用于活細(xì)胞內(nèi)多種mRNA含量實(shí)時(shí)并行檢測(cè)的納米探針的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了屬于核酸檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域的一種用于活細(xì)胞內(nèi)多種mRNA含量實(shí)時(shí)并行檢測(cè)的納米探針。所述納米探針包括穿透肽、量子點(diǎn)、捕捉探針、報(bào)告探針和納米金顆粒；其中，量子點(diǎn)作為供體與捕捉探針相連，納米金顆粒作為受體與報(bào)告探針相連，捕捉探針與報(bào)告探針通過部分堿基互補(bǔ)配對(duì)，形成能量轉(zhuǎn)移供受體對(duì)；穿透肽與量子點(diǎn)相連，修飾能量轉(zhuǎn)移供受體對(duì)；所述捕捉探針能與目標(biāo)mRNA完全互補(bǔ)配對(duì)。所述納米探針能高效地進(jìn)入細(xì)胞，且抗光漂白性能強(qiáng)。將多種納米探針導(dǎo)入到活細(xì)胞內(nèi)，能對(duì)活細(xì)胞內(nèi)的多種mRNA含量進(jìn)行實(shí)時(shí)并行檢測(cè)，為更加全面地了解細(xì)胞中不同基因的表達(dá)水平以及不同基因之間的相互影響提供保障。
【專利說明】
用于活細(xì)胞內(nèi)多種mRNA含量實(shí)時(shí)并行檢測(cè)的納米探針
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于核酸檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于活細(xì)胞內(nèi)多種mRNA含量實(shí)時(shí)并 行檢測(cè)的納米探針。
【背景技術(shù)】
[0002] 基因是遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)，支配著生命的基本構(gòu)造和性能?；虻男蛄蟹治鍪?其研究中最直接的、最重要的組成部分，也是進(jìn)一步改造基因的基礎(chǔ)。傳統(tǒng)的基因分析針對(duì) 群體細(xì)胞，其結(jié)果只是細(xì)胞群體信號(hào)的平均值或其中占優(yōu)勢(shì)數(shù)量的細(xì)胞信息。即使來源相 同的單個(gè)細(xì)胞，由于隨機(jī)的生物過程和環(huán)境擾動(dòng)等原因，彼此在許多方面也存在差異，即細(xì) 胞存在異質(zhì)性。與現(xiàn)有基因測(cè)序技術(shù)相比，單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)不僅有助于認(rèn)識(shí)細(xì)胞異質(zhì)性，而 且還能檢測(cè)到微量的基因表達(dá)子或者罕見非編碼RNA，也可以用于尋找新的細(xì)胞類型、進(jìn)行 細(xì)胞亞型鑒定等領(lǐng)域。而在單細(xì)胞層面進(jìn)行核酸的準(zhǔn)確高通量檢測(cè)是單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的基 礎(chǔ)工作。
[0003] mRNA是攜帶遺傳信息的基因與執(zhí)行生命活動(dòng)的蛋白質(zhì)之間溝通的橋梁，是細(xì)胞表 型和功能的傳遞者。細(xì)胞內(nèi)mRNA的含量直接反映了該細(xì)胞對(duì)應(yīng)基因的表達(dá)情況，而細(xì)胞異 質(zhì)性的生物學(xué)本質(zhì)即是基因的表達(dá)差異或突變基因的表達(dá)，因此對(duì)細(xì)胞內(nèi)mRNA的檢測(cè)和研 究是生物醫(yī)學(xué)研究的重要領(lǐng)域。
