用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑及制備和檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑及制備和檢測方法；旨在提供一種檢測靈敏度高，檢測結(jié)果可靠的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，以及提供一種全程封閉推注式，避免溶液本身特殊的腥臭味對操作者的刺激，同時減短溶液接觸空氣的時間，避免快速氧化造成假陽性結(jié)果，充分保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的檢測方法；該用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，由下述重量百分?jǐn)?shù)的組分制成：0.03％-2％的亞甲基藍、5％-10％果糖、0.1％-1％抗壞血酸、1％-5％葉酸、40％二甲基亞砜、3％-5％乙酸-乙酸鈉緩沖液、0.1％-1％表面活性劑，余量為純化水。
【專利說明】用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑及制備和檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種檢測試劑，具體地說，是一種用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑， 本發(fā)明還涉及該檢測試劑的制備方法和檢測方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前，用于上皮組織進行細胞特殊染色的方法主要有醋酸白化反應(yīng)、碘試驗、以及 亞甲基藍染色等。特殊染色液體外診斷疾病有很長的歷史，是一種侵入式體外染色診斷方 法，廣泛用于上皮組織等常規(guī)病變的初篩。
[0003] 醋酸白化反應(yīng)是通過3 % -5 %乙酸溶液，涂抹在上皮組織上，等待一段時間后觀 察所涂抹的上皮組織有無白化反應(yīng)，若有則被懷疑有腫瘤細胞，此方法特異性差，易造成假 陽。碘試驗是基于糖原反應(yīng)，特異性同樣較低。
[0004] 專利CN103808551A利用虹吸法將溶液儲存于棉簽桿中，運輸過程中溶液易滲出 和氧化，使用時染色液流出緩慢，操作不便。
[0005] 中國專利：2014100628449中提及調(diào)節(jié)染色液pH采用的是乙酸，我們研宄發(fā)現(xiàn)， 當(dāng)乙酸的量達到3% -5%時，容易極易氧化，且pH值也下降到3左右，不符合該染色液 pH5. 0-6. 0的要求，若乙酸含量達不到3% -5%，就無法實現(xiàn)醋酸白化反應(yīng)，不能實現(xiàn)棉簽 染色與腫瘤組織醋酸白化反應(yīng)雙重定位。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測靈敏度高，檢測結(jié)果可靠的用于 上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，以及提供一種全程封閉推注式，避免溶液本身特殊的腥臭 味對操作者的刺激，同時減短溶液接觸空氣的時間，避免快速氧化造成假陽性結(jié)果，充分保 證檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的檢測方法。
[0007] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的第一技術(shù)方案是這樣的：
[0008] 該用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，所述的試劑由下述重量百分?jǐn)?shù)的組分制 成：0. 03% -2%的亞甲基藍、5% -10%果糖、0. 1% -1%抗壞血酸、1% -5%葉酸、40%二甲 基亞砜、3% -5%乙酸-乙酸鈉緩沖液、0. 1% -1 %表面活性劑，余量為純化水。
[0009] 進一步的，上述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，所述的3%-5%乙酸-乙酸 鈉緩沖液的pH值為5. 5 ±0. 5。
[0010] 進一步的，上述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，所述的表面活性劑為Tween-20。
[0011] 為制備該檢測試劑，本發(fā)明的另外一個技術(shù)方案是這樣的：
[0012] 上述用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的制備方法，依次包括下述步驟：
[0013] 1)按權(quán)利要求1所述的重量百分?jǐn)?shù)稱取各個組分；
[0014] 2)將步驟1)稱取的葉酸溶入二甲基亞砜中，攪拌溶解；
[0015] 3)將亞甲基藍加入至步驟2)溶液中，攪拌溶解后繼續(xù)攪拌40-80min;
[0016] 4)將表面活性劑加入步驟3)溶液中，攪拌混勻；
[0017] 5)將果糖和抗壞血酸和堿性水溶液加入至步驟4)溶液中再次攪拌溶解；
[0018] 6)將乙酸-乙酸鈉緩沖液按加入至步驟5)溶液中攪拌均勻即得。
[0019] 為了更好的使用本發(fā)明，本發(fā)明還有一個技術(shù)方案是這樣的：
[0020] 上述用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的檢測方法，該方法檢測時采用下述檢測 組件取樣后，棉簽插入桿端部插接在裝有權(quán)利要求1所述的檢測試劑的試劑瓶的接入管端 部，倒置擠壓瓶體，使檢測試劑流向取樣后的棉簽頭；
