一株具有免疫調(diào)節(jié)及抗過敏功能的嗜酸乳桿菌La28及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供一株具有免疫調(diào)節(jié)及抗過敏功能的嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus）La28，其保藏編號為CGMCC No.11506。本發(fā)明還提供嗜酸乳桿菌La28在制備具有免疫調(diào)節(jié)功能和抗過敏功能的食品中的應(yīng)用。本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No.11506具有良好的免疫調(diào)節(jié)功能和抗過敏的功能，能顯著降低血清IL?6水平，并能顯著降低OVA致敏小鼠的血清總IgE水平，是一種效果很好的功能性乳酸菌，能很好的用于制備具有免疫調(diào)節(jié)功能和抗過敏功能的食品。CGMCC No.1150620151015
【專利說明】
-株具有免疫調(diào)節(jié)及抗過敏功能的嗜酸乳桿菌La28及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一株具有免疫調(diào)節(jié)及抗過敏功能的嗜酸乳桿菌La28及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 正常的情況下，當(dāng)外來物質(zhì)進(jìn)入人體后大都面臨兩種命運(yùn)，如果被機(jī)體識別為有 用或無害物質(zhì)，則運(yùn)些物質(zhì)將與人體和諧相處，最終將被吸收、利用或被自然排出。如運(yùn)些 物質(zhì)被識別為有害物質(zhì)時，機(jī)體的免疫系統(tǒng)則立即做出反應(yīng)，將其驅(qū)除或消滅，運(yùn)就是免疫 應(yīng)答發(fā)揮的保護(hù)作用。免疫應(yīng)答是人的防衛(wèi)體系重要的功能之一，但是如果運(yùn)種應(yīng)答超出 了正常范圍，即免疫系統(tǒng)對無害物質(zhì)進(jìn)行攻擊時，運(yùn)種情況稱為變態(tài)反應(yīng)。變態(tài)反應(yīng)是一種 疾病，因為無端的攻擊也會損害正常的身體組織，甚至免疫系統(tǒng)居然有時對機(jī)體本身的組 織進(jìn)行攻擊和破壞，對人體的健康非常不利。常見的過敏性疾病有過敏性哮喘、過敏性鼻 炎、花粉病、某些皮炎等。
[0003] 過敏的發(fā)病率很高，文獻(xiàn)報道約有V3的人在一生中患過過敏性疾病。根據(jù)我國北 京地區(qū)的統(tǒng)計，在一般人群中過敏的發(fā)病率約為15%。太平洋有些地區(qū)的過敏性疾病甚至高 達(dá)50%。進(jìn)入21世紀(jì)W來，該病已成為最常見的全球性疾病之一。世界衛(wèi)生組織(WHO)的數(shù)據(jù) 表明，目前全球有22%-25%的人患有過敏性疾病，并W每10年23倍的速度增加，目前僅在我 國就有兩億多人患病。因此過敏和抗過敏，是現(xiàn)代人面臨的不可回避的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。
[0004] 益生菌是指有益于宿主健康及良好狀態(tài)的微生物制劑或微生物的細(xì)胞成分，主要 包括乳酸桿菌、雙歧桿菌、酵母菌等。研究表明益生菌具有多重健康促進(jìn)功能，包括調(diào)節(jié)腸 道菌群對病原微生物的抵抗作用、防止腹瀉、調(diào)節(jié)免疫、減少血清膽固醇水平、預(yù)防過敏性 疾病和癌癥等。其中最被人們所關(guān)注的是其免疫調(diào)節(jié)功能。
[0005] 近年來的研究顯示，益生菌具有抗過敏的潛能。研究表明，乳酸桿菌可W促進(jìn)巨隧 細(xì)胞及其他免疫細(xì)胞的增殖，因而改善宿主的免疫功能，運(yùn)表明乳酸桿菌對機(jī)體免疫細(xì)胞 活性的調(diào)節(jié)存在一定聯(lián)系。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了一株具有免疫調(diào)節(jié)及抗過敏功能的嗜酸乳桿菌La28,該菌具有免疫 調(diào)節(jié)及抗過敏的功能。
