專利名稱：新型雙環(huán)核苷類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型雙環(huán)核苷類似物，它可用于制備具有優(yōu)良的反義或反基因活性，且在體內(nèi)穩(wěn)定的非天然型寡核苷酸類似物。
另外，本發(fā)明涉及含有1或2個(gè)以上該雙環(huán)核苷結(jié)構(gòu)的新型寡核苷酸類似物。
進(jìn)而，本發(fā)明涉及具有抗艾滋病(AIDS)活性的新型的改性雙環(huán)核苷類似物。
但是，已知天然型寡核苷酸可被血液中和細(xì)胞內(nèi)存在的各種核酸酶迅速降解掉。
為了克服這些缺點(diǎn)，制備了種種非天然型寡核苷酸類似物，并嘗試將它們作為醫(yī)藥而進(jìn)行開發(fā)。已知這些嘗試有，例如將與寡核苷酸磷酸二酯鍵內(nèi)的磷原子結(jié)合的氧原子置換為硫原子，將該氧原子置換為甲基，將該氧原子置換為硼原子，寡核苷酸的糖部分或堿基部分進(jìn)行化學(xué)改性等。
更具體地說，ISIS公司開發(fā)了硫酯(thioate)型寡核苷酸ISIS2922，并作為人細(xì)胞肥大病毒性視網(wǎng)膜炎的治療藥，以VitraveneTM(商標(biāo)名)在美國(guó)銷售。
但是，考慮到上述非天然型寡核苷酸類似物的反義或反基因活性的強(qiáng)度，即與mRNA或DNA形成穩(wěn)定的互補(bǔ)鏈的能力，對(duì)于各種核酸酶的穩(wěn)定性，與體內(nèi)各種蛋白質(zhì)非特異性結(jié)合導(dǎo)致的副作用等，還需要一種具有優(yōu)良的反義或反基因活性，在體內(nèi)穩(wěn)定的、且副作用的表現(xiàn)少的非天然型寡核苷酸類似物。
與本發(fā)明化合物有關(guān)的化學(xué)結(jié)構(gòu)，即具有下述的二氧雜雙環(huán)[2，2，1]庚烷結(jié)構(gòu)的化合物，已在WO98/39352號(hào)中報(bào)道過，但該化合物因核糖的3’位取代基而與本發(fā)明化合物不同。并且，對(duì)于該化合物是否具有抗AIDS活性還不能夠確定。 上述式中，B0為嘧啶或嘌呤核酸堿基或它們的類似物，X及Y相同或不同，為氫、烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基、?；蚣坠柰榛?。
本發(fā)明的課題是提供新型的雙環(huán)核苷類似物，它可用于制備具有優(yōu)良的反義或反基因活性，且在體內(nèi)穩(wěn)定的非天然型寡核苷酸類似物。
其次，本發(fā)明的課題是提供含有1或2個(gè)以上該雙環(huán)核苷結(jié)構(gòu)的新型寡核苷酸類似物。
再者，本發(fā)明的課題是提供具有抗AIDS活性的新型寡核苷酸類似物。
本發(fā)明的發(fā)明人為了解決上述課題悉心研究的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)具有2’-O、4’-C-亞甲基的新型雙環(huán)核苷類似物是制備具有優(yōu)良的反義或反基因活性、且在體內(nèi)穩(wěn)定的非天然型寡核苷酸類似物的重要中間體；其次，發(fā)現(xiàn)含有1或2個(gè)以上該雙環(huán)核苷結(jié)構(gòu)的新型寡核苷酸類似物具有優(yōu)良的反義或反基因活性、且在體內(nèi)穩(wěn)定；再者，發(fā)現(xiàn)該雙環(huán)核苷類似物具有優(yōu)良的抗AIDS活性，進(jìn)而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明化合物中，優(yōu)選的是，2)R1為氫原子、脂肪族?；?、芳香族酰基、甲硅烷基、用1～3個(gè)芳基取代的甲基、或用芳環(huán)被低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵素或氰基取代的1～3個(gè)芳基取代的甲基的化合物；3)R1為氫原子、甲硅烷基、用1～3個(gè)芳基取代的甲基、或用芳環(huán)被低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵素或氰基取代的1～3個(gè)芳基取代的甲基的化合物；4)R1為氫原子、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、苯甲基、三苯基甲基、4-甲氧基苯甲基、4-甲氧基苯基二苯基甲基、4，4’-二甲氧基三苯基甲基或4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基的化合物5)R2為疊氮基、氨基、或式NH-R3表示的基團(tuán)(式中，R3為脂肪族?