2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】一種2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的制備方法及應(yīng)用，采用原位聚合法，以2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸為模板分子、4-乙烯基吡啶為功能單體、甲醇與蒸餾水的混合溶液為致孔劑，直接將預(yù)聚合溶液注入到色譜柱內(nèi)，在柱管內(nèi)一步完成聚合，避免了繁瑣的裝柱手續(xù)，制備過(guò)程簡(jiǎn)單，大大減少了制備時(shí)間。采用本發(fā)明方法得到的整體柱對(duì)模板分子、鏈格孢霉毒素及其結(jié)構(gòu)類(lèi)似物具有特異選擇性，穩(wěn)定性好，可重復(fù)使用，而且用便宜的偽模板分子代替要檢測(cè)的物質(zhì)，減少了檢測(cè)費(fèi)用，避免了模板分子的泄漏問(wèn)題，提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】2-[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體
柱的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于鏈格孢酚毒素的分離檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種原位聚合法制備2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的方法及其在分離檢測(cè)鏈格孢酚毒素中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]鏈格孢霉是廣泛存在于大氣、土壤和植物中的一類(lèi)真菌。這種真菌在全球分布最為廣泛，少數(shù)作為植物內(nèi)生真菌的鏈格孢可以產(chǎn)生長(zhǎng)春堿、紫杉醇等抗癌藥物，而大多數(shù)鏈格孢能夠引起多種植物病害，而它產(chǎn)生的代謝物會(huì)造成對(duì)蔬菜、水果、谷物和飼料的污染，繼而引起全球性的田間和產(chǎn)后巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于它能在低溫下生長(zhǎng)，因此能夠造成在低溫下長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸?shù)氖卟?、水果的霉變腐敗。主要的鏈格孢霉毒素有鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、?xì)交鏈孢菌酮酸、鏈格孢霉素，這些毒素具有一定的細(xì)胞毒性，對(duì)動(dòng)物有一定的致畸、致癌、致突變作用等，對(duì)人體健康危害較大，因此對(duì)鏈格孢霉毒素建立高效率、低檢出限的分析方法，來(lái)檢測(cè)食品中的鏈格孢霉毒素的含量迫在眉睫。
[0003]分子印跡技術(shù)具有特異選擇性、穩(wěn)定性好、使用壽命長(zhǎng)、可重復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)，作為樣品的預(yù)處理介質(zhì)，能從復(fù)雜體系中選擇性地富集目標(biāo)分析物，已成為化學(xué)分析領(lǐng)域里最具應(yīng)用前景的技術(shù)之一。但現(xiàn)有的制備分子印跡聚合物整體柱的方法都存在明顯的局限性:本體聚合得到的聚合物為塊狀，使用前須經(jīng)過(guò)研磨、篩分等處理，尺寸和形狀不規(guī)則使得樣品處理困難，工作繁瑣、費(fèi)時(shí)，且產(chǎn)率低(一般<50%)，應(yīng)用效率大幅降低；沉淀聚合法對(duì)溶劑的要求高，難以得到廣泛應(yīng)用；乳液聚合法制得的聚合物粒徑小(< lum)，不適合在液相色譜中使用且吸附后不易分離；懸浮聚合法雖制備工藝簡(jiǎn)單，但獲得的粒徑分布寬，產(chǎn)物的單分散性和規(guī)整性都急劇下降，且亞微米級(jí)的微球難以得到，需經(jīng)繁瑣的分級(jí)處理才可使用；多步溶脹聚合法雖能制得微米級(jí)且粒徑較均勻的微球，經(jīng)簡(jiǎn)單的洗滌即可使用，但需經(jīng)多步溶脹，過(guò)程較為繁瑣、制備周期較長(zhǎng)，難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化；表面模板聚合法雖然較為簡(jiǎn)單，但只能進(jìn)行少部分特定的分子的印跡，應(yīng)用范圍較窄。此外，以上方法都要經(jīng)過(guò)繁瑣的裝柱過(guò)程。原位聚合是近期發(fā)展的制備分子印跡聚合物的新技術(shù)，可以通過(guò)一步聚合完成，在空的色譜柱內(nèi)用該方法形成整體柱，通過(guò)洗脫除去模板分子即可以使用，該技術(shù)的關(guān)鍵是針對(duì)不同的模板分子尋找合適的致孔劑體系和聚合體系，以獲得通透性好、選擇性好、柱效高的分子印跡聚合物整體柱。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的所要解決的一個(gè)技術(shù)問(wèn)題在于克服現(xiàn)有方法存在的缺點(diǎn)，提供一種操作簡(jiǎn)單的2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的制備方法。
