專利名稱：從大蒜中提取蒜氨酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從植物中提取有機(jī)物質(zhì)的方法，是一種從大蒜中提取蒜氨酸的方法。
蒜氨酸[Alliin，3-(Propenylsulfinyl)alanine，s-Allyl-L-cysteine，S-烯丙基-L半胱氨酸亞砜]，C6H11NO3S，分子量177.22，熔點(diǎn)163～165℃。以無臭的形式存在于大蒜鱗芽中。蒜氨酸性質(zhì)不穩(wěn)定，常溫下在蒜酶(Allinase)和水作用下，迅速轉(zhuǎn)化為大蒜辣素(Allicin)，產(chǎn)生丙酮和氨。其中大蒜辣素還將進(jìn)一步分解成多種含硫化合物。
在大蒜多種含硫有機(jī)化合物之中，蒜氨酸被看作是大蒜的主要功效成分，與蒜酶分別獨(dú)立的存在于大蒜的鱗莖中，搗碎后這兩種物質(zhì)相互接觸，迅速發(fā)生分解反應(yīng)。因此用一般方法無法從大蒜中提取到蒜氨酸。
鑒于上述存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種從大蒜中提取蒜氨酸的方法。
本發(fā)明的目的是通過以下步驟來實(shí)現(xiàn)的第一步進(jìn)行有機(jī)物提取，以凍干蒜粉為原料，每千克凍干蒜粉用1000至20000毫升的60％至90％的乙醇作為溶劑進(jìn)行滲漉，并將所得滲漉液進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮液，然后采用95％的乙醇或無水乙醇對(duì)濃縮液進(jìn)行醇沉，在0至10℃下放置6至12小時(shí)，將上清液傾出，進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮浸膏；第二步采用硅膠柱層析法進(jìn)行分離得到蒜氨酸，其中，上述濃縮浸膏采用硅膠粉拌樣得到蒜硅膠粉，采用160至200目的硅膠裝柱，采用干法裝柱或濕法裝柱，流動(dòng)相采用正丙醇與水的配比為9比1，將所得到的蒜氨酸流份進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到含蒜氨酸的固形物。
其中所采用的濃縮方法為薄膜濃縮方法?；蛘咚捎玫臐饪s方法為旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮方法；其中對(duì)乙醇時(shí)，在60至80℃下濃縮至沒有液體流出為止；對(duì)于正丙醇時(shí)，在70至90℃下濃縮至沒有液體流出為止。在硅膠柱層析法中柱直徑與柱長(zhǎng)比最佳為1比20；在硅膠柱層析法中每千克凍干蒜粉每次收集流份量為100至500毫升。在第一次硅柱層析法后再采用第二次硅膠柱層析法來提高蒜氨酸純度。在將硅膠柱層析法得到的蒜氨酸加入75％乙醇中，所需要的乙醇量以在50至90℃下使蒜氨酸完全溶解，然后在室溫下結(jié)晶并過濾和洗滌后得到進(jìn)一步純化的蒜氨酸結(jié)晶物。
本發(fā)明的目的還可通過以下步驟來實(shí)現(xiàn)的第一步進(jìn)行有機(jī)物提取，以凍干蒜粉為原料，每千克凍干蒜粉用1000至20000毫升的60％至90％的乙醇作為溶劑進(jìn)行滲漉，并將所得滲漉液進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮液，然后采用95％的乙醇或無水乙醇對(duì)濃縮液進(jìn)行醇沉，在0至10℃下放置6至12小時(shí)，將上清液傾出，進(jìn)行薄膜濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮浸膏；第二步采用硅膠柱層析法進(jìn)行分離得到蒜氨酸，其中，上述濃縮浸膏采用硅膠粉拌樣得到蒜硅膠粉，采用160至200目的硅膠裝柱，柱直徑與柱長(zhǎng)比為1比20，采用干法裝柱或濕法裝柱，流動(dòng)相采用正丙醇與水的配比為9比1，每千克凍干蒜粉每次收集流份量為100至500毫升，將所得到的蒜氨酸流份進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到含蒜氨酸的固形物。
