用于治療糖尿病的制劑的制作方法【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含有胰島素的用于腸胃外施用的制劑，所述制劑包含在1至4之間或在6至8之間的pH記憶和非質(zhì)子極性溶劑，其中所述胰島素溶解于非質(zhì)子極性溶劑中，其中溶解的胰島素包括穩(wěn)定的胰島素單體或二聚體形式或其混合物，其中所述制劑的水含量等于或小于15％w/v。【專利說明】用于治療糖尿病的制劑[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用[0002]本申請(qǐng)要求2012年3月9日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)61/609123號(hào)和2011年10月31日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)61/553388號(hào)的權(quán)益。以上參考申請(qǐng)的內(nèi)容通過引用并入本申請(qǐng)中?！?br>背景技術(shù)：
】[0003]A.【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0004]本發(fā)明涉及用于腸胃外施用的胰島素制劑。這些制劑可以包含穩(wěn)定的胰島素單體和二聚體形式，從而加快胰島素進(jìn)入對(duì)象血流中的吸收速率。[0005]B.相關(guān)技術(shù)說明[0006]I型糖尿病的患者幾乎不或者不產(chǎn)生胰島素，因而對(duì)于I型糖尿病的主要治療為外源性胰島療法。另外，由于非胰島素治療的局限性，許多II型糖尿病的患者最終需要胰島素療法。歷史上，胰島素用于治療糖尿病已經(jīng)超過了90年。一種典型的方案涉及每天多次注射胰島素:每天用一或兩次的長效基礎(chǔ)胰島素和進(jìn)餐時(shí)的速效胰島素。盡管該治療方案是公認(rèn)有效的，但它具有局限性。首先，患者通常由于不方便和針扎的疼痛而不喜歡對(duì)自身注射胰島素。結(jié)果，患者往往不充分依從于規(guī)定的治療方案。更重要地，即使適當(dāng)用藥，也沒有進(jìn)餐時(shí)注射用胰島素產(chǎn)品能充分地復(fù)制人類胰島素的天然生理作用。具體地說，非糖尿病患者的第一階段反應(yīng)是:隨著來自進(jìn)食的葡萄糖進(jìn)入血液的幾分鐘內(nèi)，血液中胰島素水平的上升而產(chǎn)生胰島素高峰。然后，血液中的胰島素水平會(huì)在起效后30到60分鐘之間達(dá)到峰值。與此相反，注射的胰島素進(jìn)入血液緩慢，觀察到的最大濃度(Cmax)出現(xiàn)在注射普通人類胰島素90分鐘或更久之后。[0007]已經(jīng)開發(fā)了各種治療胰島素和胰島素類似物，以獲得不同的藥代動(dòng)力學(xué)(PK)性質(zhì)，例如權(quán)衡起效至達(dá)到血漿胰島素峰值的時(shí)間與藥效持續(xù)時(shí)間。胰島素治療的一個(gè)重要改進(jìn)為引入速效胰島素類似物，包括Humalog?、Novolog?和Apidra?。然而，即使使用這些類似物，胰島素水平峰值通常在注射后約60分鐘出現(xiàn)。目前銷售的胰島素產(chǎn)品未能充分地模擬第一階段胰島素的釋放導(dǎo)致在進(jìn)餐開始時(shí)胰島素水平不足而在進(jìn)餐之間胰島素水平過高，這會(huì)有進(jìn)餐開始后早期的高血糖癥和在進(jìn)餐后期的低血糖癥的生理影響。由于需要復(fù)雜算法來控制這兩種延遲，這兩種情況都對(duì)閉環(huán)人造胰腺技術(shù)的前景造成重要挑戰(zhàn)。[0008]對(duì)于用胰島素治療的糖尿病患者，外源性胰島素的主要施用途徑為皮下施用，PK分布曲線的主要參數(shù)取決于皮下吸收。許多可變因素會(huì)影響皮下注射胰島素的吸收(例如血流量、擴(kuò)散速率和締合狀態(tài))。當(dāng)血液流速充足時(shí)，可溶性胰島素吸收速率的限制因素為(i)通過擴(kuò)散到毛細(xì)血管的間質(zhì)輸送和(ii)毛細(xì)血管膜的輸送限制，這兩個(gè)因素都受分子的大小(如胰島素的締合狀態(tài))控制。[0009]一般地，胰島素制劑為水性制劑。對(duì)于此的一個(gè)原因是人體的大部分由水組成，包括血漿，所述血漿為水性環(huán)境。因此，存在給予與一種與藥物意圖到達(dá)的環(huán)境相容的藥物制劑的天然所趨。盡管與胰島素的六聚體形式相比，胰島素單體和二聚體形式由于其較小而更容易被吸收到血液中，但是胰島素通常以穩(wěn)定的、鍵合鋅的六聚體形式存在于藥物組合物中。胰島素單體在水溶液中不穩(wěn)定，會(huì)形成淀粉樣纖維并通過水介導(dǎo)途徑降解。盡管六聚體結(jié)構(gòu)促進(jìn)了在溶液(PH5至8)中的穩(wěn)定性，但是這也阻礙了擴(kuò)散和隨后的吸收。另外，注射積存的體積也會(huì)對(duì)擴(kuò)散有影響，使得體積越大，擴(kuò)散速率越慢。這些因素的組合正是造成藥效開始和峰值血漿胰島素水平延遲的主要原因。[0010]為了防止胰島素在水溶液中的纖維化和降解的同時(shí)促進(jìn)其皮下吸收，已經(jīng)開發(fā)了胰島素類似物，其中氨基酸序列已被改變以降低自身締合的傾向性同時(shí)保留受體結(jié)合的親和力。這些類型的胰島素通常被稱為“單體”胰島素，但是它們實(shí)際上以弱締合的六聚體存在。這類劑型的吸收仍會(huì)延遲，因?yàn)槲找蕾囉跀U(kuò)散和之后皮下濃度的降低，而這需要六聚體解離為二聚體/單體。其平衡有利于單體狀態(tài)的胰島素類似物(例如胰島素類似物L(fēng)ispro)已經(jīng)顯示出更快速的吸收和更短的藥效持續(xù)時(shí)間。然而，與六聚體胰島素相比，這些類似物分子更不穩(wěn)定，且在熱和機(jī)械應(yīng)力下更易于不可逆地聚集。此外，這些聚集體不僅降低了可用的胰島素劑量，還可能引起患者的刺激或免疫反應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)和流行病學(xué)研究中，也已經(jīng)開始關(guān)注關(guān)于受體機(jī)械信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的延長和由一些較新的胰島素類似物引起的腫瘤增殖。除了這些缺點(diǎn)之外，胰島素類似物比常規(guī)人類胰島素大約貴一倍?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0011]本發(fā)明為胰島素制劑面臨的當(dāng)前問題提供提供了一種解決方案。本發(fā)明在于在緩沖劑中干燥胰島素以制備干燥形式的胰島素，所述干燥形式的胰島素在非質(zhì)子極性溶劑中重構(gòu)和溶解后保持期望的pH。獲得的制劑包括溶解且穩(wěn)定的胰島素單體和二聚體形式。特別地，該制劑可以具有相對(duì)低量的水(20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%或更少)或者可以無水，這進(jìn)一步允許制劑中存在更多量的胰島素，從而降低給予對(duì)象的含胰島素制劑的體積。