；⒎枷阕艴；?、用1～3個(gè)芳基取代的甲基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、用芳環(huán)被鹵素或氰基取代的1～3個(gè)芳基取代的甲基、甲硅烷基、氨基亞磷酸酯(phosphoroamidite)基、膦?；⒘姿峄蛴煤怂岷铣杀Ｗo(hù)基保護(hù)的磷酸基)的化合物；6)R2為疊氮基、氨基、或式NH-R3表示的基團(tuán)(式中，R3為乙酰基、三氟乙?；?、苯甲酰基、苯甲基、對(duì)甲氧基苯甲基、叔丁基二苯基甲硅烷基、式-P(OC2H4CN)(NCH(CH3)2)表示的基團(tuán)、式-P(OCH3)(NCH(CH3)2)表示的基團(tuán)、膦?；?、或2-氯苯基或4-氯苯基磷酸基)的化合物；7)R2為疊氮基或氨基的化合物；8)B為6-氨基嘌呤-9-基(即腺嘌呤基)、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的6-氨基嘌呤-9-基、2，6-二氨基嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2，6-二氨基嘌呤-9-基、2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、2-氨基-6-羥基嘌呤-9-基(即鳥嘌呤基)、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-羥基嘌呤-9-基、6-氨基-2-甲氧基嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的6-氨基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-氨基-2-氯嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的6-氨基-2-氯嘌呤-9-基、6-氨基-2-氟嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的6-氨基-2-氟嘌呤-9-基、2，6-二甲氧基嘌呤-9-基、2，6-二氯嘌呤-9-基、6-巰基嘌呤-9-基、巰基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的6-巰基嘌呤-9-基、2-氧代-4-氨基-1，2-二氫嘧啶-1-基(即胞嘧啶基)、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氧代-4-氨基-1，2-二氫嘧啶-1-基、4-氨基-2-氧代-5-氟-1，2-二氫嘧啶-1-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的4-氨基-2-氧代-5-氟-1，2-二氫嘧啶-1-基、4-氨基-2-氧代-5-氯-1，2-二氫嘧啶-1-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的4-氨基-2-氧代-5-氯-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧代-4-甲氧基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧代-4-巰基-1，2-二氫嘧啶-1-基、巰基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氧代-4-巰基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2，4-二羥基嘧啶-1-基(即尿嘧啶基)、2，4-二羥基-5-甲基嘧啶-1-基(即胸腺嘧啶基)、4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氫嘧啶-1-基或氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氫嘧啶-1-基的化合物；9)B為6-苯甲?；被堰?9-基、腺嘌呤基、2-苯甲?；被?6-羥基嘌呤-9-基、鳥嘌呤基、2-氧代-4-苯甲?；被?1，2-二羥基嘧啶-1-基、胞嘧啶基、尿嘧啶基、胸腺嘧啶基的化合物；也優(yōu)選R1選自上述2)或4)、R2選自上述5)至7)、B選自上述8)至9)而得到的任意的組合，特別優(yōu)選2)、5)及8)的組合、3)、6)及8)的組合及4)、6)及9)的組合。
