專利名稱：作為細(xì)胞程序死亡抑制劑的RAR-γ拮抗劑配體或RAR-α激動(dòng)劑配體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及特定的視黃酸類在制備降低細(xì)胞程序死亡率的藥物組合物中的應(yīng)用。
細(xì)胞死亡涉及兩種類型的機(jī)制。第一種傳統(tǒng)類型機(jī)制被稱作壞死。從形態(tài)上看，壞死的特征在于線粒體和細(xì)胞質(zhì)的膨脹和核變形，接著是細(xì)胞的破壞及其自溶，后一種情況伴隨著炎癥現(xiàn)象。壞死以被動(dòng)和偶然方式發(fā)生。例如，組織壞死通常是由于細(xì)胞遭受到一種物理?yè)p傷，或由于受到一種化學(xué)毒物的傷害所致。
細(xì)胞死亡的另一種形式被稱作細(xì)胞程序死亡[Kerr，J.F.R.和Wyllie，A.H.，Br.J.Cancer，265，239(1972)]；但是，與壞死相反，細(xì)胞程序死亡不會(huì)導(dǎo)致任何炎癥現(xiàn)象。據(jù)報(bào)導(dǎo)細(xì)胞程序死亡能夠在各種生理?xiàng)l件下發(fā)生。它是一種高度選擇性的細(xì)胞自殺形式，其特征在于具有易于觀察到的形態(tài)的和生化的現(xiàn)象。因此，尤其可以觀察到與核酸內(nèi)切酶活性有關(guān)或無(wú)關(guān)的染色質(zhì)濃縮、細(xì)胞程序死亡體的形成和由于核酸內(nèi)切酶的活化作用，使脫氧核糖核酸(DNA)斷裂成具有180-200個(gè)堿基對(duì)的DNA片段(能夠通過瓊脂糖凝膠電泳的方法觀察到這些片段)。
可將細(xì)胞程序死亡看作是在組織發(fā)育、分化和更新中所涉及的編程性細(xì)胞死亡。還認(rèn)為細(xì)胞的分化、生長(zhǎng)和成熟是與細(xì)胞程序死亡緊密相關(guān)的，并且還認(rèn)為那些能夠?qū)?xì)胞分化、生長(zhǎng)和成熟起作用的物質(zhì)也是與細(xì)胞程序死亡現(xiàn)象相關(guān)的。因此，對(duì)于一個(gè)非常健康的人來(lái)說(shuō)，這些現(xiàn)象總體之間存在一種平衡。
在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，某些病理情況顯示了一種修正的，甚至不規(guī)則的細(xì)胞程序死亡機(jī)制，或顯示了一種為達(dá)到平衡而不會(huì)使其他生物現(xiàn)象反常的細(xì)胞程序死亡機(jī)制。因此，報(bào)導(dǎo)過通過誘導(dǎo)或抑制隨意調(diào)整細(xì)胞程序死亡有可能治療大量的疾病，如與細(xì)胞程序死亡率不足相聯(lián)系的疾病，像在癌癥、自身免疫病和變態(tài)反應(yīng)的病例中，或者相反地，與過度細(xì)胞程序死亡率相聯(lián)系的疾病，如在人的免疫缺陷病毒(HIV)的免疫缺陷綜合征、神經(jīng)變性病(早老性癡呆)或在心肌梗塞過程中發(fā)生的過度損傷的病例中。
具體地，已經(jīng)描述了大量的細(xì)胞程序死亡抑制劑，如放線菌酮、環(huán)胞霉素和某種白細(xì)胞間素。
在視黃酸類領(lǐng)域中，人們知道全反式視黃酸是眾多正?；蜣D(zhuǎn)化細(xì)胞類型的分化和增生強(qiáng)調(diào)節(jié)劑(即根據(jù)被處理細(xì)胞的性質(zhì)，它或是一種抑制劑，或相反的是一種刺激劑)。例如，視黃酸抑制了像表皮角化細(xì)胞之類的上皮細(xì)胞的分化。它還抑制了許多像惡性黑素瘤細(xì)胞之類的轉(zhuǎn)化細(xì)胞的增生。在增生和分化方面的這些作用能夠同時(shí)影響同一細(xì)胞類型，例如對(duì)于分類為HL-60細(xì)胞的人前髓細(xì)胞來(lái)說(shuō)就是如此；因而，人們已經(jīng)知道用全反式視黃酸抑制這些細(xì)胞的增生，同時(shí)誘發(fā)這些細(xì)胞分化成粒細(xì)胞并細(xì)胞程序死亡。