另外，本發(fā)明允許使用未改性或天然的胰島素形式和改性的或類似的胰島素形式。換言之，胰島素類似物可以用于本發(fā)明，同時(shí)未改性/天然的胰島素也可以使用，并且以其單體和二聚體的形式保持穩(wěn)定。[0012]在本發(fā)明的一個(gè)方面，公開了一種包含胰島素和非質(zhì)子極性溶劑的制劑，所述胰島素具有在I至4之間(或I至3或約2)，或者6至8之間(或6.5至7.5或約7)的pH記憶，其中所述胰島素可以溶解于非質(zhì)子極性溶劑中，其中溶解的胰島素可以包含穩(wěn)定的胰島素單體或胰島素二聚體形式或其混合物，并且其中制劑的水含量可以等于或小于20%、w/v或w/w或更少(例如無水)。該制劑可以用于腸胃外施用。在特定方面，非質(zhì)子極性溶劑可以是二甲基亞砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)、或碳酸亞丙酯、或其混合物。在特定方面，非質(zhì)子極性溶劑可以是二甲基亞砜(DMSO)。在一些方面,制劑包含3mg/ml至50mg/ml、3mg/ml至10mg/ml或10mg/ml至50mg/ml的胰島素。在其它方面，其可以包含0.5mg/mL、lmg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、IOmg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL、35mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL、55mg/mL、60mg/mL、65mg/mL、70mg/mL、75mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、lOOmg/mL,或更多，或根據(jù)需要，或其間的任意范圍。在一些方面，制劑內(nèi)的胰島素的大部分為單體形式或二聚體形式，或單體和二聚體形式的組合。該制劑還可以進(jìn)一步包含能夠減少胰島素的單體形式或二聚體形式的聚集的成分。這類成分的非限制性實(shí)例包括脲、鹽酸胍、氨基酸、糖、多元醇、聚合物、酸、或表面活性劑、或其混合物。在特定方面，酸可以是乙酸、抗壞血酸、檸檬酸、谷氨酸、天冬氨酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、或己二酸、或其混合物。該制劑可以包含共溶劑。共溶劑的一個(gè)非限制性實(shí)例為水。在一些方面，該制劑不含鋅，包含少量鋅，和/或包含與螯合劑結(jié)合的鋅，以降低六聚體形成的可能性。在特定方面，胰島素可以在非揮發(fā)性緩沖劑中預(yù)干燥，所述緩沖劑可以具有在I至4之間或在I至3之間或?yàn)榧s2的pH范圍，或者在6至8或6.5至7.5之間或?yàn)榧s7的pH范圍。非揮發(fā)性緩沖劑的實(shí)例可以是甘氨酸緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑、或磷酸鹽緩沖劑、或其混合物。在一些方面，緩沖劑可以包含螯合劑。螯合劑的非限制性實(shí)例包括乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇四乙酸(EGTA)、酒石酸、甘油、或檸檬酸、或其任意組合。該制劑還可以包含能夠使所述非質(zhì)子極性溶劑的凝固點(diǎn)下降到約0°C的成分，且這樣的成分的非限制性實(shí)例包括水、糖、糖醇或其混合物。在一些實(shí)例中，胰島素可以是未改性的或天然的人類胰島素。在其它方面，組合物還可以包含胰島素佐劑，例如糊精類似物。該糊精類似物可以溶解于所述制劑中。糊精類似物的一個(gè)非限制性實(shí)例為普蘭林肽(pramlintide)。普蘭林肽可以處理為使得其具有在I至5之間，或2、3或4，或約2的pH記憶。在共制劑的一些具體實(shí)例中，胰島素PH記憶可以為約2，普蘭林肽pH記憶可以為約2。在一些方面，普蘭林肽的處理可以包括在非揮發(fā)性緩沖劑中干燥所述普蘭林肽，所述緩沖劑具有在I至5之間，或2、3或4，或約2的pH范圍。在包含胰島素和普蘭林肽的制劑中，水含量可以在5%至20%w/v或w/w、或5%至15%w/v或w/w、或7%至12%w/v或w/w、或8%至10%w/v或w/w之間、或?yàn)榧s9%w/v或w/w。制劑可以為液體形式。制劑可以是溶液。在特定方面，當(dāng)制劑在室溫下儲(chǔ)存一個(gè)月時(shí)，制劑內(nèi)至少50%、60%、70%、80%或90%或更多的胰島素可以保持化學(xué)和物理穩(wěn)定。在一些方面，制劑可以包含在容器內(nèi)。容器可以是注射器、筆式注射裝置、自動(dòng)注射器裝置、泵或灌注袋。在特定方面，非質(zhì)子極性溶劑可以是制劑的連續(xù)相。制劑可以包含至少75%,80%,85%,90%,95%,96%,97%,98%,99%w/v或w/w的非質(zhì)子極性溶劑。制劑內(nèi)的胰島素可以是亞穩(wěn)的。[0013]還公開了一種用于降低血糖水平的方法，其包括以有效降低對(duì)象中的血糖水平的量給予需要它的對(duì)象本發(fā)明的制劑中的任一種。對(duì)象可以是人(成人或兒童)、動(dòng)物(例如黑猩猩、馬、牛、豬、兔、大鼠、小鼠等)。在特定方面，對(duì)象中的血糖水平在用藥后10分鐘、20分鐘、30分鐘、60分鐘或90分鐘內(nèi)降低。在一些實(shí)例中，對(duì)象中的早期？Tmax血液胰島素水平在用藥后10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘或60分鐘內(nèi)或者在施用后30至60分鐘內(nèi)出現(xiàn)。對(duì)象可以是已經(jīng)診斷為患有I型或II型糖尿病，或者是易進(jìn)展為I型或II型糖尿病。在一些實(shí)例中，在對(duì)象進(jìn)食前30分鐘、20分鐘、15分鐘、10分鐘、5分鐘或I分鐘內(nèi)用藥，或在對(duì)象進(jìn)食后I分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘或30分鐘內(nèi)用藥。[0014]還公開了一種制備本發(fā)明的制劑的方法。該方法可以包括干燥包含胰島素和非揮發(fā)性緩沖劑的混合物以獲得干燥的胰島素，其中經(jīng)干燥的胰島素可以具有在I至4(或2至3或約2)、或者6至8之間(或6.5至7.5或約7)的pH記憶；和隨后在非質(zhì)子極性溶劑中使所述經(jīng)干燥的胰島素重構(gòu)，其中所述胰島素可以溶解于非質(zhì)子極性溶劑中，其中溶解的胰島素可以包含穩(wěn)定的胰島素單體和二聚體形式或其混合物，且其中制劑的水含量可以等于或小于20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、I%w/v或w/w或更少(例如無水)。本方法還可以包括干燥包含糊精類似物和第二非揮發(fā)性緩沖劑的混合物以獲得干燥的糊精類似物和使經(jīng)干燥的糊精類似物在非質(zhì)子極性溶劑中與經(jīng)干燥的胰島素一起重構(gòu)，其中經(jīng)干燥的糊精類似物可以溶解于非質(zhì)子極性溶劑。