嗜酸乳桿菌制劑及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及嗜酸乳桿菌制劑及其應(yīng)用，具體設(shè)及嗜酸乳桿菌作為主要活性成份制 成微生態(tài)制劑，及該微生態(tài)制劑在治療相關(guān)疾病中的應(yīng)用，屬于生物藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 嗜酸乳桿菌在預(yù)防和治療疾病方面發(fā)揮越來越重要的作用，但目前已經(jīng)上市的含 有嗜酸乳桿菌的產(chǎn)品效果不理想，因此篩選高效嗜酸乳桿菌菌種是目前亟需解決的問題， 尤其篩選到具有顯著抗過敏作用的嗜酸乳桿菌菌種。
[0003] 近年來，過敏疾病的發(fā)生率呈上升趨勢，根據(jù)世界衛(wèi)生組織的數(shù)據(jù)，目前全球有 22 %的人患過敏性疾病，并且發(fā)病率迅猛增長，截止到2015年，全球已有40-50 %的人患有 過敏癥，WK)已把過敏性疾病列為21世紀(jì)需要重點(diǎn)研究和防治的Ξ大疾病之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)我國 過敏性疾病的發(fā)病率高達(dá)37.3%，主要影響人群為嬰幼兒。
[0004] 尋找有效的過敏防治措施迫在眉睫。目前針對治療過敏性疾病比較普遍的方法是 使用藥物治療。如組胺括抗劑，可通過堵塞組胺感受器來抑制組胺反應(yīng)，W及類固醇和抑制 肥大細(xì)胞釋放發(fā)炎物質(zhì)的藥物、氣管擴(kuò)張劑藥物等。但是運(yùn)類藥物僅提供暫時的癥狀緩解， 無法真正改變過敏免疫反應(yīng)，治標(biāo)不治本。
[000引然而并不是所有的益生菌株都有抗過敏的作用。Taylor等將將患有過敏性疾病孕 婦的新生兒分成兩組，在出生后6個月內(nèi)，每天服用嗜酸性乳酸桿菌或安慰劑，結(jié)果6個月時 兩組嬰兒的特異性皮炎發(fā)病率沒有差別，提示該試驗(yàn)使用的嗜酸性乳酸桿菌并不會降低特 異性皮炎發(fā)病率（Taylor AL，Dunstan JA，Prescott SL，et al.Probiotic supplementationfor the first 6months of life falls to reduce the risk of atopic dermatitis and increases the risk of allergen sensitization in high- risk children.a randomized controlled trial.J Allergy Clin Inlmunol，2007，119 (1): 184-191.)。一項(xiàng)隨機(jī)對照研究給予經(jīng)吸入過敏原誘導(dǎo)哮喘的青少年和成年人服用含 有嗜熱鏈球菌和嗜酸乳桿菌的奶制品，結(jié)果顯示哮喘的臨床癥狀、肺功能和炎癥的實(shí)驗(yàn)室 標(biāo)記物相對于對照組均沒有發(fā)生改變（Wheeler JG，aiema SJ，Bogle ML，et al. Immune and clinical impact of Lactobacillus acidophilus on asthma.Ann Allergy Asthma Immunol ,1997,79(3):229-233.)。說明只有某些乳酸菌菌株有抗過敏的免疫作用。本發(fā)明 嗜酸乳桿菌微生態(tài)制劑防治過敏等疾病療效顯著，并可作為藥品、保健品、食品、獸藥和飼 料添加劑等應(yīng)用，社會意義巨大，且未見相關(guān)研究報(bào)道，特申請此發(fā)明專利。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種微生態(tài)制劑，該微生態(tài)制劑的活性成分為嗜酸乳桿菌 DH213，保藏編號CGMCC No. 11228,該微生態(tài)制劑具有預(yù)防或治療機(jī)體過敏反應(yīng)等作用。
[0007] 根據(jù)菌株的菌落、菌體形態(tài)特征，leSrDNA序列分析及API細(xì)菌鑒定系統(tǒng)分析結(jié)果 來確認(rèn)菌株在分類學(xué)地位，發(fā)現(xiàn)編號DH213的菌株為嗜酸乳桿菌;該株菌在形態(tài)學(xué)及一般性 質(zhì)上的特征如下：