[0021] 所述的檢測組件包括一試劑瓶以及與試劑瓶配套使用的棉簽，所述試劑瓶包括螺 紋狀軟瓶體，瓶體上設(shè)有柱狀空心接入管，所述瓶體與接入管一體成型，所述棉簽包括一空 心插入桿，插入桿的一端端部設(shè)有萌蘆頭狀棉花頭，所述插入桿的外徑與接入管的內(nèi)徑相 同。
[0022] 作為本發(fā)明的進一步改進，上述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的檢測方 法，所述的接入管上還設(shè)有密封接口端的瓶塞。
[0023] 作為本發(fā)明的進一步改進，上述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的檢測方 法，所述的棉簽外部還設(shè)有密封棉簽的包裝袋。
[0024] 作為本發(fā)明的進一步改進，上述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的檢測方 法，所述的插入桿的長度160_220mm，直徑3_6mm。
[0025] 作為本發(fā)明的進一步改進，上述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的檢測方 法，所述的棉花頭尖頭直徑為2. 5-3. 5mm，下半部分直徑為7-12mm，下半部分與插入桿連 接。
[0026] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明將還原性亞甲基藍與葉酸結(jié)合在一起，通過葉酸受體介 導(dǎo)進入癌變細胞。通過染色和發(fā)生顏色變化而快速定位和檢測上皮腫瘤細胞。本發(fā)明采 用的尖頭萌蘆形棉簽，依據(jù)婦女宮頸解剖學(xué)結(jié)構(gòu)設(shè)計；尖頭可伸入宮頸口取樣，取樣面積更 大，能提高檢出陽性率。使用密封塑料瓶儲存染色液，運輸方便，能與棉簽巧妙地結(jié)合在一 起，全程封閉推注，相對于直接蘸取溶液，能避免溶液本身特殊的腥臭味對操作者的刺激； 同時減短溶液接觸空氣的時間，避免快速氧化造成假陽性結(jié)果，充分保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確 性。葉酸容易在酸性條件下析出，且當(dāng)在堿性條件下還原亞甲基藍時，亞甲基藍難溶解，本 發(fā)明加入適量表面活性劑能促進各成分溶解，使反應(yīng)更充分；并且將乙酸改為PH5. 0的乙 酸-乙酸鈉緩沖液，能有效的解決這些問題。我們通過602例臨床樣本驗證，以病理診斷為 金標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明的染色液與TCT檢查對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0027] 圖1是本發(fā)明提供的檢測組件結(jié)構(gòu)示意圖；
[0028] 圖2是本發(fā)明檢測組件組裝狀態(tài)示意圖；
[0029] 圖3本發(fā)明檢測組件使用狀態(tài)示意圖。

【具體實施方式】
[0030] 下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明的權(quán)利要求作進一步的詳細說明，但本發(fā)明并不 限于此，任何人在本發(fā)明權(quán)利要求范圍內(nèi)所做的有限次的修改仍在本發(fā)明權(quán)利要求保護范 圍之內(nèi)。
[0031] 實施例1
[0032] 本發(fā)明一種用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，所述的試劑由下述重量百分?jǐn)?shù)的 組分制成：2g的亞甲基藍、5g果糖、Ig抗壞血酸、Ig葉酸、40g二甲基亞砜、5gpH值為5. 5 乙酸-乙酸鈉緩沖液、0.IgTween-20,余量為純化水。
[0033] 實施例2
[0034] 本發(fā)明一種用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，所述的試劑由下述重量百分?jǐn)?shù)的 組分制成：〇. 03g的亞甲基藍、IOg果糖、0.Ig抗壞血酸、5g葉酸、40g二甲基亞砜、3gpH值 為5. 5乙酸-乙酸鈉緩沖液、IgTween-20,余量為純化水。
[0035] 實施例3
[0036] 本發(fā)明一種用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，所述的試劑由下述重量百分?jǐn)?shù)的 組分制成：〇. 06g的亞甲基藍、7g果糖、0. 5g的抗壞血酸、3g葉酸、40g二甲基亞砜、4gpH值 為5. 5乙酸-乙酸鈉緩沖液、0. 5gTween-20,余量為純化水。
[0037] 實施例4
[0038] 本發(fā)明一種用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，所述的試劑由下述重量百分?jǐn)?shù)的 組分制成：Ig的亞甲基藍、8g果糖、0. 3g的抗壞血酸、2g葉酸、40g二甲基亞砜、3. 5gpH值 為5. 5乙酸-乙酸鈉緩沖液、0. 3gTween-20,余量為純化水。
[0039] 實施例1至4中任意一種用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的制備方法，依次包 括下述步驟：
[0040] 1)按實施例1至4中任意一種組分?jǐn)?shù)稱取各個組分；
[0041] 2)將步驟1)稱取的葉酸溶入二甲基亞砜中，攪拌溶解；
[0042] 3)將亞甲基藍加入至步驟2)溶液中，攪拌溶解后繼續(xù)攪拌40-80min;