如上所述，糊精類似物可以是普蘭林肽，并且可以處理為具有在I至5之間，或2、3或4，或在具體實(shí)例中約2的pH記憶。在共制劑的一些具體實(shí)例中，胰島素PH記憶可以為約2，普蘭林肽pH記憶可以為約2。第二非揮發(fā)性緩沖劑可以具有在I至5之間，或約2、3或4，或更特別地為約2的pH范圍。該方法還進(jìn)一步包括以5%至20%w/v或w/w、或5%至15%w/v或w/w、或7%至12%w/v或w/w、或8%至10%w/v或w/w、或約9%w/v或w/w的量將共溶劑例如水添加到制劑。[0015]本制劑的另一獨(dú)特方面為其可以包含在容器中，可以儲(chǔ)存，可以在需要時(shí)立即用于腸胃外施用，而不必重構(gòu)或稀釋制劑。因此，可以儲(chǔ)存制劑的容器可以是注射器、筆式注射裝置、自動(dòng)注射器裝置、泵或灌注袋。還考慮在制劑中使用額外的添加劑/藥物賦形劑，其非限制性實(shí)例包括:抗氧化劑(實(shí)例包括抗壞血酸、半胱氨酸、蛋氨酸、硫代甘油、硫代硫酸鈉、亞硫酸鹽、BHT、BHA、抗壞血酸棕櫚酸酯、沒食子酸丙酯或維生素E);螯合劑(實(shí)例包括EDTA、EGTA、酒石酸、甘油或檸檬酸)；或防腐劑(實(shí)例包括烷基醇、芐醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或其混合物)。制劑可以是液體形式、半固體形式或凝膠形式。如下文所討論的，該制劑可以具有期望的粘度范圍(在一個(gè)非限制性實(shí)例中，這樣的范圍可以在0.5cps至1.5cps之間)ο[0016]可以預(yù)計(jì)，本說明書中所討論的任意實(shí)施方案均可針對(duì)本發(fā)明的任意方法或組合物來實(shí)施，并且反之亦然。此外，本發(fā)明的組合物可以用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的方法。[0017]“胰島素”是指人類、非人類、重組的、純化的、和/或合成(例如改性的胰島素或胰島素類似物)的胰島素?！叭祟愐葝u素”是指由胰腺分泌的人類肽激素胰島素一其可以從天然源中分離，由基因改變的有機(jī)體制備，通過合成化學(xué)制造，購買等?！胺侨祟愐葝u素”為來源于動(dòng)物(例如豬、牛等)的胰島素。[0018]“改性的胰島素”或“胰島素類似物”是胰島素的變化形式，與天然的胰島素不同(例如化學(xué)改性、不同結(jié)構(gòu)、不同氨基酸序列)，但是仍可用于對(duì)象(例如人類)以執(zhí)行與天然/未改性的胰島素相同的功能。例如，通過DNA編碼的基因工程，胰島素的氨基酸序列可以被改變以改變其ADME(吸收、分布、代謝和/或排泄)特征。改性胰島素或胰島素類似物的實(shí)例包括Lispro?、Aspart?、Glulisine?、Detemir?、Degludec.?'等。未改性或天然的胰島素包括天然的或自然存在的氨基酸序列。[0019]“穩(wěn)定的胰島素”是指制劑內(nèi)的胰島素在制劑內(nèi)不會(huì)不可逆地聚集或者在制劑施用之后失去其活性。胰島素在被吸收到血液中之后保持其活性。不希望被理論束縛，據(jù)認(rèn)為本發(fā)明的制劑內(nèi)的胰島素為“亞穩(wěn)的”(meta-stable)，因?yàn)楸M管溶解的胰島素的構(gòu)象會(huì)變化，但是在施用并被吸收到血液中后胰島素就變回其天然構(gòu)象。另外，據(jù)認(rèn)為制劑內(nèi)的胰島素的構(gòu)象變化降低了與制劑內(nèi)存在的其它胰島素單體和二聚體或佐劑如糊精類似物聚集的可能性。單體胰島素形式是指處于其單體形式的胰島素。二聚體胰島素形式是指處于其二聚體形式(例如締合或偶聯(lián)到一起的兩個(gè)單體)的胰島素。六聚體胰島素形式是指處于其六聚體形式(例如締合或偶聯(lián)到一起的三個(gè)二聚體)的胰島素。[0020]“不含鋅”或“低鋅”是指制劑包含相對(duì)于胰島素含量約0.6%或更少(例如0.5%,0.4%,0.3%,0.2%,0.1%,0%)的鋅，或每6個(gè)胰島素單體3個(gè)或更少(例如2、1、0)的鋅離子。[0021]“非質(zhì)子極性溶劑”是指不含酸性氫且不作為氫鍵供體的極性溶劑。如上所述，非限制性實(shí)例包括二甲基亞砜(DMS0)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺(DMA)和碳酸亞丙酯。[0022]“腸胃外施用”是指在動(dòng)物例如人類的一層或多層皮膚或粘膜下方或者穿過它們來施用制劑。標(biāo)準(zhǔn)的腸胃外施用被提供到動(dòng)物例如人類患者的皮下或肌肉內(nèi)部位。以這些深的部位為靶點(diǎn)，這是因?yàn)橄鄬?duì)于淺的真皮部位而言其組織更容易擴(kuò)展以容納注射體積來輸送胰島素制劑?？梢岳冕橆^、泵、注射裝置、導(dǎo)管等來施用。[0023]“藥學(xué)上可接受的載體”表示用于將胰島素遞送到哺乳動(dòng)物例如動(dòng)物或人類的媒介物、懸浮劑或藥學(xué)上可接受的溶劑。[0024]“藥學(xué)上可接受的”成分、賦形劑或組分是與合理的收益/風(fēng)險(xiǎn)比相稱的適合用于人類和/或動(dòng)物而沒有過度不利的副作用(例如毒性、刺激性和過敏反應(yīng))的成分、賦形劑或組分。[0025]“生物相容的”是指其與合理的收益/風(fēng)險(xiǎn)比相稱的適合用于人類和/或動(dòng)物而沒有過度不利的副作用(例如毒性、刺激性和過敏反應(yīng))。[0026]“生物利用度”是指對(duì)象從制劑吸收胰島素達(dá)到的程度。[0027]“系統(tǒng)的”是指，就胰島素到對(duì)象的遞送或或施用而言，治療劑在對(duì)象的血漿中在生物學(xué)顯著水平上可檢測(cè)。[0028]“患者”、“對(duì)象”或“個(gè)體”是指哺乳動(dòng)物(例如人類、靈長動(dòng)物、狗、貓、牛、綿羊、豬、馬、小鼠、大鼠、倉鼠、兔或豚鼠)。[0029]當(dāng)在權(quán)利要求和/或說明書中使用時(shí)，“抑制”或“減少”或這些術(shù)語的任何變體包括達(dá)到預(yù)期結(jié)果的任何可測(cè)量的減少或完全抑制。[0030]當(dāng)在權(quán)利要求和/或說明書中使用時(shí)，“有效的”、“治療”或“防止”或這些術(shù)語的任何變體是指足以達(dá)到期望的、預(yù)期的或計(jì)劃的結(jié)果。[0031]如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所理解的，術(shù)語“約”或“大致”定義為接近于，并且在一個(gè)非限制性實(shí)施方案中該術(shù)語定義為在10%以內(nèi)，優(yōu)選在5%以內(nèi)，更優(yōu)選在I%以內(nèi)，最優(yōu)選在0.5%以內(nèi)。另外，“基本上無水”是指以水的重量或體積計(jì)小于5%、4%、3%、2%、I%或更小。[0032]當(dāng)在權(quán)利要求書和/或說明書中與術(shù)語“包含/包括”一起使用時(shí)，單數(shù)形式可以表示“一個(gè)”，但是其也與“一個(gè)或更多個(gè)”、“至少一個(gè)”和“一個(gè)或多于一個(gè)”的意思一致。