一種快速檢測(cè)革蘭氏陰性陽(yáng)性菌的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種快速檢測(cè)革蘭氏陰性陽(yáng)性菌的方法，包括步驟為：將納米磁珠與脂磷壁酸抗體或核酸適配體偶聯(lián)，封閉未偶聯(lián)位點(diǎn)，得到陽(yáng)性菌富集磁珠；將納米磁珠與脂多糖抗體或核酸適配體偶聯(lián)，封閉未偶聯(lián)位點(diǎn)，得到陰性菌富集磁珠；將所述陽(yáng)性菌富集磁珠或陰性菌富集磁珠與檢測(cè)樣本分別混勻后孵育并洗滌，再加入熒光標(biāo)記二抗或酶標(biāo)記二抗孵育并洗滌后測(cè)定結(jié)果。通過上述方式，本發(fā)明快速檢測(cè)革蘭氏陰性陽(yáng)性菌的方法能對(duì)低濃度細(xì)菌污染樣本進(jìn)行檢測(cè)，節(jié)約操作時(shí)間，易于自動(dòng)化，操作簡(jiǎn)化并保證檢測(cè)精度，可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)，可廣泛應(yīng)用于醫(yī)療衛(wèi)生、食品藥品等領(lǐng)域的細(xì)菌污染篩查，解決細(xì)菌有無、細(xì)菌含量等問題，滿足快速、準(zhǔn)確、可靠的檢測(cè)要求。
【專利說明】一種快速檢測(cè)革蘭氏陰性陽(yáng)性菌的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種快速定量鑒定流體樣本中革蘭氏陰性陽(yáng)性菌的檢測(cè)方法。

【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)菌存在于各種環(huán)境中，包括水、食品、甚至人體內(nèi)，與人的生活密切相關(guān)。細(xì)菌對(duì)環(huán)境、人類和動(dòng)物既有用處又有危害。生物有害菌的快速檢測(cè)有助于疾病的預(yù)防和治療，對(duì)此方面的研宄也是方興未艾。醫(yī)療、檢疫、環(huán)境、農(nóng)業(yè)、制藥和食品加工等領(lǐng)域均需要進(jìn)行大量的細(xì)菌檢測(cè)工作。目前通用的細(xì)菌檢測(cè)方法有十種以上，對(duì)細(xì)菌直接進(jìn)行檢測(cè)的方法都需要對(duì)樣品進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)或DNA擴(kuò)增。
[0003]以血液制品為例，臨床輸血目前為成分輸血，即血液米集后分離有效成分分別輸注，包括紅細(xì)胞成分制品、血小板成分制品、血漿成分制品等。臨床輸血必需保證血液制品無菌，盡管目前采用多種方法防止血液制品輸注前污染，但是依然不可避免，這嚴(yán)重危害患者的健康，其中血小板制品污染問題尤其突出。
[0004]血小板制品必須在(22±2) °〇條件下振蕩保存，這種環(huán)境極易于細(xì)菌繁殖，有效保存期很短。發(fā)生細(xì)菌污染的血小板制品如果輸注到病人體內(nèi)，幾乎無例外都要引起輕重程度不等的輸血反應(yīng)，甚至是致命的菌血癥和敗血癥。血小板制品細(xì)菌污染的概率要高于其他血液成分細(xì)菌污染或病毒感染的概率，輸注血小板引起輸血相關(guān)敗血癥的概率約為1/25000，而輸注紅細(xì)胞引起輸血相關(guān)敗血癥的概率為1/250000。輸注血小板引起細(xì)菌性敗血癥的風(fēng)險(xiǎn)遠(yuǎn)大于各種病毒引起的輸血相關(guān)敗血癥。
[0005]在血小板制品細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)的研宄方面，國(guó)外已經(jīng)發(fā)展了基于細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的間接指標(biāo)，如PH值變化、葡萄糖濃度異常等、細(xì)菌消耗O2和釋放CO 2原理、抗原抗體免疫學(xué)原理、分子生物學(xué)核酸檢測(cè)等領(lǐng)域的檢測(cè)技術(shù)。其中通過FDA認(rèn)證的有Bact/ALERT細(xì)菌培養(yǎng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)、PalleBDS細(xì)菌檢測(cè)系統(tǒng)、Scansystem系統(tǒng)和血小板P⑶檢測(cè)系統(tǒng)，并運(yùn)用于血小板制品細(xì)菌污染的檢測(cè)中，但國(guó)內(nèi)尚未開發(fā)相關(guān)的檢測(cè)試劑及儀器。
