一種肝素鈉的制備工藝的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種肝素鈉的制備工藝，步驟如下：1)將畜禽副產(chǎn)物中含肝素臟器絞碎研磨后加水和含鈉堿性物質(zhì)，調(diào)節(jié)勻漿的pH＝9-10；2)控制勻漿溫度至35-40℃，加入動(dòng)物蛋白水解酶，恒溫下攪拌1-2小時(shí)；3)過(guò)濾后，用樹(shù)脂吸附載流液，收集吸附有肝素鈉的樹(shù)脂后洗脫，沉淀并干燥即得肝素鈉。該制備工藝中通過(guò)優(yōu)化蛋白酶的組成和勻漿pH值等條件，使其具有工藝簡(jiǎn)單、產(chǎn)率高、效價(jià)高的優(yōu)點(diǎn)，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種肝素鈉的制備工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物制藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種利用畜禽副產(chǎn)物制備肝素的工藝?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]肝素(heparin)是一種抗凝劑,是由二種多糖交替連接而成的多聚體,在體內(nèi)外都有抗凝血作用。臨床上主要用于血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手術(shù)、心臟導(dǎo)管檢查、血液透析等。鑒于肝素的復(fù)雜結(jié)合和特殊的化學(xué)性質(zhì)，目前主要以生物提取方式獲得，人工合成的肝素因其成本及產(chǎn)品質(zhì)量的限制，尚未達(dá)到工業(yè)化生產(chǎn)的要求。
[0003]Scott、林文慶等人發(fā)明的傳統(tǒng)工藝主要包括組織勻漿和自溶，用堿性硫酸銨或氯化鈉提取肝素與脂蛋白復(fù)臺(tái)物、乙醇去脂、酶解和沉淀等，傳統(tǒng)工藝繁瑣，制備的肝素品位低，色澤淡黃，效價(jià)低(5-15u/mg)，產(chǎn)品收得率低，質(zhì)量難以保證，生產(chǎn)效益低下而無(wú)法規(guī)模化生產(chǎn)。
[0004]專(zhuān)利CN102344502A公開(kāi)了用細(xì)細(xì)胞裂解劑(如十二烷基硫酸鈉、亞硫酸鈉、亞硝酸鈉等)降解法，需要加入防腐劑等，反應(yīng)過(guò)程控制難度較大，而且有毒物質(zhì)殘留較大，產(chǎn)率低，不利于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)和臨床應(yīng)用。因此，工業(yè)上需要一種制備工藝簡(jiǎn)單、產(chǎn)率高、效價(jià)高肝素鈉制備工藝。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供一種適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，產(chǎn)率和效價(jià)都較高的肝素鈉制備工藝，具體地，本發(fā)明提供一 種肝素鈉的制備工藝，該工藝的步驟如下:
[0006](I)將畜禽副產(chǎn)物中含肝素臟器絞碎研磨后加水和含鈉堿性物質(zhì)，調(diào)節(jié)勻漿的pH=9-10 ；
[0007](2)控制勻漿溫度至35_40°C，加入動(dòng)物蛋白水解酶，恒溫下攪拌1_2小時(shí)；
[0008](3)過(guò)濾后，用樹(shù)脂吸附載流液，收集吸附有肝素鈉的樹(shù)脂后洗脫，沉淀并干燥即得肝素鈉。
[0009]優(yōu)選地，所述工藝的步驟(1)中畜禽副產(chǎn)物中含肝素臟器為豬肺、豬肝、牛肺或牛肝中的一種或幾種，更加優(yōu)選地，步驟(1)中畜禽副產(chǎn)物中含肝素臟器為豬肺。
[0010]優(yōu)選地，所述的肝素鈉制備工藝中，步驟(1)中堿性物質(zhì)為NaOH或Na2CO3O
[0011]優(yōu)選地，所述的肝素鈉制備工藝中，步驟(1)中調(diào)節(jié)勻漿的pH = 9.3-9.5。