本發(fā)明的目的也可通過以下步驟來實(shí)現(xiàn)的第一步進(jìn)行有機(jī)物提取，以凍干蒜粉為原料，每千克凍干蒜粉用1000至20000毫升的60％至90％的乙醇作為溶劑進(jìn)行滲漉，每次加入量以溶劑能充分浸泡凍干蒜粉為宜，每次充分?jǐn)嚢枵駬u，并浸泡放置6至12小時(shí)后收集滲漉液，然后將所得滲漉液進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮液，然后采用95％的乙醇或無水乙醇對(duì)濃縮液進(jìn)行醇沉，在0至10℃下放置6至12小時(shí)，將上清液傾出，在60至80℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮浸膏；第二步采用硅膠柱層析法進(jìn)行分離得到蒜氨酸，其中，上述濃縮浸膏采用硅膠粉拌樣得到蒜硅膠粉，采用160至200目的硅膠裝柱，柱直徑與柱長(zhǎng)比為1比20，采用干法裝柱或濕法裝柱，流動(dòng)相采用正丙醇與水的配比為9比1，每千克凍干蒜粉每次收集流份量為100至500毫升，在70至90℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至沒有液體流出為止得到固形物，然后加入75％的乙醇，所需要的75％乙醇量以在50至90℃下使固形物完全溶解得到相應(yīng)的流份；將確定為蒜氨酸的流份進(jìn)行合并，然后在室溫下結(jié)晶并過濾和洗滌后得到蒜氨酸粗品；在蒜氨酸粗品加入75％乙醇中，所需要的乙醇量以在50至90℃下使蒜氨酸完全溶解，然后在室溫下結(jié)晶并過濾和洗滌后得到蒜氨酸結(jié)晶物。
在本發(fā)明中在硅膠柱層析法中確定蒜氨酸流份的方法是采用薄層層析法，在該薄層層析法中，薄析板采用硅膠G板，展開劑由正丁醇與醋酸和水的配比為4比1比1配制而成，或者展開劑由乙醇與水的配比為17比5配制而成，或者展開劑由丙醇與水的配比為9比1配制而成；顯色劑包括A液和B液，A液由100毫升0.4％茚三酮乙醇溶液與20毫升冰醋酸和4毫升2，4，6-三甲基吡啶配制成混合液，B液為1％硫酸銅乙醇溶液，使用時(shí)用50毫升A液與3毫升B液混合，蒜氨酸顯色呈桔紅色，或者顯色劑采用茚三酮，蒜氨酸顯色呈藍(lán)色；蒜氨酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液為含有蒜氨酸1毫克/毫升75％乙醇溶液，將標(biāo)準(zhǔn)液與各流份點(diǎn)于硅膠板上，點(diǎn)樣量為20至70微升，在裝有展開劑層析缸中展開至溶劑的前沿距硅膠板上端1至3厘米后，取出，待干后噴霧顯色，與標(biāo)準(zhǔn)蒜氨酸斑點(diǎn)相同的流份就被確定為蒜氨酸流份。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述實(shí)施例1是按以下步驟進(jìn)行第一步進(jìn)行有機(jī)物提取，以凍干蒜粉為原料，每千克凍干蒜粉用1000至20000毫升的60％至90％的乙醇作為溶劑進(jìn)行滲漉，并將所得滲漉液進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮液，然后采用95％的乙醇或無水乙醇對(duì)濃縮液進(jìn)行醇沉，在0至10℃下放置6至12小時(shí)，將上清液傾出，進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮浸膏；第二步采用硅膠柱層析法進(jìn)行分離得到蒜氨酸，其中，上述濃縮浸膏采用硅膠粉拌樣得到蒜硅膠粉，采用160至200目的硅膠裝柱，采用干法裝柱或濕法裝柱，流動(dòng)相采用正丙醇與水的配比為9比1，將所得到的蒜氨酸流份進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到含蒜氨酸的固形物。
實(shí)施例2是按以下步驟進(jìn)行第一步進(jìn)行有機(jī)物提取，以凍干蒜粉為原料，每千克凍干蒜粉用1000至20000毫升的60％至90％的乙醇作為溶劑進(jìn)行滲漉，并將所得滲漉液進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮液，然后采用95％的乙醇或無水乙醇對(duì)濃縮液進(jìn)行醇沉，在0至10℃下放置6至12小時(shí)，將上清液傾出，進(jìn)行薄膜濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮浸膏；第二步采用硅膠柱層析法進(jìn)行分離得到蒜氨酸，其中，上述濃縮浸膏采用硅膠粉拌樣得到蒜硅膠粉，采用160至200目的硅膠裝柱，柱直徑與柱長(zhǎng)比為1比20，采用干法裝柱或濕法裝柱，流動(dòng)相采用正丙醇與水的配比為9比1，每千克凍干蒜粉每次收集流份量為100至500毫升，將所得到的蒜氨酸流份進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到含蒜氨酸的固形物。
