?biāo)記有雞IgY或兔IgG的質(zhì)控微球。所述檢測(cè)微球和質(zhì)控微球均為表面帶有羥基或氨基的娃膠微球或聚苯乙稀微球。并且，