[0004] 2005年，美國約翰霍普金斯大學(xué)的Zhang等開發(fā)了一種基于量子點(diǎn)和Cy5染料的夾 心式發(fā)光探針，能夠用來測(cè)定核酸的含量，遺憾的是，該檢測(cè)需要復(fù)雜的細(xì)胞核提取等預(yù)處 理過程，不能應(yīng)用于活細(xì)胞的檢測(cè)。2010年，韓國科學(xué)技術(shù)院的Taejoon等人利用目標(biāo)DNA單 鏈將納米金顆粒和金納米線連接起來，并觀察到表面拉曼增強(qiáng)效應(yīng)(SERS)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)多種 病原體核酸的并行檢測(cè)，但該方法的材料合成過程繁瑣，對(duì)納米線的操作困難，且拉曼光譜 檢測(cè)設(shè)備較為昂貴。2014年，德國的Michaelis等人利用核酸分子雜交前后熒光分子的連接 位置的改變實(shí)現(xiàn)熒光共振轉(zhuǎn)移效率的變化，從而檢測(cè)目標(biāo)核酸分子的含量，然而該檢測(cè)過 程是在細(xì)胞外進(jìn)行的，難以實(shí)現(xiàn)多種核酸的并行檢測(cè)。
[0005] 核酸擴(kuò)增技術(shù)是核酸檢測(cè)的傳統(tǒng)方法，具有靈敏度高、樣品純度要求低等優(yōu)點(diǎn)，但 是核酸擴(kuò)增的過程中容易發(fā)生假陽性、外源污染、溫度控制復(fù)雜等問題。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)多核酸的并行檢測(cè)，但是儀器設(shè)備價(jià)格昂貴、配套資源要求高，且難以應(yīng)用在 活細(xì)胞中。核酸可以通過堿基配對(duì)特異性連接互補(bǔ)探針，進(jìn)而根據(jù)系統(tǒng)的質(zhì)量改變、諧振頻 率偏移、表面拉曼增強(qiáng)等效應(yīng)對(duì)目標(biāo)核酸進(jìn)行檢測(cè)，但是其靈敏度較低、偶聯(lián)物復(fù)雜、過程 繁瑣，難以取得實(shí)用。另外，現(xiàn)有的納米探針，例如分子信標(biāo)技術(shù)，用于胞內(nèi)檢測(cè)時(shí)存在假陽 性干擾，穩(wěn)定性不足，對(duì)細(xì)胞毒性較大，且靈敏度、速度、通量等方面均有待進(jìn)一步提高，目 前難以用于單細(xì)胞核酸并行檢測(cè)。同時(shí)目前基于熒光檢測(cè)mRNA等核酸的成熟方法，采用熒 光蛋白或有機(jī)染料，都面臨熒光漂白的問題。熒光強(qiáng)度自身漂白很快，一方面會(huì)給檢測(cè)結(jié)果 帶來很大誤差，同時(shí)也不能夠長時(shí)間檢測(cè)。
[0006] 如果需要更加整體、準(zhǔn)確地了解不同基因在細(xì)胞內(nèi)部的表達(dá)、含量變化、物理空間 位置變化，單獨(dú)分析一種mRNA往往是不夠的。細(xì)胞作為一個(gè)生命體，其中各種物質(zhì)往往同時(shí) 發(fā)生作用，相互影響，相互調(diào)節(jié)。如癌細(xì)胞生長信號(hào)的表達(dá)和運(yùn)輸，通常不是單獨(dú)發(fā)生作用， 而它們是何時(shí)發(fā)生作用的，又是以怎樣的順序發(fā)生作用的，這些問題的答案都是目前的檢 測(cè)方法無法給出的。有些mRNA只在細(xì)胞生理周期的某個(gè)階段表達(dá)，而目前的檢測(cè)方法也無 法監(jiān)測(cè)mRNA的這種瞬態(tài)活性變化。
[0007] 綜上，實(shí)現(xiàn)長時(shí)間實(shí)時(shí)并行檢測(cè)活細(xì)胞內(nèi)多種mRNA的含量很有必要，也具有廣泛 的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種用于活細(xì)胞內(nèi)多種mRNA含量實(shí)時(shí)并行檢測(cè)的納米探 針，采取的技術(shù)方案如下：
[0009] -種用于活細(xì)胞內(nèi)多種mRNA含量實(shí)時(shí)并行檢測(cè)的納米探針，所述納米探針包括穿 透肽1、量子點(diǎn)2、捕捉探針3、報(bào)告探針4和納米金顆粒5;其中，量子點(diǎn)2作為供體與捕捉探針 3相連，納米金顆粒5作為受體與報(bào)告探針4相連，捕捉探針3與報(bào)告探針4通過部分堿基互補(bǔ) 配對(duì)，形成能量轉(zhuǎn)移供受體對(duì);穿透肽1與量子點(diǎn)2相連，修飾能量轉(zhuǎn)移供受體對(duì);所述捕捉 探針3能與目標(biāo)mRNA完全互補(bǔ)配對(duì)。
