轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)盤(pán)上，通過(guò)旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)盤(pán)使待測(cè)樣品、緩沖溶液、熒光納米探針進(jìn)入檢測(cè)通道中。
[0044]在上述的用于食品中多種危害因子同步檢測(cè)的方法中，所述的凸起的橫截面為正六邊形，所述的PDMS本體為圓盤(pán)形。
[0045]本發(fā)明的有益效果如下:
[0046]1、本發(fā)明的熒光納米探針采用核殼結(jié)構(gòu)，其中核層和殼層均為T(mén)EOS骨架，核層為T(mén)EOS納米內(nèi)核，其不同于傳統(tǒng)的通過(guò)物理包埋或共價(jià)交聯(lián)包裹的熒光納米探針，而是通過(guò)一種由“核”到“殼”全合成的熒光納米探針，核殼結(jié)構(gòu)的優(yōu)點(diǎn)在于:所制備的這種層層包裹的熒光納米探針具有更強(qiáng)的熒光信號(hào)，相比較以前文獻(xiàn)報(bào)道的稀土類(lèi)熒光納米對(duì)信號(hào)有著明顯增強(qiáng)，其光譜特性與以前文獻(xiàn)報(bào)道一致，二氧化硅包裹的熒光納米不會(huì)改變其熒光特性。
[0047]2、本發(fā)明的熒光納米探針在TEOS納米內(nèi)核表面設(shè)置多層表面鍵合有Eu3+和/或Tb3+稀土螯合物的TEOS殼層并結(jié)合TEOS納米內(nèi)核內(nèi)載有的Eu3+和/或Tb3+稀土螯合物，能夠提供更為靈敏、穩(wěn)定的熒光響應(yīng)和更強(qiáng)的熒光信號(hào)。其原因在于，由于硅殼層有一定的厚度，使得層與層之間有一定的距離，從而保證TEOS納米內(nèi)的Eu3+和/或Tb3+離子不會(huì)產(chǎn)生熒光自猝滅效應(yīng)，保證了熒光強(qiáng)度會(huì)隨著層數(shù)的增多而增強(qiáng)。這樣帶來(lái)最直接的好處就在于危害因子檢出限相比于傳統(tǒng)技術(shù)得到了顯著的提高，檢測(cè)靈敏度增加，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確和具有針對(duì)性。
[0048]3、本發(fā)明的用于食品中多種危害因子同步檢測(cè)的方法采用熒光納米探針和微流控芯片結(jié)合，具有高通量?jī)?yōu)點(diǎn)，可以同時(shí)檢測(cè)多種危險(xiǎn)因子，具體來(lái)說(shuō)，這里的危害因子不僅包括微生物等大分子，還包括激素、抗生素等小分子物質(zhì)，響應(yīng)速度快、熒光強(qiáng)度大，可以作為食品中多種危害因子檢測(cè)的有效方法。
【附圖說(shuō)明】
[0049]圖1是本發(fā)明的實(shí)施例1的熒光納米探針制備示意圖；
[0050]圖2是本發(fā)明的實(shí)施例1的修飾有氨基的熒光納米探針的放大的示意圖；
[0051 ]圖3是本發(fā)明的實(shí)施例3和4的微流控芯片的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0052]圖4是本發(fā)明的實(shí)施例3和4的微流控芯片的A-A剖視圖。
[0053]圖5是本發(fā)明的實(shí)施例5的熒光檢測(cè)光譜。
[0054]各標(biāo)號(hào)具體為:UTEOS納米內(nèi)核，2、修飾有氨基的TEOS納米內(nèi)核，3、修飾有稀土螯合物的TEOS納米內(nèi)核，4、修飾有氨基的熒光納米探針，5、稀土螯合物，6、TEOS殼層，8、PDMS本體，81、進(jìn)樣口，82、進(jìn)樣通道，83、控制通道，84、出口，85、凸起。
【具體實(shí)施方式】
[0055]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制。
[0056]實(shí)施例1
[0057]本實(shí)施例給出了熒光納米探針的制備方法。
[0058]具體為:1.螯合物前驅(qū)體的制備
