本發(fā)明屬于多肽，具體涉及一種清除銅綠假單胞菌的多肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、銅綠假單胞菌(pseudomonas?aeruginosa)在多種自然界廣泛分布，會(huì)引發(fā)呼吸道、泌尿系統(tǒng)等多種感染性疾病，是醫(yī)院感染中一種極為常見(jiàn)的條件致病菌，能夠產(chǎn)生粘附素、多糖莢膜、內(nèi)毒素和外毒素等多種致病因子。該菌對(duì)化學(xué)藥物的抵抗力極強(qiáng)，對(duì)消毒劑、干燥、紫外線等理化因素及不良環(huán)境有較強(qiáng)的抵抗力，易形成生物膜，且形成生物被膜后不易被徹底清除?，F(xiàn)有的銅綠假單胞菌感染治療方法包括有機(jī)酸、抗生素、噬菌體療法、納米材料和抗菌肽等。弱有機(jī)酸可穿透細(xì)菌細(xì)胞膜，具有一定的抗菌能力。硼酸、水楊酸和抗壞血酸等常用于在局部的傷口感染上消除銅綠假單胞菌。但目前對(duì)于有機(jī)酸的研究和使用局限于小規(guī)模的創(chuàng)傷，其對(duì)銅綠假單胞菌的治療效果有限。

2、銅綠假單胞菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶，可水解β-內(nèi)酰胺類抗生素，針對(duì)這一耐藥機(jī)制，研究者們提出使用大劑量的β-內(nèi)酰胺類抗生素進(jìn)行長(zhǎng)療效治療，β-內(nèi)酰胺類抗生素包括半合成青霉素和頭孢菌素兩大類。治療過(guò)程中可聯(lián)合用藥，以提高抗菌活性和保護(hù)抗生素不被水解，現(xiàn)有治療中有許多使用他唑巴坦和頭孢菌素組成的廣譜復(fù)合制劑的報(bào)道。然而，抗生素的不當(dāng)使用極易導(dǎo)致多重耐藥性的銅綠假單胞菌的產(chǎn)生。

3、為應(yīng)對(duì)致病菌耐藥性增強(qiáng)的現(xiàn)象，許多研究聚焦于用噬菌體療法代替抗生素治療。噬菌體療法是通過(guò)噬菌體裂解宿主細(xì)菌，治療病原菌感染導(dǎo)致的疾病的手段。近年來(lái)，噬菌體療法已在治療大腸桿菌、分枝桿菌、肺炎克雷伯菌和銅綠假單胞菌等細(xì)菌性疾病上取得重大進(jìn)展。噬菌體治療的局限性在于宿主譜窄，一個(gè)噬菌體往往只能感染一種細(xì)菌的某些菌株。如今，多種噬菌體組合制劑和噬菌體與抗生素的聯(lián)合療法，在治療銅綠假單胞菌肺炎方面具有光明前景。

4、目前，多種納米材料已被證明能夠顯著抑制銅綠假單胞菌的群體響應(yīng)、綠膿菌素的產(chǎn)生過(guò)程和生物膜的形成，如銀、銅、鐵和鋅等金屬離子及其氧化物。然而，使用金屬納米材料治療人類疾病可能帶來(lái)一定的副作用，需要慎重使用。

5、一些抗菌肽也是良好的抗銅綠假單胞菌感染的手段，且其產(chǎn)生的耐藥性頻率低于抗生素的使用。例如，粘菌素是目前最典型的治療重癥銅綠假單胞菌感染的天然抗菌肽，具有廣譜殺菌效果。但一些天然抗菌肽對(duì)目標(biāo)致病菌產(chǎn)生抑菌效果的同時(shí)，也對(duì)真核細(xì)胞有毒性作用，且其活性受環(huán)境因子的影響顯著，易被細(xì)菌或宿主的蛋白酶降解，因此天然抗菌肽的臨床應(yīng)用受到限制。

6、現(xiàn)有藥物和技術(shù)對(duì)銅綠假單胞菌的治療效果有限，因此亟需挖掘新的有效且安全的抗銅綠假單胞菌的治療方法和藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本專利的目的在于挖掘一類噬菌體來(lái)源的能夠特異性清除銅綠假單胞菌的多肽，檢測(cè)其對(duì)模式和臨床來(lái)源的銅綠假單胞菌的殺傷效果，評(píng)估其對(duì)銅綠假單胞菌和其它常見(jiàn)菌株的殺菌效果，以實(shí)現(xiàn)特異性治療銅綠假單胞菌感染的效果。

2、本發(fā)明旨在尋找噬菌體來(lái)源且對(duì)銅綠假單胞菌具有高效殺菌能力，且不會(huì)對(duì)其他細(xì)菌產(chǎn)生毒性影響的專一性的抗菌多肽，為治療銅綠假單胞菌感染引起的感染提供新思路。

3、本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種多肽在制備銅綠假單胞菌抑制劑中的應(yīng)用，所述多肽的氨基酸序列如seq?id?no.3或seq?id?no.4所示。

4、本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種多肽在制備治療銅綠假單胞菌感染的藥物中的應(yīng)用，所述多肽的氨基酸序列如seq?id?no.3或seq?id?no.4所示。