[0006]血小板細(xì)菌污染在世界范圍內(nèi)都是頗為棘手的問題。在血小板捐獻(xiàn)后進(jìn)行血樣培養(yǎng)，過24小時(shí)甚至48小時(shí)才能得出檢測(cè)結(jié)果，然后拋棄有污染的部分。然而，血小板制品中細(xì)菌數(shù)量在培養(yǎng)前可能比較低，以至于不能檢出；同時(shí)我國(guó)臨床用血量巨大，培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)不能有效的保證我國(guó)臨床安全用血；且醫(yī)院在臨床輸血前不能快速對(duì)血源細(xì)菌進(jìn)行檢測(cè)，增大患者的輸血風(fēng)險(xiǎn)。目前主要檢測(cè)方法有三個(gè)問題:耗時(shí)長(zhǎng)，操作繁瑣、敏感度低。
[0007]納米磁珠由于比表面積大，磁珠對(duì)配體的載量相對(duì)其它介質(zhì)高，同時(shí)它還具備可以進(jìn)行磁分離的特性，這些優(yōu)勢(shì)賦予它無可比擬的優(yōu)勢(shì)。在免疫檢測(cè)、細(xì)胞分選、生物大分子分離純化及靶向給藥等生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。磁珠介導(dǎo)的免疫檢測(cè)有效率高，分離快速，重復(fù)性好及可自動(dòng)化操作等優(yōu)點(diǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種快速檢測(cè)革蘭氏陰性陽(yáng)性菌的方法，該方法檢測(cè)快速、準(zhǔn)確、可靠。
[0009]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是:提供一種快速檢測(cè)革蘭氏陰性陽(yáng)性菌的方法，包括步驟為:(I)將納米磁珠與脂磷壁酸抗體或脂磷壁酸核酸適配體偶聯(lián)，封閉未偶聯(lián)位點(diǎn)，得到陽(yáng)性菌富集磁珠；(2)將納米磁珠與脂多糖抗體或脂多糖核酸適配體偶聯(lián)，封閉未偶聯(lián)位點(diǎn)，得到陰性菌富集磁珠；(3)將所述陽(yáng)性菌富集磁珠或陰性菌富集磁珠與檢測(cè)樣本分別混勻后孵育并洗滌，再加入熒光標(biāo)記二抗或酶標(biāo)記二抗孵育并洗滌后測(cè)定結(jié)果。
[0010]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述納米磁珠是具有磁性的四氧化三鐵磁珠、具有磁性的三氧化二鐵磁珠或聚合物包裹的磁性聚合物，所述納米磁珠的表面富含有多種活性基團(tuán)，所述納米磁珠大小在20納米-1微米之間。
[0011]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述磁性聚合物為二氧化硅磁性微球、聚苯乙烯磁性微球或金納米磁性微球，所述活性基團(tuán)為氨基、羧基、巰基、羥基或環(huán)氧基。
[0012]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，步驟(I)或(2)中所述陰性菌或陽(yáng)性菌富集磁珠制備過程為將所述納米磁珠稀釋至體積分?jǐn)?shù)為5-50%，與1-5 mg/mL抗體或核酸適配體混合均勻，反應(yīng)30min-2h，磁力吸附洗滌去上清，磁珠用0.1_1%的牛血清白蛋白或脫脂乳封閉12h-24h，得到陰性菌或陽(yáng)性菌富集磁珠。
[0013]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述脂磷壁酸抗體或脂多糖抗體為鼠源單克隆抗體，所述脂磷壁酸核酸適配體或脂多糖核酸適配體為利用富集的配基系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)即SELEX技術(shù)篩選的與脂磷壁酸或脂多糖特異結(jié)合的寡核苷酸鏈。
[0014]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，步驟(I)或(2)中所述偶聯(lián)過程為共價(jià)偶聯(lián)，偶聯(lián)劑為雙功能交聯(lián)劑或硅烷偶聯(lián)劑，所述偶聯(lián)過程中采用的磷酸鹽緩沖液的濃度為0.5M。
[0015]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述雙功能交聯(lián)劑為1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCL)、N-[p-馬來酰亞胺苯]異氰酸酯(PMPI)。
[0016]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，步驟(I)或(2)中所述偶聯(lián)過程是利用生物素和親和素連接的，在所述納米磁珠上偶聯(lián)親和素，在抗體或核酸適配體上偶聯(lián)生物素，通過生物素與親和素結(jié)合的特點(diǎn)將所述納米磁珠與抗體或核酸適配體偶聯(lián)。