[0033]術(shù)語“包含”(和其任意其它形式)、“具有”(和其任意其它形式)、“包括”(和其任意其它形式)或“含有”(和其任意其它形式)是包括性的或開放式的，并且不排除額外的、未列舉的要素或方法步驟。[0034]對(duì)于其用途，組合物和方法可以“包含”說明書全文所公開的成分或步驟、“基本上由說明書全文所公開的成分或步驟構(gòu)成”或“由說明書全文所公開的成分或步驟構(gòu)成”。對(duì)于過渡形式“基本上由……構(gòu)成”，在一個(gè)非限制性方面，本說明書所公開的制劑和方法的基本且新穎的特征包括所述制劑內(nèi)的胰島素的單體和/或二聚體形式的穩(wěn)定性和溶解度。因此，可能影響制劑內(nèi)的胰島素的單體和/或二聚體形式的穩(wěn)定性或溶解度的成分在其中權(quán)利要求使用過渡形式“主要包含”的實(shí)例中被排除在所述制劑之外。[0035]本發(fā)明的其它目的、特征和優(yōu)點(diǎn)通過以下詳細(xì)描述會(huì)變得明顯。然而，應(yīng)理解，在表明本發(fā)明的具體實(shí)施方案時(shí)，詳細(xì)的描述和實(shí)施例僅以舉例說明給出。另外，期望本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)的變化和修改通過該詳細(xì)描述對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)變得明顯?！緦＠綀D】【附圖說明】[0036]以下附圖形成本說明書的一部分，并被包含以進(jìn)一步示范本發(fā)明的特定方面。通過參照一個(gè)或更多個(gè)這些附圖結(jié)合下文所提供的具體實(shí)施方案的詳細(xì)說明，可以更好地理解本發(fā)明。[0037]圖1:DMS0/胰島素和水性的/胰島素制劑的FTIR光譜。[0038]圖2=DMSO/胰島素和水性的/胰島素制劑的表觀分子量。[0039]圖3=DMSO中50mg/mL的Ins-E的流體力學(xué)半徑分布。水平軸為流體力學(xué)半徑值的對(duì)數(shù)間隔的格子(相鄰的點(diǎn)相差約1.3的因數(shù))。分析涵蓋從約0.01nm至約20μm的半徑范圍。在0.01nm至0.1nm處的峰已被抑制，所述峰是由光電檢測(cè)器的寄生脈沖引起的假象。[0040]圖4=DMSO中30mg/mL的Ins-E的流體力學(xué)半徑分布(圖形解釋參見以上圖3)。[0041]圖5=DMSO中10mg/mL的Ins-E的流體力學(xué)半徑分布(圖形解釋參見以上圖3)。[0042]圖6=DMSO中3mg/mL的Ins-E的流體力學(xué)半徑分布(圖形解釋參見以上圖3)。[0043]圖7:緩沖劑E中10mg/mL的Ins-H2O的流體力學(xué)半徑分布(圖形解釋參見以上圖3)。[0044]圖8:緩沖劑F中10mg/mL的Ins-H2O的流體力學(xué)半徑分布(圖形解釋參見以上圖3)?！揪唧w實(shí)施方式】[0045]如以上所討論的，與以單體或二聚體形式配制胰島素以用于腸胃外施用相關(guān)的難題得到充分的證明。對(duì)于這樣的難題的當(dāng)前解決方案也得到充分證明，并且已被接受作為制劑領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)慣例。例如，已經(jīng)制備胰島素類似物/改性的胰島素以降低其與其自身的結(jié)合親和力，希望能避免類似物的六聚體形成。這些類似物通常在水性環(huán)境中施用，這降低了其穩(wěn)定性并使它們更易于在聚集發(fā)生后不可逆地聚集。另外，這種類似物昂貴，并且可能引起患者的刺激性或免疫反應(yīng)。[0046]通過比較，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一種針對(duì)上述問題的解決方案。該解決方案在于制備具有特定PH記憶的胰島素和使所述胰島素重構(gòu)和溶解在非質(zhì)子極性溶劑中。得到的可具有少量水至無水的制劑包含溶解且穩(wěn)定的胰島素單體和二聚體形式。另外，胰島素在非質(zhì)子極性溶劑中增加的溶解度導(dǎo)致含有大量胰島素單體和二聚體形式的小體積制劑。特別地，該制劑既可以用于改性的胰島素也可以用于未改性的胰島素。在未改性胰島素的情形中，可以避免與使用改性的/類似物胰島素分子有關(guān)的問題，例如刺激性、免疫原性反應(yīng)和成本。[0047]以下討論本發(fā)明的這些和其它非限制性方面。[0048]A.胰島素[0049]胰島素幫助身體使用或儲(chǔ)存其從食物中得到的血糖。在患有I型糖尿病人中，胰腺不再制造胰島素。盡管II型糖尿病人制造胰島素，但是他們的身體對(duì)胰島素的反應(yīng)無效或不充分，這通常被稱為胰島素抗性。[0050]胰島素本身為眾所周知并且被表征的肽激素。人類胰島素的單體形式由51個(gè)氨基酸構(gòu)成，其進(jìn)一步表征為由二硫鍵連接的被稱為A鏈和B鏈的兩個(gè)肽鏈。在大多數(shù)物種中，A鏈由21個(gè)氨基酸構(gòu)成，B鏈由30個(gè)氨基酸構(gòu)成。雖然不同的物種之間胰島素的氨基酸序列不同，但是分子的某些片段是高度保持的。這些胰島素氨基酸序列的相似性導(dǎo)致在物種間非常相似的胰島素的三維構(gòu)象，來自一種動(dòng)物的胰島素可以在其它物種中具有生物活性。例如，豬胰島素已經(jīng)廣泛用于治療人類患者。胰島素的單體形式可以締合到一起而形成二聚體。二聚體可以締合到一起形成六聚體，這通常在鋅的存在下發(fā)生。[0051]胰島素的單體和二聚體形式均容易擴(kuò)散到血液中。通過比較，六聚體部分由于其明顯較大的尺寸而擴(kuò)散較差。如上所述，這已經(jīng)導(dǎo)致生產(chǎn)改性的胰島素或胰島素類似物(例如Lispro?、Aspart?、Glulisine?、Detemir?、Degludec?等)，其可市夠得到并且可用于本發(fā)明的情形中。另外，常規(guī)未改性的胰島素也可以容易地在市場(chǎng)上買到(例如Hunuilin?R、Hunuilin?N、Humulin?70/30、Novolin?:等)，并且也可用于本發(fā)明的情況。在特定方面，胰島素的常規(guī)/未改性形式可以代替改性的形式使用，以降低過敏性或免疫原性成本，或降低制劑的成本。胰島素目前由多個(gè)制造商(包括制藥公司和合約制藥商)生產(chǎn)。制藥公司包括禮來(EliLillyandC0.)、諾和諾德(NovoNordisk)以及賽諾菲(Sanofi)。[0052]合約制藥商包括西格瑪奧德里奇(Sigma-Aldrich)、龍沙(Lonza)和百康(Biocon)。本說明書的實(shí)施例中所使用的胰島素為從Sigma-Aldrich(圣路易斯，MO)購買的重組未改性人類胰島素。[0053]B.pH記憶[0054]本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)了可以用于進(jìn)一步穩(wěn)定制劑內(nèi)溶解的胰島素的處理步驟。該步驟包括在水溶液中使胰島素與非揮發(fā)性緩沖劑混合，然后干燥混合物以獲得干燥的胰島素。