人們知道，一般地，全反視黃酸通過與存在于細(xì)胞核中的被稱作RARs(視黃酸受體)的核受體互相作用而影響細(xì)胞的分化與增生。目前，有三種已鑒定的亞型RAR受體，它們分別稱為RAR-α、RAR-β和RAR-γ。在它們與配體(即全反視黃酸)結(jié)合之后，這些受體與受視黃酸調(diào)節(jié)的基因啟動(dòng)子區(qū)中的特異性反應(yīng)元件(RAREs)互相作用。為了與反應(yīng)元件結(jié)合，RARs與命名為RXRs的其他類型受體形成異源二聚體。RXRs的天然配體是9-順-視黃酸。RXRs被認(rèn)為是“主調(diào)節(jié)蛋白”，因?yàn)樗鼈兣c像維生素D3受體(VDR)、三碘甲狀腺受體(TR)和PPARs(過氧化物酶體增生活化受體)之類的類固醇/甲狀腺劑受體超家族的其他成員互相作用，形成異源二聚體，正如它們與RARs互相作用一樣。而且，RXRs能夠與呈同源二聚體形式的特異性反應(yīng)元件(RXRE)互相作用。這些復(fù)雜的互相作用，和隨細(xì)胞組織和類型而有不同表達(dá)的大量RARs和RXRs受體的存在，解釋了視黃酸類對(duì)幾乎所有細(xì)胞的多效作用。
到目前為止，已在文獻(xiàn)中描述過大量通常稱為“視黃酸類”的全反視黃酸或9-順-視黃酸的合成結(jié)構(gòu)類似物。一些這樣的分子能夠結(jié)合并專一地活化RARs或RXRs。另外，某些類似物能夠結(jié)合并活化一種特別的RAR受體亞型(α、β或γ)。最后，其他類似物對(duì)這些不同的受體沒有任何特別的選擇性活性。在這方面，例如9-順-視黃酸同時(shí)活化RARs和RXRs，而且對(duì)這些受體中的一種或另一種均不存在任何顯著的選擇性(非特異性激動(dòng)劑配體)，而全反視黃酸則選擇性地活化RARs(RARs特異性激動(dòng)劑配體)，包括所有亞型。一般定性地看，當(dāng)一種給定的物質(zhì)(配體)對(duì)一個(gè)給定受體族的所有受體(分別地對(duì)這個(gè)族的特定受體)具有親合性，這種親合性比這種物質(zhì)對(duì)任何其他族的受體(分別地對(duì)該同一族或不同族的所有其他受體)具有的親和性都強(qiáng)時(shí)，我們就說(shuō)所述物質(zhì)對(duì)給定受體族(分別地對(duì)于這個(gè)族的一個(gè)特別受體來(lái)說(shuō))具有特異性。
已報(bào)導(dǎo)9-順-視黃酸和全反視黃酸是細(xì)胞程序死亡的調(diào)節(jié)劑(具體地依據(jù)細(xì)胞類型而稱為細(xì)胞程序死亡活化劑或抑制劑)，并且9-順-視黃酸在這兩種調(diào)節(jié)劑中更具活性，下述事實(shí)可以解釋這一點(diǎn)與全反視黃酸僅活化RARs相反，9-順-視黃酸既活化RARs也活化RXRs。
鑒于前面所說(shuō)明的情況，發(fā)現(xiàn)新的細(xì)胞程序死亡調(diào)節(jié)劑具有很大的意義。
在這方面，本申請(qǐng)人已發(fā)現(xiàn)當(dāng)用RAR-γ型受體或T細(xì)胞受體誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡時(shí)，RAR-α型受體的特異性激動(dòng)劑配位劑或RAR-γ受體的特異性拮抗劑配體是不同細(xì)胞類型中，更特別地是胸腺細(xì)胞中這種細(xì)胞程序死亡的極好誘導(dǎo)劑。
因此，本發(fā)明涉及在制備一種用于降低至少一個(gè)細(xì)胞種群細(xì)胞程序死亡率的藥物組合物時(shí)，使用至少一種選自一種RAR-α型受體的特異性激動(dòng)劑配體和一種RAR-γ型受體的特異性拮抗劑配體。更具體地，該細(xì)胞種群表示這樣的細(xì)胞，即在這些細(xì)胞中能夠通過誘導(dǎo)和/或抑制RAR-γ型受體和/或RAR-α受體而調(diào)節(jié)細(xì)胞程序死亡，或在這些細(xì)胞中能夠用T細(xì)胞受體誘導(dǎo)而調(diào)節(jié)細(xì)胞程序死亡。
根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物含有一種生理上可接受的介質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明，RAR-α型受體的特異性激動(dòng)劑配體應(yīng)當(dāng)理解為是指對(duì)于RAR-α型受體其離解常數(shù)比RAR-γ型受體的離解常數(shù)至少小10倍，并且還誘導(dǎo)F9細(xì)胞分化的任何配體。