[000引 1、菌體或菌落形態(tài)
[0009] 菌體形態(tài):菌體在顯微鏡下呈短桿狀，兩端為圓形，長1.5-6微米，寬0.6-0.9微米， W單個、成雙或短鏈排列。不運(yùn)動，無鞭毛，無芽抱，革蘭氏染色陽性。
[0010] 菌落形態(tài)：固體培養(yǎng)基上菌落形態(tài)通常較粗糖，用顯微鏡觀察顯示為纏繞或微毛 絲狀物，從菌堆中屯、放射出來，深層菌落呈放射或分枝的不規(guī)則形狀，無色素。
[0011] 2、生理生化特征：
[0012] 最適生長溫度為35-38 °C，20 °C W下不生長，兼性厭氧。菌株的最適生長pH值5.5- 6.0，耐酸性強(qiáng)。不具有致病性，不產(chǎn)毒素。
[0013] 在糖發(fā)酵中，苦杏仁巧、纖維二糖、屯葉巧、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘 露糖、水楊巧、薦糖均能被發(fā)酵;不能發(fā)酵阿拉伯糖、葡糖酸鹽、甘露醇、松Ξ糖、鼠李糖、核 糖、山梨醇、木糖;精氨酸水解不產(chǎn)NH3,發(fā)酵葡萄糖不產(chǎn)氣，接觸酶陰性。
[0014] 本微生態(tài)制劑制成固體組合物包含的總活菌數(shù)不低于IX 10化FU/g，一般在IX 109C即/gW上，最高可達(dá)到1X i〇iic即/g或1X i〇iic即/gW上；制成液體組合物包含的總活 菌數(shù)不能低于1 X 10化FU/mL，一般在1 X 10化FU/mLW上，最高可達(dá)到1 X l〇iiCFU/mL或1 X l〇iiC即/血W上。
[0015] 本微生態(tài)制劑可用于預(yù)防或治療機(jī)體過敏反應(yīng)等多種人體疾病，進(jìn)一步治療濕 疹、過敏性鼻炎、異位性皮炎、過敏性哮喘或食物過敏等疾病。
[0016] 本微生態(tài)制劑可制成藥品組合物、保健品、食品、獸藥或飼料添加劑等。
[0017] 本微生態(tài)制劑所述嗜酸乳桿菌指活的生物個體。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 制備例說明：運(yùn)里通過嗜酸乳桿菌DH213保藏編號CGMCC No. 11228散劑為例進(jìn)行 具體說明，其他嗜酸乳桿菌菌種制劑的制備方法本領(lǐng)域技術(shù)人員通過本實(shí)施例很容易掌 握，其他劑型的制備方法本領(lǐng)域技術(shù)人員通過本實(shí)施很容易掌握，在此不再一一敘述說明。 制備方法并不局限于本發(fā)明實(shí)施例所述，公知的能夠達(dá)到制備目的的方法均可W，實(shí)施例 的制備說明只是對本發(fā)明的說明，并不是對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。
[0019] 制備實(shí)施例嗜酸乳桿菌散劑的制備
[0020] 1菌粉的制備和菌種的鑒定
[0021 ]用無菌容器收集自然排出的新鮮糞便5-lOg，迅速放入?yún)捬豕拗校瑤Щ貙?shí)驗(yàn)室進(jìn)行 菌種分離。取糞便樣品1.5g，用15mlPBS緩沖液懸浮混勻，400g離屯、5min收集上清濁液，再加 入適量PBS緩沖液8000g離屯、lOmin，收集上清濁液，即得到供試樣品。吸取1ml上濁液加入一 支裝有9mlPBS稀釋液(含有5%山-半脫氨酸）的試管中滿旋混勻，作為10-2稀釋液，用同樣方 法稀釋至1〇-3，分別取糞便原液、1〇-2稀釋液、1〇-3稀釋液各0.1ml涂布于MRS平板上，置于37 °C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后，選擇培養(yǎng)基上菌落形態(tài)較為粗糖的菌落，接種于MRS液體培 養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)24h后，將所得培養(yǎng)液離屯、（12000rpm)分離出菌體后，將菌體冷凍真空干 燥，調(diào)制出干燥菌粉，活菌數(shù)均為IX 109CFU/gW上。同時對菌株展開生理