[0007] 本發(fā)明提供一株嗜酸乳桿菌(13[的63[_?7扣5 3[扣0/7知'扣5化日28，其保藏編號為 CGMCC No.11506。
[000引本發(fā)明的嗜酸乳桿菌（Zacio6acj7Jt/s acic/0j0AiJt/s)La28的保藏單位為：中國普 通微生物菌種保藏管理中屯、，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微 生物研究所，保藏日期2015年10月15日，保藏號為CGMCC No.11506。
[0009] 本發(fā)明還提供嗜酸乳桿菌(Zacio6acj7Jt/s acic/〇j〇AiJt/s)La28菌劑，是將上述的 嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506菌株擴(kuò)大培養(yǎng)后得到的。
[0010] 本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28的擴(kuò)大培養(yǎng)方法可W參照現(xiàn)有技術(shù)中嗜酸乳桿菌的擴(kuò) 大培養(yǎng)方法，均能很好的擴(kuò)大培養(yǎng)本發(fā)明的嗜酸乳桿菌。
[0011] 本發(fā)明還提供上述嗜酸乳桿菌La28或嗜酸乳桿菌La28菌劑在制備具有免疫調(diào)節(jié) 功能和抗過敏功能的食品中的應(yīng)用。
[0012] 作為優(yōu)選，所述食品為益生產(chǎn)品或乳制品；作為優(yōu)選，所述食品包括嗜酸乳桿菌粉 劑、嗜酸乳桿菌片劑、嗜酸乳桿菌顆粒劑、嗜酸乳桿菌膠囊劑、嗜酸乳桿菌乳制品、嗜酸乳桿 菌飲料、嗜酸乳桿菌糖果或嗜酸乳桿菌果凍。
[0013] 本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28可W制備成各種含有嗜酸乳桿菌的產(chǎn)品，包括粉劑、片 劑、顆粒劑、乳制品、飲料、糖果、果凍。但不限于此，還包括本領(lǐng)域常見的其他產(chǎn)品形式，例 如膠囊劑等等。本發(fā)明的含有嗜酸乳桿菌La28的粉劑、片劑、顆?？蒞通過將嗜酸乳桿菌 La28,按照本領(lǐng)域常規(guī)的方法，W常規(guī)的比例與常規(guī)的輔料制成。本發(fā)明的含有嗜酸乳桿菌 La28的發(fā)酵果蔬汁及乳制品中，可將嗜酸乳桿菌La28直接添加使用，再按照本領(lǐng)域常規(guī)的 方法，W常規(guī)的比例與常規(guī)的原料制成。
[0014] 本發(fā)明還提供一種具有免疫調(diào)節(jié)功能和抗過敏功能的食品，所述食品的功能性有 效成分為權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌La28、權(quán)利要求2所述的嗜酸乳桿菌La28菌劑;所述 功能性有效成分為免疫調(diào)節(jié)功能和抗過敏功能。
[0015] 作為優(yōu)選，所述食品包括嗜酸乳桿菌粉劑、嗜酸乳桿菌片劑、嗜酸乳桿菌顆粒劑、 嗜酸乳桿菌膠囊劑、嗜酸乳桿菌乳制品、嗜酸乳桿菌飲料、嗜酸乳桿菌糖果或嗜酸乳桿菌果 凍。
[0016] 本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506具有良好的免疫調(diào)節(jié)功能和抗過敏的 功能，能顯著降低血清IL-6水平，并能顯著降低OVA致敏小鼠的血清總I姐水平，是一種效果 很好的功能性乳酸菌，能很好的用于制備具有免疫調(diào)節(jié)功能和抗過敏功能的食品。
【附圖說明】
[0017] 附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與本發(fā)明的實 施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中： 圖1為本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28的顯微鏡成像圖。