根據(jù)本發(fā)明，RAR-γ型受體的特異性拮抗劑配體應(yīng)當(dāng)理解為是指對(duì)于RAR-γ型受體其離解常數(shù)比RAR-α型受體的離解常數(shù)至少小10倍，并且還誘導(dǎo)F9細(xì)胞分化的任何配體。
因而，人們知道，全反視黃酸及其某些類似物能夠誘導(dǎo)老鼠胚胎惡性畸胎瘤細(xì)胞(F9細(xì)胞)的分化；因此它們被看作是RAR受體的拮抗劑。伴隨這一分化而分泌的纖維蛋白溶酶原活化劑是F9細(xì)胞對(duì)視黃酸類的生物反應(yīng)的一個(gè)指數(shù)(Skin Pharmacol.1990；3pp.256-267)。
本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員采用標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)可測(cè)定這些離解常數(shù)。這些試驗(yàn)具體地在下述參考文件中作過描述(1)RETINOIDS，Progress inResearch and Clinical Applications，第19章(pp 261-267)中的“Selective Synthetic Ligands for Nuclear Retinoic AcidReceptor Subtypes”，Marcel Dekker Inc.，由Maria A.Livrea和Lester Packer編輯；(2)Pharmacol Skin中的“SyntheticRetinoidsReceptor Selectivity and Biological Activity”，Basel，Karger，1993，Vol.5，pp 117-127；(3)Skin Pharmacology中的“Selective Synthetic Ligands for Human Nuclear RetinoicAcid Receptors”，1992，Vol.5，pp 57-65；(4)Biochemical andBiophysical Research Communications中的“Identification ofSynthetic Retinoids with Selectivity for Human NuclearRetinoic Acid Receptor-γ”，Vol.186，No.2，1992年7月，pp 977-983；(5)Mol.Pharmacol.中的“Selective High AffinityRAR-αor RAR-βRetinoic Acid Receptor Ligands”，Vol.40，pp556-562。
通過閱讀以下說(shuō)明以及用于說(shuō)明本發(fā)明的具體而沒有任何限制的各個(gè)實(shí)施例，可更清楚地體現(xiàn)出本發(fā)明的其他特征、方面、目的和優(yōu)點(diǎn)。
在RAR-α型受體的特異性激動(dòng)劑配體中，具體可以提及4-((5，6，7，8-四氫-5，5，8，8-四甲基-2-萘基)甲酰胺基)苯甲酸、4-((5，6，7，8-四氫-5，5，8，8-四甲基-2-萘基)氨基甲酰基)苯甲酸和2-羥基-4-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫萘-2-甲酰胺基)苯甲酸。
在本發(fā)明的RAR-α型受體的特異性激動(dòng)劑配體中，優(yōu)選地使用至少一種激動(dòng)劑配體，它的RAR-α型受體的離解常數(shù)比它的RAR-γ型受體的離解常數(shù)至少小20倍，例如4-((5，6，7，8-四氫-5，5，8，8-四甲基-2-萘基)甲酰胺基)苯甲酸和2-羥基-4-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫萘-2-甲酰胺基)苯甲酸。