[0043] 4)將表面活性劑加入步驟3)溶液中，攪拌混勻；
[0044] 5)將果糖和抗壞血酸和堿性水溶液加入至步驟4)溶液中再次攪拌溶解；
[0045] 6)將乙酸-乙酸鈉緩沖液按加入至步驟5)溶液中攪拌均勻即得。
[0046] 實施例1至4中任意一種用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的制備方法，該方法 檢測時采用下述檢測組件取樣后，棉簽的插入桿端部插接在試劑瓶的接入管端部，所述的 試劑瓶內(nèi)裝有實施例1至4中任意一種檢測試劑，然后倒置擠壓瓶體，使檢測試劑流向取樣 后的棉簽頭；
[0047] 所述的檢測組件包括一塑料材質(zhì)的試劑瓶1以及與試劑瓶1配套使用的棉簽2,所 述試劑瓶1包括螺紋狀軟瓶體11，瓶體11上設(shè)有柱狀空心接入管12,接入管12上還設(shè)有 密封接口端的瓶塞13。
[0048] 所述瓶體11與接入管12 -體成型，所述棉簽2包括一空心插入桿21，插入桿21 的一端端部設(shè)有萌蘆頭狀棉花頭22,所述插入桿21的外徑與接入管12的內(nèi)徑相同。
[0049] 更具體的說，所述的插入桿21的長度160-220mm，直徑3-6mm，所述的棉花頭22尖 頭直徑為2. 5-3. 5_，下半部分直徑為712_，下部分與插入桿21連接。
[0050] 棉簽外部還設(shè)有密封棉簽的包裝袋3。
[0051] 不需要使用時，檢測試劑裝入試劑瓶1內(nèi)，蓋上瓶塞密封；棉簽2裝入包裝袋3密 封。方便儲存和運輸。
[0052] 使用時，打開棉簽2的包裝袋3,再打開試劑瓶1的瓶塞，將插入桿2的端部插接在 試劑瓶1接入管的內(nèi)，倒置試劑瓶并且擠壓，使試劑瓶內(nèi)的試劑流入棉簽的棉花頭，用棉簽 2的棉花頭22尖頭取樣檢測。
[0053] 為了更好的說明本發(fā)明的優(yōu)點，下面給出本發(fā)明提供的檢測溶液檢測結(jié)果與市場 上常規(guī)試劑檢測結(jié)果對比結(jié)果。
[0054] 表1改良型醋酸白溶液和TCT篩查結(jié)果和病理診斷的結(jié)果比較
[0055]

【權(quán)利要求】
1. 一種用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，其特征在于，所述的試劑由下述重量百分 數(shù)的組分制成：0.03% -2%的亞甲基藍、5% -10%果糖、0. 1% -1%抗壞血酸、1% -5%葉 酸、40%二甲基亞砜、3% -5%乙酸-乙酸鈉緩沖液、0. 1% -1 %表面活性劑，余量為純化水。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，其特征在于，所述的 3% -5%乙酸-乙酸鈉緩沖液的pH值為5. 5 ±0. 5。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑，其特征在于，所述的表 面活性劑為Tween-20 〇
4. 權(quán)利要求1所述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的制備方法，其特征在于，依 次包括下述步驟： 1) 按權(quán)利要求1所述的重量百分?jǐn)?shù)稱取各個組分； 2) 將步驟1)稱取的葉酸溶入二甲基亞砜中，攪拌溶解； 3) 將亞甲基藍加入至步驟2)溶液中，攪拌溶解后繼續(xù)攪拌40-80min; 4) 將表面活性劑加入步驟3)溶液中，攪拌混勻； 5) 將果糖和抗壞血酸和堿性水溶液加入至步驟4)溶液中再次攪拌溶解； 6) 將乙酸-乙酸鈉緩沖液按加入至步驟5)溶液中攪拌均勻即得。
5. 權(quán)利要求1所述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的檢測方法，其特征在于，該 方法檢測時采用下述檢測組件取樣后，棉簽的插入桿端部插接在裝有權(quán)利要求1所述的檢 測試劑的試劑瓶的接入管端部，倒置擠壓瓶體，使檢測試劑流向取樣后的棉簽頭； 所述的檢測組件包括一試劑瓶（1)以及與試劑瓶（1)配套使用的棉簽（2)，所述試劑 瓶⑴包括螺紋狀軟瓶體（11)，瓶體（11)上設(shè)有柱狀空心接入管（12)，所述瓶體（11)與 接入管（12) -體成型，所述棉簽（2)包括一空心插入桿（21)，插入桿（21)的一端端部設(shè)有 萌蘆頭狀棉花頭（22)，所述插入桿（21)的外徑與接入管（12)的內(nèi)徑相同。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的檢測方法，其特征在 于，所述的接入管（12)上還設(shè)有密封接口端的瓶塞（13)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的檢測方法，其特征在 于，所述的棉簽（2)外部還設(shè)有密封棉簽的包裝袋（3)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的檢測方法，其特征在 于，所述的插入桿（21)的長度160mm-220mm，直徑3mm-6mm。
9. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于上皮組織腫瘤細胞的檢測試劑的檢測方法，其特征在 于，所述的棉花頭（22)尖頭直徑為2. 5-3. 5mm，下半部分直徑為7mm-12mm，下半部分與插入 桿（21)連接。
【文檔編號】G01N33/52GK104483473SQ201410854634
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月31日
【發(fā)明者】汪艷濤, 龔成, 趙肅清, 湯永平, 潘秀華, 張曉麗 申請人:廣州市微米生物科技有限公司