【具體實施方式】
[0018] W下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為市 售。百分含量如無特別說明均為質(zhì)量百分含量。
[0019]實施例1 1、本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28(YMC0253)的分離、鑒定 (1)菌株分離。
[0020] a、取從內(nèi)蒙古采集的奶酪樣品放入至50mL無菌離屯、管中，再加入20mL滅菌的生 理鹽水，振蕩均勻。
[0021] b、用接菌環(huán)沾取上述稀釋液，在已配置好的改良MRS瓊脂培養(yǎng)基(在MRS培養(yǎng)基中 加入0.5%。的半脫氨酸鹽酸鹽)上進(jìn)行劃線，將完成劃線的平板置于37°C條件下恒溫培養(yǎng)72 小時。用接菌環(huán)挑取單菌落，接種于改良MRS液體培養(yǎng)基(在MRS培養(yǎng)基中加入0.5%〇的半脫 氨酸鹽酸鹽）中，置于37°C條件下恒溫培養(yǎng)18小時。取菌液劃線接種于改良MRS瓊脂培養(yǎng)基 (在MRS培養(yǎng)基中加入0.5%。的半脫氨酸鹽酸鹽），置于37°C下恒溫培養(yǎng)72小時后，觀察菌落 形態(tài)并進(jìn)行革蘭氏染色，觀察染色情況及細(xì)胞形態(tài)特征。將革蘭氏染色呈陽性的短桿或棒 狀桿菌，進(jìn)行編號并進(jìn)一步純化培養(yǎng):重復(fù)上述劃線步驟至少Ξ次，得到菌落、菌體形態(tài)一 致的菌株，進(jìn)行保存，得到嗜酸乳桿菌La28。采用-80°C凍結(jié)保存或低溫真空冷凍保存方法 保存目標(biāo)菌株。
[0022] (2)菌株鑒定。
[0023] 將分離純化的嗜酸乳桿菌La28進(jìn)行生理生化鑒定及l(fā)eSrDNA鑒定。嗜酸乳桿菌 acic/o如La28生物學(xué)特性如表1所示。該菌株的形態(tài)學(xué)特征為:革蘭氏 染色呈陽性的短桿或棒狀桿菌。
[0024] 將該菌株送至中國普通微生物菌種保藏管理中屯、進(jìn)行保藏，保藏地址為北京市朝 陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏日期2015年10月15日，保藏號為 CGMCC No.11506。
[00巧]表1嗜酸乳桿菌acic/o如La28的生物學(xué)特性
嗜酸乳桿菌acic/o如tuf基因序列測定結(jié)果如下：

將本發(fā)明的嗜酸乳桿菌按照現(xiàn)有技術(shù)中嗜酸乳桿菌常用的擴(kuò)大培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)，得 到擴(kuò)大培養(yǎng)后的嗜酸乳桿菌。
[00%] 實施例2應(yīng)用本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506制備益生產(chǎn)品 應(yīng)用本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506制備益生產(chǎn)品時，制備方法可W參照 現(xiàn)有技術(shù)中的制備方法。W下是幾種含有本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506的益 生產(chǎn)品。
[0027] (1)嗜酸乳桿菌粉劑 目前粉劑是嗜酸乳桿菌相關(guān)制劑的主要產(chǎn)品形式。其生產(chǎn)最為便利，采用的設(shè)備也最 為簡單，同時具有攜帶及使用方便的特點。該類產(chǎn)品主要W本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506凍干菌粉為主，添加如麥芽糊精、抗性糊精、低聚異麥芽糖、低聚果糖、水蘇 糖、乳糖醇、巧樣酸等食品原料、益生元及食品添加劑，還可W添加乳酸巧、乳酸鋒、乳酸亞 鐵、維生素 A、維生素 C、維生素 D等營養(yǎng)強(qiáng)化劑混合均勻，也可加入天然果蔬粉進(jìn)行調(diào)味。產(chǎn) 品可W根據(jù)不同的克重和活菌數(shù)進(jìn)行規(guī)格的分類。