在干燥之前，水溶液具有在I至4之間或在6至8之間的pH范圍，其為在水性環(huán)境中對(duì)胰島素穩(wěn)定性最佳的PH范圍。因此，在干燥了混合物之后，其產(chǎn)生具有在I至4之間或在6至8之間的“pH記憶”的經(jīng)干燥的胰島素，使得經(jīng)干燥的胰島素在非質(zhì)子極性溶劑內(nèi)溶解后仍保留該P(yáng)H記憶。在進(jìn)一步包含普蘭林肽的一些具體實(shí)例中，胰島素pH記憶可以為約2，普蘭林肽pH記憶可以為約2。[0055]特別地，胰島素的“pH記憶”是由緩沖水溶液(例如由非揮發(fā)性緩沖劑)干燥胰島素之后所得到的電荷分布(質(zhì)子化狀態(tài))。胰島素在非質(zhì)子極性溶劑中的質(zhì)子化狀態(tài)、以及其溶解度和穩(wěn)定性受干燥之前含水的胰島素混合物或溶液的pH影響。當(dāng)胰島素在其中酸性和堿性組分都是非揮發(fā)性的緩沖物質(zhì)中進(jìn)行干燥時(shí)，經(jīng)干燥的胰島素的PH記憶會(huì)約等于胰島素混合物或溶液的pH。參見例如EnzymaticReactionsinOrganicMedia,Koskinen,A.M.P.和Klibanov,A.M.，eds.，Springer(1996)。此外，其中膜島素被干燥的緩沖水溶液(例如非揮發(fā)性緩沖劑)的PH可以被優(yōu)化以使胰島素產(chǎn)生pH記憶，該pH記憶使干燥的胰島素隨后在非質(zhì)子極性溶劑中重構(gòu)時(shí)有最佳穩(wěn)定性、最大溶解度和最小降解的胰島素。因此，當(dāng)經(jīng)干燥的胰島素被重構(gòu)到這種溶劑中時(shí)，在重構(gòu)制劑中的胰島素會(huì)保持最佳pH記憶的溶解度和穩(wěn)定性特征。[0056]胰島素的pH記憶可以用若干方式進(jìn)行測(cè)量。在一個(gè)方法中，pH記憶通過將經(jīng)干燥的胰島素重構(gòu)到非緩沖的水中，然后用PH指示劑如pH試紙或校準(zhǔn)的pH電極來測(cè)量重構(gòu)的胰島素混合物或溶液的pH?；蛘?，可以通過向胰島素/非質(zhì)子極性溶劑制劑加入至少20%的水，并利用pH指示劑測(cè)量該制劑的pH來檢測(cè)PH記憶。參見例如Baughman和Kreevoy,“DeterminationofAcidityin80%DimethylSulfoxide-20%Water,^JournalofPhysicalChemistry,78(4):421-23(1974)。非質(zhì)子極性溶劑-水溶液中的pH的測(cè)量可能需要小的校正(即根據(jù)上述的Baughman和Kreevoy不超過0.2pH單位)。[0057]鑒于上文所述，在本文所述的制劑中有用的非揮發(fā)性緩沖劑是指那些有助于確立最大穩(wěn)定性/最小降解的PH的緩沖劑，以及那些有助于從胰島素中除去殘留水分或水含量的緩沖劑。非揮發(fā)性緩沖劑包括不會(huì)以與水在干燥/凍干時(shí)相似的方式揮發(fā)掉的那些緩沖劑。合適的非揮發(fā)性緩沖劑包括例如甘氨酸緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑等。在具體實(shí)例中，非揮發(fā)性緩沖劑為甘氨酸緩沖劑或檸檬酸鹽緩沖劑。[0058]胰島素與非揮發(fā)性緩沖劑的干燥可以使用噴霧干燥技術(shù)、冷凍干燥技術(shù)、凍干技術(shù)、真空離心技術(shù)等來實(shí)施。噴霧干燥技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。噴霧干燥包括步驟:經(jīng)由噴嘴轉(zhuǎn)盤或其它裝置霧化含有一種或多種固體(例如治療劑)的溶液，隨后蒸發(fā)液滴中的溶劑。得到的粉末的性質(zhì)是包括起始溶質(zhì)濃度、所產(chǎn)生的液滴的尺寸分布和溶質(zhì)移除率在內(nèi)的若干變量的函數(shù)。所產(chǎn)生的顆?？赡馨跏剂Ｗ拥木酆象w，該初始粒子由晶體和/或非晶固體組成，取決于溶劑移除的速率和條件。一種用于制備藥物的超細(xì)粉末的噴霧干燥方法例如在美國專利6051256號(hào)中進(jìn)行描述。冷凍干燥程序在本領(lǐng)域中是眾所周知的，并且例如在美國專利4608764號(hào)和美國專利4848094號(hào)中進(jìn)行描述。噴霧-冷凍-干燥方法例如在美國專利5208998號(hào)中進(jìn)行描述。其它噴霧干燥技術(shù)在美國專利6253463、6001336,5260306號(hào)和PCT國際申請(qǐng)W091/16882和W096/09814號(hào)中進(jìn)行描述。[0059]凍干技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。凍干是產(chǎn)品在冷凍狀態(tài)并真空下(真空下的冰升華)通過微熱干燥進(jìn)行的脫水技術(shù)。這些條件使產(chǎn)品穩(wěn)定，使氧化和其它降解過程最小化。冷凍干燥的條件允許在低溫下實(shí)施方法，因此可以保護(hù)熱不穩(wěn)定的產(chǎn)品。冷凍干燥的步驟包括預(yù)處理、冷凍、一次干燥和二次干燥。預(yù)處理包括在冷凍之前處理產(chǎn)品的任何方法。這可以包括濃縮產(chǎn)品、劑型修正(即加入組分以增加穩(wěn)定性和/或改善處理)、減少高蒸氣壓溶劑或增加表面積。預(yù)處理的方法包括:冷凍濃縮、溶液相濃縮和特別地配制以保持產(chǎn)品外觀或?yàn)榉磻?yīng)性產(chǎn)品提供凍干保護(hù)，并且例如在美國專利6，199，297號(hào)中所描述?！皹?biāo)準(zhǔn)的”凍干條件例如美國專利5，031，336號(hào)和“FreezeDryingofPharmaceuticals”(DeLuca,PatrickP.,J.Vac.Sc1.Technol.，14卷，第I期，1977年一月/二月)和“TheLyophilizationofPharmaceuticals:ALiteratureReview，，(Williams,N.A.和G.P.Polli,JournalofParenteralScienceandTechnology,38卷，第2期，1984年三月/四月)中所描述。[0060]在特定方面，凍干循環(huán)可以部分地在胰島素的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)之上進(jìn)行，以引起質(zhì)量的塌縮從而形成含有殘留水分的致密結(jié)塊。在其它實(shí)施方案中，凍干循環(huán)在胰島素的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度之下實(shí)施，以避免塌縮從而獲得胰島素顆粒的完全干燥。[0061]C.非質(zhì)子極性溶劑[0062]在獲得具有其選定的pH記憶的經(jīng)干燥的胰島素之后，經(jīng)干燥的胰島素然后可以被重構(gòu)并溶解到非質(zhì)子極性溶劑中。非質(zhì)子極性溶劑包括缺乏酸性氫的那些溶劑。該特征有助于保持經(jīng)干燥的胰島素的PH記憶。