本發(fā)明的新型寡核苷酸類似物為，1)含有1或2個(gè)以上通式(1a)表示的結(jié)構(gòu)的寡核苷酸類似物或其可藥用鹽。 [式中，B為可以具有選自下述α組的取代基的嘌呤-9-基或2-氧代-1，2-二氫嘧啶-1-基]但是，含有2個(gè)以上上述結(jié)構(gòu)時(shí)，該結(jié)構(gòu)之間的B相同或不同。(α組)羥基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的羥基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷氧基、巰基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的巰基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基硫基、氨基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的氨基、用碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基取代的氨基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基、及鹵素原子。
在此，“寡核苷酸類似物”是指天然型的寡核苷酸中核苷單位被1或2個(gè)以上上述結(jié)構(gòu)(1a)取代的非天然型的化合物，這種類似物中，例如也可以含有糖部分被改性的糖衍生物、磷酸二酯鍵部分被硫酯化的硫酯衍生物、末端的磷酸部分被酯化的酯化物、嘌呤堿基上的氨基被酰胺化的酰胺化物作為其他核苷或核苷酸單位。
本發(fā)明的新型寡核苷酸類似物中，優(yōu)選的是，2)B為6-氨基嘌呤-9-基(即腺嘌呤基)、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的6-氨基嘌呤-9-基、2，6-二氨基嘌呤-9-基、2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、2-氨基-6-羥基嘌呤-9-基(即鳥嘌呤基)、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-羥基嘌呤-9-基、氨基及羥基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-羥基嘌呤-9-基、6-氨基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-氨基-2-氯嘌呤-9-基、6-氨基-2-氟嘌呤-9-基、2，6-二甲氧基嘌呤-9-基、2，6-二氯嘌呤-9-基、6-巰基嘌呤-9-基、2-氧代-4-氨基-1，2-二氫嘧啶-1-基(即胞嘧啶基)、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氧代-4-氨基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧代-4-氨基-5-氟-1，2-二氫嘧啶-1-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氧代-4-氨基-5-氟-1，2-二氫嘧啶-1-基、4-氨基-2-氧代-5-氯-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧代-4-甲氧基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧代-4-巰基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧代-4-羥基-1，2-二氫嘧啶-1-基(即尿嘧啶基)、2-氧代-4-羥基-5-甲基-1，2-二氫嘧啶-1-基(即胸腺嘧啶基)、4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氫嘧啶-1-基(即5-甲基胞嘧啶基)或氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氫嘧啶-1-基的寡核苷酸類似物或其可藥用鹽；3)B為6-苯甲?；被堰?9-基、腺嘌呤基、2-異丁?；被?6-羥基嘌呤-9-基、鳥嘌呤基、2-氧代-4-苯甲?；被?1，2-二氫嘧啶-1-基、胞嘧啶基、2-氧代-5-甲基-4-苯甲?；被?1，2-二氫嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶基、尿嘧啶基或胸腺嘧啶基的寡核苷酸類似物或其可藥用鹽。