[00%] (2)嗜酸乳桿菌顆粒劑 顆粒劑也是嗜酸乳桿菌制品的一類。顆粒生產(chǎn)非常簡單，不需要復(fù)雜的設(shè)備，攜帶和服 用方便;服用時容易溶解、入口分散性很好。顆粒W菌粉、填充劑、穩(wěn)定劑和調(diào)味劑等組成。 本發(fā)明的嗜酸乳桿菌顆粒劑主料為本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No.11506干燥菌粉， 輔料為奶粉W及淀粉，根據(jù)產(chǎn)品要求還可加入一些常規(guī)的甜味劑、香精等調(diào)味劑，有的還加 入一些營養(yǎng)強(qiáng)化劑。按照常規(guī)的比例，經(jīng)過常規(guī)制粒法進(jìn)行生產(chǎn)，產(chǎn)品可W根據(jù)不同的克重 和活菌數(shù)進(jìn)行規(guī)格的分類。
[0029] (3)嗜酸乳桿菌片劑 目前片劑產(chǎn)品是嗜酸乳桿菌制品的一類。該產(chǎn)品是利用本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506,配合片劑領(lǐng)域的常用原輔材料，如:葡萄糖、乳糖、山梨糖醇、微晶纖維素、 硬脂酸儀W及奶粉等，經(jīng)常規(guī)制劑技術(shù)制成的片狀制劑。片劑具有劑量準(zhǔn)確，服用和攜帶方 便，便于識別等優(yōu)點。本發(fā)明的片劑制備是按常規(guī)的方法，將菌粉與常規(guī)的輔料按照常規(guī)的 比例混合均勻，使其具有良好的流動性和可壓性，然后通過壓片機(jī)機(jī)械壓成片。壓片時可在 適度的壓力下壓成硬度符合要求的片劑。
[0030] (4)嗜酸乳桿菌膠囊劑 膠囊劑也是嗜酸乳桿菌制品的一類，其分為固體膠囊劑W及液體膠囊劑，固體膠囊劑， 是將嗜酸乳桿菌粉劑或者嗜酸乳桿菌顆粒劑，經(jīng)膠囊機(jī)制作成為膠囊產(chǎn)品;液體膠囊劑，是 將嗜酸乳桿菌菌粉與油脂混合，通過膠囊劑制作成軟膠囊產(chǎn)品。W上兩種產(chǎn)品均可W根據(jù) 不同的克重和活菌數(shù)進(jìn)行規(guī)格的分類。
[0031] 巧)本發(fā)明嗜酸乳桿菌在制備乳制品中的應(yīng)用 本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506可W在制備乳制品中使用，乳制品包括酸 奶、乳飲料、冰洪淋等。但本發(fā)明的乳制品不限于此，還包括其他形式的乳制品。本發(fā)明的各 種乳制品可W通過將本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28菌粉作為原料，按照本領(lǐng)域常規(guī)的方法，W 常規(guī)的比例添加制成。
[0032] a、嗜酸乳桿菌乳飲料 鮮奶或濃縮脫脂乳或脫脂乳粉強(qiáng)化的脫脂乳1〇%-15%。糖液:甜味劑(砂糖或葡萄糖或 其他常用甜味劑)22%-30%，巧樣酸0.05%-0.1%，穩(wěn)定劑(本領(lǐng)域任何常用的用于乳制品的穩(wěn) 定劑)0.1%-0.4%。發(fā)酵液、糖液與水比例為1:2:1。
[0033] 將鮮奶或濃縮脫脂乳或脫脂乳粉強(qiáng)化的脫脂乳用40-50°C去離子水混合料液，充 分溶解后預(yù)熱至60-65 °C，20MPa壓力下均質(zhì)，在90-95°C溫度下加熱殺菌5-30分鐘，冷卻到 42°C;然后在其中添加發(fā)酵劑化-C698-U由河北一然生物科技有限公司生產(chǎn)，并已公開出 售)0.003%-0.01%和嗜酸乳桿菌La28菌粉0.002%-0.004%，在42 °C下培養(yǎng)，使其抑值為4.2- 4.5,活菌數(shù)達(dá)到108c化/mLW上。