非質(zhì)子極性溶劑的非限制性實(shí)例包括二甲基亞砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺(DMA)、碳酸亞丙酯及其混合物。這些溶劑中的每一種都是眾所周知的，并且可從各種來源商購得到。[0063]如實(shí)例中所示的，溶解的胰島素導(dǎo)致穩(wěn)定的胰島素單體和二聚體形式，這可以導(dǎo)致超快或快速作用的胰島素產(chǎn)品。另外，如上所述，不希望受理論束縛，據(jù)認(rèn)為溶解的胰島素在非質(zhì)子極性溶劑中是“亞穩(wěn)的”。據(jù)認(rèn)為該亞穩(wěn)定性來源于胰島素的pH記憶和胰島素在非質(zhì)子極性溶劑內(nèi)的溶解度的結(jié)合。[0064]D.減少胰島素聚集的成分[0065]可以在制劑中加入附加成分以進(jìn)一步降低胰島素的單體和/或二聚體形式聚集的可能性。在用藥之前(例如在儲(chǔ)存過程中)或用藥之后(例如在用藥之后并且在吸收到對(duì)象的血流中之前)，可以用這些成分減少制劑內(nèi)的聚集。這類可以使用的成分包括脲、鹽酸胍、氨基酸、糖、多元醇、聚合物、酸、表面活性劑或其混合物。這樣的成分可以從各種來源商購獲得。[0066]E.制劑的水含量[0067]由于使用相對(duì)大量的非質(zhì)子極性溶劑，本發(fā)明的制劑可以具有低水分或水含量。這可以通過降低制劑內(nèi)胰島素的單體和二聚體聚集的可能性來提供所述單體和二聚體形式的額外穩(wěn)定性。例如，本發(fā)明的制劑可以具有以制劑的重量或體積計(jì)20%、19%、18%、17%,16%,15%,10%,9%,8%,7%,6%,5%,4%,3%,2%,1%>0.5%,0.25%,0.10.05%,0.025%,0.01%至0%的水分或水含量。然而，在一些實(shí)例中，水還可以用作共溶劑，例如當(dāng)本發(fā)明的制劑包含胰島素和普蘭林肽時(shí)。[0068]F.胰島素/普蘭林肽共制劑[0069]糊精，一種通常響應(yīng)于葡萄糖攝入而與胰島素一起分泌的β-細(xì)胞激素，在I型糖尿病患者中也完全不足。糊精表現(xiàn)出多個(gè)葡萄糖調(diào)節(jié)作用，這些作用是對(duì)胰島素餐后葡萄糖調(diào)節(jié)作用的補(bǔ)充。天然的人類糊精由于其多個(gè)理化性質(zhì)而不適合用于臨床或藥用，這些性質(zhì)包括溶解度差、自聚集性以及形成淀粉樣纖維和淀粉樣斑塊。[0070]普蘭林肽為通過選擇性地用脯氨酸取代Ala-25、Ser-28和Ser-29研制出的一種人類糊精的類似物。其解決了人類糊精的不理想的物理化學(xué)性質(zhì)，而保留了其重要的代謝作用。普蘭林肽普遍地可從各種商業(yè)來源(例如來自AmylinPharmaceuticals的Symlin?)獲得。[0071]普蘭林肽通常經(jīng)由除了胰島素之外的單獨(dú)皮下注射來施用。這種用法已被一些患者的亞群體所接受，但是采取額外的注射對(duì)已經(jīng)每天多次注射胰島素的患者造成了明顯的負(fù)擔(dān)。另外，一些患者可能無意地或有意地在注射前將普蘭林肽和胰島素混合到相同的注射器中，從而引發(fā)有害或不期望的事件。[0072]普蘭林肽和胰島素分開施用的原因之一是這些藥物在它們的緩沖體系中有沖突，使混合的制劑難以相容。例如，幾種胰島素和胰島素類似物具有在5至6范圍內(nèi)的等電點(diǎn)，從而在大約7的pH進(jìn)行配制。普蘭林肽具有>10.5的等電點(diǎn)，在低pH下是最佳穩(wěn)定的，并且一般在大約4的pH進(jìn)行配制。普蘭林肽和胰島素制劑在不同的pH和不同緩沖能力條件下的相互作用通常導(dǎo)致可溶的胰島素組分沉淀或結(jié)晶的胰島素組分溶解。普蘭林肽和短效及長效胰島素制劑的體外研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)不同量的胰島素與固定量的普蘭林肽混合時(shí)胰島素溶解度有很大變化。[0073]本發(fā)明解決由共制劑造成的這些問題。例如，普蘭林肽可以在緩沖體系中干燥，使得其具有在I至5之間，或2、3或4，或更特別地約2的pH記憶。胰島素可以在相同或單獨(dú)的緩沖體系中干燥，使得其具有約I至4、I至3或大約2，或者6至8或約7的pH記憶。然后，干燥的普蘭林肽和胰島素可以在相同的非質(zhì)子極性溶劑內(nèi)重構(gòu)和溶解，并在相同制劑內(nèi)維持其各自的溶解度和穩(wěn)定性特征。因此，僅需要單個(gè)制劑來向?qū)ο笫┯闷仗m林肽和胰島素兩者。這種共制劑會(huì)降低對(duì)象對(duì)更接近地模擬餐后血糖水平升高的自然生理反應(yīng)的治療的抵觸。在共制劑的一些具體實(shí)例中，胰島素PH記憶可以為約2，普蘭林肽pH記憶可以為約2。[0074]除了普蘭林肽之外，也可以在本發(fā)明的情況下使用其它糊精激動(dòng)劑。這樣的激動(dòng)劑可以是重組的或從天然源中純化的。糊精激動(dòng)劑可以是人類或非人類的。糊精激動(dòng)劑還可以是糊精類似物，其可以基于人類糊精的氨基酸序列，但是具有一個(gè)或更多個(gè)氨基酸差異，或是化學(xué)改性的糊精或糊精類似物。糊精激動(dòng)劑的劑量取決于其生物利用度和待治療的患者?！叭祟惡卑ㄓ梢认俜置诘娜祟愲募に?，無論是從天然源分離的，通過合成肽化學(xué)制備的，還是通過基因改變的微生物制備的?！昂愃莆铩睘樽儺惖暮?，其不同于由胰腺分泌的糊精，但是仍可用于人體以用于發(fā)揮與天然糊精相同的作用。[0075]G.劑量[0076]任何合適劑量的胰島素、普蘭林肽或兩者的組合可以利用本發(fā)明的制劑來使用。當(dāng)然，用藥劑量會(huì)根據(jù)已知因素改變，例如:特定的藥物、鹽或其組合的藥效動(dòng)力學(xué)特性；對(duì)象的年齡、健康狀況或體重；癥狀的性質(zhì)和程度；治療劑和患者的代謝特性，同期治療的種類；治療的頻率；或預(yù)期效果。通常，制劑中可含有約0.5mg/mL至約100mg/mL的胰島素。在一些實(shí)施方案中，胰島素中胰島素含量為約3mg/mL至約100mg/mL、3mg/mL至約10mg/mL、10mg/mL至約50mg/mL、或約50mg/mL至約100mg/mL。在特定方面,制劑內(nèi)胰島素的量在約3mg/mL至約10mg/mL的范圍,這可導(dǎo)致大部分胰島素以單體形式存在(參見實(shí)施例中的數(shù)據(jù))。在其它實(shí)例中，制劑內(nèi)胰島素的量在約10mg/mL至約50mg/mL的范圍,這導(dǎo)致大部分的胰島素以二聚體形式存在(參見實(shí)施例中的數(shù)據(jù))。在一些實(shí)施方案中，普蘭林肽以0.1mg/mL至10mg/mL或0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL、0.9mg/mL、lmg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL或9mg/mL或根據(jù)需要的量存在于制劑中。另外，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言明顯的是，用藥劑量依據(jù)所使用的藥物和治療的疾病、失調(diào)或病情的不同而變化，制劑中藥物的濃度會(huì)根據(jù)藥物溶解度、劑量和施用方法而變化。