具體可以提及的RAR-γ型受體的特異性拮抗劑配體是2-羥基-4-[7-(1-金剛烷基)-6-芐氧基-2-萘基]苯甲酸、2-羥基-4-[7-(1-金剛烷基)-6-己氧基-2-萘基]苯甲酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基甲氧基-2-萘基]苯甲酸、5-[7-(1-金剛烷基)-6-芐氧基-2-萘基]-2-噻吩羧酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-芐氧基-2-萘基]苯甲酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-芐氧基羰基-2-萘基]苯甲酸、2-羥基-4-[7-(1-金剛烷基)-6-(4-氟代芐基)氧基-2-萘基]苯甲酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-庚氧基-2-萘基]苯甲酸、6-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基甲氧基-2-萘基]煙酸、2-羥基-4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基甲氧基-2-萘基]苯甲酸、2-氯代-4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基甲氧基-2-萘基]苯甲酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基丁氧基-2-萘基]苯甲酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基甲氧基丙基-2-萘基]苯甲酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基丙基-2-萘基]苯甲酸和4-[7-(1-金剛烷基)-6-乙酰基氧基丁氧基-2-萘基]苯甲酸。
在本發(fā)明中，在RAR-γ型受體的特異性拮抗劑配體中，優(yōu)選地使用至少一種這類拮抗劑配體，該配體的RAR-γ型受體離解常數(shù)比該配體的RAR-α型受體離解常數(shù)至少小20倍，這種拮抗劑配體例如是4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基甲氧基-2-萘基]苯甲酸。
因此，當(dāng)必須降低至少一個(gè)細(xì)胞種群的細(xì)胞程序死亡率時(shí)，可以使用本發(fā)明的藥物組合物。更具體地，該細(xì)胞種群表示這樣的細(xì)胞，在這些細(xì)胞中，能夠通過RAR-γ型受體和/或RAR-α型受體的誘導(dǎo)作用或抑制作用而調(diào)節(jié)細(xì)胞程序死亡，或者在這些細(xì)胞中，能夠通過用T細(xì)胞受體誘導(dǎo)作用而調(diào)節(jié)細(xì)胞程序死亡，因此，具體是在有RAR-γ型受體和/或RAR-α型受體、或T細(xì)胞受體的細(xì)胞種群中，例如像存在有這三種類型受體的由胸腺得到的細(xì)胞中。
當(dāng)由于個(gè)體的遺傳條件或后天條件而導(dǎo)致細(xì)胞程序死亡率過度時(shí)，可以證明降低細(xì)胞程序死亡率是必要的，希望這一個(gè)體服用該藥物組合物。這些遺傳條件或后天條件有利于誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡的信號(hào)積累或降低這些信號(hào)誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡的閾值。
在與細(xì)胞程序死亡率過度相關(guān)的疾病或病癥中，更具體地可以提及人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫缺陷綜合征、神經(jīng)變性病、骨髓發(fā)育不良綜合征(如再生障礙性貧血)、局部缺血綜合征(如心肌梗塞)、由毒素(如酒精)導(dǎo)致的肝病、脫發(fā)、紫外光對(duì)皮膚的傷害、扁平苔蘚、皮膚萎縮、白內(nèi)障或其他移植排斥。
因而，更具體地可以提及的神經(jīng)變性病是Azheimer病、帕金森氏病、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化和像Creutzfeld-Jakob病之類的其他與大腦變性相聯(lián)系的疾病。
本發(fā)明的組合物能夠經(jīng)腸、胃腸外、局部和眼部途徑施用。優(yōu)選地，將藥物組合物包裝成適于通過全身(用于注射或灌注)用藥的形式。
當(dāng)經(jīng)腸途徑用藥時(shí)，組合物，更具體講為藥物組合物，能夠呈片劑、硬膠囊、糖衣片劑、糖漿、懸浮液、溶液、粉劑、顆粒劑、乳化液、微球或毫微球，或呈可以控制釋放的類脂或聚合物微球顆粒的形式。當(dāng)通過胃腸外途徑用藥時(shí)，該組合物可以呈用于灌注或注射的溶液或懸浮液形式。