[0017]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，步驟(3)中所述檢測(cè)樣本為流體樣本或固體樣本溶于溶液后的樣本，所述流體樣本為血液樣本、尿液樣本、組織液樣本或水樣本，所述溶液為水。
[0018]在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，步驟(3)中所述熒光標(biāo)記二抗中用于標(biāo)記的熒光素為花青素Cy系列熒光素或Alexa Fluor系列熒光素或異硫氰酸熒光素，所述酶標(biāo)記二抗中用于標(biāo)記的酶為堿性磷酸酶或過氧化物酶。
[0019]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明的快速檢測(cè)革蘭氏陰性陽(yáng)性菌的方法，該方法僅需兩種類型的細(xì)菌富集磁珠就能完成對(duì)流體樣本中細(xì)菌的富集，克服傳統(tǒng)的細(xì)菌檢測(cè)前細(xì)菌需培養(yǎng)擴(kuò)增的環(huán)節(jié)，可對(duì)低濃度細(xì)菌污染樣本進(jìn)行檢測(cè)；同時(shí)利用磁性分離代替離心分離，節(jié)約操作時(shí)間，易于自動(dòng)化；相對(duì)于染色法、PCR法，磁珠表面偶聯(lián)細(xì)菌特異性配體，利用免疫學(xué)方法，更簡(jiǎn)化操作難度并保證檢測(cè)精度，可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)?？蓮V泛應(yīng)用于醫(yī)療衛(wèi)生、食品藥品檢測(cè)等領(lǐng)域的細(xì)菌污染篩查，可解決流體樣本細(xì)菌污染中細(xì)菌有無、細(xì)菌含量等問題，滿足快速、準(zhǔn)確、可靠的檢測(cè)要求。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖，其中:
圖1是本發(fā)明的快速檢測(cè)革蘭氏陰性陽(yáng)性菌的方法的原理過程圖；
圖2是本發(fā)明的快速檢測(cè)革蘭氏陰性陽(yáng)性菌的方法中納米磁珠的電鏡圖；
圖3是本發(fā)明的快速檢測(cè)革蘭氏陰性陽(yáng)性菌的方法中納米磁珠偶聯(lián)抗體的最優(yōu)緩沖液選擇圖；
圖4是本發(fā)明的革蘭氏陽(yáng)性菌的檢測(cè)結(jié)果圖。

【具體實(shí)施方式】
[0021]下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0022]提供一種快速定量鑒定流體樣本中革蘭氏陰性及陽(yáng)性菌含量的檢測(cè)方法，包括步驟為:
納米磁珠的合成方法:
(I)催化劑制備:將Ig尿素與20ml溶劑乙二醇在氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌加熱到150°C，使尿素溶解，Ih后冷卻到100°C待用。
[0023](2)反應(yīng)體系制備:稱取0.8g聚丙烯酸、0.35g FeCl3，與50ml溶劑乙二醇混合，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌Ih后加熱至230°C，所有物質(zhì)溶解后，反應(yīng)體系制備完成。
[0024](3)納米磁珠合成:把4ml催化劑注入到反應(yīng)體系中，約3min后溶液變渾濁，呈黑色。繼續(xù)加熱Ih后，關(guān)閉溫度，冷卻至常溫，磁性分離去上清，用無水乙醇清洗2次，再用去離子水清洗3次，最后用去離子水將所得的產(chǎn)物重新分散，得到表面含羧基修飾基團(tuán)的納米磁珠。如圖2所示，合成的納米磁珠直徑約lOOnm。
[0025]基于上述得到的納米磁珠偶聯(lián)抗體最優(yōu)緩沖液選擇的方法:
要增加偶聯(lián)效率，降低磁珠與蛋白質(zhì)的非特異性吸附，使更多的蛋白質(zhì)與磁珠發(fā)生共價(jià)偶聯(lián)反應(yīng)，需要選擇合適的偶聯(lián)反應(yīng)緩沖液以提供適宜的離子強(qiáng)度和pH值，改變磁珠表面的微環(huán)境。
[0026](I)偶聯(lián)緩沖液配制分別配制pH=7.4的0.5M、0.1M、0.0lM磷酸鹽緩沖液(PBS緩沖液)，以及0.0lM pH=5的乙酸-乙酸鹽緩沖液。
[0027](2)緩沖液選擇步驟:
1)將納米磁珠稀釋至體積分?jǐn)?shù)為10%;
2)取離心管5只，各管加入500μ L合成的納米磁珠；
3)將納米磁珠溶液分別置換成0.5M、0.1M和0.0lM (ρΗ=7.4)磷酸鹽緩沖液、去離子水、或0.0lM乙酸-乙酸鹽緩沖液(pH=5.0)；