[0034] 另外，將作為輔料的甜味劑、穩(wěn)定劑、色素等，用60-8(TC去離子水溶解配成糖漿， 經(jīng)95°C加熱殺菌5-30分鐘后冷卻到42°C，將發(fā)酵乳與糖漿混合，必要時添加巧樣酸調(diào)節(jié)酸 度;添加香料后，加一定量的冷卻水定容，用10兆帕的壓力均質(zhì)，冷卻至25°C，最后將制品灌 裝于容器中冷藏，其產(chǎn)品活菌數(shù)為3X106c化/mL。
[0035] b、嗜酸乳桿菌酸乳 將鮮乳加熱至50°C W上，加入6.5-8%白砂糖攬拌至完全溶解，預(yù)熱至60-65 °C，20Mpa 壓力均質(zhì)，95°C左右殺菌5分鐘，冷卻至42-45Γ，接種發(fā)酵劑化-C975(由河北一然生物科技 有限公司生產(chǎn)，并已公開出售）0.003%-0.01%和本發(fā)明嗜酸乳桿菌0.002%-0.004%。40-42 °C發(fā)酵至pH 4.2-4.5,冷卻、冷藏，制成凝固型酸乳或攬拌型酸乳。
[0036] C、嗜酸乳桿菌冰洪淋 制備1000kg冰洪淋，使用白砂糖75kg，全脂奶粉66kg，奶油32kg，挪子油23kg，糖漿 26.化g，穩(wěn)定劑化g，本發(fā)明的嗜酸乳桿菌菌粉0.002%-0.004%，其余為水。將除菌粉外的其 他物料混合，預(yù)熱至60°C-65°C，20Mpa下均質(zhì)，70°C-85°C下殺菌10-30分鐘，冷卻至40°C-50 °C，加入本發(fā)明的嗜酸乳桿菌菌粉，20-30Mpa下進(jìn)行均質(zhì)，在2°C-4°C下放置6小時，經(jīng)凝凍 硬化制成冰洪淋。
[0037] d、嗜酸乳桿菌粉劑 選用麥芽糊精、抗性糊精、乳粉等食品原料5%-30%、益生元(低聚果糖、低聚異麥芽糖、 水蘇糖、乳糖醇等）10%-30%、膳食纖維(菊粉等巧%-15%、果蔬粉5%-10%W及本發(fā)明的嗜酸乳 桿菌菌粉5%-15%，按照一定比例混合，混合后經(jīng)包裝制成粉劑小條即可，終端產(chǎn)品每包活菌 數(shù)可達(dá)100億到300億不等，可根據(jù)不同活菌數(shù)制定產(chǎn)品規(guī)格。
[0038] 實施例3本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506的免疫調(diào)節(jié)及抗過敏功能 實驗材料 1.1實驗菌株 本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506。
[0039] 1.2實驗動物 SPF級BALB/C小鼠，雄性，6-8周齡(體重18-20g)，48只，購自四川省達(dá)碩實驗動物有限 責(zé)任公司（許可證號:SCYK(川）2015-030)。
[0040] 1.3試劑與儀器 無菌生理鹽水：自配；比-6、化-12、IFN- 丫 ELISA檢測試劑盒:R&D公司，美國；離屯、機(jī)， 酶標(biāo)儀，洗板機(jī)。
[0041] 2.實驗方法 2.1動物飼養(yǎng) 動物購買回本實驗室SPF級動物房后，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周(7天）。動物均飼養(yǎng)于塑料籠中， 給予標(biāo)準(zhǔn)膳食，自由飲水。環(huán)境溫度:24°C±rC，濕度:55±10%。每天灌胃生理鹽水或菌液。 實驗分兩次處死動物，第一次于飼養(yǎng)2周（14天)后處死各組的一半（12只）動物，第二次于飼 養(yǎng)4周(28天)后處死余下動物。
[0042] 2.2動物分組及益生菌干預(yù) 將48只小鼠隨機(jī)分為2組，每組24只，具體分組如下： 對照組:共24只，每只小鼠每天灌胃無菌生理鹽水0.2血； 嗜酸乳桿菌La28干預(yù)組:共24只，每只小鼠每天灌胃嗜酸乳桿菌La28菌液0.2mL(含菌 量l〇9cfU)。
[0043] 2.3小鼠體重及免疫臟器系數(shù)（Immune organ index, ΙΟΙ)的測定 實驗開始時稱取各組小鼠基礎(chǔ)體重，并于實驗過程中每隔7天稱取一次體重W監(jiān)測小 鼠生長發(fā)育情況。處死小鼠前稱取最后一次體重，用于計算臟器系數(shù)。處死時，無菌剝離小 鼠胸腺及脾臟，去除周圍結(jié)締組織，用濾紙吸凈臟器表面血液后稱重，由公式101=胸腺或脾 臟重量(mg)/體重(g)計算免疫臟器系數(shù)(Immune organ index, 101)。
