7,8-二羥黃酮在制備治療視神經(jīng)損傷的藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及7, 8-二羥黃酮在制備治療視神經(jīng)損傷的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 視神經(jīng)損傷是由許多眼部疾病所導(dǎo)致的視功能損害，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成患者視神經(jīng)的 萎縮和視功能的不可逆喪失。臨床上導(dǎo)致視神經(jīng)萎縮的疾病有多種，如青光眼、視神經(jīng)挫 傷、視神經(jīng)管骨折、遺傳性疾病Leber病、代謝性疾病，如糖尿病、神經(jīng)節(jié)苷脂病、視神經(jīng)炎 和視神經(jīng)病變等。盡管對視神經(jīng)萎縮的治療開展了大量研究工作，但其臨床實(shí)際療效不盡 人意。
[0003] 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（retinalganglion cells, RGCs)的丟失是視神經(jīng)損傷導(dǎo)致視 神經(jīng)萎縮和致盲的共同途徑。目前認(rèn)為，其可能涉及到的機(jī)制包括興奮性氨基酸毒性、神經(jīng) 營養(yǎng)因子的剝奪、Ca 2+超載以及一氧化氮、活性氧簇、半胱氨酸蛋白酶的毒性作用等。由于 人類視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞屬于中樞神經(jīng)元，不能去分化替代已丟失的細(xì)胞，如何對已發(fā)生損 傷的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及萎縮的視神經(jīng)進(jìn)行有效的逆轉(zhuǎn)治療，一直是眼科界面臨的難題之 〇
[0004]目前，常見的治療藥物有神經(jīng)興奮性毒素谷氨酸鹽受體拮抗劑、主動(dòng)免疫制劑、神 經(jīng)營養(yǎng)因子、氧化氮合成物阻滯劑、作用于鈉通道的藥物、作用于鈣通道的藥物、抗氧化應(yīng) 激藥物、熱休克蛋白、RGCs凋亡中的藥物介入或能夠保護(hù)RGCs的降眼壓藥物（a腎上腺素 能受體興奮劑、3腎上腺素能受體阻滯劑或碳酸酐酶抑制藥)。
[0005] 7, 8-二羥基黃酮（7, 8-dihydroxyf lavone，7, 8-DHF)是類黃酮家族成員，是一種 酪氨酸激酶受體B (TrkB)受體的一個(gè)同源的配位體，可以逆轉(zhuǎn)阿爾茲海默癥，此外，其具有 抗氧化作用，可以對抗機(jī)體的氧化損傷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供7, 8-二羥黃酮的新用途。
[0007] 本發(fā)明提供了 7, 8-二羥黃酮在制備治療和/或預(yù)防視神經(jīng)損傷的藥物中的用途。
[0008] 其中，所述藥物是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞保護(hù)藥物。
[0009] 其中，所述藥物是治療和/或預(yù)防興奮性氨基酸導(dǎo)致的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷的 藥物。所述興奮性氨基酸是7, 8-二羥黃酮對N-甲基-D-天門冬氨酸。
[0010] 其中，所述藥物是治療和/或預(yù)防視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞機(jī)械損傷的藥物。
[0011] 本發(fā)明還提供了一種具有視神經(jīng)保護(hù)作用的藥物，它是以7, 8-二羥黃酮為活性 成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或者輔助性成分制備而成的制劑。
[0012] 其中，所述制劑為液體制劑、固體制劑、半固體制劑。
[0013] 本發(fā)明還提供了前述藥物在制備治療和/或預(yù)防視神經(jīng)損傷的藥物中的用途。
[0014] 其中，所述藥物是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞保護(hù)藥物。
[0015] 其中，所述藥物是治療和/或預(yù)防興奮性氨基酸導(dǎo)致的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷的 藥物。所述興奮性氨基酸是7, 8-二羥黃酮對N-甲基-D-天門冬氨酸。
[0016] 其中，所述藥物是治療和/或預(yù)防視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞機(jī)械損傷的藥物。
[0017] 本發(fā)明7, 8-二羥黃酮是一種良好的視神經(jīng)保護(hù)藥物，可以有效防止視網(wǎng)膜神經(jīng) 節(jié)細(xì)胞的衰亡，修復(fù)損傷的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，治療視神經(jīng)損傷，臨床應(yīng)用前景良好。
[0018] 顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0019] 以下通過實(shí)施例形式的【具體實(shí)施方式】，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【附圖說明】
[0020] 圖1NMDA組NeuN染色結(jié)果（200倍視野下)，內(nèi)：中央；中，中間；外：周邊；
