一種檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及IgM抗體免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)有免疫檢測(cè)方法中，主要是應(yīng)用免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)樣本中待測(cè)物質(zhì)；在臨床 檢驗(yàn)中，主要通過(guò)抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)體液中抗體或抗原等物質(zhì)。根據(jù)檢測(cè)原理的不同，免疫 檢測(cè)可以分為間接法、夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法和捕獲法。
[0003] 在正常血清中，IgG是血清免疫球蛋白的主要成分，約占血清中免疫球蛋白總含量 的75 %，而IgM則大約占血清中免疫球蛋白總量的6 %，針對(duì)某種抗原的特異性IgM經(jīng)常與 特異性IgG同時(shí)存在，且特異性IgG經(jīng)常會(huì)干擾IgM抗體的測(cè)定?，F(xiàn)有的四種檢測(cè)方法中， 特異性IgG對(duì)IgM抗體測(cè)定的干擾主要表現(xiàn)在如下：
[0004] 間接法測(cè)IgM抗體時(shí)，通過(guò)包被抗原，用酶或者其他指示物標(biāo)記二抗的模式進(jìn)行 檢測(cè)，這類方法容易出現(xiàn)特異性不強(qiáng)，易受待測(cè)樣本中IgG的干擾；
[0005] 夾心法測(cè)IgM抗體時(shí)，同樣出現(xiàn)特異性不強(qiáng)，容易受IgG的干擾，檢測(cè)靈敏度較捕 獲法不高，同時(shí)標(biāo)記的抗原與包被的抗原會(huì)相互競(jìng)爭(zhēng)與待測(cè)的IgM結(jié)合，導(dǎo)致檢測(cè)信號(hào)不 強(qiáng)或者沒(méi)有；
[0006] 競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)IgM抗體時(shí)，由于IgM抗體分子量較大，不是非常適合使用此方法，且與 間接法一樣，其特異性不強(qiáng)，易受待測(cè)樣本中IgG的干擾，同時(shí)標(biāo)記所用的IgM抗體不易獲 得。
[0007] 目前測(cè)定IgM抗體時(shí)，主要用捕獲法，捕獲法則是通過(guò)包被抗IgM，用酶或其他指 示物標(biāo)記抗原的模式進(jìn)行檢測(cè)，即，先將血清中所有免疫球蛋白IgM(包括特異性IgM和非 特異性IgM)都固定于固相中，去除IgG干擾后，再檢測(cè)待測(cè)特異性IgM，但是這種在檢測(cè)過(guò) 程中，容易出現(xiàn)檢測(cè)靈敏度不高，容易導(dǎo)致假陰性現(xiàn)象。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 針對(duì)現(xiàn)檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法中存在的特異性不強(qiáng)，容易受到待測(cè)樣本中 IgG干擾和檢測(cè)靈敏度不高，容易出現(xiàn)假陰性的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是為了解決前述問(wèn)題而 提出一種檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法。
[0009] 為達(dá)到上述技術(shù)目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：
[0010] 本發(fā)明為一種檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法：包含以下步驟：
[0011] 步驟一、抗IgM的固化處理，將抗IgM置于固相載體上，在2°C~8°C的條件下，孵 育12小時(shí)及以上，然后洗滌3~5次；
[0012] 步驟二、待測(cè)IgM與抗IgM結(jié)合，將作為樣本的待測(cè)IgM加入已經(jīng)固化了抗IgM的 固相載體中，孵育〇. 5~1. 0小時(shí)，洗滌3~5次；
[0013] 步驟三、抗原、標(biāo)記單抗與固相載體上的待測(cè)IgM結(jié)合，可以先將抗原與標(biāo)記單抗 混合均勻后，再加入步驟二中洗滌好的固相載體中，在恒溫箱中，37°C恒溫條件孵育0. 5~ 1小時(shí)，孵育結(jié)束，洗滌3~5次；或者依次將抗原、標(biāo)記單抗加入步驟二中洗滌好的固相載 體中，即先將抗原加入，緊接著加入標(biāo)記單抗，在恒溫箱中，37°C條件恒溫孵育0. 5~1小 時(shí)，孵育結(jié)束，洗滌3~5次，留待檢測(cè)；
