本發(fā)明屬于分子生物學(xué)，更具體地，涉及環(huán)狀rna?circppp2r5a作為預(yù)測肺腺癌骨轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)志物在制備預(yù)測肺腺癌患者骨轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)和/或總生存時(shí)間的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、肺癌是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因，也是最嚴(yán)重的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害人類健康和生命。根據(jù)全球癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，估計(jì)每年有超過200萬人新診斷為肺癌。肺癌一般分為小細(xì)胞肺癌（sclc）和非小細(xì)胞肺癌（nsclc）。其中非小細(xì)胞肺癌約占所有肺癌的85%。非小細(xì)胞肺癌包括多種癌癥類型，如肺腺癌（luads）、鱗狀細(xì)胞癌（luscs）和大細(xì)胞癌。其中在nsclc的亞型中，肺腺癌是最普遍的組織學(xué)變異，約占nsclc病例的40%。肺鱗狀細(xì)胞癌緊隨其后，約占非小細(xì)胞肺癌病例的35%。

2、骨轉(zhuǎn)移是肺癌最有害的臨床后果之一，與不良預(yù)后相關(guān)。多達(dá)30-40%的nsclc患者發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，這些患者的中位生存率約為6個(gè)月，所有實(shí)體瘤轉(zhuǎn)移至骨的中位生存率最低，目前這些患者的五年生存率低于5%。小細(xì)胞肺癌患者常表現(xiàn)為骨溶解，其表現(xiàn)與非小細(xì)胞肺癌患者相似。這些骨骼病變涉及顯著的發(fā)病率，代謝綜合征，病理性骨折和脊髓壓迫，這導(dǎo)致生活質(zhì)量明顯下降，并需要昂貴的治療，影響總體生存。肺腺癌的骨轉(zhuǎn)移作為臨床上常見的問題，卻一直沒有得到很好的解決。目前缺乏能夠預(yù)測肺腺癌骨轉(zhuǎn)移的方法。目前臨床上最常用診斷肺腺癌骨轉(zhuǎn)移的是通過影像學(xué)檢測。骨掃描是最常用的檢查方法之一，通過注射一種放射性物質(zhì)，使骨組織能夠被檢測到。在掃描過程中，放射性物質(zhì)會(huì)集中在骨轉(zhuǎn)移的區(qū)域，形成“熱點(diǎn)”，從而幫助醫(yī)生確定骨轉(zhuǎn)移的位置和數(shù)量。x線檢查可以幫助確定骨轉(zhuǎn)移的位置和形狀，但不能顯示骨髓內(nèi)的腫瘤。ct和mri檢查可以提供更詳細(xì)的圖像，以幫助醫(yī)生確定骨轉(zhuǎn)移的位置和大小。然而這一系列的檢測都是基于腫瘤已經(jīng)發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，此時(shí)在采取治療手段患者往往獲得較差的治療效果。所以如何更早發(fā)現(xiàn)肺腺癌骨轉(zhuǎn)移，預(yù)測其發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)才能為患者提前進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)處理，為患者提供及時(shí)的治療干預(yù)。

3、環(huán)狀rna?（circrnas）是一類具有發(fā)育特異性表達(dá)模式的單鏈分子，擁有屬性為共價(jià)閉合結(jié)構(gòu)，由前體mrna轉(zhuǎn)錄物的反向剪接產(chǎn)生。與線性rna不同，circrna既不含有5’-3’帽狀結(jié)構(gòu)，也不含有多聚腺苷酸化尾。越來越多的研究報(bào)道，circrna在多種癌癥中被廣泛檢測到，并在腫瘤發(fā)展和進(jìn)展中起著不可或缺的調(diào)節(jié)作用。由于其共價(jià)閉環(huán)結(jié)構(gòu)和缺乏暴露的末端，circrna對核酸外切酶的降解具有一定的抗性，并且在血液和其他體液中高度穩(wěn)定存在。正是由于其特殊的穩(wěn)定性，從而讓檢測circrna相關(guān)生物標(biāo)志物和制成circrna疫苗成為一種極具前景的應(yīng)用。如專利cn117143999a公開了一種環(huán)狀rna聯(lián)合作為肺腺癌分子標(biāo)志物的應(yīng)用，環(huán)狀rna聯(lián)合由circlzic和circcep350構(gòu)成，通過檢測兩者的表達(dá)水平，可以判斷受試者是否患有肺腺癌或存在患肺腺癌的風(fēng)險(xiǎn)。如專利cn112375826b公告了一種鑒別非小細(xì)胞肺癌亞型的環(huán)狀rna組合物標(biāo)志物及其應(yīng)用，其中組合物包括hsa_circ_0069841、hsa_circ_001357及hsa_circ_001357與hsa_circ_0069841，發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0069841和hsa_circ_001357能單獨(dú)或組合對非小細(xì)胞肺癌中的肺腺癌與肺鱗癌鑒別具有顯著的特異性和敏感性。然而環(huán)狀rna在肺腺癌的骨轉(zhuǎn)移中的研究還鮮有報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述缺陷和不足，提供一種環(huán)狀rnacircppp2r5a作為預(yù)測肺腺癌骨轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)志物在制備預(yù)測肺腺癌患者骨轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)和/或總生存時(shí)間的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

2、本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供檢測環(huán)狀rna?circppp2r5a表達(dá)水平的試劑在制備預(yù)測肺腺癌患者骨轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)和/或總生存時(shí)間的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

