專(zhuān)利名稱(chēng)：利用反應(yīng)性染料選擇性染色水溶性蛋白質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)染色的方法，且特別涉及一種利用反應(yīng)性染料選擇性染色水溶性蛋白質(zhì)的方法。
各種免疫分析法在臨床診斷、食品品管、污染防治及科學(xué)研究各領(lǐng)域，應(yīng)用越來(lái)越廣泛。但無(wú)論那一類(lèi)型免疫分析法，都必須把蛋白質(zhì)標(biāo)示起來(lái)，做為分析過(guò)程中的計(jì)量用途。如被測(cè)物Z是抗原Ag，或是抗體Ab，則可根據(jù)抗原、抗體的價(jià)格及取得的難易程度等因素，有如

圖1舉例(1)及(2)的分析邏輯設(shè)計(jì)。此時(shí)，Ab1和Ab2為抗被測(cè)物Z的兩種不同性質(zhì)的抗體，L即是所謂標(biāo)示配體(marker ligand)。當(dāng)L是放射性元素時(shí)，這種方法被稱(chēng)為放射免疫分析法；當(dāng)L是酶時(shí)，稱(chēng)為酶免疫分析法；L是螢光物或化學(xué)冷光物時(shí)，稱(chēng)為螢光免疫分析法及冷光免疫分析法?？傊S著L的不同，免疫分析法有不同的計(jì)量方式，而冠之有不同名稱(chēng)。以上這四種方法是現(xiàn)階段實(shí)用免疫分析法的主流。
五十年代放射免疫分析法實(shí)用化以來(lái)，對(duì)人類(lèi)社會(huì)有重大貢獻(xiàn)，靈敏又便宜，但是操作者的安全性顧慮及廢棄物處理，限制了它的發(fā)展。七十年代發(fā)明的酶免疫分析法，順利的取代了放射免疫分析法大部分市場(chǎng)。酶免疫分析法的缺點(diǎn)在于穩(wěn)定性及靈敏性較差，培育時(shí)間長(zhǎng)。螢光免疫分析法好處是靈敏度高，進(jìn)一步取代了一些放射免疫分析的應(yīng)用，缺點(diǎn)是儀器設(shè)備配合問(wèn)題，使得臨床檢驗(yàn)這種使用頻繁的應(yīng)用領(lǐng)域，不易借以做日常化驗(yàn)?；瘜W(xué)冷光免疫分析法的好處與螢光免疫分析法相同，但一旦改裝為高速度、自動(dòng)化免疫分析儀器，不免變得體積龐大及價(jià)格昂貴，并不利于免疫分析在民生福利社會(huì)的推廣應(yīng)用。
在八十年代，有人用擴(kuò)散性染料，做成200～300納米(nanometer)微粒來(lái)吸附抗體，發(fā)展出所謂的染料免疫分析法(dye immunoassay，DIA)。此方法因微粒大小、形狀及分布控制較困難、不同抗體對(duì)同樣擴(kuò)散性染料有不同吸附能力、不同擴(kuò)散性染料對(duì)同一蛋白質(zhì)又有不同吸附反應(yīng)等工藝因素，外加吸附抗體的染料微粒穩(wěn)定性較差等產(chǎn)品因素，而一直未得以實(shí)用。
反應(yīng)性染料(reactive dye)又稱(chēng)為活性染料(active dye)，1956年推出，設(shè)計(jì)目的為通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合方式，將染料分子接合在綿纖維的羥基上?；旧戏譃?1)親核性取代反應(yīng)(substitution)，染料如三氮六環(huán)苯(triazine)反應(yīng)性染料系列及(2)親核性加成反應(yīng)(addition)，染料如乙烯基砜(vinyl sulfone)系列兩大類(lèi)。雖然原設(shè)計(jì)為染色棉紗，但因以上兩種親核性反應(yīng)(nucleophilic reaction)，又可以與氨基及硫醇基作用，所以多年來(lái)又常用之于羊毛及蠶絲的染色。反應(yīng)性染料一般在綿紗、羊毛及蠶絲材料的染色時(shí)，一般均采取pH值10.5以上，反應(yīng)溫度在60～100℃間，同時(shí)加上大量鹽類(lèi)。目的如下(1)促使各種紡織材料膨脹，易使著色均勻；(2)加快染色速度；(3)染料著色率高、廢料少、符合環(huán)保要求；(4)在堿性環(huán)境中，羥基、硫醇基游離化，而氨基被中和，氨基酸中上述各官能團(tuán)的未配對(duì)電子對(duì)(lone paired electron)的負(fù)電性均大為增加，而有利于對(duì)染料分子的親核性反應(yīng)。