[0010] 所述量子點(diǎn)2的表面用鏈霉親和素修飾。
[0011 ] 所述納米金顆粒5的直徑為2nm_15nm。
[0012] 所述量子點(diǎn)2與納米金顆粒5的物理距離不大于20nm。
[0013] 所述捕捉探針3的結(jié)構(gòu)為1^〇^11-5'-(4，1'，(：，6)"-3'；其中，1^〇^11為用于偶聯(lián)的 量子點(diǎn)2的生物素，5 ' - (A，T，C，G) m-3 '提供捕獲目標(biāo)mRNA的配對(duì)區(qū)域，20彡m彡25。
[0014]所述報(bào)告探針4的結(jié)構(gòu)為5'-以，1'，(：，6)11-3'-5!1;其中，-5!1為用于偶聯(lián)納米金顆粒 5的巰基，5'-以，1'，(：，6)11-3'提供與捕捉探針3的配對(duì)區(qū)域，15<11<18。
[0015]報(bào)告探針中C、G堿基的數(shù)目較少，因此報(bào)告探針4與捕捉探針3形成的dsDNA具有較 低的退火溫度(35-40°C)，在室溫下(25°C)反應(yīng)時(shí)競(jìng)爭(zhēng)性偶聯(lián)的效率較高。
[0016]報(bào)告探針4的堿基數(shù)目少于捕捉探針3,堿基數(shù)差基本上決定了供受體間距。堿基 數(shù)差過大，供受體之間的能量轉(zhuǎn)移效率將變低;而堿基數(shù)差過小，報(bào)告探針4與捕捉探針3形 成的配對(duì)區(qū)域不容易被目標(biāo)mRNA接觸，產(chǎn)生空間位阻效應(yīng)，競(jìng)爭(zhēng)性偶聯(lián)效率較低。
[0017] 所述的穿透肽1為細(xì)胞生長因子EGF，一端用生物素修飾，以結(jié)合在量子點(diǎn)2的表 面。
[0018] 用光源激發(fā)量子點(diǎn)2,當(dāng)納米探針沒有接觸到目標(biāo)mRNA時(shí)，量子點(diǎn)2吸收的光能不 以光子的形式發(fā)射出去，不具有發(fā)光特性；當(dāng)納米探針與目標(biāo)mRNA接觸后，目標(biāo)mRNA取代報(bào) 告探針4偶聯(lián)于捕捉探針3上，量子點(diǎn)2恢復(fù)發(fā)光特性。
[0019] 所述的納米探針用于活細(xì)胞內(nèi)多種mRNA含量實(shí)時(shí)并行檢測(cè)的方法為：用不同發(fā)射 光譜的量子點(diǎn)2分別與面向多個(gè)目標(biāo)mRNA的不同序列的捕捉探針3結(jié)合，得到針對(duì)不同目標(biāo) mRNA的多種納米探針;將得到的針對(duì)不同目標(biāo)mRNA的多種納米探針導(dǎo)入到活細(xì)胞內(nèi)，在同 一種波段的激發(fā)光下，在同一種波段的激發(fā)光下，不同的納米探針?biāo)l(fā)出的熒光的顏色不 同；用共聚焦顯微鏡、熒光顯微鏡或熒光分光光度計(jì)，檢測(cè)不同顏色熒光信號(hào)的變化，對(duì)活 細(xì)胞內(nèi)的多種mRNA含量進(jìn)行實(shí)時(shí)并行檢測(cè)。
[0020] 本發(fā)明的有益效果為:所述納米探針能高效地進(jìn)入細(xì)胞，進(jìn)入方式不會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn) 生傷害;抗光漂白性能強(qiáng)，能夠在長達(dá)一個(gè)月的時(shí)間內(nèi)檢測(cè)活細(xì)胞內(nèi)mRNA含量。將針對(duì)不同 目標(biāo)mRNA的多種探針導(dǎo)入到活細(xì)胞中，能夠?qū)崿F(xiàn)活細(xì)胞內(nèi)多種mRNA含量的長時(shí)間實(shí)時(shí)并行 檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果能夠反映出mRNA在細(xì)胞內(nèi)的分布，并實(shí)時(shí)反映出各目標(biāo)mRNA轉(zhuǎn)錄合成的時(shí) 間，以及細(xì)胞中不同基因表達(dá)水平的差異，為更加全面地了解細(xì)胞中不同基因的表達(dá)水平 以及不同基因之間的相互影響提供保障。
