專利名稱：革蘭氏陰性菌感染內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型公開一種內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒，按國際專利分類表(IPC)劃分屬于檢測(cè)臨床體液檢品的檢測(cè)試劑盒制造技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種革蘭氏陰性菌感染內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒。
背景技術(shù)：
內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)中的類脂多糖體，內(nèi)毒素進(jìn)入機(jī)體后可引發(fā)內(nèi)毒素血癥。內(nèi)毒素血癥嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致感染性休克、多器官功能衰竭，彌漫性血管內(nèi)凝血，細(xì)菌性腦膜炎等，病死率極高。體液細(xì)菌內(nèi)毒素水平檢測(cè)是診斷和監(jiān)測(cè)革蘭氏陰性菌感染的一個(gè)重要參數(shù)，體液內(nèi)毒素水平的定量快速檢測(cè)可用于鑒別診斷細(xì)菌性和非細(xì)菌性炎性疾病，監(jiān)控具有感染危險(xiǎn)的重癥患者的病程發(fā)展。目前，在臨床上診斷革蘭氏陰性菌感染主要靠微生物培養(yǎng)，微生物培養(yǎng)需要幾天才能出結(jié)果，而且由于抗生素的廣泛使用，其培養(yǎng)陽性率很低。細(xì)菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁上的主要成分，體液細(xì)菌內(nèi)毒素水平直接反應(yīng)了革蘭氏陰性菌感染的程度。鱟試驗(yàn)是檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的最佳方法。鱟試劑中含有對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素敏感的C因子，B因子，凝固酶原，凝固蛋白原等，在細(xì)菌內(nèi)毒素存在時(shí)，細(xì)菌內(nèi)毒素激活鱟試劑中的C因子，引起一系列酶促反應(yīng)，使鱟試劑產(chǎn)生凝集反應(yīng)形成凝膠。隨著凝膠的形成，反應(yīng)液的吸光度增加，吸光度增加的速度與內(nèi)毒素濃度成正相關(guān)。換言之，吸光度值上升到某一預(yù)設(shè)限值所需要的時(shí)間(啟動(dòng)時(shí)間)與內(nèi)毒素濃度成負(fù)相關(guān)，啟動(dòng)時(shí)間的對(duì)數(shù)與內(nèi)毒素濃度的對(duì)數(shù)成線性關(guān)系， 因此可以定量檢品的內(nèi)毒素濃度。此方法稱為為動(dòng)態(tài)濁度法。
發(fā)明內(nèi)容針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本實(shí)用新型提供了一種快速檢測(cè)、靈敏度高的革蘭氏陰性菌感染內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒，可以檢測(cè)出0. lEU/ml的細(xì)菌內(nèi)毒素，該試劑盒檢測(cè)的檢品是血液、尿液等體液，通過檢測(cè)體液中的細(xì)菌內(nèi)毒素水平，為臨床革蘭氏陰性菌感染及內(nèi)毒素血癥等的早期診斷及治療預(yù)后效果提供依據(jù)。為達(dá)到上述目的，本實(shí)用新型是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種革蘭氏陰性菌感染內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒，包括—標(biāo)準(zhǔn)品盒，其盒體內(nèi)包含鱟試劑瓶、內(nèi)毒素檢品處理液瓶、溶解液瓶、空安瓿及一支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品瓶；以及至少一檢品盒，其包含數(shù)支鱟試劑瓶和內(nèi)毒素檢品處理液瓶，且鱟試劑瓶和內(nèi)毒素檢品處理液瓶的數(shù)量為1:1。進(jìn)一步，所述的標(biāo)準(zhǔn)品盒包含八支鱟試劑瓶、四支內(nèi)毒素檢品處理液瓶、一支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品瓶、三支溶解液瓶及四支空安瓿，且上述各瓶均為安瓿瓶。進(jìn)一步，所述的鱟試劑瓶內(nèi)的鱟試劑裝量為0. Iml/支，細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品瓶內(nèi)裝有效價(jià)為50-200EU的細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，內(nèi)毒素檢品處理液瓶內(nèi)的內(nèi)毒素檢品處理液裝量為0. 9ml/支，溶解液瓶內(nèi)的溶解液裝量為aiil/支。本實(shí)用新型所采用的分析方法為動(dòng)態(tài)濁度法，本試劑盒配套光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)使用， 光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)必須帶有恒溫裝置，能使檢品和鱟試劑在37° C反應(yīng)，用軟件記錄反應(yīng)液吸光度值的動(dòng)態(tài)變化，根據(jù)反應(yīng)液吸光度值上升到某一預(yù)設(shè)限值所需要的時(shí)間(啟動(dòng)時(shí)間)的對(duì)數(shù)與內(nèi)毒素濃度的對(duì)數(shù)成反比例線性關(guān)系的原理，用本試劑盒配套的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線， 再根據(jù)檢品和鱟試劑反應(yīng)的吸光度值的動(dòng)態(tài)變化情況從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出檢品中的內(nèi)毒素含量。本實(shí)用新型的特點(diǎn)為能夠有效地排除體液對(duì)鱟試驗(yàn)的干擾，快速準(zhǔn)確地檢測(cè)出體液細(xì)菌內(nèi)毒素水平，本實(shí)用新型檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素比傳統(tǒng)的革蘭氏陰性菌培養(yǎng)法有以下優(yōu)占.