3、本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供促進(jìn)環(huán)狀rna?circppp2r5a過表達(dá)的試劑在制備促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移的細(xì)胞模型或動(dòng)物模型中的應(yīng)用。

4、本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供環(huán)狀rna?circppp2r5a作為治療靶點(diǎn)在制備肺腺癌細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移治療藥物中的應(yīng)用。

5、本發(fā)明的第五個(gè)目的在于提供抑制環(huán)狀rna?circppp2r5a表達(dá)的制劑在制備肺腺癌細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移治療藥物中的應(yīng)用。

6、本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案給予實(shí)現(xiàn)的：

7、本發(fā)明通過分析在肺腺癌骨轉(zhuǎn)移以及非骨轉(zhuǎn)移的患者中的環(huán)狀rna高通量測序數(shù)據(jù)，在肺腺癌骨轉(zhuǎn)移的患者中首次鑒定了一種上調(diào)的環(huán)狀rna（circppp2r5a），其核苷酸序列如seq?id?no.1所示。進(jìn)一步在臨床標(biāo)本中利用pcr檢測驗(yàn)證了高表達(dá)circppp2r5a的肺腺癌患者有更大的概率發(fā)生骨轉(zhuǎn)移以及低總生存期（os），并且預(yù)示不良的預(yù)后，在體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中首次證明了circppp2r5a具有促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移的能力，而敲低circppp2r5a可以抑制破骨細(xì)胞分化，表明circppp2r5a還可作為肺腺癌細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移的治療新靶點(diǎn)，可通過抑制circppp2r5a的表達(dá)治療肺腺癌細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移。

8、因此，本發(fā)明首先提供上述環(huán)狀rna?circppp2r5a作為預(yù)測肺腺癌骨轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)志物在制備預(yù)測肺腺癌患者骨轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)和/或總生存時(shí)間的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

9、本發(fā)明還提供檢測上述環(huán)狀rna?circppp2r5a表達(dá)水平的試劑在制備預(yù)測肺腺癌患者骨轉(zhuǎn)移和/或總生存時(shí)間的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

10、進(jìn)一步地，所述產(chǎn)品用于檢測環(huán)狀rna?circppp2r5a在肺腺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平來評估肺腺癌患者骨轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)和/或總生存期。

11、進(jìn)一步地，所述檢測環(huán)狀rna?circppp2r5a表達(dá)水平的試劑為實(shí)時(shí)熒光定量pcr引物，其核苷酸序列依次如seq?id?no.2～3所示。

12、進(jìn)一步地，上述產(chǎn)品為試劑盒、芯片或試紙。

13、本發(fā)明還提供促進(jìn)上述環(huán)狀rna?circppp2r5a過表達(dá)的制劑在制備促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移的細(xì)胞模型或動(dòng)物模型中的應(yīng)用。

14、進(jìn)一步地，所述過表達(dá)環(huán)狀rna?circppp2r5a可以促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞中破骨細(xì)胞分化。

15、進(jìn)一步地，上述含過表達(dá)環(huán)狀rna?circppp2r5a的肺腺癌細(xì)胞可以促進(jìn)骨轉(zhuǎn)移模型中骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生。

16、本發(fā)明還提供環(huán)狀rna?circppp2r5a作為治療靶點(diǎn)在制備肺腺癌細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移治療藥物中的應(yīng)用。

17、本發(fā)明還提供抑制環(huán)狀rna?circppp2r5a表達(dá)的制劑在制備肺腺癌細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移治療藥物中的應(yīng)用。

18、進(jìn)一步地，所述抑制環(huán)狀rna?circppp2r5a表達(dá)的制劑為rna?circppp2r5a的小干擾rna。

19、優(yōu)選地，所述小干擾rna包括sirna-1或sirna-2，其核苷酸序列分別如seq?idno.4～5或seq?id?no.6～7所示。

20、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

21、本發(fā)明提供了circppp2r5a作為預(yù)測肺腺癌骨轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)志物的應(yīng)用。本發(fā)明通過在肺腺癌骨轉(zhuǎn)移以及非骨轉(zhuǎn)移的患者中的環(huán)狀rna高通量測序數(shù)據(jù)中首次鑒定了一種上調(diào)的環(huán)狀rna?circppp2r5a，后續(xù)臨床標(biāo)本中驗(yàn)證了高表達(dá)circppp2r5a的患者有更大的概率發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，并且預(yù)示不良的預(yù)后。在體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中首次證明了過表達(dá)circppp2r5a具有促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移的能力，而敲低circppp2r5a可以抑制破骨細(xì)胞分化。肺腺癌晚期患者在臨床上常常發(fā)生骨轉(zhuǎn)移并導(dǎo)致不良的預(yù)后，circppp2r5a的發(fā)現(xiàn)可以為預(yù)測肺腺癌骨轉(zhuǎn)移提供一種新型的生物標(biāo)志物，提前預(yù)測肺腺癌的骨轉(zhuǎn)移發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)并及時(shí)監(jiān)測以及干預(yù)可以有效提高肺腺癌患者的預(yù)后，有效避免影像學(xué)檢測對患者身體造成的輻照危害，擴(kuò)大檢測病人的范圍如孕婦老人等；可以有效減輕患者檢測成本，降低患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。同時(shí)，過表達(dá)circppp2r5a可以促進(jìn)肺腺癌的骨轉(zhuǎn)移，低表達(dá)circppp2r5a可以抑制肺腺癌的骨轉(zhuǎn)移，為后續(xù)開發(fā)新的治療肺腺癌骨轉(zhuǎn)移藥物提供了靶點(diǎn)。