[0021] 圖2NMDA+7, 8-二羥黃酮組NeuN染色結(jié)果（200倍視野下)，內(nèi)：中央；中，中間；外： 周邊；
[0022] 圖3NMDA組NeuN染色明場顯示視神經(jīng)分布結(jié)果，A:周邊視網(wǎng)膜；B:中間視網(wǎng)膜； C:中央視網(wǎng)膜；
[0023] 圖4NMDA+7, 8-二羥黃酮組NeuN染色明場顯示視神經(jīng)分布結(jié)果，A:周邊視網(wǎng)膜； B:中間視網(wǎng)膜；C:中央視網(wǎng)膜；
[0024] 圖5NMDA組和NMDA+7, 8-二羥黃酮組視網(wǎng)膜各區(qū)域RGCs計(jì)數(shù)，*P〈0. 05;
[0025] 圖6視網(wǎng)膜夾傷后7, 8-二羥黃酮處理組和單純PBS處理組RGCs計(jì)數(shù)。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 實(shí)施例17, 8-二羥黃酮對N-甲基-D-天門冬氨酸（NDMA)所致大鼠視網(wǎng)膜興奮性 損傷后的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（RGC)的保護(hù)作用
[0027]1?實(shí)驗(yàn)方法
[0028]1. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
[0029] 12只Sprague-Dawley健康大鼠，雌雄各半，體重200_240g。經(jīng)檢查角膜透明，虹 膜血管清晰，瞳孔等大等圓，對光反射靈敏。左眼為模型組，右眼為實(shí)驗(yàn)組：
[0030] 模型組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射NMDA;
[0031] 實(shí)驗(yàn)組：右眼玻璃體腔內(nèi)注射NMDA+7, 8-二羥黃酮。
[0032] 1. 2藥物注射
[0033] 按3ml/Kg體重腹腔內(nèi)注射3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，復(fù)方托吡卡胺滴眼液雙眼擴(kuò) 瞳，0. 3%妥布霉素滴眼液滴入結(jié)膜囊3次作術(shù)眼準(zhǔn)備，0. 4%鹽酸奧布卡因滴眼液角膜表面 麻醉，消毒術(shù)眼手術(shù)區(qū)。
[0034] Hamilton-10 ill微量注射器按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分別抽取5 ill的不同藥液：①4mMNMDA (1XPBS 配制）；② 8mM NMDA+100iiM7,8-二羥黃酮（1XPBS 配制）。
[0035] 手術(shù)顯微鏡下用30g B-D針頭于背側(cè)角膜緣后1mm處經(jīng)睫狀體平坦部刺穿眼球壁 后立即出針，從預(yù)先準(zhǔn)備好的球壁針孔處，微量注射器以50°的斜角進(jìn)入眼內(nèi)，針尖始終向 后朝向視神經(jīng)，在相當(dāng)于赤道部處，經(jīng)瞳孔區(qū)可見針尖，避免損傷晶狀體和視網(wǎng)膜，緩慢注 入藥液或?qū)φ找?。推注完畢針頭至少停留20秒鐘后緩慢抽出，術(shù)眼涂以紅霉素眼膏。
[0036] 1. 3 計(jì)數(shù) RGCs
[0037] 注射7天后處死動(dòng)物，分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：行視網(wǎng)膜全層鋪片，NeuN染色計(jì)數(shù)正常 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞RGCs。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的計(jì)數(shù)是采用NeuN染色計(jì)數(shù)。NeuN是神經(jīng)元 細(xì)胞核抗原，是神經(jīng)元特有的標(biāo)志物。
[0038] 常規(guī)處死大鼠，摘除眼球；將眼球固定于4%多聚甲醛中1小時(shí)，去除角膜、晶狀體、 玻璃體，0.2M PBS液中于顯微鏡下小心剝?nèi)∫暰W(wǎng)膜；將大鼠雙眼視網(wǎng)膜鋪于一張0. 1%明膠 玻片上，NeuN染色，染成綠色的圓點(diǎn)為視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞核，明場下觀察到的白色圓點(diǎn)為細(xì)胞 核。具體染色步驟為：
[0039] 1. 0? 2%Triont X-100PBS 洗 1 小時(shí)，中間換液 2 次；2. NeuN -抗 1:200 (稀釋液 l%BSA/PBS/0. 2%Triont X-100)孵育，4°C 過夜；3. 0? 2%Triont X-100PBS 洗片，3 次，每次 5min ;4.二抗（山羊抗小鼠)1:400,室溫 lh ;5. 0. 2%Triont X-100PBS洗片，3次，每次5min6. 封片。
[0040] 200倍視野下將每個(gè)視網(wǎng)膜鋪片分為四個(gè)象限（Ql、Q2、Q3、Q4)，每個(gè)象限按與視 神經(jīng)距離分中央（inner)中間（middle)，周邊（peri)后三個(gè)區(qū)域照相，視網(wǎng)膜分成三個(gè)區(qū) 域-中央（inner)中間（middle)周邊（peri)后，分別計(jì)數(shù)RGC個(gè)數(shù)值，其中，INNER- 距視神經(jīng)約3mm處，即中央視網(wǎng)膜區(qū)域，MIDD--距視神經(jīng)約5mm處，即中間視網(wǎng)膜區(qū)域， PERI--距視神經(jīng)約8mm處，即周邊視網(wǎng)膜區(qū)域.；計(jì)算機(jī)圖像分析計(jì)數(shù)正常RGCs，排除凋 亡者和膠質(zhì)細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞密度。