4)分別向每管中加入50 μ L脂多糖抗體溶液(10mg/mL)，以150rpm、室溫條件在恒溫振蕩器上反應(yīng)3h，反應(yīng)后分離上清，測(cè)上清0D280吸收值。
[0028](3)緩沖液測(cè)試結(jié)果
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示相對(duì)于對(duì)照組，當(dāng)緩沖液為乙酸-乙酸鈉溶液時(shí)，上清的0D280值為零，抗體幾乎全部吸附；當(dāng)緩沖液為超純水時(shí)，大部分抗體被吸附；當(dāng)緩沖液為PBS緩沖液時(shí)，盡管緩沖液的濃度不同，非特異性吸附都很低。其中PBS緩沖液為0.5M時(shí)，抗體和磁粒非特異性吸附最少，結(jié)果見圖3。
[0029]檢測(cè)革蘭氏陽(yáng)性菌的方法
(I)納米磁珠制備:
I)催化劑制備:將Ig尿素與20ml溶劑乙二醇在氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌加熱到150°C，使尿素溶解，Ih后冷卻到100°C待用。
[0030]2)反應(yīng)體系制備:稱取0.8g聚丙烯酸、0.35g FeCl3，與50ml溶劑乙二醇混合，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌Ih后加熱至230°C，所有物質(zhì)溶解后，反應(yīng)體系制備完成。
[0031]3)納米磁珠合成:把4ml催化劑注入到反應(yīng)體系中，約3min后溶液變渾濁，呈黑色。繼續(xù)加熱Ih后，關(guān)閉溫度，冷卻至常溫，磁性分離去上清，用無水乙醇清洗2次，再用去離子水清洗3次，最后用去離子水將所得的產(chǎn)物重新分散，得到表面含羧基修飾基團(tuán)的納米磁珠。
[0032](2)陽(yáng)性菌富集磁珠制備:
I)用0.5M磷酸鹽緩沖液(pH=7.2)將納米磁珠稀釋至體積分?jǐn)?shù)為5%，加入等體積的濃度為5mg/ml的脂磷壁酸抗體溶液，輕輕混勻后，立即加入20mg碳酰二亞胺鹽，置于混勻儀室溫反應(yīng)6h。
[0033]2)反應(yīng)完成后，磁性分離去上清，用磷酸鹽緩沖液磁性洗滌3次，稀釋到體積分?jǐn)?shù)為10%待用。
[0034](3)流體樣本選擇待檢樣本:含有一定量金黃色葡萄球菌的水溶液。陰性對(duì)照:無菌水。空白對(duì)照:未偶聯(lián)抗體的納米磁珠加入待檢樣本中。
[0035](4)革蘭氏陽(yáng)性菌富集及檢測(cè):
取200 μ L未偶聯(lián)抗體的納米磁珠置于1.5ml離心管中，加入200 μ L待檢樣本；再分別取200 μ L所述陽(yáng)性菌富集磁珠懸液置于2只1.5ml離心管中，分別加入200 μ L待檢樣本、200 y L無菌水，混和均勻。將離心管置于37°C水浴下孵育10 min，再分別用500ul磷酸鹽緩沖液磁性分離洗滌3次。加入用生理鹽水稀釋5000倍的50 μ L FITC標(biāo)記二抗，在37°C下孵育30 min得到混合液。分別用500ul磷酸鹽緩沖液磁性分離洗滌3次，最后將磁珠混懸于200 μ L磷酸鹽緩沖液。用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果如圖4。通過磁珠富集及信號(hào)放大作用，待檢樣本與陰性對(duì)照熒光值有100倍差異。利用此檢測(cè)系統(tǒng)可有效篩檢鑒別革蘭氏陽(yáng)性菌及陰性菌，為臨床提供一種快速有效的檢測(cè)手段。
[0036]本發(fā)明的有益效果是:
本發(fā)明利用納米磁珠對(duì)流體樣本中的細(xì)菌進(jìn)行富集，磁珠上分別偶聯(lián)有針對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌脂磷壁酸(LTA)和革蘭陰性菌脂多糖(LPS)的抗體或核酸適配體，將富集后細(xì)菌洗滌，再加入熒光標(biāo)記二抗或酶標(biāo)記的二抗孵育并洗滌后測(cè)定結(jié)果。
[0037]本發(fā)明的檢測(cè)方法克服傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)擴(kuò)增、染色計(jì)數(shù)等耗時(shí)耗力的方法，利用納米磁珠快速磁分離代替離心操作，操作更簡(jiǎn)便，易于自動(dòng)化；同時(shí)利用磁珠富集菌株，省略了細(xì)菌培養(yǎng)過程，可實(shí)現(xiàn)微量細(xì)菌的檢測(cè)；采用特異針對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌及陰性菌的抗體或核酸適配體，提高檢測(cè)精度，結(jié)合檢測(cè)儀器可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。可廣泛適用于應(yīng)用于醫(yī)療衛(wèi)生，食品藥品檢測(cè)等領(lǐng)域細(xì)菌污染篩查，可解決流體樣本細(xì)菌污染中細(xì)菌有無、細(xì)菌含量等問題，滿足快速、準(zhǔn)確、可靠的檢測(cè)要求。