因此本發(fā)明的主要目的就是在于提供一種利用反應(yīng)性染料選擇性染色水溶性蛋白質(zhì)的方法。當(dāng)其應(yīng)用在免疫分析上時(shí)具有安全、反應(yīng)時(shí)間短、制作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)而靈敏的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，反應(yīng)性染料的染料分子分別結(jié)合在組成蛋白質(zhì)的氨基酸分子的羥基、氨基或硫醇基上。當(dāng)染色對(duì)象是抗體時(shí)，被控制在酸性環(huán)境，以利于染料分子與抗體組成氨基酸或抗體分子恒定區(qū)低醣類(lèi)碳水化合物上的羥基作用。在免疫分析中，當(dāng)不需要用抗體來(lái)做標(biāo)示配體時(shí)，在微堿性溶液中染色，蛋白質(zhì)可染有較深色度。蛋白質(zhì)經(jīng)活性染料染色后，分離未完全反應(yīng)的染料分子，純化后各種顏色蛋白質(zhì)穩(wěn)定性很高。
為使本發(fā)明的上述和其它目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能更明顯易懂，下文特舉一較佳實(shí)施例，并配合附圖，作詳細(xì)說(shuō)明圖面說(shuō)明圖1是一非均質(zhì)式免疫分析法示意圖；圖2是經(jīng)反應(yīng)性染料procion red MX-8R染色的肌紅蛋白抗體與肌紅蛋白在瓊脂基板上產(chǎn)生的沉淀線(xiàn)圖；圖3是經(jīng)amino black染色及脫色的肌紅蛋白抗體與肌紅蛋白在瓊脂基板上產(chǎn)生的沉淀線(xiàn)圖；圖4是牛血清白蛋白經(jīng)procion red MX-8R染色后的可見(jiàn)光圖譜；圖5是未經(jīng)染色的牛血清白蛋白可見(jiàn)光圖譜，其濃度是7.8mg/ml。
本抗體染色及其在免疫分析應(yīng)用上的發(fā)明，在于使用紡織工業(yè)用的反應(yīng)性染料，如與被染色物進(jìn)行親核性取代反應(yīng)的三氮六環(huán)苯系列，以及與被染色物進(jìn)行親核性加成反應(yīng)的乙烯基砜系列。以控制酸堿度的方式，使反應(yīng)集中在抗體蛋白質(zhì)及共軛其上的低聚糖的羥基上，而使染色抗體維持其原有力價(jià)及免疫性質(zhì)。染色反應(yīng)后的蛋白質(zhì)，經(jīng)分離純化，去除未反應(yīng)染料，可以用在免疫分析中的各種用途，成為一種創(chuàng)新性的染料免疫分析法，可以稱(chēng)為溶解性染料分析法(solubledye immunoassay，SDIA)。與放射免疫分析法相比較，有安全便利的好處；比酶免疫分析法靈敏、快速、穩(wěn)定；更比螢光或冷光免疫分析法有使用便利及成本低廉的優(yōu)點(diǎn)。
水溶性蛋白質(zhì)反應(yīng)性染料染色，舉肌紅蛋白(myoglobin)及牛血清白蛋白為例，依下列條件進(jìn)行(一)肌紅蛋白抗體染色反應(yīng)。
10毫克兔子抗人肌紅蛋白抗體溶于pH4.8、0.01M的醋酸鈉鹽緩沖溶液中，加入5毫克procion red MX-8R，在冰浴溫度避光攪拌反應(yīng)廿四小時(shí)后，注入一1.1×30厘米的Sephadex G-25管柱，以pH6.8、0.05M磷酸鹽緩沖液，每小時(shí)20毫升速度沖流，并用分級(jí)收集器，每管收集一毫升。經(jīng)共價(jià)鍵染色肌紅蛋白抗體，因體積大，不進(jìn)入Sephadex G-25分子篩膠粒的孔隙，不被吸附，因此流出較快；未反應(yīng)及凝結(jié)(aggregate)的染料分子，則因被吸附進(jìn)入膠粒中孔隙而較慢流出。先沖出的紅色各管經(jīng)集中冷凍干燥后保存，供進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)使用。