[0041] 2?實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0042] 2. 1顯微鏡觀察細(xì)胞密度
[0043] 如圖1所示，NMDA造模組：出現(xiàn)了大量RGC凋亡；
[0044] 如圖2所示，7, 8-二羥黃酮+NMDA組：與NMDA造模組相比，視網(wǎng)膜外側(cè)象限細(xì)胞 數(shù)量增加。
[0045] 2. 2視網(wǎng)膜視神經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)
[0046] 對比圖3和圖4可以看出，經(jīng)NeuN染色，在顯微鏡明場下觀察可見NMDA模型組（圖 3)視網(wǎng)膜周邊、中間、中央的視神經(jīng)密度均小于7, 8-二羥黃酮+NMDA組對應(yīng)區(qū)域（圖4)的 視神經(jīng)密度。
[0047] NMDA組和7, 8-二羥黃酮+NMDA組視網(wǎng)膜視神經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖5和表1 所示：
[0048] 表1視網(wǎng)膜視神經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果
[0049]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 7, 8-二羥黃酮在制備治療和/或預(yù)防視神經(jīng)損傷的藥物中的用途。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：所述藥物是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞保護(hù)藥物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于：所述藥物是治療和/或預(yù)防興奮性氨基 酸導(dǎo)致的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷的藥物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于：所述興奮性氨基酸是7, 8-二羥黃酮對 N-甲基-D-天門冬氨酸。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于：所述藥物是治療和/或預(yù)防視網(wǎng)膜神經(jīng) 節(jié)細(xì)胞機(jī)械損傷的藥物。
6. -種具有視神經(jīng)保護(hù)作用的藥物，其特征在于：它是以7, 8-二羥黃酮為活性成分， 加上藥學(xué)上可接受的輔料或者輔助性成分制備而成的制劑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物，其特征在于：所述制劑為液體制劑、固體制劑或半固體 制劑。
8. 權(quán)利要求6或7所述的藥物在制備治療和/或預(yù)防視神經(jīng)損傷的藥物中的用途。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于：所述藥物是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞保護(hù)藥物。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于：所述藥物是治療和/或預(yù)防興奮性氨基 酸導(dǎo)致的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷的藥物。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其特征在于：所述興奮性氨基酸是7, 8-二羥黃酮對 N-甲基-D-天門冬氨酸。
12. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于：所述藥物是治療和/或預(yù)防視網(wǎng)膜神經(jīng) 節(jié)細(xì)胞機(jī)械損傷的藥物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了7,8-二羥黃酮在制備治療和/或預(yù)防視神經(jīng)損傷的藥物中的用途。本發(fā)明還公開了具有視神經(jīng)保護(hù)作用的藥物，它是由7,8-二羥黃酮為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或者輔助性成分制備而成的制劑。本發(fā)明7,8-二羥黃酮對興奮性視神經(jīng)損傷和視神經(jīng)機(jī)械損傷具有很好的保護(hù)作用，可修復(fù)損傷的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，是臨床治療視神經(jīng)損傷的新選擇。
【IPC分類】A61K31-352, A61P27-02, A61P25-02
【公開號(hào)】CN104622867
【申請?zhí)枴緾N201310561206
【發(fā)明人】羅紅蓉
【申請人】廣州康睿生物醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2013年11月12日