本發(fā)明使用的選自RAR-α型受體的特異性激動(dòng)劑配體和RAR-γ型受體的特異性拮抗劑配體的配體通常以每日0.01-100毫克/千克體重的劑量、每日1-3次分開服用。
當(dāng)通過局部途徑用藥時(shí)，本發(fā)明的藥物或化妝組合物更具體地用于治療皮膚和粘膜，并可以呈軟膏、霜、乳液、香膏劑、粉劑、浸濕緩沖液、溶液、凝膠、噴霧劑、洗劑或懸浮液形式。它還可以呈微球或毫微球，或類脂或聚合物囊的形式，或呈可以控制釋放的聚合物斑貼和水凝膠的形式。通過局部途徑給藥的這種組合物能夠呈無(wú)水形式或含水的形式。
當(dāng)通過眼部途徑用藥時(shí)，該組合物主要呈眼部洗劑的形式。
選自RAR-α型受體的特異性激動(dòng)劑配體和RAR-γ型受體的特異性拮抗劑配體的配體，通過局部或眼部途徑用藥的使用濃度通常是以組合物總重量計(jì)為0.001-10％(重量)，優(yōu)選地是0.1-1％(重量)。
當(dāng)然，如前面所述的這些組合物還可以含有惰性的或者甚至具有藥效活性的添加劑或這些添加劑的組合，具體是潤(rùn)濕劑；像氫醌、壬二酸、咖啡酸或曲酸之類的脫色劑；潤(rùn)滑劑；像甘油、PEG 400、噻嗎啉酮及其衍生物或脲之類的水合劑；像S-羧甲基半胱氨酸、S-芐基半胱胺及其鹽或衍生物，或過氧化苯甲酰之類的抗皮脂溢劑或抗痤瘡劑；像酮康唑或聚-4，5-亞甲基-3-異-噻唑烷酮之類的殺真菌劑；抗菌劑、類胡蘿卜素及具體是β-胡蘿卜素；像蒽啉及其衍生物之類的治牛皮癬劑；最后是二十烷基-5，8，11，14-tetraynoic酸和二十烷基-5，8，11-trynoic酸，和它們的酯及酰胺。
這些組合物還可以含有增味劑、像對(duì)羥基苯甲酸酯之類的防腐劑、穩(wěn)定劑、濕度調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、乳化劑、UV-A和UV-B防曬劑、像α-生育酚、丁基羥基茴香醚或丁基羥基甲苯之類的抗氧化劑。
當(dāng)然，本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員不難理解，通過如此選擇向這些組合物中要添加的一種或多種可能的化合物，本發(fā)明所固有的有利性質(zhì)不會(huì)或基本上不會(huì)因設(shè)想加入的化合物而有所改變。
現(xiàn)非限制性地給出幾個(gè)用于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施例。
實(shí)施例1該實(shí)施例證明當(dāng)已用其他視黃酸類誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡時(shí)，RAR-γ特異性拮抗劑配體作為細(xì)胞程序死亡抑制劑在體內(nèi)的效果。
細(xì)胞的培養(yǎng)和制備用未處理的4周齡雄性NMRI鼠(由Hungary Godollo，LATI公司出售)的胸腺制備胸腺細(xì)胞懸浮液。采用的培養(yǎng)基是用Gibco牛胎血清、2毫摩爾谷氨酰胺和100國(guó)際單位青霉素和100微克鏈霉素/毫升補(bǔ)充的Sigma RPMI 1640培養(yǎng)基。然后在將其放入潮濕的孵育箱中，在5％CO2和95％空氣氣氛與37℃條件下孵育之前，洗滌并稀釋胸腺細(xì)胞，以達(dá)到最終濃度為107細(xì)胞/毫升。通過攝取臺(tái)盼藍(lán)測(cè)定細(xì)胞的死亡。
DNA的定性與定量分析在24孔中用各種不同的待試驗(yàn)化合物孵育胸腺細(xì)胞。孵育6小時(shí)后，在13,000克離心15分鐘之前，通過加入0.7毫升、pH8.0的含有0.5％(體積/體積)Triton X-100、10毫摩爾Tris、20毫摩爾EDTA的裂解緩沖液，使0.8毫升細(xì)胞懸浮物裂解。
-DNA定量分析上清液(片段)和沉淀物(未損壞的染色質(zhì))中含有的DNA用等同量的10％三氯乙酸進(jìn)行沉淀，再在5％三氯乙酸中制成懸浮液，然后用二苯胺試劑定量測(cè)定DNA量(Burton，K.(1956)Biochem.J.，62，315-322)。