5、本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種抑制或清除銅綠假單胞菌的試劑或藥物，其含有將seq?id?no.3或seq?id?no.4所示的多肽在銅綠假單胞菌中表達(dá)的成分。

6、優(yōu)選地，所述試劑或藥物含有將seq?id?no.1或seq?id?no.2所示序列整合進(jìn)銅綠假單胞菌的成分。

7、優(yōu)選地，所述將seq?id?no.1或seq?id?no.2所示序列整合進(jìn)銅綠假單胞菌的成分為含有含seq?id?no.1或seq?id?no.2所示序列的重組載體的微生物。

8、優(yōu)選地，所述含seq?id?no.1或seq?id?no.2所示序列的重組載體為含seq?idno.1或seq?id?no.2所示序列的pherd20t質(zhì)粒。

9、優(yōu)選地，所述試劑或藥物增加銅綠假單胞菌的細(xì)胞膜通透性。

10、優(yōu)選地，所述銅綠假單胞菌為mpao1或pao1。

11、優(yōu)選地，所述的藥物還含有藥學(xué)上可以接受的輔料。

12、本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種治療銅綠假單胞菌感染的試劑或藥物，所述試劑或藥物含有將seq?id?no.3或seq?id?no.4所示的多肽在銅綠假單胞菌中表達(dá)的成分。

13、本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

14、挖掘新的抗菌藥物以在治療多重耐藥的銅綠假單胞菌感染的同時(shí)，維持人體正常菌群的穩(wěn)定和控制病原菌裂解后內(nèi)毒素的釋放，是人們關(guān)注的問(wèn)題。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的抗菌多肽pa0726.1對(duì)銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株均表現(xiàn)出了顯著的毒性作用，且對(duì)非銅綠假單胞菌的大腸桿菌、鹽單胞菌和斯氏普羅威登斯菌的生長(zhǎng)沒(méi)有影響，這表明該多肽具有抗銅綠假單胞菌的潛能和一定的生物安全性。后續(xù)可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，尋找pa0726.1最適配的藥物載體，若能將多肽pa0726.1負(fù)載在載體上，則能減少藥物的損失，提高其治療效率。

15、本發(fā)明在銅綠假單胞菌mpao1的絲狀噬菌體中發(fā)現(xiàn)的多肽pa0726.1對(duì)銅綠假單胞菌表現(xiàn)出殺菌活性，這不僅增進(jìn)了人們對(duì)銅綠假單胞菌附屬基因功能的認(rèn)識(shí)，而且為治療銅綠假單胞菌感染提供新思路，該發(fā)現(xiàn)具有臨床價(jià)值。

技術(shù)特征：

1.一種多肽在制備銅綠假單胞菌抑制劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如seq?id?no.3或seq?id?no.4所示。

2.一種多肽在制備治療銅綠假單胞菌感染的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如seq?id?no.3或seq?id?no.4所示。

3.一種抑制或清除銅綠假單胞菌的試劑或藥物，其特征在于，含有將seq?id?no.3或seq?id?no.4所示的多肽在銅綠假單胞菌中表達(dá)的成分。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑或藥物，其特征在于，所述試劑或藥物含有將seq?idno.1或seq?id?no.2所示序列整合進(jìn)銅綠假單胞菌的成分。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑或藥物，其特征在于，所述將seq?id?no.1或seq?id?no.2所示序列整合進(jìn)銅綠假單胞菌的成分為含有含seq?id?no.1或seq?id?no.2所示序列的重組載體的微生物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑或藥物，其特征在于，所述含seq?id?no.1或seq?id?no.2所示序列的重組載體為含seq?id?no.1或seq?id?no.2所示序列的pherd20t質(zhì)粒。

7.根據(jù)權(quán)利要求3-6任一所述的試劑或藥物，其特征在于，所述試劑或藥物增加銅綠假單胞菌的細(xì)胞膜通透性。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑或藥物，其特征在于，所述銅綠假單胞菌為mpao1或pao1。

9.根據(jù)權(quán)利要求3-6任一所述的試劑或藥物，其特征在于，所述的藥物還含有藥學(xué)上可以接受的輔料。

10.一種治療銅綠假單胞菌感染的試劑或藥物，其特征在于，所述試劑或藥物含有將seq?id?no.3或seq?id?no.4所示的多肽在銅綠假單胞菌中表達(dá)的成分。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種清除銅綠假單胞菌的多肽及其應(yīng)用。所述多肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3或SEQ?ID?NO.4所示。本發(fā)明在銅綠假單胞菌MPAO1的絲狀噬菌體中發(fā)現(xiàn)的多肽PA0726.1對(duì)銅綠假單胞菌表現(xiàn)出殺菌活性，對(duì)銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株菌均表現(xiàn)出了顯著的毒性作用，且對(duì)非銅綠假單胞菌的大腸桿菌、鹽單胞菌和斯氏普羅威登斯菌的生長(zhǎng)沒(méi)有影響，這表明該多肽具有抗銅綠假單胞菌的潛能和一定的生物安全性。為治療銅綠假單胞菌感染提供新思路，具有臨床價(jià)值。

技術(shù)研發(fā)人員：郭云學(xué),翁玨華,王曉雪,古嘉瑜,林世團(tuán),黃紫賢
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21