[0077]H.額外成分/藥物賦形劑[0078]本發(fā)明的制劑可以包含附加成分/藥物賦形劑，以進(jìn)一步開發(fā)具有期望的觸覺性能、粘度范圍的配方，或者進(jìn)一步保護(hù)胰島素或普蘭林肽。例如，制劑可以進(jìn)一步包含抗氧化劑(其非限制性實(shí)例包括抗壞血酸、半胱氨酸、蛋氨酸、硫代甘油、硫代硫酸鈉、亞硫酸鹽、ΒΗΤ、BHA、抗壞血酸棕櫚酸酯、沒食子酸丙酯或維生素E或其任意組合)、螯合劑(其非限制性實(shí)例包括EDTA、EGTA、酒石酸及其鹽、甘油和檸檬酸及其鹽)；和/或防腐劑(其非限制性實(shí)例包括烷基醇、芐醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯及其混合物)中的任何一種、任意組合或全部。另外，本發(fā)明的制劑還可以包含非水質(zhì)子溶劑(其非限制性實(shí)例包括聚乙二醇(PEG)、丙二醇(PG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、甲氧基丙二醇(MPEG)、甘油、四氫呋喃聚乙二醇醚(glycofurol)及其混合物)。[0079]1.試劑盒/容器[0080]由于在本發(fā)明的特定方面使用，本發(fā)明還涉及試劑盒。例如，本發(fā)明的制劑可以容納在試劑盒內(nèi)。試劑盒可以包括容器。在一個(gè)方面，例如，制劑可以包含在已準(zhǔn)備好用于對(duì)象的腸胃外施用而無需重構(gòu)或稀釋制劑的容器內(nèi)。也就是說，待使用的制劑可以儲(chǔ)存在容器中并在需要時(shí)立即使用。儲(chǔ)存容器可以是注射器、筆式注射裝置、自動(dòng)注射器裝置或泵。合適的筆式/自動(dòng)注射器裝置包括但不限于由Becton-Dickenson、SwedishHealthcareLimited(SHLGroup)、YpsoMedAg等制造的那些筆式/自動(dòng)注射裝置。合適的泵裝置包括但不限于由TandemDiabetesCare,Inc.>DelsysPharmaceuticals等制造的那些栗裝置。[0081]或者，本發(fā)明的試劑盒可以包括多個(gè)容器或容器內(nèi)的多個(gè)隔室。每一容器或多個(gè)隔室可以用于單獨(dú)儲(chǔ)存例如生物相容的非水溶劑和小分子藥物。于是，當(dāng)需要時(shí)，溶劑和藥物可以混合到一起，并立即使用或根據(jù)需求儲(chǔ)存一段時(shí)間。[0082]J.制備制劑的方法[0083]本發(fā)明的制劑可以通過使用以下步驟來制備。這些步驟用于制備本說明書的實(shí)施例中的制劑。[0084]1.通過將胰島素粉末(例如重組的人類胰島素，Sigma-Aldrich，圣路易斯，MO)以10mg/mL的胰島素濃度溶解到期望的水性緩沖劑(包括特定的緩沖物質(zhì)、濃度和pH;例如檸檬酸鹽，PH2.0)中來制備胰島素水溶液。[0085]2.普蘭林月太(例如AmbioPharm,Inc.,BeechIsland,SC和CSBio,Inc.,MenloPark,CA，其用于本說明書的實(shí)施例)可以用相似方法制備，不同的是普蘭林肽可以以2mg/mL的濃度溶解于水性緩沖劑中。[0086]3a.根據(jù)下表1中或與其相似的凍干循環(huán)，將胰島素或普蘭林肽溶液分裝到干凈的HPLC小瓶或凍干瓶中進(jìn)行凍干。[0087]表1[0088]【權(quán)利要求】1.一種用于腸胃外施用的制劑，其包含:(a)包含在I至4之間或在6至8之間的pH記憶的胰島素；和(b)非質(zhì)子極性溶劑，其中所述胰島素溶解于所述非質(zhì)子極性溶劑中，其中溶解的胰島素包括穩(wěn)定的胰島素單體或二聚體形式或其混合物，和其中所述制劑的水含量等于或小于15%w/vo2.權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述胰島素的所述pH記憶在I至4之間或在I至3之間，或者為約2。3.權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述胰島素的pH記憶在6至8之間，或者為約7。4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述非質(zhì)子極性溶劑為二甲基亞砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)、或碳酸亞丙酯、或其混合物。5.權(quán)利要求4所述的制劑，其中所述非質(zhì)子極性溶劑為二甲基亞砜(DMSO)。6.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的制劑,其中所述制劑包含3mg/ml至50mg/ml、3mg/ml至10mg/ml或10mg/ml至50mg/ml的胰島素。7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述溶解的胰島素的大部分為單體形式。8.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述溶解的胰島素的大部分為二聚體形式。9.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的制劑，其還包含能夠減少胰島素的單體或二聚體形式的聚集的成分。10.權(quán)利要求9所述的制劑，其中所述能夠減少胰島素的單體或二聚體形式的聚集的成分為脲、鹽酸胍、氨基酸、糖、多元醇、聚合物、酸、或表面活性劑、或其混合物。11.權(quán)利要求10所述的制劑，其中所述酸為乙酸、抗壞血酸、檸檬酸、谷氨酸、天冬氨酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、或己二酸、或其混合物。12.權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的制劑，其還包含共溶劑。13.權(quán)利要求12所述的制劑，其中所述共溶劑為水。14.權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述制劑不包含鋅，或者其中在所述制劑中存在的鋅與螯合劑結(jié)合。15.權(quán)利要求1至14中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述胰島素已經(jīng)在非揮發(fā)性緩沖劑中預(yù)干燥，所述緩沖劑具有在I至4之間或在6至8之間的pH范圍。16.權(quán)利要求15所述的制劑，其中所述非揮發(fā)性緩沖劑為甘氨酸緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑、或磷酸鹽緩沖劑、或其混合物。17.權(quán)利要求15至16中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述緩沖劑包含螯合劑。18.權(quán)利要求14或權(quán)利要求17所述的制劑，其中所述螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇四乙酸(EGTA)、酒石酸、甘油或檸檬酸。