專利名稱：一種胺碘酮分子印跡固相萃取柱的制備及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及藥物分析領域，具體地說是涉及一種鹽酸胺碘酮分子印跡固相萃取 (MISPE)柱及制備方法，并主要用于生物樣品中鹽酸胺碘酮的高選擇性分離、富集和純化。
背景技術：
鹽酸胺碘酮，簡稱胺碘酮，化學名為(2- 丁基-3苯并呋喃基)[4-[2-( 二乙氨基) 乙氧基]-3，5- 二碘苯基]甲酮鹽酸鹽，是一個廣泛用于治療及預防室性及室上性心律失常 的第III類抗心律失常藥物。鹽酸胺碘酮的半衰期很長，長期服用會在體內積累，同時藥用 范圍很窄，易對人體產生副作用。因此，有必要對病人體內的鹽酸胺碘酮濃度進行檢測。由于生物樣品中許多內源性物質的存在，使得樣品凈化成為必要步驟。目前，生 物樣品中的鹽酸胺碘酮前處理手段較多，如溶劑萃取和固相萃取法，結合毛細管電泳或高 效液相色譜法。溶劑萃取法需要大量的有機溶劑，耗時且存在嚴重的基體干擾，其它方法 的儀器昂貴。固相萃取法(SPE)出現于20世紀70年代，至今已成為許多領域樣品預處理 的常用方法。傳統(tǒng)的SPE吸附劑選擇性不佳，在富集分析物過程中存在大量基體和干擾物 質。因此，發(fā)展快速、高效、高選擇性、環(huán)境友好的樣品前處理技術非常重要[中國科學B輯 化學，2009，39 (8) :733]。分子印跡聚合物(MIP)是為模板分子量身定做的高分子聚合物， 具有預定性、實用性和識別性等特點[Chemistry of Materials, 2008, 20 (3) 859 ；Anal. Chem. ,2009,81(4) :1615]。由于模板選擇的多樣性，使得MIP能廣泛應用于物質的分離 與分析過程，它對于目標物質的高度選擇性也是普通SPE填料所不能比擬的[分析化學， 2007,35(9) 1319 ；Analytical Letters, 2009，42 (3) :600]。目前關于鹽酸胺碘酮 MISPE 柱的制備未見報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種鹽酸胺碘酮MISPE柱及制備方 法和應用，以高效地選擇性分離富集血清、血漿等生物樣品提取液中的鹽酸胺碘酮，結合高 效液相色譜即可實現生物樣品中鹽酸胺碘酮的快速分析。為實現上述目的，本發(fā)明以胺碘 酮為模板，4-乙烯吡啶為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，以氯仿為致孔劑，偶 氮二乙丁腈為引發(fā)劑，進行聚合制備出MIP后，填充在固相萃取柱內得鹽酸胺碘酮MISPE 柱。儀器與試劑 UV-2450紫外可見分光光度計、LC-10A高效液相色譜儀(日本島津公司)； Inertsil 0DS-SP (5 μ m，4. 6X 250mm) C18 色譜柱；HumanpowerIII 超純水處理器(韓國)； HC-2518微量高速離心機(安徽中科中佳科學儀器)；5S1020固相萃取儀(北京振翔工貿 有限公司)。鹽酸利多卡因(杭州大陽化工有限公司，LD)；利多卡因(sigma，98% )；鹽酸胺碘 酮(杭州大陽化工有限公司，AD) ；4-乙烯基吡啶(ACROS 0RGANICS，USA)，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA，分析純，百靈威化學技術有限公司)，偶氮二乙丁腈(AIBN，化學純，上海試劑 廠)；磷酸二氫鈉(天津福晨化學試劑，基準試劑)；3，5_二碘4-[2-(二乙氨基)乙氧基-硝 基苯(自制，Bi)，其它試劑均為分析純。
四

附圖1為pH = 4. 5胺碘酮溶液上樣在MIP與非印跡聚合物(NIP)上的吸附量隨 濃度變化曲線。附圖2為1. Omg/L胺碘酮溶液HPLC圖2a為鹽酸胺碘酮標準品溶液；2b為鹽酸 胺碘酮血清提取液_未經過MISPE柱；2c為鹽酸胺碘酮血清提取液-經過MISPE柱。