[0059]溶液A:2.0mgBBCAP或BHHCT或PTTA溶解于20yL 0.05M的碳酸鹽緩沖液(pH 9.5)中。溶液B: 6.4mg EDC和2.0mg NHS溶解于80yL無(wú)水乙醇。A，B混合攪拌20min，加入1.5yLAPTMS，避光攪拌反應(yīng)2h。然后，加入200yL 0.0lM的EuCl3和TbCl3的混合物，避光攪拌反應(yīng)2h，獲得有大量氨基且螯合不同比例Eu3+和Tb3+的螯合物，作為合成具有不同發(fā)射波長(zhǎng)熒光探針的前驅(qū)體。
[0060]2.熒光納米探針的制備
[0061]A)焚光納米探針的TEOS納米內(nèi)核的合成:取10yL上述前驅(qū)體和300yL超純水加入至IJlOmL由非離子表面活性劑TritonX-1OO形成的反相膠束體系中進(jìn)行凝膠化反應(yīng)。反相膠束體系按照TritonX-1OO，正己醇，環(huán)己烷三者體積比1:1:3混合，快速攪拌均勻制備反相膠束。在上述體系中加入10yL TEOS，加快攪拌速度，促使TEOS進(jìn)入反相膠束中的“納米水池”，然后加入60yL NH4OH引發(fā)水解反應(yīng)。室溫反應(yīng)24h，使水解和縮合反應(yīng)進(jìn)行充分，將收集的產(chǎn)物分散在等體積的丙酮中，在冰水浴中超聲震蕩5min，高速離心沉淀，將沉淀分散在乙醇相中進(jìn)行充分洗滌，保存在無(wú)水乙醇中備用。其如圖1中的標(biāo)號(hào)I。
[0062]B)熒光納米探針TEOS殼層的制備:①如圖1中的標(biāo)號(hào)2所示，取I mL濃度約為30mg/mL懸浮于無(wú)水乙醇中的熒光納米探針TEOS納米內(nèi)核，加入3yL APTMS，室溫?cái)嚢?小時(shí)，隨后加熱到69°C，并持續(xù)加熱保持5min，最后用無(wú)水乙醇洗滌3遍，并懸浮于I mL無(wú)水乙醇中?、谌鐖D1中的標(biāo)號(hào)3所示，取上述表面修飾有氨基的TEOS納米內(nèi)核I mL，濃度約為30mg/mL，加入0.8mg BHHCT，室溫?cái)嚢?h，無(wú)水乙醇洗滌2遍后，以ImL Tris.HCl(0.05mol/L，pH 7.8)懸浮，最后以無(wú)水乙醇洗滌3遍，并懸浮于I mL無(wú)水乙醇中，然后加入0.8mg E11CI3，避光攪拌反應(yīng)2h，獲得螯合新一層Eu3+的納米探針;③TEOS殼層的制備:取上述鍵合有稀土螯合物的熒光納米I mL，濃度約為30mg/mL，加入20yLTE0S，室溫，避光攪拌2h，隨后加熱到69°C，并持續(xù)加熱保持5min，最后用無(wú)水乙醇洗滌I遍，并懸浮于I mL無(wú)水乙醇中。重復(fù)步驟①-③2_4次。最后重復(fù)①步驟在其表面修飾氨基，備用，其如圖1中的標(biāo)號(hào)4所示。圖2為修飾有氨基的熒光納米探針的示意圖，其中5為稀土螯合物，6為最外層的TEOS殼層，其中在圖2中最外層的TEOS殼層6和TEOS納米內(nèi)核之間僅畫(huà)出了稀土螯合物5，圖中未示出的是，在最外層的TEOS殼層6和TEOS納米內(nèi)核之間具有多層TEOS殼層，通過(guò)稀土螯合物5可以看出稀土螯合物5為多層分布的，在多層的稀土螯合物5之間即為T(mén)EOS殼層。
[0063]3.熒光納米探針與抗體偶聯(lián)
[0064]取抗體500yL，對(duì)0.01mol/L pH 5.2醋酸鈉緩沖液，4°C透析6h;然后加入Nal(k，終濃度為0.0Im01/L，對(duì)抗體進(jìn)行氧化，20分鐘后，再次對(duì)0.01mol/L pH5.2醋酸鈉緩沖液透析，然后加入表面帶有氨基的熒光納米探針500yL，混勻，4°C過(guò)夜；加入NaBH3CN,終濃度為0.005mol/L，4°C反應(yīng)2h；再加入等體積的封閉液(0.05mol/L Tris.HCl ,pH = 7.8，含2wt%BSA、4wt%蔗糖)，4°C封閉12小時(shí)或過(guò)夜;最后用0.05mol/LTris-HCl，pH=7.8)洗滌標(biāo)記好的熒光納米探針 3 遍，然后用 500yL 0.05mol/L Tri s.HCl (pH= 7.8，含0.9wt %NaCl、0.2wt%BSA,0.1wt% NaN3)懸浮，得到熒光納米探針，備用。