(二)肌紅蛋白抗體免疫力價(jià)測(cè)定。
1％瓊脂配制于巴比妥(barbital)(pH8.2，0.05M)緩沖液中，在50℃溶解，配制Ouchterlony雙向免疫擴(kuò)散薄板。取染色的抗體1.32毫克/毫升做成2、4、8、16、32、64、128、256、512、1024、2048、4096等倍數(shù)的稀釋液。未經(jīng)染色抗體取同樣濃度，稀釋亦同，做對(duì)比實(shí)驗(yàn)。
取15微升2.1毫克/毫升的人肌紅蛋白，放置于配制好的Ouchterlony瓊脂板的中間孔洞，另各取15微升不同稀釋倍數(shù)染色及未染色的肌紅蛋白抗體分別注入瓊脂板中間孔洞的外圍孔洞，加蓋，室溫靜置六小時(shí)。觀(guān)察發(fā)現(xiàn)在2至64倍稀釋的染色肌紅蛋白抗體與中心肌紅蛋白之間產(chǎn)生紅色沉淀線(xiàn)。而未染色抗體僅在2至16倍稀釋與抗原有混濁沉淀線(xiàn)。再經(jīng)靜置六小時(shí)，染色抗體與抗原的紅色沉淀線(xiàn)并未增加(見(jiàn)圖2)。未染色抗體雙向擴(kuò)散瓊脂平皿上，經(jīng)用氨基黑(Amido black)染色及脫色，在2至64倍稀釋未染色抗體與抗原間，亦染出沉淀線(xiàn)，參見(jiàn)圖3。
本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，肌紅蛋白抗體經(jīng)在pH4.8環(huán)境中與反應(yīng)性染料作用后，不但仍保持其活性，其力價(jià)與未染色抗體相比，并未產(chǎn)生改變。
(三)反應(yīng)性染料在抗體上共價(jià)鍵結(jié)合位置。
a.神經(jīng)胺酶(neuramidase)的前處理。
購(gòu)入的神經(jīng)胺酶經(jīng)在pH8.0，0.05M醋酸緩沖液4℃透析一夜，再注入一5毫升Sepharose固定的牛胎球蛋白(fetuin)管柱，然后用緩沖液沖洗至210nm吸收值降至0.05以下。然后用標(biāo)準(zhǔn)重碳酸鹽(bicarbonate)緩沖液將神經(jīng)胺酸酶沖出，中和后，經(jīng)pH8.0磷酸緩沖液透析備用。
b.肌紅蛋白抗體的低聚醣去除。
取一毫升經(jīng)前述處理的已去除蛋白質(zhì)分解酶的神經(jīng)胺酸酶，加入50微升、7.5毫克/毫升的肌紅蛋白抗體，再加入0.05％鏈霉素，在40℃培育48小時(shí)。然后注入1.1×45厘米的Sephadex G-150管柱，以每小時(shí)10毫升速度流洗，收取淡肉紅色各管即為肌紅蛋白，經(jīng)離心濃縮后，供作以下的染色實(shí)驗(yàn)。
(四)去低聚醣的肌紅蛋白抗體染色反應(yīng)。
將前述處理抗體的濃度調(diào)整到10毫克/毫升，其余染色步驟均與(一)所述相同。
本節(jié)與(一)節(jié)所得產(chǎn)品，稱(chēng)取同重量?jī)龈善废♂專(zhuān)?jīng)用BeckmanDU-65光譜計(jì)掃描結(jié)果，如表一表一去低聚醣/未去低聚醣抗體染色表
表一說(shuō)明，明顯表示部分procion red MX-8R原以共價(jià)鍵結(jié)合方式與肌紅蛋白抗體低聚糖部分相連，經(jīng)神經(jīng)胺酶將抗體恒定區(qū)及重鏈部分的低聚醣切除后，反應(yīng)性染料分子在酸性環(huán)境中對(duì)羥基作用對(duì)象趨減而造成如表一的對(duì)照結(jié)果。
(五)牛血清白蛋白染色反應(yīng)。
取Cohn V級(jí)牛血清白蛋白做染色反應(yīng)，因?yàn)槭且话愕鞍踪|(zhì)染色，并沒(méi)有像抗體染色時(shí)避免氨基端被600～700分子量染料分子占據(jù)而影響抗原/抗體活性的顧慮。所以將反應(yīng)酸堿值調(diào)在堿性范圍中，較合適的是約pH10.5，希望蛋白質(zhì)氨基酸上氨基、硫醇基、及羥基均可以參加反應(yīng)，增加染色的深度及未來(lái)在免疫分析應(yīng)用上的靈敏度。其余染色及純化步驟同(一)所述。經(jīng)紫外光可見(jiàn)光光譜儀掃描，其結(jié)果見(jiàn)圖4，未經(jīng)染色的同一濃度牛血清白蛋白可見(jiàn)光圖譜見(jiàn)圖5。