實(shí)施例3是按以下步驟進(jìn)行第一步進(jìn)行有機(jī)物提取，以凍干蒜粉為原料，每千克凍干蒜粉用1000至20000毫升的60％至90％的乙醇作為溶劑進(jìn)行滲漉，每次加入量以溶劑能充分浸泡凍干蒜粉為宜，每次充分?jǐn)嚢枵駬u，并浸泡放置6至12小時(shí)后收集滲漉液，然后將所得滲漉液進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮液，然后采用95％的乙醇或無水乙醇對(duì)濃縮液進(jìn)行醇沉，在0至10℃下放置6至12小時(shí)，將上清液傾出，在60至80℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮浸膏；第二步采用硅膠柱層析法進(jìn)行分離得到蒜氨酸，其中，上述濃縮浸膏采用硅膠粉拌樣得到蒜硅膠粉，采用160至200目的硅膠裝柱，柱直徑與柱長(zhǎng)比為1比20，采用干法裝柱或濕法裝柱，流動(dòng)相采用正丙醇與水的配比為9比1，每千克凍干蒜粉每次收集流份量為100至500毫升，在70至90℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至沒有液體流出為止得到固形物，然后加入75％的乙醇，所需要的75％乙醇量以在50至90℃下使固形物完全溶解得到相應(yīng)的流份；將確定為蒜氨酸的流份進(jìn)行合并，然后在室溫下結(jié)晶并過濾和洗滌后得到蒜氨酸粗品；在蒜氨酸粗品加入75％乙醇中，所需要的乙醇量以在50至90℃下使蒜氨酸完全溶解，然后在室溫下結(jié)晶并過濾和洗滌后得到蒜氨酸結(jié)晶物。
在實(shí)施例1至3的硅膠柱層析法中確定蒜氨酸流份的方法都是采用薄層層析法在該薄層層析法中，展開劑由正丁醇與醋酸和水的配比為4比1比1配制而成，或者展開劑由乙醇與水的配比為17比5配制而成，或者展開劑由丙醇與水的配比為9比1配制而成；顯色劑包括A液和B液，A液由100毫升0.4％茚三酮乙醇溶液與20毫升冰醋酸和4毫升2，4，6-三甲基吡啶配制成混合液，B液為1％硫酸銅乙醇溶液，使用時(shí)用50毫升A液與3毫升B液混合，由于蒜氨酸分子結(jié)構(gòu)中含有亞砜基，而亞砜基氨基酸顯桔紅色，因此蒜氨酸顯色呈桔紅色，或者顯色劑采用茚三酮，蒜氨酸顯色呈藍(lán)色；蒜氨酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液為含有蒜氨酸1毫克/毫升75％乙醇溶液，將標(biāo)準(zhǔn)液與各流份點(diǎn)于硅膠板上，點(diǎn)樣量為20至70微升，在裝有展開劑層析缸中展開至溶劑的前沿距硅膠板上端1至3厘米后，取出，待干后噴霧顯色，與標(biāo)準(zhǔn)蒜氨酸斑點(diǎn)相同的流份就被確定為蒜氨蒜流份。
在本發(fā)明中所采用的原料凍干蒜粉，可直接從而市場(chǎng)上采購(gòu)凍干蒜粉，也可利用真空冷凍干燥法自己生產(chǎn)，一般將蒜鱗芽經(jīng)液氮冷凍后磨成冰粉，然后進(jìn)行真空干燥得到凍干蒜粉。
下面將上述實(shí)施例3所得的蒜氨酸作為測(cè)試品(Alliin-XJYB)與Indofinechemical Company，Inc.USA所提供的批號(hào)為97112003的標(biāo)準(zhǔn)品(Alliin-USA)進(jìn)行對(duì)比測(cè)試如下一、熔點(diǎn)測(cè)定按照中華人民共和國(guó)藥典95版一部附錄42頁(yè)，VII C熔點(diǎn)測(cè)定法的第一法操作，測(cè)得測(cè)試品的蒜氨酸熔點(diǎn)為164～166℃，而標(biāo)準(zhǔn)品的熔點(diǎn)為164～166℃。
二、紫外光譜測(cè)定采用雙光束可見-紫外分光光度計(jì)(760CRT型，上海第三分析儀器廠制造)，將測(cè)試品和標(biāo)準(zhǔn)品的蒜氨酸分別以50％乙醇為溶劑，配制成40.8微克/毫升(Alliin-XJYB)和40.4微克/毫升(Alliin-USA)的供試液；在200～350nm范圍內(nèi)掃描獲得紫外吸收光譜，如附

圖1和2所示；兩種供試液的紫外吸收光譜相同，最大吸收波長(zhǎng)和吸收度分別為216.8nm、0.357(Alliin-USA)及218.0nm、0.360，計(jì)算吸收系數(shù)分別為E1％＝88.37(216.8nm)及88.24(218.0nm)，兩種供試品的最大吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)相同(λmax＝217.4±0.6nm；E1％＝88.30±0.06)。