[0044] 2.4血清細(xì)胞因子的測定 處死小鼠時，采用眼球取血法收集小鼠血液，室溫靜置30分鐘后，離屯、lOOOr/min lOmin，收集上清液凍存于-80°C備用。
[0045] 分別用化-6、化-12、IFN- 丫 ELISA試劑盒(R&D，美國）進(jìn)行血清細(xì)胞因子的測定， 具體測定步驟參照試劑盒說明書完成。
[0046] 2.5統(tǒng)計學(xué)分析 用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料用表示，體重及臟器系數(shù)的各組間均數(shù)比較采 用方差分析，血清細(xì)胞因子IL-6的實驗組與對照組均數(shù)比較采用t檢驗。
[0047] 3.實驗結(jié)果 3.1體重及一般情況 實驗結(jié)束時各組體重及各組體重增長結(jié)果如表2。實驗結(jié)束時，各組體重?zé)o統(tǒng)計學(xué)差 異，各組體重增長也無統(tǒng)計學(xué)差異。體重增長均為正，表明各組菌株對小鼠無毒性。實驗期 間小鼠生長狀況良好，無明顯腹瀉等不良表現(xiàn)，未出現(xiàn)中毒癥狀及死亡。
[004引表2實驗結(jié)束時體重及實驗前后體重增長(單位:g)
3.2免疫臟器系數(shù) 實驗測得免疫臟器系數(shù)如表3。實驗結(jié)束時，各組間免疫臟器系數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異。
[0049]表3免疫器官的臟器系數(shù)(單位:mg/g)
3.3血清細(xì)胞因子 實驗測得血清細(xì)胞因子結(jié)果如表4、表5。14天及28天時各組血清IL-12、IFN-丫均低于 試劑盒檢測限，未檢出。14天時，La28菌株組的血清比-6濃度低于空白對照組，差異有統(tǒng)計 學(xué)意義(P<〇.〇5)d28天時，La28菌株組的血清IL-6濃度低于空白對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05)。
[0化0] 表4 14天時血清細(xì)胞因子濃度(單位:pg/mL)
注:*與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P沛.口筑;N.D表示未檢出 表5 28天時血清細(xì)胞因子濃度(單位:pg/mL)
注:*與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<〇. 05): N. D表示未檢出 綜上所述，在投用本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506 14天-28天后，可降低小 鼠血清化-6水平，化-6主要由單核巨隧細(xì)胞、化2細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞產(chǎn)生，其 作用祀細(xì)胞較為復(fù)雜。實驗結(jié)果顯示嗜酸乳桿菌La28可降低血清IL-6水平，提示其可能抑 審化h2細(xì)胞活性，說明本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506具有免疫調(diào)節(jié)作用。
[0化1 ] 實施例4本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506抗過敏功能試驗 1.實驗材料 1.1實驗菌株 本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506。
[0化2] 1.2實驗動物 SPF級BALB/C小鼠，雄性，6-8周齡(體重18-20g)，36只，購自四川省達(dá)碩實驗動物有限 責(zé)任公司（許可證號:SCYK(川）2015-030)。