由實(shí)驗(yàn)一至五結(jié)果可以證明，當(dāng)染色反應(yīng)對(duì)象為非抗體的任何蛋白質(zhì)時(shí)，則可選擇堿性環(huán)境，不使用高溫，不需加鹽或電解質(zhì)。在此操作簡(jiǎn)易的情況下，能使得氨基酸支鏈的羥基、氨基、硫醇基呈富電子狀態(tài)，以有利于對(duì)染料分子的親核反應(yīng)，生成共價(jià)鍵的染色蛋白質(zhì)分子共軛物，因此而得到染色度較高的蛋白質(zhì)。當(dāng)染色反應(yīng)對(duì)象為抗體時(shí)，選用酸性環(huán)境，使染料分子作用于抗體蛋白質(zhì)氨基酸、支鏈羥基與結(jié)構(gòu)恒定區(qū)以及重鏈部分的羥基上。避免了抗體分子氨基端被染料分子結(jié)合上以后，對(duì)抗原活性的影響，從而提高在免疫分析應(yīng)用上的靈敏度。
通過(guò)本發(fā)明所提供的方法染色的蛋白質(zhì)在以下應(yīng)用中，當(dāng)做標(biāo)示配體。例如應(yīng)用于酶聯(lián)接免疫分析法(enzyme linked immunoassay)的平板分析，應(yīng)用于組織學(xué)(histology)、細(xì)胞學(xué)(cell cytology)、各種免疫凝集法(immunoagglutination)、各種電泳方法、各種免疫色層分析法(immunochromatography)， 應(yīng)用于各種液相層析(liquidchromatography)，應(yīng)用于各種傳感器(sensor)，應(yīng)用于各種核酸探針的染色及計(jì)量，或者是應(yīng)用于其它各種分析化學(xué)用途。
雖然本實(shí)施例以管柱分離方法將游離染料分子與染色的白質(zhì)分子分開(kāi)。然而對(duì)于熟悉該技術(shù)的人員，可了解蛋白質(zhì)經(jīng)反應(yīng)性染料染色后，還可以用分子篩、過(guò)濾膜、鹽析、或有機(jī)溶劑方式將游離染料分子與染色的蛋白質(zhì)分子分開(kāi)。蛋白質(zhì)經(jīng)活性染料染色后，通過(guò)上述方法分離、去除未反應(yīng)完全的染料分子，純化后的各種顏色蛋白質(zhì)穩(wěn)定性很高，并可以透過(guò)真空冷凍干燥進(jìn)一步提升其儲(chǔ)存性。
本發(fā)明的重要性舉圖1為例，當(dāng)L配位子為放射性同位素或酶或螢光物或化學(xué)冷光物體，分別就有放射免疫分析法、酶免疫分析法、螢光免疫分析法及冷光免疫分析法等各種應(yīng)用。組合本發(fā)明將反應(yīng)性染料作為L(zhǎng)，同理，所謂的溶解性染料免疫分析法(soluble dyeimmunoassay，DIA)出現(xiàn)，極可能取代酶免疫分析法。其優(yōu)點(diǎn)如下(1)比酶免疫分析法靈敏，因?yàn)槿玖戏肿佣际菑?qiáng)調(diào)高克分子吸光系數(shù)而設(shè)計(jì)的。
(2)免疫分析時(shí)間較短，因不需要測(cè)定酶活性的時(shí)間。
(3)蛋白質(zhì)經(jīng)共價(jià)鍵與染料分子結(jié)合后較穩(wěn)定，不像酶共軛化物保存/取用需要注意不喪失酶活性。
(4)制作簡(jiǎn)便，批量生產(chǎn)容易，僅需控制酸堿值，加上簡(jiǎn)單的分離純化，就可以有實(shí)用的抗體/抗原。
(5)反應(yīng)性染料大量用于紡織工業(yè)，計(jì)噸銷(xiāo)售，價(jià)格較任何免疫分析的配體便宜。
(6)染料顏色的選擇范圍推廣，擴(kuò)大了染色蛋白質(zhì)在分析化學(xué)領(lǐng)域里應(yīng)用。