^ \\\ ·1.快速檢測(cè)可在2小時(shí)內(nèi)完成，而微生物培養(yǎng)需耗時(shí)幾天；2.靈敏度高可以檢測(cè)出0. lEU/ml的細(xì)菌內(nèi)毒素；3.不受抗生素的影響，是臨床快速診斷革蘭氏陰性菌感染的最佳方法之一。

圖1是本實(shí)用新型標(biāo)準(zhǔn)品盒示意圖；圖2是本實(shí)用新型檢品盒示意圖。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步說明實(shí)施例請(qǐng)參閱圖1及圖2，一種革蘭氏陰性菌感染內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒，包括一標(biāo)準(zhǔn)品盒1，所述的標(biāo)準(zhǔn)品盒包含八支鱟試劑瓶101、四支內(nèi)毒素檢品處理液瓶102、一支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品瓶103、三支溶解液瓶104及四支空安瓿105，且上述各瓶均為安瓿瓶； 以及至少一檢品盒2，其包含數(shù)支鱟試劑瓶21和內(nèi)毒素檢品處理液瓶22，且鱟試劑瓶和內(nèi)毒素檢品處理液瓶的數(shù)量為1:1，圖2中給出的鱟試劑瓶和內(nèi)毒素檢品處理液瓶分別為20 支，針對(duì)不同的測(cè)樣可以選擇不同數(shù)量的鱟試劑和內(nèi)毒素檢品處理液，但兩者的數(shù)量比例為 1:1。本實(shí)用新型的標(biāo)準(zhǔn)品盒1和檢品盒2可以分開或直接裝在一個(gè)外殼內(nèi)，目的是為解決實(shí)際檢測(cè)的需求而設(shè)置。本實(shí)用新型中的凝膠法鱟試劑，裝量為0. Iml/支。灌裝于無熱原安瓿中，冷凍干燥封口 ；細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，效價(jià)為50-200EU，灌裝于無熱原安瓿中，冷凍干燥封口 ；內(nèi)毒素檢品處理液，裝量為0. 9ml/支，灌裝于無熱原安瓿中，高壓滅菌；溶解液，裝量為 2ml/支，灌裝于無熱原安瓿中，高壓滅菌；無熱原空安瓿，無菌狀態(tài)下封口。本實(shí)用新型的使用方法一.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作1.從標(biāo)準(zhǔn)品盒中取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品1支加入適量溶解液溶解，在漩渦混合儀上劇烈震蕩2分鐘以上，按所標(biāo)示效價(jià)用溶解液在空安瓿中逐步稀釋配制成100EU/ ml、10EU/ml、lEU/ml 及 0. lEU/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液；2.取0. Iml陰性對(duì)照液(即溶解液)及濃度為10EU/ml、lEU/ml和0. lEU/ml的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加入到0.9ml內(nèi)毒素檢品處理液中，混勻。70°C保溫10分鐘，取出后立即放入冷水中冷卻；3.取處理后的陰性對(duì)照液、各濃度內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液混合液0.2 ml加入鱟試劑中， 輕輕振搖溶解鱟試劑后移取0. Iml反應(yīng)混合液至除熱原96孔微板中，放置于光學(xué)檢測(cè)儀器中檢測(cè)。反應(yīng)結(jié)束后，軟件自動(dòng)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合；二.檢品檢測(cè)1.檢品采集1. 1血漿用無熱原肝素鈉抗凝真空采血管采集靜脈血anl，進(jìn)行3000rpm離心 60s，分離得到富含血小板的血漿；1. 2尿液用已除熱原試管或其他除熱原器材采集中段尿液2ml ；2.檢測(cè)2. 1.取0. Iml血漿或尿液檢品，加入到0. 9ml內(nèi)毒素檢品處理液中，混勻后70°C 保溫10分鐘，取出后立即放入冷水中冷卻；2.2取經(jīng)內(nèi)毒素檢品處理液處理后的血漿或尿液檢品混合液0.2 ml加入鱟試劑中，溶解后移取0. Iml至除熱原96孔微板中，放置于光學(xué)檢測(cè)儀器中檢測(cè)，反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)計(jì)算出樣本內(nèi)毒素含量；三.檢測(cè)結(jié)果解釋正常體液中細(xì)菌內(nèi)毒素含量< 0. lEU/ml。檢測(cè)結(jié)果細(xì)菌內(nèi)毒素含量大于或等于 0. lEU/ml表明該檢品有細(xì)菌內(nèi)毒素存在，病人可能感染革蘭氏陰性菌。檢測(cè)結(jié)果細(xì)菌內(nèi)毒素含量小于0. lEU/ml表明該檢品細(xì)菌內(nèi)毒素含量低，病人感染革蘭氏陰性菌的可能性小。本試劑盒中的鱟試劑為只對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素起反應(yīng)的特異性鱟試劑。本試劑盒配有能排除體液檢品對(duì)鱟試驗(yàn)干擾的內(nèi)毒素檢品處理液。體液檢品經(jīng)內(nèi)毒素檢品處理液稀釋10 倍后，在70° C加熱10分鐘處理。處理后的體液檢品對(duì)鱟試驗(yàn)的干擾基本被排除。