三、紅外光譜測(cè)定采用富麗葉變換紅外光譜議-紅外顯微鏡(FTS-135型，Bio-Rad Co.)，采用紅外顯微鏡表面漫反射測(cè)定方法，測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試品的紅外光譜，如附圖3和4所示，標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試品的峰位、峰形和峰的相對(duì)高度完全一致。
四、薄層色譜分析(I)按照中華人民共和國(guó)藥典95版一部附錄35頁(yè)，VI B薄層色譜法操作，將標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試品分別配制成1.00毫克/毫升的試液，分別點(diǎn)樣于5×15硅膠G板，點(diǎn)樣量為60微升，分別用兩種流動(dòng)相正丁醇/醋酸/水＝4∶1∶1(I)、乙醇/水＝17∶5(II)展開，茚三酮試液噴顯色；兩種流動(dòng)相均得到在相同位置有兩個(gè)單一斑點(diǎn)的薄層色譜，如附圖5所示，標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試品的斑點(diǎn)的比移值值為比移值＝0.33(展開劑I)，比移值＝0.71(展開劑II)。
五、薄層色譜分析(II)取20×20硅膠G板，將Alliin-XJYB(1.00毫克/毫升)試液分別點(diǎn)樣20、40、60、80、100微升，將Alliin-USA(1.00毫克/毫升)試液分別點(diǎn)樣60微升，共6個(gè)斑點(diǎn)，同理上述薄層色譜分析(I)的操作，采用正丁醇/醋酸/水＝4∶1∶1的展開劑展開，茚三酮試液噴霧顯色，如附圖6所示，得到的薄層色譜圖顯示1.不同濃度的Alliin-XJYB五個(gè)斑點(diǎn)，其比移值值與Alliin-USA斑點(diǎn)的比移值值相同，均為0.33；2.Alliin-XJYB在20至100微克范圍內(nèi)均未見雜質(zhì)斑點(diǎn)出現(xiàn)。
六、高效液相色譜分析儀器島津-HPLC-10A高效液相色譜議、SDP-10A型紫外檢測(cè)器、C-R3A積分儀；Alliin-USA標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液配制Alliin-USA與內(nèi)標(biāo)物撲熱息痛分別于105℃干燥2小時(shí)，分別準(zhǔn)確稱取適量，用流動(dòng)相配制含Alliin-USA73.4微克/毫升及撲熱息痛11.8微克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液；Alliin-XJYB供試液配制Alliin-XJYB與內(nèi)標(biāo)物撲熱息痛分別于105℃干燥2小時(shí)，分別準(zhǔn)確稱取適量，用流動(dòng)相配制含Alliin-XJYB86.6微克/毫升及撲熱息痛10.0微克/毫升的供試液；色譜條件Spherisorb Sum C18柱(4.6×200毫米，大連化物所)，由甲醇與水的配比為60比40作為流動(dòng)相，流率為0.8毫升/min，214nm檢測(cè)，Alliin-USA標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液和Alliin-XJYB供試液分別進(jìn)樣20微升，根據(jù)色譜曲線，由內(nèi)標(biāo)對(duì)比法計(jì)算得到Alliin-XJYB含量，如附圖7和8所示，顯示1.在上述實(shí)驗(yàn)條件下，理論塔板數(shù)(以蒜氨酸計(jì)算)≥3000，與內(nèi)標(biāo)撲熱息痛的分離度為1.3；2.Alliin-XJYB供試液和Alliin-USA標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液色譜曲線的蒜氨酸與內(nèi)標(biāo)撲息痛的保留時(shí)間(tR)和峰面積(A)如附圖7和8所示；3.以Alliin-USA標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的含量即純度為99.5％計(jì)算，Alliin-XJYB的蒜氨酸的含量應(yīng)為99.7％。
其中上述附圖分別為附圖1為Alliin-XJYB的紫外吸收光譜圖，附圖2為Alliin-USA的紫外吸收光譜圖，附圖3為Alliin-USA的紅外吸收光譜圖，附圖4為Alliin-XJYB的紅外吸收光譜圖，附圖5為Alliin-USA與Alliin-XJYB的TLC色譜圖，附圖6為不同點(diǎn)樣量Alliin-XJYB與Alliin-USA的TCL色譜圖，附圖7和8為Alliin-USA與Alliin-XJYB的HPLC色譜圖。