雖然本發(fā)明已以一較佳實(shí)施例說(shuō)明如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉該技術(shù)的人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，當(dāng)可作簡(jiǎn)單的改進(jìn)和修飾，但本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)當(dāng)以權(quán)利要求所限定的范圍為準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.一種水溶性蛋白質(zhì)的染色方法，其特征在于利用一反應(yīng)性染料讓該水溶性蛋白質(zhì)進(jìn)行一染色反應(yīng)，該反應(yīng)性染料可選自于紡織工業(yè)所用的三氮六環(huán)苯與乙烯基砜系列反應(yīng)性染料所組成的族群，而該染色反應(yīng)是在一酸性或一堿性的環(huán)境下進(jìn)行的，其中當(dāng)該水溶性蛋白質(zhì)是一抗體時(shí)，該染色反應(yīng)是在酸性的環(huán)境下進(jìn)行的，使染料分子作用于該抗體蛋白質(zhì)氨基酸支鏈的羥基上、結(jié)構(gòu)恒定區(qū)與重鏈部分的羥基上、以及與該抗體共軛的低聚糖的羥基上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于該染色反應(yīng)進(jìn)行所需的堿性環(huán)境的pH值約10.5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于當(dāng)該抗體是一肌紅蛋白抗體時(shí)，該染色反應(yīng)是在pH值約4.8的酸性環(huán)境下進(jìn)行的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在利用該反應(yīng)性染料染色該水溶性蛋白質(zhì)之后，還包括利用管柱分離方法、分子篩、過(guò)濾膜、鹽析或有機(jī)溶劑方式將游離的該染料分子與該染色的蛋白質(zhì)分子分開(kāi)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于酶聯(lián)接免疫分析法的平板分析。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于組織學(xué)的標(biāo)的物顯色及計(jì)量。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)標(biāo)的物顯色及計(jì)量。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種免疫凝集法的顯色與計(jì)量。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種電泳方法的顯色與計(jì)量。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種免疫色層分析法的顯色與計(jì)量。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種液相層析的應(yīng)用。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種傳感器的應(yīng)用。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種核酸探針的染色及計(jì)量。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種分析化學(xué)用途。