[0化3] 1.3試劑與儀器 卵清白蛋白（OVA) : sigma公司，美國；氨氧化侶:分析純，SigmaV900163-500G，美國；無 菌生理鹽水：自配;I巧ELISA試劑盒:YAMASA公司，日本;離屯、機(jī)，酶標(biāo)儀，洗板機(jī)。
[0化4] 2.實驗方法 2.1動物飼養(yǎng) 動物購買回本實驗室SPF級動物房后，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周(7天）。動物均飼養(yǎng)于塑料籠中， 給予標(biāo)準(zhǔn)膳食，自由飲水。環(huán)境溫度:24±rC，濕度:55±10%。每2天灌胃一次生理鹽水或菌 液，于實驗開始后第8天、第22天、第29天、第36天分別進(jìn)行腹腔OVA注射，于最后一次腹腔 OVA注射7天后處死動物。
[0化日]2.2動物分組及益生菌干預(yù) 將36只小鼠隨機(jī)分為3組，具體分組如下： 空白對照組：12只，每2天灌胃無菌生理鹽水一次(0.2血/次）； OVA陽性對照組:12只，每2天灌胃0.2mL無菌生理鹽水一次，進(jìn)行3次腹腔OVA注射； 嗜酸乳桿菌La28菌株組：12只，每2天灌胃0.2mL La28菌液一次(含菌量109c化），進(jìn)行4 次腹腔OVA注射。
[0化6] 2.3 OVA的配制及過敏反應(yīng)激發(fā) 采用腹腔注射卵清白蛋白（OVA)的方式激發(fā)小鼠過敏反應(yīng)。激發(fā)所用OVA需自行配制， 配制方法如下：400yg0VA溶于ImL憐酸鹽緩沖液(PBS)中，400mg A1 (0H)3配于lOmL憐酸鹽 緩沖液(PBS)中形成混懸液，并用超聲破碎儀破碎10分鐘，使用時將OVA溶液和A1 (0H)3混懸 液等體積混合，配得濃度為20化gOVA，20mgAl (0H)3/mL的混懸液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0057]分別于實驗開始后第8天、第22天、第29天、第36天對OVA陽性對照組和實驗組小鼠 進(jìn)行腹腔OVA注射，每只小鼠每次注射0.1 mL混懸液。
[0化引 2.4小鼠體重測定 實驗開始時稱取各組小鼠基礎(chǔ)體重，并于實驗過程中每隔7天稱取一次體重W監(jiān)測小 鼠生長發(fā)育情況。
[0059] 2.5血清總1邑6巧憶 于最后一次腹腔OVA注射7天后處死動物，分別測定各組小鼠體重血液總I姐濃度。實驗 開始時，采用尾部動脈法收集小鼠血液，實驗結(jié)束處死小鼠時，采用眼球取血法收集小鼠血 液，室溫靜置30分鐘后，離屯、lOOOr/min lOmin，收集血清凍存于-80°C備用。
[0060] 血清總I巧的測定，采用小鼠血清總IgE ELISA試劑盒(YAMASA，日本)進(jìn)行測定，具 體測定步驟參照試劑盒說明書。
[0061] 2.6統(tǒng)計學(xué)分析 用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料用表示，各組間均數(shù)比較采用方差分析，部分 均數(shù)間兩兩比較采用Dunnett-t檢驗。
[0062] 3.實驗結(jié)果 3.1體重及一般情況 實驗結(jié)束時各組體重及各組體重增長結(jié)果如表6。實驗結(jié)束時，各組體重增長無統(tǒng)計學(xué) 差異。體重增長均為正，表明菌株對小鼠無毒性。實驗期間小鼠生長狀況良好，無明顯腹瀉 等不良表現(xiàn)。
[0063] 表6實驗結(jié)束時體重及實驗前后體重增長(單位:g)
3.2血清總I巧濃度 根據(jù)試劑盒要求，在測定血清總I巧時，對血清進(jìn)行25倍稀釋后進(jìn)行測定，所得結(jié)果如 表7。實驗前血清總I巧水平均較低或未檢出，實驗結(jié)束時，OVA陽性對照組及各菌株組血清 總I姐高于空白對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<〇.〇5)DLa28菌株組血清總I巧低于OVA陽性對 照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<〇. 05)。