【附圖說明】
[0021] 圖1為所述探針的結(jié)構(gòu)示意圖；其中，1-穿透肽，2-量子點(diǎn)，3-捕捉探針，4-報(bào)告探 針，5-納米金顆粒。
[0022] 圖2為所述探針的能量轉(zhuǎn)移示意圖。
[0023] 圖3為目標(biāo)mRNA競(jìng)爭(zhēng)性取代報(bào)告探針的示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 本發(fā)明可用于活細(xì)胞內(nèi)多種mRNA含量的長時(shí)間實(shí)時(shí)并行檢測(cè)。下面結(jié)合附圖和實(shí) 施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。
[0025] K-ras基因是RAS基因家族成員之一，與腫瘤的生成、增值、迀移、擴(kuò)散以及血管生 成均有關(guān)系，在腫瘤細(xì)胞中常發(fā)生突變;survivin具有腫瘤特異性，且與腫瘤細(xì)胞的分化增 殖及浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，survivin基因在常見的腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)。設(shè)計(jì)出本發(fā)明中的 相應(yīng)納米探針，即可對(duì)腫瘤細(xì)胞中涉及到的多種基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物mRNA進(jìn)行并行檢測(cè)。
[0026] 實(shí)施例1 [0027] (1)原料的準(zhǔn)備
[0028] 取lpmol量子點(diǎn)QD605(CdSe/ZnS量子點(diǎn)，發(fā)射波長為605nm)，在每個(gè)量子點(diǎn)的外圍 連接4-8個(gè)鏈霉親和素；
[0029] 納米金顆粒的數(shù)量為鏈霉親和素?cái)?shù)量總結(jié)合位點(diǎn)個(gè)數(shù)的5-10倍;一個(gè)鏈霉親和素 的可用結(jié)合位點(diǎn)為3個(gè)，所以納米金顆粒的數(shù)量為鏈霉親和素的15-30倍，試驗(yàn)中取直徑為 2nm的納米金顆粒；
[0030] 設(shè)計(jì)并合成捕捉探針、報(bào)告探針和穿透肽，合成的針對(duì)K-ras基因和survivin基因 的探針序列如表1所示。其中，報(bào)告探針中帶下劃線的部分代表報(bào)告探針末端的非配對(duì)堿 基，在報(bào)告探針末端設(shè)置2-3個(gè)非配對(duì)堿基可以增強(qiáng)競(jìng)爭(zhēng)性偶聯(lián)的效率;待測(cè)基因序列中帶 下劃線的部分為靶向序列區(qū)。
[0031 ] 表1:針對(duì)K-ras基因和survivin基因的探針序列
[0032]
[0033] (2)納米金顆粒-報(bào)告探針的合成
[0034]首先將納米金顆粒和3'端修飾有-SH的報(bào)告探針通過Au-S鍵偶聯(lián)結(jié)合;為保證每 個(gè)納米金顆粒都能和報(bào)告探針連接，報(bào)告探針需過量，一般報(bào)告探針的分子數(shù)為納米金顆 粒的2-10倍；
[0035]將300pmol的報(bào)告探針與160pmol的納米金顆?；旌?，加入roS緩沖液，使最終反應(yīng) 體積為300ul;然后在4°C環(huán)境下反應(yīng)24h，無需攪拌；反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到容量為 500ul、截留分子量為10K的超濾離心管中，調(diào)節(jié)離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為6000r/min，離心20min，重 復(fù)兩次，去除未與納米金顆粒結(jié)合的報(bào)告探針，得到約20ul的"納米金顆粒-報(bào)告探針"溶 液;反應(yīng)中采用的納米金顆粒的分子量約為15K，報(bào)告探針的分子量約為7K，所以用截留分 子量為10K的超濾離心管能將未參與反應(yīng)的報(bào)告探針去除。