·[0005]本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題在于為上述2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱提供一種用途。[0006]解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是:將2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸與4-乙烯基吡啶、乙二醇二甲基丙烯酸按摩爾比為1:4~9.4:23~25溶于甲醇與蒸餾水的體積比為2~3.5:1的混合溶液中，乙二醇二甲基丙烯酸與混合溶液的體積比為0.3:1，加入偶氮二異丁腈混合均勻，偶氮二異丁腈與2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸的質(zhì)量比為1:2.8，除去混合物中的氧氣，裝入到色譜柱中，密封，55~70V反應(yīng)12~18小時(shí)，用甲醇與乙酸的體積比為4:1的混合液沖洗，得到2-[(6-氧代-6!1-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱。
[0007]本發(fā)明所述的2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸與4_乙烯基吡啶、乙二醇二甲基丙烯酸的摩爾比最佳為1:6:24 ;所述的反應(yīng)條件最佳為65°C反應(yīng)16小時(shí)。
[0008]本發(fā)明的2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸整體柱在分離檢測(cè)鏈格孢酚毒素中的用途，所述的鏈格孢酚毒素為鏈格孢酚或鏈格孢酚甲醚。其具體使用方法為:將制備的2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱直接用作液相色譜儀的檢測(cè)柱進(jìn)行鏈格孢酹毒素的分離檢測(cè)。
[0009]本發(fā)明采用原位聚合法，直接將預(yù)聚合溶液注入到色譜柱內(nèi)，在柱管內(nèi)一步完成聚合，避免了繁瑣的裝柱手續(xù)，制備過(guò)程簡(jiǎn)單，大大減少了制備時(shí)間。本發(fā)明得到的整體柱對(duì)模板分子2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸、鏈格孢霉毒素及其結(jié)構(gòu)類(lèi)似物具有特異選擇性，穩(wěn)定性好，可重復(fù)使用。用相對(duì)便宜的模板代替昂貴的鏈格孢酚毒素，減少了色譜柱制備的成本。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010]圖1是2-[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星在實(shí)施例1制備的整體柱上的色譜分離圖。
[0011]圖2是2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星在對(duì)比實(shí)施例1制備的非印跡空白柱上的色譜分離圖。
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。
[0013]實(shí)施例1
[0014]將14.21mg(0.05mmol)2-[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿 _3-基)氧基]丙酸、32uL(0.3mmol) 4-乙烯基吡卩定、240uL (1.2mmol)乙二醇二甲基丙烯酸酯超聲分散于800uL甲醇與蒸餾水的體積比為10:3的混合溶液中，加入5mg偶氮二異丁腈，超聲分散均勻，通氮?dú)?0分鐘除去混合物中的氧氣,將混合物裝滿內(nèi)徑為4.6mm、長(zhǎng)為50mm的色譜柱,密封,65°C反應(yīng)16小時(shí)，將色譜柱連接到HPLC高壓泵上，用200mL甲醇與乙酸的體積比為4:1的混合液在流速為0.5mL/min條件下沖洗色譜柱，得到2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱。
[0015]對(duì)比實(shí)施例1
[0016]在實(shí)施例1中，不加模板分子2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸，其他步驟與實(shí)施例1相同，得到非印跡空白柱。
[0017]實(shí)施例2
[0018]將14.21mg(0.05mmol)2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿 _3_ 基)氧基]丙酸、50uL(0.47mmol) 4-乙烯基吡卩定、240uL (1.2mmol)乙二醇二甲基丙烯酸酯超聲分散于800uL甲醇與蒸餾水的體積比為10:3的混合溶液中，加入5mg偶氮二異丁腈，超聲分散均勻，通氮?dú)?0分鐘除去混合物中的氧氣,將混合物裝滿內(nèi)徑為4.6mm、長(zhǎng)為50mm的色譜柱,密封，65°C反應(yīng)16小時(shí)，將色譜柱連接到HPLC高壓泵上，用200mL甲醇與乙酸的體積比為4:1的混合液在流速為0.5mL/min條件下沖洗色譜柱，得到2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱。
[0019]實(shí)施例3
[0020]將15.6mg(0.055mmol)2_[ (6_ 氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸、23uL(0.22mmol)4-乙烯基吡啶、251uL (1.33mmol)乙二醇二甲基丙烯酸酯超聲分散于837uL甲醇與蒸餾水的體積比為10:3的混合溶液中，加入5mg偶氮二異丁腈，超聲分散均勻，通氮?dú)?0分鐘除去混合物中的氧氣,將混合物裝滿內(nèi)徑為4.6mm、長(zhǎng)為50mm的色譜柱,密封,65°C反應(yīng)16小時(shí)，將色譜柱連接到HPLC高壓泵上，用200mL甲醇與乙酸的體積比為4:1的混合液在流速為0.5mL/min條件下沖洗色譜柱，得到2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱。