五具體實施例方式A)將模板、功能單體、交聯(lián)劑、引發(fā)劑、致孔劑按 Immol 4mmol 16mmol 78. 5mg的配比置于50mL圓底燒瓶中，充分溶解混勻，超聲脫氣 5min，通氮氣5min，于50°C恒溫油浴鍋中加熱24h。B)將步驟Α)制備的聚合物磨碎成粉末，粉末過篩，收集粒徑在38 75 μ m的聚合 物，用索氏提取器以含冰乙酸-甲醇(1 9，V/V)溶液洗至無胺碘酮檢出，繼續(xù)用甲醇洗去 乙酸，最后真空干燥至恒重，得鹽酸胺碘酮MIP顆粒。用HPLC評價鹽酸胺碘酮MIP顆粒的選擇性。將洗滌過的MIP顆粒干法裝填于不 銹鋼色譜柱(50mmX4. 6mm)中，以甲醇pH = 4.0(75 25, ν/ν)為流動相，流速為1. 2mL/ 111土11，檢測波長為24211111，柱溫為32.21，2(^1^進樣。以丙酮測量死時間。結果表明制備的 MIP對鹽酸胺碘酮具有高的親和性和選擇性。表HPLC評價鹽酸胺碘酮MI
權利要求
1.一種鹽酸胺碘酮分子印跡固相萃取(MISPE)柱，其特征是固相萃取柱中填充有鹽酸 胺碘酮分子印跡聚合物(MIP)顆粒。
2.如權利要求1所述的鹽酸胺碘酮MISPE柱，其特征在于上述鹽酸胺碘酮MIP顆粒大 小為38 75μπι。
3.鹽酸胺碘酮MISPE柱的制備方法，其特征在于包括以下步驟Α)將胺碘酮0. 6455g (Immol)、4_乙烯基吡啶0. 4206g (4mmol)、乙二醇二甲基丙烯酸酯 3. 1715g(16mmol)，偶氮二乙丁腈0. 0848g,氯仿3. 9262g置于50mL圓底燒瓶中，充分溶解混 勻，超聲脫氣5min，通氮氣5min，于50°C恒溫油浴鍋中加熱24小時，得到塊狀聚合物。將塊 狀聚合物用研缽磨碎，過篩收集得到粒徑在38 75 μ m,含有胺碘酮的MIP顆粒；B)將上述含有胺碘酮的MIP顆粒，用索氏提取器以含冰乙酸-甲醇(1 9，V/V)溶液 洗至無胺碘酮檢出，繼續(xù)用甲醇洗去乙酸，再經甲醇反復沉降，濾去甲醇，將獲得的顆粒物 真空干燥至恒重，即為鹽酸胺碘酮MIP顆粒；C)稱取IOOmg上述鹽酸胺碘酮MIP顆粒，均勻填充至固相萃取空柱中，在聚合物上放置 塞板，制得鹽酸胺碘酮MISPE柱。
4.如權利要求1所述的鹽酸胺碘酮MISPE柱，其特征在于將上述鹽酸胺碘酮MIP顆粒 填充在聚丙烯固相萃取柱內得鹽酸胺碘酮MISPE柱。
5.如權利要求1所述的鹽酸胺碘酮MISPE柱用途，其特征在于利用該鹽酸胺碘酮 MISPE柱分離富集生物樣品中的鹽酸胺碘酮。
6.如權利要求5所述的鹽酸胺碘酮MISPE柱的用途，其特征在于用該鹽酸胺碘酮 MISPE柱分離富集血清(或血漿)樣品鹽酸胺碘酮提取液，以pH = 4. 5溶液為上樣溶劑、 30%甲醇pH = 4. 5溶液為淋洗劑、5%鹽酸-甲醇為洗脫劑。
7.如權利要求6所述的鹽酸胺碘酮MISPE柱應用于血清(或血漿)樣品鹽酸胺碘酮提 取液，其特征在于上述血清樣品鹽酸胺碘酮提取液制備方法是取空白牛血清0. 3mL樣品， 置具塞離心管中，精密加入1. Og/L鹽酸胺碘酮的甲醇溶液0. 3mL，渦旋混勻lmin，加入乙腈 2. 4mL混勻，后于4000r/min離心30min除去蛋白質，精密量取上清液1. OmL作為生物樣品 提取液。
全文摘要
本發(fā)明涉及吸附材料的制備及其在藥物分離、富集中的應用，是一種鹽酸胺碘酮分子印跡聚合物和鹽酸胺碘酮分子印跡固相萃取柱的制備及其應用。該分子印跡聚合物以胺碘酮為模板，4-乙烯基吡啶為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，氯仿為致孔劑，采用本體聚合法合成分子印跡聚合物，將分子印跡聚合物顆粒均勻填充于固相萃取柱內，得到鹽酸胺碘酮分子印跡固相萃取柱。本發(fā)明實現了生物樣品中鹽酸胺碘酮的高效分離、富集與純化，與以往普通溶劑萃取法、C18固相萃取法等相關技術相比，選擇性高，并且鹽酸胺碘酮分子印跡固相萃取柱可以重復使用，成本低，可望成為生物樣品中鹽酸胺碘酮前處理的必備手段。
文檔編號B01J20/30GK102101041SQ20101051392
公開日2011年6月22日 申請日期2010年10月21日 優(yōu)先權日2010年10月21日
發(fā)明者劉翠, 吐爾洪·買買提 申請人:新疆大學