[0012]優(yōu)選地，所述的肝素鈉制備工藝中，步驟(2)中動(dòng)物蛋白酶為木瓜蛋白酶和地衣芽孢桿菌蛋白酶的混合物；更加優(yōu)選地，步驟(2)中動(dòng)物蛋白酶中木瓜蛋白酶與地衣芽孢桿菌蛋白酶重量比為1: 1-3;進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(2)中動(dòng)物蛋白酶中木瓜蛋白酶與地衣芽孢桿菌蛋白酶重量比為1: 2。
[0013]優(yōu)選地，所述的肝素制備工藝中，步驟(3)中所述的過(guò)濾依次包括微濾、超濾和納濾。應(yīng)當(dāng)說(shuō)明說(shuō)的是，所述微濾(MF)的過(guò)濾精度一般在0.1-50微米，諸如各種PP濾芯，活性碳濾芯，陶瓷濾芯等過(guò)濾；所述超濾(UF)的過(guò)濾精度在0.001-0.1微米；所述納濾(NF)的過(guò)濾精度一般是大于0.0OOl微米而小于0.001微米。
[0014]上述的肝素鈉制備工藝中通過(guò)優(yōu)化蛋白酶的組成和勻漿pH值等條件，出乎意料地發(fā)現(xiàn)，該制備工藝具有工藝簡(jiǎn)單、產(chǎn)率高、效價(jià)高的優(yōu)點(diǎn)，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的闡釋。
[0016]實(shí)施例1肝素鈉的制備
[0017]取經(jīng)清洗后的新鮮豬肺500g，絞碎研磨，加入水500ml和適量NaOH呈勻漿狀，攪拌均勻并調(diào)節(jié)勻漿的PH = 9.3，控制勻漿的溫度為35°C，加入動(dòng)物蛋白酶混合物6.0g (木瓜蛋白酶與地衣芽孢桿菌蛋白酶重量比1:1)，充分?jǐn)嚢?，控溫反?yīng)1.5小時(shí)；酶解液冷卻后，依次經(jīng)過(guò)微濾、超濾和納濾，載流液用樹(shù)脂吸附，收集吸附有肝素鈉的樹(shù)脂后洗脫，在洗脫液中加入100g的95%乙醇沉淀過(guò)夜，除去上清液，沉淀物為肝素鈉；干燥沉淀物，即得肝素鈉1.6g,測(cè)得其效價(jià)為104單位/mg。
[0018]實(shí)施例2肝素鈉的制備 [0019]取經(jīng)清洗后的新鮮豬肺500g，絞碎研磨，加入水500ml和適量NaOH呈勻漿狀，攪拌均勻并調(diào)節(jié)勻漿的PH = 9.3，控制勻漿的溫度為35°C，加入動(dòng)物蛋白酶混合物6.0g (木瓜蛋白酶與地衣芽孢桿菌蛋白酶重量比1: 3)，充分?jǐn)嚢?，控溫反?yīng)1.5小時(shí)；酶解液冷卻后，依次經(jīng)過(guò)微濾、超濾和納濾，加入載流液用樹(shù)脂吸附，收集吸附有肝素鈉的樹(shù)脂后洗脫，在洗脫液中加入100g的95%乙醇沉淀過(guò)夜，除去上清液，沉淀物為肝素鈉；干燥沉淀物，即得肝素鈉1.7g，測(cè)得其效價(jià)為118單位/mg。
[0020]實(shí)施例3肝素鈉的制備
[0021]取經(jīng)清洗后的新鮮豬肺500g，絞碎研磨，加入水500ml和適量NaOH呈勻漿狀，攪拌均勻并調(diào)節(jié)勻漿的PH = 9.4，控制勻漿的溫度為40°C，加入動(dòng)物蛋白酶混合物6.0g (木瓜蛋白酶與地衣芽孢桿菌蛋白酶重量比1: 2)，充分?jǐn)嚢瑁販胤磻?yīng)1.5小時(shí)；酶解液冷卻后，依次經(jīng)過(guò)微濾、超濾和納濾，加入載流液用樹(shù)脂吸附，收集吸附有肝素鈉的樹(shù)脂后洗脫，在洗脫液中加入100g的95%乙醇沉淀過(guò)夜，除去上清液，沉淀物為肝素鈉；干燥沉淀物，即得肝素鈉1.9g，測(cè)得其效價(jià)為121單位/mg。
[0022]實(shí)施例4肝素鈉的制備
[0023]取經(jīng)清洗后的新鮮豬肺500g，絞碎研磨，加入水500ml和適量Na2CO3呈勻漿狀，攪拌均勻并調(diào)節(jié)勻漿的PH = 9.5，控制勻漿的溫度為40°C，加入動(dòng)物蛋白酶混合物6.0g (木瓜蛋白酶與地衣芽孢桿菌蛋白酶重量比1: 3)，充分?jǐn)嚢?，控溫反?yīng)2小時(shí)；酶解液冷卻后，依次經(jīng)過(guò)微濾、超濾和納濾，加入載流液用樹(shù)脂吸附，收集吸附有肝素鈉的樹(shù)脂后洗脫，在洗脫液中加入100g的95%乙醇沉淀過(guò)夜，除去上清液，沉淀物為肝素鈉；干燥沉淀物，即得肝素鈉1.3g，測(cè)得其效價(jià)為99單位/mg。
[0024]實(shí)施例5肝素鈉的制備