-DNA定性分析平行地，讓上清液在含有0.15毫摩爾NaCl的乙醇中沉淀一夜。這些沉淀物再溶解在pH8.0的含有10毫摩爾Tris、1毫摩爾EDTA的緩沖液中，然后用RNase處理這些溶液；相繼地用等體積的酚、氯仿/異戊醇(24/1)萃?。辉?.8％瓊脂糖凝膠中在60伏下電泳3小時(shí)之前在乙醇中進(jìn)行沉淀。然后在用溴化-3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶翁著色該凝膠之后，用紫外光觀察DNA片段。所得到的凝膠具有典型誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡的180-200個(gè)堿基對(duì)的復(fù)合DNA片段梯形圖。整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，斷裂程度與對(duì)臺(tái)盼藍(lán)試驗(yàn)呈陽(yáng)性的死亡細(xì)胞數(shù)有關(guān)。
定量分析結(jié)果匯集在下表1中。
表1

ATRA是全反視黃酸9-cisRA是9-順-視黃酸CD437是6-3-(1-金剛烷基)-4-羥苯基-2-萘甲酸CD2665是4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基甲氧基-2-萘基]苯甲酸該表中的DNA片段百分?jǐn)?shù)表示已處理胸腺細(xì)胞中得到的DNA片段百分?jǐn)?shù)與未處理胸腺細(xì)胞中得到的DNA片段百分?jǐn)?shù)(這些胸腺細(xì)胞的細(xì)胞程序死亡基礎(chǔ)比率)之間的差值。
該表清楚地表明由ATRA、9-cisRA和CD437誘導(dǎo)的細(xì)胞程序死亡被RAR-γ型受體的特異性拮抗劑配體CD2665所抑制。
實(shí)施例2該實(shí)施例證明當(dāng)已用其他視黃酸類誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡時(shí)，RAR-α特異性激動(dòng)劑配體作為細(xì)胞程序死亡抑制劑的體外試驗(yàn)效果。
以與上述實(shí)施例相同的方式進(jìn)行，只是改變待試驗(yàn)配體的性質(zhì)及其濃度。
因而，在不同濃度CD336[4-((5，6，7，8-四氫-5，5，8，8-四甲基-2-萘基)甲酰胺基)苯甲酸]存在下，CD437[6-3-(1-金剛烷基)-4-羥苯基)-2-萘甲酸](單一濃度)與胸腺細(xì)胞一起孵育。
得到的結(jié)果匯集在下表2中。
表2

該表中的DNA片段百分?jǐn)?shù)表示已處理胸腺細(xì)胞中得到的DNA片段百分?jǐn)?shù)與未處理胸腺細(xì)胞中得到的DNA片段百分?jǐn)?shù)(這些胸腺細(xì)胞的細(xì)胞程序死亡基礎(chǔ)比率)之間的差值。
因此，該表清楚地表明由RAR-γ型受體的特異性激動(dòng)劑配體CD437誘導(dǎo)的細(xì)胞程序死亡，以與劑量有關(guān)的方式被RAR-α型受體的特異性激動(dòng)劑配體CD336所抑制。
實(shí)施例3
該實(shí)施例證明當(dāng)通過活化一種T細(xì)胞受體而誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡時(shí)，RAR-α特異性激動(dòng)劑配體作為細(xì)胞程序死亡抑制劑的體外試驗(yàn)效果。
以與實(shí)施例1相同的方式進(jìn)行，只是改變受試化合物的性質(zhì)及其濃度。
人們知道，在胸腺中T細(xì)胞分化為成熟的T淋巴細(xì)胞。在這一分化過程中，T細(xì)胞增生并產(chǎn)生T細(xì)胞受體。這些表達(dá)可能自體反應(yīng)細(xì)胞受體并與具有一種抗原的細(xì)胞互相作用的細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞程序死亡(負(fù)選擇)(Smith等人，(1989)Nature 337，181-184)。在體外，可通過同時(shí)加入二丁酸佛波醇酯和一種Ca++離子載體刺激與T細(xì)胞受體相結(jié)合的CD3分子，而模擬這一選擇(Iseki等人，(1991)J.Immunol.147，4286-4292)。
例如，在有或無(wú)不同濃度的CD336[4-((5，6，7，8-四氫-5，5，8，8-四甲基-2-萘基)甲酰胺基)苯甲酸]存在下，二丁酸佛波醇酯(5毫微克/毫升)和一種Ca++離子載體(0.5微摩爾)與胸腺細(xì)胞一起溫育。