[0065]在本實(shí)施例中以及實(shí)施例2和3中均未明確指出Eu3+和Tb3+的摩爾比例，其在實(shí)施例5中的圖5的解釋中已經(jīng)明確說(shuō)明了Eu3+和Tb3+比例對(duì)特征峰的影響，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)圖5的圖譜自行設(shè)計(jì)Eu3+和Tb3+的比例。在本實(shí)施例中單位M代表mo 1/L，wt %代表質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。
[0066]實(shí)施例2
[0067]本實(shí)施例給出了熒光納米探針的制備方法。
[0068]具體為:1.螯合物前驅(qū)體的制備
[0069]溶液A:1Omg BBCAP或BHHCT或PTTA溶解于20yL 0.05M的碳酸鹽緩沖液(pH 9.5)中。溶液B: 6.4mg EDC和2.0mg NHS溶解于80yL無(wú)水乙醇。A，B混合攪拌20min，加入1.5yLAPTMS，避光攪拌反應(yīng)2h。然后，加入200yL 0.01M的EuC13和TbC13的混合物，避光攪拌反應(yīng)2h，獲得有大量氨基且螯合不同比例Eu3+和Tb3+的螯合物，作為合成具有不同發(fā)射波長(zhǎng)熒光探針的前驅(qū)體。
[0070]2.熒光納米探針的制備
[0071]A)熒光納米探針的TEOS納米內(nèi)核的合成:取10yL上述前驅(qū)體和300yL超純水加入至IJlOmL由非離子表面活性劑TritonX-1OO形成的反相膠束體系中進(jìn)行凝膠化反應(yīng)。反相膠束體系按照TritonX-1OO，正己醇，環(huán)己烷三者體積比1:1:3混合，快速攪拌均勻制備反相膠束。在上述體系中加入10yL TEOS，加快攪拌速度，促使TEOS進(jìn)入反相膠束中的“納米水池”，然后加入10yL NH40H引發(fā)水解反應(yīng)。室溫反應(yīng)24h，使水解和縮合反應(yīng)進(jìn)行充分，將收集的產(chǎn)物分散在等體積的丙酮中，在冰水浴中超聲震蕩5min，高速離心沉淀，將沉淀分散在乙醇相中進(jìn)行充分洗滌，保存在無(wú)水乙醇中備用。其示意圖如圖1中的標(biāo)號(hào)I。
[0072]B)熒光納米探針TEOS殼層的制備:①如圖1中的標(biāo)號(hào)2所示，取I mL濃度約為100mg/mL懸浮于無(wú)水乙醇中的熒光納米探針TEOS納米內(nèi)核，加入5yL APTMS，室溫?cái)嚢?小時(shí)，隨后加熱到69°C，并持續(xù)加熱保持5min，最后用無(wú)水乙醇洗滌3遍，并懸浮于I mL無(wú)水乙醇中；②如圖1中的標(biāo)號(hào)3所示，取上述表面修飾有氨基的TEOS納米內(nèi)核I mL，濃度約為100mg/mL，加入5.0mg BHHCT，室溫?cái)嚢?h，無(wú)水乙醇洗滌2遍后，以ImL Tris.HCl (0.05mol/L，pH 7.8)懸浮，最后以無(wú)水乙醇洗滌3遍，并懸浮于I mL無(wú)水乙醇中，然后加入5.0mgEuCl3，避光攪拌反應(yīng)2h，獲得螯合新一層Eu3+的納米探針;③TEOS殼層的制備:取上述鍵合有稀土螯合物的熒光納米I mL，濃度約為100mg/mL，加入100μLTE0S，室溫，避光攪拌2h，隨后加熱到69°C，并持續(xù)加熱保持5min，最后用無(wú)水乙醇洗滌I遍，并懸浮于I mL無(wú)水乙醇中。重復(fù)步驟①-③2-4次。最后重復(fù)①步驟在其表面修飾氨基，備用，其如圖1中的標(biāo)號(hào)4所示。圖2為修飾有氨基的熒光納米探針的放大的示意圖。
[0073]3.熒光納米探針與抗體偶聯(lián)
[0074]取抗體500yL，對(duì)0.01mol/L pH 5.2醋酸鈉緩沖液，4°C透析6h;然后加入Nal(k，終濃度為0.0Im01/L，對(duì)抗體進(jìn)行氧化，20分鐘后，再次對(duì)0.0lmol/L pH5.2醋酸鈉緩沖液透析，然后加入表面帶有氨基的熒光納米探針500yL，混勻，4°C過(guò)夜；加入NaBH3CN，終濃度為0.005mol/L，4°C反應(yīng)2h；再加入等體積的封閉液(0.05mol/L Tris.HCl ,