[0025]取經(jīng)清洗后的新鮮豬肺500g，絞碎研磨，加入水500ml和適量NaOH呈勻漿狀，攪拌均勻并調(diào)節(jié)勻漿的PH = 9.4，控制勻漿的溫度為40°C，加入動(dòng)物蛋白酶混合物6.0g (木瓜蛋白酶與地衣芽孢桿菌蛋白酶重量比1: 2)，充分?jǐn)嚢?，控溫反?yīng)1.5小時(shí)；酶解液冷卻后，依次經(jīng)過(guò)微濾、超濾和納濾，加入載流液用樹(shù)脂吸附，收集吸附有肝素鈉的樹(shù)脂后洗脫，在沉貺淞甲那八IUUUg的9b%乙沉従a儀，除云上凊淞，沉従物為肝荼鈉；十爍沉従物，即得肝素鈉1.6g，測(cè)得其效價(jià)為114單位/mg。
[0026]實(shí)施例6肝素鈉的制備
[0027]取經(jīng)清洗后的新鮮牛肺lOOOg，絞碎研磨，加入水100ml和適量NaOH呈勻漿狀，攪拌均勻并調(diào)節(jié)勻漿的PH = 9.4，控制勻漿的溫度為35°C，加入動(dòng)物蛋白酶混合物6.0g (木瓜蛋白酶與地衣芽孢桿菌蛋白酶重量比1: 3)，充分?jǐn)嚢?，控溫反?yīng)2小時(shí)；酶解液冷卻后，依次經(jīng)過(guò)微濾、超濾和納濾，加入載流液用樹(shù)脂吸附，收集吸附有肝素鈉的樹(shù)脂后洗脫，在洗脫液中加入1500g的95%乙醇沉淀過(guò)夜，除去上清液，沉淀物為肝素鈉；干燥沉淀物，即得肝素鈉1.5g，測(cè)得其效價(jià)為93單位/mg。
[0028]實(shí)施例7不同因素對(duì)肝素鈉的產(chǎn)率與效價(jià)影響
[0029]1)酶的組成對(duì)肝素鈉的影響
[0030]除酶組成外，其他實(shí)驗(yàn)條件均與實(shí)施例3中相同，測(cè)得結(jié)果如下:
[0031]
【權(quán)利要求】
1.一種肝素鈉的制備工藝，其特征在于，該工藝的步驟如下: (1)將畜禽副產(chǎn)物中含肝素臟器絞碎研磨后加水和含鈉堿性物質(zhì)，調(diào)節(jié)勻漿的PH=9-10 ； (2)升高勻漿溫度至35-40°C，加入動(dòng)物蛋白水解酶，恒溫下攪拌1-2小時(shí)； (3)過(guò)濾后，用樹(shù)脂吸附載流液，收集吸附有肝素鈉的樹(shù)脂后洗脫，沉淀并干燥即得肝素鈉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝素鈉制備工藝，其特征在于，步驟(1)中畜禽副產(chǎn)物中含肝素臟器為豬肺、豬肝、牛肺或牛肝中的一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肝素鈉制備工藝，其特征在于，步驟(1)中畜禽副產(chǎn)物中含肝素臟器為豬肺。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝素鈉制備工藝，其特征在于，步驟(1)中堿性物質(zhì)為NaOH或 Na2CO3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝素鈉制備工藝，其特征在于，步驟(1)中調(diào)節(jié)勻漿的pH=9.3_9.5 ο
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝素鈉制備工藝，其特征在于，步驟(2)中動(dòng)物蛋白酶為木瓜蛋白酶和地衣芽孢桿菌蛋白酶的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的肝素鈉制備工藝，其特征在于，步驟(2)中動(dòng)物蛋白酶中木瓜蛋白酶與地衣芽孢桿菌蛋白酶重量比為1: 1-3。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的肝素鈉制備工藝，其特征在于，步驟(2)中動(dòng)物蛋白酶中木瓜蛋白酶與地衣芽孢桿菌蛋白酶重量比為1: 2。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的肝素鈉制備工藝，其特征在于，步驟3中所述的過(guò)濾依次包括微濾、超濾和納濾。
【文檔編號(hào)】C08B37/10GK104031178SQ201410291155
【公開(kāi)日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年6月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月20日
【發(fā)明者】趙厚發(fā), 徐賓朋, 郭慶, 王美紅 申請(qǐng)人:安徽科寶生物工程有限公司