[0064] 表7實驗前后血清總I巧濃度(單位:ng/mL)
注:未擴(kuò)大倍數(shù);a與b之間有統(tǒng)計學(xué)差異，P <0.05;a與C之間有統(tǒng)計學(xué)差異，P <0.05;b 與C之間用統(tǒng)計學(xué)差異，P <0.05;N.D表示未檢出。
[0065] 綜上所述，在OVA刺激小鼠后，血清I姐升高，小鼠發(fā)生超敏反應(yīng)，而投用本發(fā)明的 嗜酸乳桿菌La28后，可W降低由于超敏反應(yīng)而升高的血清I巧水平，推測本發(fā)明的嗜酸乳桿 菌La28具有抗過敏作用。在免疫調(diào)節(jié)作用實驗中，嗜酸乳桿菌降低血清IL-6水平，表明其免 疫調(diào)節(jié)機(jī)制為抑制化2細(xì)胞的活性。
[0066] 整體試驗結(jié)果表明，本發(fā)明的嗜酸乳桿菌La28具有免疫調(diào)節(jié)作用，在投用14天-28 天后可降低血清IL-6水平。嗜酸乳桿菌La28還具有抗過敏作用，可降低OVA致敏小鼠的血清 總I巧水平，其潛在的抗過敏機(jī)制為抑制化2細(xì)胞活性，從而影響化1/化2細(xì)胞平衡。
[0067] 最后應(yīng)說明的是：W上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明， 盡管參照前述實施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可 W對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。 凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的 保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一株具有免疫調(diào)節(jié)及抗過敏功能的嗜酸乳桿菌（ZacioAaciDus acic/OjOAi^us) La28,其保藏編號為CGMCC No. 11506。2. 具有免疫調(diào)節(jié)及抗過敏功能的嗜酸乳桿菌(ZacioAaciDus acit/〇j〇Ai7t/s)La28菌 劑，其特征在于：是將權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌La28 CGMCC No. 11506菌株擴(kuò)大培養(yǎng)后 得到的。3. 權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌La28或權(quán)利要求2所述的嗜酸乳桿菌La28菌劑在制備 具有免疫調(diào)節(jié)功能和抗過敏功能的食品中的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于:所述食品為益生產(chǎn)品或乳制品；作為優(yōu)選， 所述食品包括嗜酸乳桿菌粉劑、嗜酸乳桿菌片劑、嗜酸乳桿菌顆粒劑、嗜酸乳桿菌膠囊劑、 嗜酸乳桿菌乳制品、嗜酸乳桿菌飲料、嗜酸乳桿菌糖果或嗜酸乳桿菌果凍。5. 一種具有免疫調(diào)節(jié)功能和抗過敏功能的食品，其特征在于:所述食品的功能性有效 成分為權(quán)利要求1所述的嗜酸乳桿菌La28、權(quán)利要求2所述的嗜酸乳桿菌La28菌劑;所述功 能性有效成分為免疫調(diào)節(jié)功能和抗過敏功能。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的食品，其特征在于:所述食品包括嗜酸乳桿菌粉劑、嗜酸乳桿 菌片劑、嗜酸乳桿菌顆粒劑、嗜酸乳桿菌膠囊劑、嗜酸乳桿菌乳制品、嗜酸乳桿菌飲料、嗜酸 乳桿菌糖果或嗜酸乳桿菌果凍。
【文檔編號】A23G9/36GK106011006SQ201610381849
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月1日
【發(fā)明人】趙林森, 齊世華, 崔文靜, 馬新穎, 劉明月
【申請人】河北然生物科技有限公司, 河北一然生物科技有限公司