[0014] 步驟四、信號(hào)檢測(cè)，待步驟三完成后，根據(jù)標(biāo)記單抗上的指示物的不同，在相應(yīng)的 儀器設(shè)備上進(jìn)行其反應(yīng)信號(hào)檢測(cè)。
[0015] 較優(yōu)地，所述抗原、標(biāo)記單抗與待測(cè)IgM的孵育過(guò)程中，一個(gè)抗原份額子可同時(shí)結(jié) 合2個(gè)及以上不同結(jié)合位點(diǎn)的標(biāo)記單抗，以增加反應(yīng)信號(hào)。
[0016] 較優(yōu)地，所述固相載體為微孔板、玻璃板或NC膜。
[0017] 較優(yōu)地，所述洗滌過(guò)程采用含有表面活性劑的洗滌液。
[0018] 較優(yōu)地，所述抗IgM為羊抗IgM或者鼠抗IgM。
[0019] 較優(yōu)地，所述標(biāo)記單抗中的指示物為酶、膠體金、膠體銀、膠體硒、乳膠、放射性物 質(zhì)、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)及熒光物質(zhì)。
[0020] 本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明首先排除了樣本中IgG與待測(cè)IgM競(jìng)爭(zhēng)性與抗原的結(jié) 合，極大的降低了IgG對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾，從而降低檢測(cè)的背景和假陽(yáng)性率，提高檢測(cè)特異 性，同時(shí)采用2個(gè)及以上不同結(jié)合位點(diǎn)的標(biāo)記單抗，增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)，降低假陰性率，提高檢 測(cè)靈敏度。
【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1為本發(fā)明一種檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法的反應(yīng)原理示意圖。
[0022] 其中，1-固相載體；2-抗IgM ;3_樣本中待測(cè)IgM ;4_抗原；5-標(biāo)記單抗。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 為了更好地說(shuō)明本發(fā)明，現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例與附圖作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0024] 本發(fā)明為一種檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法，如圖1所示的反應(yīng)原理，涉及的步驟 為：
[0025] 步驟一、抗IgM2的固化處理。將抗IgM2置于檢測(cè)系統(tǒng)的微孔板或者玻璃板或者 NC膜上，這些微孔板或者玻璃板或者NC膜為實(shí)驗(yàn)的固相載體1，在2°C~8°C的條件下，孵 育12小時(shí)及以上，然后用含表面活性劑的洗滌液洗滌3~5次，洗滌的目的主要是去除尚 未結(jié)合上固相載體1的抗IgM2。
[0026] 步驟二、待測(cè)IgM3與抗IgM2結(jié)合。將含待測(cè)IgM3樣本加入已經(jīng)固化了抗IgM2 的固相載體1中，孵育〇. 5~1. 0小時(shí)，待待測(cè)IgM3和固相載體1上的抗IgM2結(jié)合后，用 含表面活性劑的洗滌液洗滌3~5次，以除去樣本中的特異性IgG，避免特異性IgG對(duì)檢測(cè) 的干擾。
[0027] 步驟三、抗原、標(biāo)記單抗與固相載體上的待測(cè)IgM3結(jié)合。可以將抗原與至少2個(gè) 標(biāo)記單抗混合均勻后，加入已經(jīng)附著了抗IgM2和待測(cè)IgM3的固相載體中，在恒溫箱內(nèi)，恒 溫溫度37°C，孵育0. 5~1小時(shí)，孵育結(jié)束，采用含表面活性劑的洗滌液洗滌3~5次；或者 可以先將抗原加入放置在37°C的恒溫箱中的已經(jīng)附著了抗IgM2結(jié)和樣本zhogn待測(cè)IgM3 的固相載體中，緊接著加入至少2個(gè)標(biāo)記單抗，同樣孵育0. 5~1小時(shí)，孵育結(jié)束，采用含表 面活性劑的洗滌液洗滌3~5次，得到孵育物，待檢測(cè)；
[0028] 步驟四、信號(hào)檢測(cè)。待步驟三完成后，根據(jù)標(biāo)記單抗上指示物的不同，在相應(yīng)的儀 器設(shè)備上進(jìn)行其反應(yīng)信號(hào)檢測(cè)。
[0029]具體地，本發(fā)明涉及的標(biāo)記單抗是2個(gè)及以上具有不同結(jié)合位點(diǎn)的單抗。
[0030] 具體地，本發(fā)明所使用