[0021]實(shí)施例4
[0022]實(shí)施例1制備的2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸整體柱在分離檢測(cè)鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚中的用途。其使用方法如下:
[0023]將2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿_3_基)氧基]丙酸整體柱直接作為液相色譜儀的檢測(cè)柱，對(duì)待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行分離檢測(cè)，待測(cè)物質(zhì)為:2-[(6-氧代-611-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸(以下稱(chēng)為模板分子)、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星；色譜檢測(cè)條件:流動(dòng)相是乙酸與體積分?jǐn)?shù)為50%的乙腈水溶液的體積比為3:100的混合液，流速為0.8mL/min ;紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。同時(shí)用對(duì)比實(shí)施例1制備的非印跡空白柱作對(duì)比試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2，圖中I為鏈格孢酚，2為模板分子，3為鏈格孢酚甲醚，4為諾氟沙星，5為氧氟沙星，6為氯霉素，7為環(huán)丙沙星。
[0024]由圖1和圖2可見(jiàn)，實(shí)施例1制備的整體柱對(duì)模板分子、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星的保留時(shí)間不同，對(duì)模板分子、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星的印跡因子分別為:17.06,24.15，16.82，0.483，1.842,0.471,0.475，而非印跡空白柱對(duì)模板分子、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚、氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星的保留時(shí)間相差不多，不能將它們分開(kāi)，說(shuō)明本發(fā)明制備的整體柱對(duì)模板分子以及與模板分子結(jié)構(gòu)相近的鏈格孢酚、鏈格孢酚甲醚有很強(qiáng)的保留能力，具有特異選擇性，可以用于富集分離鏈格孢酚毒素類(lèi)物質(zhì)，而對(duì)氧氟沙星、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星沒(méi)有特異選擇性。
【權(quán)利要求】
1.一種2-[(6_氧代-6H-苯并[C]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的制備方法，其特征在于:將2_[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸與4-乙烯基吡唳、乙二醇二甲基丙烯酸按摩爾比為1:4~9.4:23~25溶于甲醇與蒸餾水的體積比為2~3.5:1的混合溶液中，乙二醇二甲基丙烯酸與混合溶液的體積比為0.3:1，加入偶氮二異丁腈混合均勻，偶氮二異丁腈與2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸的質(zhì)量比為1:2.8，除去混合物中的氧氣，裝入到色譜柱中，密封，55~70°C反應(yīng)12~18小時(shí)，用甲醇與乙酸的體積比為4:1的混合液沖洗，得到2-[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-[(6_氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的制備方法，其特征在于:所述的2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸與4-乙烯基吡唆、乙二醇二甲基丙烯酸的摩爾比為1:6:24。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱的制備方法，其特征在于:所述的反應(yīng)條件為65°C反應(yīng)16小時(shí)。
4.權(quán)利要求1的2-[ (6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱在分離檢測(cè)鏈格孢酹毒素中的用途。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的2-[(6-氧代-6H-苯并[c]色滿-3-基)氧基]丙酸整體柱在分離檢測(cè)鏈格孢酚毒素中 的用途，所述的鏈格孢酚毒素為鏈格孢酚或鏈格孢酚甲醚。
【文檔編號(hào)】B01J20/285GK103524676SQ201310376068
【公開(kāi)日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年8月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月26日
【發(fā)明者】張靜, 王艷麗, 田永樂(lè), 鄭曉玲, 倪艷麗 申請(qǐng)人:陜西師范大學(xué)