19.權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)所述的制劑，其還包含能夠使所述非質(zhì)子極性溶劑的凝固點(diǎn)下降到約0°C的成分。20.權(quán)利要求19所述的制劑，其中所述能夠使所述非質(zhì)子極性溶劑的凝固點(diǎn)下降到約(TC的成分為水、糖、糖醇或其混合物。21.權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述胰島素為未改性的人類胰島素。22.權(quán)利要求1至21中任一項(xiàng)所述的制劑，其還包含溶解于所述制劑中的糊精類似物。23.權(quán)利要求22所述的制劑，其中所述糊精類似物為普蘭林肽。24.權(quán)利要求23所述的制劑，其中所述普蘭林肽具有約2的pH記憶，或者其中所述普蘭林肽具有約2的pH記憶，并且所述胰島素具有約2的pH記憶。25.權(quán)利要求24所述的制劑，其中所述普蘭林肽已經(jīng)在非揮發(fā)性緩沖劑中預(yù)干燥，所述緩沖劑具有約2的pH。26.權(quán)利要求22至25中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述制劑的水含量在5%至15%w/V、或7%至12%w/v、或8%至10%w/v之間，或者為約9%w/v。27.權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述制劑為液體形式。28.權(quán)利要求27所述的制劑，其中所述制劑為溶液。29.權(quán)利要求1至28中任一項(xiàng)所述的制劑，其中當(dāng)所述制劑在室溫下儲(chǔ)存一個(gè)月時(shí)，所述制劑內(nèi)至少90%的胰島素保持化學(xué)和物理穩(wěn)定。30.權(quán)利要求1至29中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述制劑包含在容器內(nèi)。31.權(quán)利要求30所述的制劑，其中所述容器為注射器、筆式注射裝置、自動(dòng)注射器裝置、泵或灌注袋。32.權(quán)利要求1至31中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述非質(zhì)子極性溶劑為所述制劑的連續(xù)相。33.權(quán)利要求1至32中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述制劑包含至少75%、80%、85%、90%或95%w/v的所述非質(zhì)子極性溶劑。34.權(quán)利要求1至33中任一項(xiàng)所述的制劑，其中所述溶解的胰島素為亞穩(wěn)的。35.一種用于降低血糖水平的方法，其包括以有效降低對(duì)象的血糖水平的量向需要它的對(duì)象施用權(quán)利要求1至34所述的制劑中的任一種。36.權(quán)利要求35所述的方法，其中所述對(duì)象的血糖水平在施用后30分鐘、60分鐘或90分鐘內(nèi)降低。37.權(quán)利要求35至36中任一項(xiàng)所述的方法，其中在所述對(duì)象中的早期l/2Tmax血液胰島素水平在施用后30至60分鐘內(nèi)出現(xiàn)。38.權(quán)利要求35至37中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述對(duì)象已經(jīng)診斷為患有I型或II型糖尿病。39.權(quán)利要求35至38中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述制劑在所述對(duì)象進(jìn)食前10分鐘、5分鐘或I分鐘內(nèi)或在所述對(duì)象進(jìn)食后I分鐘、5分鐘或10分鐘內(nèi)施用。40.一種制備權(quán)利要求1至34中任一項(xiàng)所述的制劑的方法，其包括:(a)干燥含有胰島素和非揮發(fā)性緩沖劑的混合物以獲得經(jīng)干燥的胰島素，其中所述經(jīng)干燥的胰島素具有在I至4或6至8之間的pH記憶；和(b)使所述經(jīng)干燥的胰島素在非質(zhì)子極性溶劑中重構(gòu)，其中所述胰島素溶解于所述非質(zhì)子極性溶劑中，其中所溶解的胰島素包括穩(wěn)定的胰島素單體或二聚體形式或其混合物，和其中所述制劑的水含量等于或小于15%w/v。41.權(quán)利要求40所述的方法，其中所述胰島素的pH記憶在I至4之間或在I至3之間，或?yàn)榧s2。42.權(quán)利要求40所述的方法，其中所述胰島素的pH記憶在6至8之間，或者為約7。43.權(quán)利要求40至41中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述非質(zhì)子極性溶劑為二甲基亞砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)、或碳酸亞丙酯、或其混合物。44.權(quán)利要求43所述的方法，其中所述非質(zhì)子極性溶劑為二甲基亞砜(DMSO)。45.權(quán)利要求40至44中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述制劑包含3mg/ml至50mg/ml、3mg/ml至10mg/ml或10mg/ml至50mg/ml的胰島素，或50mg/ml至100mg/ml的胰島素。46.權(quán)利要求40至45中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述溶解的胰島素的大部分為單體形式或二聚體形式。47.權(quán)利要求40至46中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括:(c)干燥含有糊精類似物和與步驟(a)中相同的非揮發(fā)性緩沖劑或第二非揮發(fā)性緩沖劑的混合物以獲得經(jīng)干燥的糊精類似物；和(b)使所述經(jīng)干燥的糊精類似物與所述干燥的胰島素一起在所述非質(zhì)子極性溶劑中重構(gòu)，其中所述經(jīng)干燥的糊精類似物溶解于所述非質(zhì)子極性溶劑中。48.權(quán)利要求47所述的方法，其中所述糊精類似物為普蘭林肽，其中所述普蘭林肽具有約2的pH記憶，或者其中所述普蘭林肽具有約2的pH記憶，并且所述胰島素具有約2的pH記憶。49.權(quán)利要求47至48中任一項(xiàng)所述的方法，其中非揮發(fā)性緩沖劑具有約2的pH范圍。50.權(quán)利要求46至49中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括添加在5%至15%w/v之間的制劑水作為共溶劑?！疚臋n編號(hào)】A61K47/22GK103930096SQ201280053399【公開日】2014年7月16日申請(qǐng)日期:2012年10月31日優(yōu)先權(quán)日:2011年10月31日【發(fā)明者】史蒂文·普萊斯特斯基,南?！に箍铺厣暾?qǐng)人:Xeris藥物公司