綜上所述，得到以下結(jié)論
1.根據(jù)熔點(diǎn)、紫外光譜測(cè)定、及紅外光譜測(cè)定的結(jié)果確證測(cè)試品(Alliin-XJYB)與標(biāo)準(zhǔn)品(Alliin-USA)同為蒜氨酸；2.根據(jù)薄層色譜、熔點(diǎn)、紅外、及紫外光譜測(cè)定結(jié)果的綜合分析，未見有雜質(zhì)的存在；3.HPLC內(nèi)標(biāo)法測(cè)定蒜氨酸含量，測(cè)試品(Alliin-XJYB)含蒜氨酸為99.7％，高于標(biāo)準(zhǔn)品(Alliin-USA)的純度。
因此，利用本發(fā)明可有效地從大蒜中提取蒜氨酸，從而解決了從大蒜中得到蒜氨酸的難題，并且可使純度達(dá)到99.7％，高于Indofine chemical Company，Inc.USA所提供的批號(hào)為97112003的標(biāo)準(zhǔn)品(Alliin-USA)的純度。
權(quán)利要求
1.一種從大蒜中提取蒜氨酸的方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行第一步進(jìn)行有機(jī)物提取，以凍干蒜粉為原料，每千克凍干蒜粉用1000至20000毫升的60％至90％的乙醇作為溶劑進(jìn)行滲漉，并將所得滲漉液進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮液，然后采用95％的乙醇或無水乙醇對(duì)濃縮液進(jìn)行醇沉，在0至10℃下放置6至12小時(shí)，將上清液傾出，進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮浸膏；第二步采用硅膠柱層析法進(jìn)行分離得到蒜氨酸，其中，上述濃縮浸膏采用硅膠粉拌樣得到蒜硅膠粉，采用160至200目的硅膠裝柱，采用干法裝柱或濕法裝柱，流動(dòng)相采用正丙醇與水的配比為9比1，將所得到的蒜氨酸流份進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到含蒜氨酸的固形物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從大蒜中提取蒜氨酸的方法，其特征在于所采用的濃縮方法為薄膜濃縮方法。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從大蒜中提取蒜氨酸的方法，其特征在于所采用的濃縮方法為旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮方法；其中，對(duì)乙醇時(shí)，在60至80℃下濃縮至沒有液體流出為止；對(duì)于正丙醇時(shí)，在70至90℃下濃縮至沒有液體流出為止。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從大蒜中提取蒜氨酸的方法，其特征在于硅膠柱層析法中柱直徑與柱長(zhǎng)比為1比20。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從大蒜中提取蒜氨酸的方法，其特征在于硅膠柱層析法中每千克凍干蒜粉每次收集流份量為100至500毫升。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從大蒜中提取蒜氨酸的方法，其特征在于采用二次硅膠柱層析法來提高蒜氨酸純度。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的從大蒜中提取蒜氨酸的方法，其特征在于將硅膠柱層析法得到的蒜氨酸加入75％乙醇中，所需要的乙醇量以在50至90℃下使蒜氨酸完全溶解，然后在室溫下結(jié)晶并過濾和洗滌后得到蒜氨酸結(jié)晶物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從大蒜中提取蒜氨酸的方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行第一步進(jìn)行有機(jī)物提取，以凍干蒜粉為原料，每千克凍干蒜粉用1000至20000毫升的60％至90％的乙醇作為溶劑進(jìn)行滲漉，并將所得滲漉液進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮液，然后采用95％的乙醇或無水乙醇對(duì)濃縮液進(jìn)行醇沉，在0至10℃下放置6至12小時(shí)，將上清液傾出，進(jìn)行薄膜濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮浸膏；第二步采用硅膠柱層析法進(jìn)行分離得到蒜氨酸，其中，上述濃縮浸膏采用硅膠粉拌樣得到蒜硅膠粉，采用160至200目的硅膠裝柱，柱直徑與柱長(zhǎng)比為1比20，采用干法裝柱或濕法裝柱，流動(dòng)相采用正丙醇與水的配比為9比1，每千克凍干蒜粉每次收集流份量為100至500毫升，將所得到的蒜氨酸流份進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到含蒜氨酸的固形物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從大蒜中提取蒜氨酸的方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行第一步進(jìn)行有機(jī)物提取，以凍干蒜粉為原料，每千克凍干蒜粉用1000至20000毫升的60％至90％的乙醇作為溶劑進(jìn)行滲漉，每次加入量以溶劑能充分浸泡凍干蒜粉為宜，每次充分?jǐn)嚢枵駬u，并浸泡放置6至12小時(shí)后收集滲漉液，然后將所得滲漉液進(jìn)行濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮液，然后采用95％的乙醇或無水乙醇對(duì)濃縮液進(jìn)行醇沉，在0至10℃下放置6至12小時(shí)，將上清液傾出，在60至80℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至沒有液體流出為止而得到濃縮浸膏；第二步采用硅膠柱層析法進(jìn)行分離得到蒜氨酸，其中，上述濃縮浸膏采用硅膠粉拌樣得到蒜硅膠粉，采用160至200目的硅膠裝柱，柱直徑與柱長(zhǎng)比為1比20，采用干法裝柱或濕法裝柱，流動(dòng)相采用正丙醇與水的配比為9比1，每千克凍干蒜粉每次收集流份量為100至500毫升，在70至90℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至沒有液體流出為止得到固形物，然后加入75％的乙醇，所需要的75％乙醇量以在50至90℃下使固形物完全溶解得到相應(yīng)的流份；將確定為蒜氨酸的流份進(jìn)行合并，然后在室溫下結(jié)晶并過濾和洗滌后得到蒜氨酸粗品；在蒜氨酸粗品加入75％乙醇中，所需要的乙醇量以在50至90℃下使蒜氨酸完全溶解，然后在室溫下結(jié)晶并過濾和洗滌后得到蒜氨酸結(jié)晶物。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或8或9所述的從大蒜中提取蒜氨酸的方法，其特征在于硅膠柱層析法中確定蒜氨酸流份的方法是采用薄層層析法，在該薄層層析法中，薄析板采用硅膠G板，展開劑由正丁醇與醋酸和水的配比為4比1比1配制而成，或者展開劑由乙醇與水的配比為17比5配制而成，或者展開劑由丙醇與水的配比為9比1配制而成；顯色劑包括A液和B液，A液由100毫升0.4％茚三酮乙醇溶液與20毫升冰醋酸和4毫升2，4，6-三甲基吡啶配制成混合液，B液為1％硫酸銅乙醇溶液，使用時(shí)用50毫升A液與3毫升B液混合，蒜氨酸顯色呈桔紅色，或者顯色劑采用茚三酮，蒜氨酸顯色呈藍(lán)色；蒜氨酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液為含有蒜氨酸1毫克/毫升75％乙醇溶液，將標(biāo)準(zhǔn)液與各流份點(diǎn)于硅膠板上，點(diǎn)樣量為20至70微升，在裝有展開劑層析缸中展開至溶劑的前沿距硅膠板上端1至3厘米后，取出，待干后噴霧顯色，與標(biāo)準(zhǔn)蒜氨酸斑點(diǎn)相同的流份就被確定為蒜氨酸流份。
全文摘要
一種從大蒜中提取蒜氨酸的方法,其通過以下步驟來實(shí)現(xiàn)的:第一步進(jìn)行有機(jī)物提取,以凍干蒜粉為原料,用60%至90%的乙醇作為溶劑進(jìn)行滲漉,并將所得滲漉液進(jìn)行濃縮后進(jìn)行醇沉,然后將上清液進(jìn)行濃縮得到濃縮浸膏;第二步采用硅膠柱層析法進(jìn)行分離得到含蒜氨酸的固形物,還可對(duì)固形物進(jìn)行進(jìn)一步純化。利用本發(fā)明可有效地從大蒜中提取蒜氨酸,從而解決了從大蒜中得到蒜氨酸的難題,并且可使純度達(dá)到99.7%。
文檔編號(hào)C07C317/48GK1273969SQ0010124
公開日2000年11月22日 申請(qǐng)日期2000年1月22日 優(yōu)先權(quán)日2000年1月22日
發(fā)明者陳堅(jiān), 李新霞, 常軍民, 姜恒, 馬萍 申請(qǐng)人:陳堅(jiān)