15.一種水溶性蛋白質(zhì)的染色方法，其特征在于利用一反應(yīng)性染料讓該水溶性蛋白質(zhì)進(jìn)行一染色反應(yīng)，該反應(yīng)性染料可選自于紡織工業(yè)所用的三氮六環(huán)苯與乙烯基砜系列反應(yīng)性染料所組成的族群，而該染色反應(yīng)是在一酸性或一堿性的環(huán)境下進(jìn)行的，其中當(dāng)該水溶性蛋白質(zhì)是一氨基端需被保護(hù)的水溶性蛋白質(zhì)時(shí)，該染色反應(yīng)在酸性的環(huán)境下進(jìn)行，使染料分子作用于該氨基端需被保護(hù)的水溶性蛋白質(zhì)氨基酸支鏈的羥基上、及共軛其上低聚糖的羥基上。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于該染色反應(yīng)進(jìn)行所需的堿性環(huán)境的pH值約10.5。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于當(dāng)該氨基端需被保護(hù)的水溶性蛋白質(zhì)是一肌紅蛋白抗體時(shí)，該染色反應(yīng)在pH值約4.8的酸性環(huán)境下進(jìn)行。
18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于在利用該反應(yīng)性染料染色該水溶性蛋白質(zhì)之后，還包括利用管柱分離方法、分子篩、過(guò)濾膜、鹽析或有機(jī)溶劑方式將游離的該染料分子與該染色的蛋白質(zhì)分子分開(kāi)。
19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于酶聯(lián)接免疫分析法的平板分析。
20.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于組織學(xué)的標(biāo)的物顯色及計(jì)量。
21.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)標(biāo)的物顯色及計(jì)量。
22.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種免疫凝集法的顯色與計(jì)量。
23.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種電泳方法的顯色與計(jì)量。
24.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種免疫色層分析法的顯色與計(jì)量。
25.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種液相層析的應(yīng)用。
26.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種傳感器的應(yīng)用。
27.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各種核酸探針的染色及計(jì)量。
28.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于通過(guò)該方法染色的該水溶性蛋白質(zhì)，可應(yīng)用于各利分析化學(xué)用途。
全文摘要
本發(fā)明使用紡織工業(yè)用的反應(yīng)性染料,來(lái)染色包括抗體在內(nèi)的各種水溶性蛋白質(zhì)。染料分子分別結(jié)合在組成蛋白質(zhì)的氨基酸分子的羥基、氨基或硫醇基上。當(dāng)染色對(duì)象是抗體時(shí),被控制在酸性環(huán)境,以利于染料分子與抗體組成氨基酸或抗體分子恒定區(qū)低醣類(lèi)碳水化合物上的羥基作用。在免疫分析中,當(dāng)不需要用抗體來(lái)做標(biāo)示配體時(shí),在微堿性溶液中染色,蛋白質(zhì)可染有較深色度。蛋白質(zhì)經(jīng)活性染料染色后,未完全反應(yīng)的染料分子,必須分離去除方能使用。純化后各種顏色蛋白質(zhì)穩(wěn)定性很高,并可以通過(guò)真空冷凍干燥進(jìn)一步提高其儲(chǔ)存性。
文檔編號(hào)G01N33/531GK1379245SQ0111035
公開(kāi)日2002年11月13日 申請(qǐng)日期2001年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月6日
發(fā)明者許宗雄, 姚文法 申請(qǐng)人:臺(tái)灣元生生物科技股份有限公司