得到的結(jié)果匯集在下表3中。
表3

P+C表示二丁酸佛波醇酯(5毫微克/毫升)和一種Ca++離子載體(0.5微摩爾)。
該表中的DNA片段百分?jǐn)?shù)表示已處理胸腺細(xì)胞中得到的DNA片段百分比與未處理胸腺細(xì)胞中得到的DNA片段百分比(這些胸腺細(xì)胞的細(xì)胞程序死亡基礎(chǔ)比率)之間的差值。
因此，該表清楚地表明由P+C誘導(dǎo)的細(xì)胞程序死亡，以與劑量有關(guān)的方式被RAR-α型受體的特異性激動(dòng)劑配體CD336所抑制。
實(shí)施例4本實(shí)施例表明當(dāng)已用RAR-γ特異性激動(dòng)劑配體誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡時(shí)，RAR-γ特異性激動(dòng)劑配體作為細(xì)胞程序死亡抑制劑的體內(nèi)試驗(yàn)效果。
使用4周齡雄性NMRI鼠(由Hungary Godollo，LATI公司出售)。為了誘導(dǎo)胸腺內(nèi)細(xì)胞程序死亡，通過單次腹膜內(nèi)注射0.5毫克6-3-(1-金剛烷基)-4-羥苯基-2-萘甲酸溶解在40微升DMSO和0.5毫升20％乙醇中的溶液，處理這些雄性小鼠。為了觀察到胸腺內(nèi)由RAR-γ特異性激動(dòng)劑配體誘導(dǎo)的細(xì)胞程序死亡的抑制效果，通過單次腹膜內(nèi)注射0.5毫克6-3-(1-金剛烷基)-4-羥苯基)-2-萘甲酸(CD437)和5毫克4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基甲氧基-2-萘基]苯甲酸(CD2665)的混合物溶解在40微升DMSO和0.5毫升20％乙醇中的溶液，處理這些雄性小鼠。作為對(duì)照，通過單次腹膜內(nèi)注射40微升DMSO和0.5毫升20％乙醇的混合物，處理這些雄性小鼠。在與以前相同的實(shí)驗(yàn)條件下，還用0.5毫克CD2665單獨(dú)進(jìn)行了試驗(yàn)。
處理48小時(shí)后測(cè)定胸腺的重量，其結(jié)果匯集在下表4中。
表4

因此，在僅用CD437處理之后可觀察到胸腺的退化，用CD2665處理之后沒有觀察到任何顯著的變化，而CD2665和CD437結(jié)合使用觀察到的胸腺退化比單獨(dú)使用CD437明顯低得多。
權(quán)利要求
1.至少一種選自RAR-α型受體的特異性激動(dòng)劑配體和RAR-γ型受體的特異性拮抗劑配體的配體在制備用于降低至少一種細(xì)胞種群的細(xì)胞程序死亡率的藥物組合物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)上述權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于該細(xì)胞種群是這樣一些細(xì)胞，在這些細(xì)胞中，能夠通過誘導(dǎo)和/或抑制RAR-γ型和/或RAR-α型受體來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞程序死亡，或者在這些細(xì)胞中能夠通過用T細(xì)胞受體的誘導(dǎo)來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞程序死亡。
3.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于RAR-γ型受體的特異性拮抗劑配體選自下述化合物2-羥基-4-[7-(1-金剛烷基)-6-芐氧基-2-萘基]苯甲酸、2-羥基-4-[7-(1-金剛烷基)-6-己氧基-2-萘基]苯甲酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基甲氧基-2-萘基]苯甲酸、5-[7-(1-金剛烷基)-6-芐氧基-2-萘基]-2-噻吩羧酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-芐氧基-2-萘基]苯甲酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-芐氧基羰基-2-萘基]苯甲酸、2-羥基-4-[7-(1-金剛烷基)-6-(4-氟代芐基)氧基-