[0038]以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其它相關(guān)的【技術(shù)領(lǐng)域】，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種快速檢測(cè)革蘭氏陰性陽(yáng)性菌的方法，其特征在于，包括步驟為:(1)將納米磁珠與脂磷壁酸抗體或脂磷壁酸核酸適配體偶聯(lián)，封閉未偶聯(lián)位點(diǎn)，得到陽(yáng)性菌富集磁珠；(2)將納米磁珠與脂多糖抗體或脂多糖核酸適配體偶聯(lián)，封閉未偶聯(lián)位點(diǎn)，得到陰性菌富集磁珠；(3)將所述陽(yáng)性菌富集磁珠或陰性菌富集磁珠與檢測(cè)樣本分別混勻后孵育并洗滌，再加入熒光標(biāo)記二抗或酶標(biāo)記二抗孵育并洗滌后測(cè)定結(jié)果。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述納米磁珠是具有磁性的四氧化三鐵磁珠、具有磁性的三氧化二鐵磁珠或聚合物包裹的磁性聚合物，所述納米磁珠的表面富含有多種活性基團(tuán)，所述納米磁珠大小在20納米-1微米之間。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述磁性聚合物為二氧化硅磁性微球、聚苯乙烯磁性微球或金納米磁性微球，所述活性基團(tuán)為氨基、羧基、巰基、羥基或環(huán)氧基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(1)或(2)中所述陰性菌或陽(yáng)性菌富集磁珠制備過程為將所述納米磁珠稀釋至體積分?jǐn)?shù)為5-50%，與1-5 1118加[抗體或核酸適配體混合均勾，反應(yīng)30111111-211，磁力吸附洗滌去上清，磁珠用0.1-1%的牛血清白蛋白或脫脂乳封閉121^-241！，得到陰性菌或陽(yáng)性菌富集磁珠。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述脂磷壁酸抗體或脂多糖抗體為鼠源單克隆抗體，所述脂磷壁酸核酸適配體或脂多糖核酸適配體為利用富集的配基系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)即技術(shù)篩選的與脂磷壁酸或脂多糖特異結(jié)合的寡核苷酸鏈。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(1)或(2)中所述偶聯(lián)過程為共價(jià)偶聯(lián)，偶聯(lián)劑為雙功能交聯(lián)劑或硅烷偶聯(lián)劑，所述偶聯(lián)過程中采用的磷酸鹽緩沖液的濃度為0.51。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述雙功能交聯(lián)劑為1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(￡0(:.1101)、馬來酰亞胺苯〕異氰酸酯即0。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(1)或(2)中所述偶聯(lián)過程是利用生物素和親和素連接的，在所述納米磁珠上偶聯(lián)親和素，在抗體或核酸適配體上偶聯(lián)生物素，通過生物素與親和素結(jié)合的特點(diǎn)將所述納米磁珠與抗體或核酸適配體偶聯(lián)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(3)中所述檢測(cè)樣本為流體樣本或固體樣本溶于溶液后的樣本，所述流體樣本為血液樣本、尿液樣本、組織液樣本或水樣本，所述溶液為水。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(3)中所述熒光標(biāo)記二抗中用于標(biāo)記的熒光素為花青素(37系列熒光素或八16X3 系列熒光素或異硫氰酸熒光素，所述酶標(biāo)記二抗中用于標(biāo)記的酶為堿性磷酸酶或過氧化物酶。
【文檔編號(hào)】G01N33/569GK104459125SQ201410750804
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月10日
【發(fā)明者】田晶晶, 李勇, 王紅梅, 蒙青林, 丁少華, 段生寶, 陳曄洲, 魏雙施 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所