本實(shí)用新型所采用的分析方法為動(dòng)態(tài)濁度法。本試劑盒配套光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)使用。光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)必須帶有恒溫裝置，能使檢品和鱟試劑在37° C反應(yīng)，用軟件記錄反應(yīng)液吸光度值的動(dòng)態(tài)變化。根據(jù)反應(yīng)液吸光度值上升到某一預(yù)設(shè)限值所需要的時(shí)間(啟動(dòng)時(shí)間)的對(duì)數(shù)與內(nèi)毒素濃度的對(duì)數(shù)成反比例線性關(guān)系的原理，用本試劑盒配套的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。再根據(jù)檢品和鱟試劑反應(yīng)的吸光度值的動(dòng)態(tài)變化情況從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出檢品中的內(nèi)毒素含量。本實(shí)用新型的特點(diǎn)是1、配有內(nèi)毒素檢品處理液。經(jīng)處理后的體液對(duì)鱟試驗(yàn)基本沒有干擾。2.配有標(biāo)準(zhǔn)品盒，能用標(biāo)準(zhǔn)品盒內(nèi)試劑做一條四個(gè)點(diǎn)(包括空白)的標(biāo)準(zhǔn)曲線， 使實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。以上所記載，僅為利用本創(chuàng)作技術(shù)內(nèi)容的實(shí)施例，任何熟悉本項(xiàng)技藝者運(yùn)用本創(chuàng)作所做的修飾、變化，皆屬本創(chuàng)作主張的專利范圍，而不限于實(shí)施例所揭示者。
權(quán)利要求1.一種革蘭氏陰性菌感染內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒，其特征在于包括一標(biāo)準(zhǔn)品盒，其盒體內(nèi)包含鱟試劑瓶、內(nèi)毒素檢品處理液瓶、溶解液瓶、空安瓿及一支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品瓶；以及至少一檢品盒，其包含數(shù)支鱟試劑瓶和內(nèi)毒素檢品處理液瓶，且鱟試劑瓶和內(nèi)毒素檢品處理液瓶的數(shù)量為1:1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的革蘭氏陰性菌感染內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒，其特征在于所述的標(biāo)準(zhǔn)品盒包含八支鱟試劑瓶、四支內(nèi)毒素檢品處理液瓶、一支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品瓶、 三支溶解液瓶及四支空安瓿，且上述各瓶均為安瓿瓶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的革蘭氏陰性菌感染內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒，其特征在于 所述的鱟試劑瓶內(nèi)的鱟試劑裝量為0. Iml/支，細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品瓶內(nèi)裝有效價(jià)為 50-200EU的細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，內(nèi)毒素檢品處理液瓶內(nèi)的內(nèi)毒素檢品處理液裝量為 0. 9ml/支，溶解液瓶內(nèi)的溶解液裝量為aiil/支。
專利摘要本實(shí)用新型公開一種革蘭氏陰性菌感染內(nèi)毒素檢測(cè)鱟試劑盒，是由檢品盒和標(biāo)準(zhǔn)品盒組成，其中檢品盒包含數(shù)支鱟試劑瓶和內(nèi)毒素檢品處理液瓶，且兩者的數(shù)量為1:1；所述的標(biāo)準(zhǔn)品盒包含八支鱟試劑瓶、四支內(nèi)毒素檢品處理液瓶、一支細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品瓶、三支溶解液瓶及四支空安瓿。本實(shí)用新型所采用的分析方法為動(dòng)態(tài)濁度法，本試劑盒配套光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)使用，根據(jù)檢品和鱟試劑反應(yīng)的吸光度值的動(dòng)態(tài)變化情況從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出檢品中的內(nèi)毒素含量，具有快速檢測(cè)且靈敏度高并不受抗生素影響等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N21/31GK202119709SQ201120213970
公開日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月23日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請(qǐng)人:廈門市鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司