2-萘基]苯甲酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-庚氧基-2-萘基]苯甲酸、6-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基甲氧基-2-萘基]煙酸、2-羥基-4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基甲氧基-2-萘基]苯甲酸、2-氯代-4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基甲氧基-2-萘基]苯甲酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基丁基氧基-2-萘基]苯甲酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基甲氧基丙基-2-萘基]苯甲酸、4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基丙基-2-萘基]苯甲酸和4-[7-(1-金剛烷基)-6-乙?；趸⊙趸?2-萘基]苯甲酸。
4.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于RAR-γ型受體的特異性拮抗劑配體，例如4-[7-(1-金剛烷基)-6-甲氧基乙氧基甲氧基-2-萘基]苯甲酸，對(duì)RAR-γ型受體的離解常數(shù)比對(duì)RAR-α型受體的離解常數(shù)至少小20倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于RAR-α型受體的特異性激動(dòng)劑配體的離解常數(shù)對(duì)于RAR-α型受體比RAR-γ型受體至少小20倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2和5之任一權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于RAR-α型受體的特異性激動(dòng)劑配體選自4-((5，6，7，8-四氫-5，5，8，8-四甲基-2-萘基)甲酰胺基)苯甲酸和2-羥基-4-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-萘-2-甲酰胺基)-苯甲酸。
7.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于該藥物組合物用于治療與細(xì)胞程序死亡率過度相關(guān)的疾病。
8.根據(jù)上述權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于與細(xì)胞程序死亡率過度相關(guān)的疾病選自人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫缺陷綜合征、神經(jīng)變性病、骨髓發(fā)育不良綜合征、局部缺血綜合征、由毒素導(dǎo)致的肝病、脫發(fā)、紫外光對(duì)皮膚的傷害、扁平苔蘚、皮膚萎縮、白內(nèi)障或其他移植排斥。
9.根據(jù)上述權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于神經(jīng)變性病選自Azheimer病、帕金森氏病、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化和像Creutzfeld-Jakob病之類的其他與大腦變性相關(guān)的疾病。
全文摘要
至少一種選自RAR－α型受體的特異性激動(dòng)劑配體和RAR－γ型受體的特異性拮抗劑配體的配體在制備用于降低至少一種細(xì)胞種群的細(xì)胞程序死亡率的藥物組合物中的應(yīng)用。該組合物特別適用于治療與至少一個(gè)細(xì)胞種群中細(xì)胞程序死亡率過度相關(guān)的疾病或病癥。
文檔編號(hào)A61P25/28GK1203529SQ96198770
公開日1998年12月30日 申請(qǐng)日期1996年10月8日 優(yōu)先權(quán)日1995年10月11日
發(fā)明者L·費(fèi)蘇斯, Z·索戴, U·雷赫爾特 申請(qǐng)人:蓋爾德馬皮膚病學(xué)國(guó)際研究中心