[0036] (3)納米金顆粒-dsDNA的合成
[0037]將5'端修飾有biotin的捕捉探針與納米金顆粒-報(bào)告探針以1:1.2的摩爾比混合， 室溫下反應(yīng)8h，使捕捉探針與報(bào)告探針不完全配對(duì)結(jié)合成dsDNA，得到40ur'納米金顆粒-dsDNA"溶液;其中，捕捉探針能與K-ras基因的mRNA完全互補(bǔ)配對(duì)。
[0038] (4)特異性檢測(cè)K-ras基因轉(zhuǎn)錄的mRNA含量的納米探針的合成
[0039] 將lOOpmol量子點(diǎn)QD605、300pmol穿透肽EGF的混合溶液（lul)加入到納米金顆粒-dsDNA溶液中，然后加入roS緩沖液，形成100ul的反應(yīng)體系，室溫反應(yīng)45min，讓納米金顆粒-dsDNA、一端連接有生物素的EGF與量子點(diǎn)外圍的鏈霉親和素充分反應(yīng)，形成能特異性檢測(cè) K-ras基因轉(zhuǎn)錄的mRNA含量的納米探針，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。
[0040 ] (5)特異性檢測(cè)surv i v i η基因轉(zhuǎn)錄的mRNA含量的納米探針的合成
[0041 ] 構(gòu)建檢測(cè)survivin轉(zhuǎn)錄的mRNA含量的納米探針時(shí)，只需根據(jù)survivin的堿基序列 將捕捉探針、報(bào)告探針的序列替換；同時(shí)為了和K-ras區(qū)分，采用的量子點(diǎn)的發(fā)射波長為 525nm，其它步驟與構(gòu)建檢測(cè)K-ras基因轉(zhuǎn)錄的mRNA含量的納米探針的步驟相同。
[0042] (6)活細(xì)胞內(nèi)K-ras，survivin的mRNA含量的實(shí)時(shí)并行檢測(cè)
[0043]當(dāng)納米探針沒有接觸到目標(biāo)mRNA時(shí)，納米探針上的量子點(diǎn)和納米金顆粒的物理距 離在20nm以內(nèi)，會(huì)發(fā)生表面能量轉(zhuǎn)移;用光源激發(fā)量子點(diǎn)時(shí)，量子點(diǎn)吸收的光能不以光子的 形式發(fā)射出去，而是通過電偶極的作用傳遞給受體納米金顆粒，如圖2所示，此時(shí)量子點(diǎn)不 具有發(fā)光特性；
[0044]當(dāng)納米探針與目標(biāo)mRNA接觸后，目標(biāo)mRNA與捕捉探針的親和性更強(qiáng)，通過競(jìng)爭(zhēng)性 關(guān)系取代報(bào)告探針偶聯(lián)于捕捉探針上，使量子點(diǎn)和納米金顆粒之間的距離增大，超出能產(chǎn) 生能量轉(zhuǎn)移的有效距離，此時(shí)用光源激發(fā)量子點(diǎn)時(shí)，量子點(diǎn)恢復(fù)發(fā)光的特性，過程如圖3所 不。
[0045]試驗(yàn)中采用Hela細(xì)胞作為檢測(cè)對(duì)象，利用構(gòu)建的納米探針對(duì)Hela細(xì)胞內(nèi)的K-ras， survivin兩種mRNA含量進(jìn)行實(shí)時(shí)并行檢測(cè)。
[0046]在96孔板中培養(yǎng)Hela細(xì)胞，每孔中加入的細(xì)胞個(gè)數(shù)為5 X104個(gè)，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中加 入上述構(gòu)建的納米探針，對(duì)照組細(xì)胞不加入納米探針;然后采用共聚焦顯微鏡、熒光顯微鏡 或熒光分光光度計(jì)對(duì)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞、對(duì)照組細(xì)胞進(jìn)行熒光檢測(cè)，觀察納米探針的熒光信號(hào)變 化，根據(jù)焚光信號(hào)的變化對(duì)He la細(xì)胞內(nèi)的K-ras，survivin兩種mRNA含量進(jìn)行實(shí)時(shí)并行檢 測(cè);其中，發(fā)射峰為605nm的熒光強(qiáng)度表征K-ras轉(zhuǎn)錄mRNA的含量，發(fā)射峰為525nm的熒光強(qiáng) 度表征survivin轉(zhuǎn)錄mRNA的含量。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于活細(xì)胞內(nèi)多種mRNA含量實(shí)時(shí)并行檢測(cè)的納米探針，其特征在于，所述納米 探針包括穿透肽（1)、量子點(diǎn)（2)、捕捉探針(3)、報(bào)告探針(4)和納米金顆粒(5);其中，量子 點(diǎn)（2)作為供體與捕捉探針(3)相連，納米金顆粒(5)作為受體與報(bào)告探針(4)相連，捕捉探 針(3)與報(bào)告探針(4)通過部分堿基互補(bǔ)配對(duì)，形成能量轉(zhuǎn)移供受體對(duì);穿透肽（1)與量子點(diǎn) (2)相連，修飾能量轉(zhuǎn)移供受體對(duì);所述捕捉探針(3)能與目標(biāo)mRNA完全互補(bǔ)配對(duì)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米探針，其特征在于，所述量子點(diǎn)（2)的表面用鏈霉親和素 修飾。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米探針，其特征在于，所述納米金顆粒（5)的直徑為2nm-15nm〇4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米探針，其特征在于，所述量子點(diǎn)（2)與納米金顆粒(5)的物 理距離不大于20nm〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米探針，其特征在于，所述捕捉探針（3)的結(jié)構(gòu)為13；[〇1:;[11-5'-以，1'，(：，6)"-3'；其中，1^ 〇^11為用于偶聯(lián)量子點(diǎn)（2)的生物素，5'-以，1'，(：，6)"-3'提供捕 獲目標(biāo)mRNA的配對(duì)區(qū)域，20彡m彡25。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米探針，其特征在于，所述報(bào)告探針(4)的結(jié)構(gòu)為5'-(A，T， C，G) n-3 ' -SH;其中，-SH為用于偶聯(lián)納米金顆粒(5)的巰基，5 ' - (A，T，C，G) n-3 '提供與捕捉探 針(3)配對(duì)的區(qū)域，15彡η<18。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米探針，其特征在于，所述的穿透肽（1)為細(xì)胞生長因子 EGF，一端用生物素修飾。8. 權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的納米探針用于活細(xì)胞內(nèi)多種mRNA含量實(shí)時(shí)并行檢測(cè)的方 法，其特征在于，用不同發(fā)射波長的量子點(diǎn)（2)分別與面向多個(gè)目標(biāo)mRNA的不同序列的捕捉 探針⑶結(jié)合，得到針對(duì)不同目標(biāo)mRNA的多種納米探針;將得到的針對(duì)不同目標(biāo)mRNA的多種 納米探針導(dǎo)入到活細(xì)胞內(nèi)，在同一種波段的激發(fā)光下，不同的納米探針?biāo)l(fā)出的熒光的顏 色不同；用共聚焦顯微鏡、熒光顯微鏡或熒光分光光度計(jì)，檢測(cè)不同顏色熒光信號(hào)的變化， 即可對(duì)活細(xì)胞內(nèi)的多種mRNA含量進(jìn)行實(shí)時(shí)并行檢測(cè)。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK105886620SQ201610269890
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年4月27日
【發(fā)明人】任大海, 王斌, 尤政
【申請(qǐng)人】清華大學(xué)