上述R1的定義中“羥基的核酸合成保護(hù)基”只要在核酸合成時(shí)可穩(wěn)定地保護(hù)羥基，就沒有特殊的限定，例如甲?；⒁阴；?、丙?；⒍□；?、異丁?；⑽烊┗?、三甲基乙?；?、戊?；愇祯；⑿刘；⒐秕；?、8-甲基壬?；?-乙基辛?；?，7-二甲基辛?；⑹煌轷；⑹轷；⑹轷；?4-甲基十五烷?；?、13，13-二甲基十四烷?；?、1-甲基十七烷?；⑹磐轷；?、二十烷酰基及二十一烷?；韧榛驶?，琥珀?；?、戊二酰基、己二?；若然榛驶?，氯乙?；?、二氯乙?；?、三氯乙?；?、三氟乙?；塞u代低級(jí)烷基羰基，甲氧基乙酰基等低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基羰基，(E)-2-甲基-2-丁烯酰基等不飽和烷基羰基等“脂肪族?；保槐郊柞；?、α-萘甲?；ⅵ?萘甲?；确蓟驶?-溴苯甲?；?、4-氯苯甲?；塞u代芳基羰基，2，4，6-三甲基苯甲?；?、4-甲苯?；鹊图?jí)烷基化芳基羰基，4-茴香?；鹊图?jí)烷氧基化芳基羰基，2-羧基苯甲?；?、3-羧基苯甲?；?、4-羧基苯甲?；若然蓟驶?，4-硝基苯甲酰基、2-硝基苯甲酰基等硝基化芳基羰基，2-(甲氧基羰基)苯甲酰基等低級(jí)烷氧基羰基化芳基羰基、4-苯基苯甲?；确蓟蓟驶取胺枷阕艴；?；四氫吡喃-2-基、3-溴四氫吡喃-2-基、4-甲氧基四氫吡喃-4-基、四氫噻喃-2-基、4-甲氧基四氫噻喃-4-基等“四氫吡喃基或四氫噻喃基”；四氫呋喃-2-基、四氫噻吩-2-基等“四氫呋喃基或四氫噻吩基”；三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、異丙基二甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、甲基二異丙基甲硅烷基、甲基二叔丁基甲硅烷基、三異丙基甲硅烷基等三低級(jí)烷基甲硅烷基，二苯基甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、二苯基異丙基甲硅烷基、苯基二異丙基甲硅烷基等被1～2個(gè)芳基取代的三低級(jí)烷基甲硅烷基等“甲硅烷基”；甲氧基甲基、1，1-二甲基-1-甲氧基甲基、乙氧基甲基、丙氧基甲基、異丙氧基甲基、丁氧基甲基、叔丁氧基甲基等“低級(jí)烷氧基甲基”；2-甲氧基乙氧基甲基等“低級(jí)烷氧基化低級(jí)烷氧基甲基”；2，2，2-三氯乙氧基甲基、二(2-氯乙氧基)甲基等“鹵代低級(jí)烷氧基甲基”；1-乙氧基乙基、1-(異丙氧基)乙基等“低級(jí)烷氧基化乙基”；2，2，2-三氯乙基等“鹵化乙基”；苯甲基、α-萘基甲基、β-萘基甲基、二苯基甲基、三苯基甲基、α-萘基二苯基甲基、9-蒽基甲基等“被1～3個(gè)芳基取代的甲基”；4-甲基苯甲基、2，4，6-三甲基苯甲基、3，4，5-三甲基苯甲基、4-甲氧基苯甲基、4-甲氧基苯基二苯基甲基、4，4’-二甲氧基三苯基甲基、4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基、2-硝基苯甲基、4-硝基苯甲基、4-氯苯甲基、4-溴苯甲基、4-氰基苯甲基等“用芳環(huán)被低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵素或氰基取代的1～3個(gè)芳基取代的甲基”；甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、異丁氧基羰基等“低級(jí)烷氧基羰基”；2，2，2-三氯乙氧基羰基、2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基等“被鹵素或三低級(jí)烷基甲硅烷基取代的低級(jí)烷氧基羰基”；乙烯氧基羰基、丙烯氧基羰基等“鏈烯氧基羰基”；苯甲氧基羰基、4-甲氧基苯甲氧基羰基、3，4-二甲氧基苯甲氧基羰基、2-硝基苯甲氧基羰基、4-硝基苯甲氧基羰基等“芳環(huán)可以被1～2個(gè)低級(jí)烷氧基或硝基取代的芳烷氧基羰基”。
優(yōu)選脂肪族?；?、芳香族?；?、被1～3個(gè)芳基取代的甲基、用芳環(huán)被低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵素或氰基取代的1～3個(gè)芳基取代的甲基、或甲硅烷基，更優(yōu)選乙?；⒈郊柞；⒈郊谆?、對(duì)甲氧基苯甲基、二甲氧基三苯甲基、單甲氧基三苯甲基或叔丁基二苯基甲硅烷基。
上述R1及R3的定義中“用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的磷酸基”的核酸合成保護(hù)基只要在核酸合成時(shí)可穩(wěn)定地保護(hù)磷酸基，就沒有特殊的限定，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正已基、異己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、2-乙基丁基等“低級(jí)烷基”；2-氰基乙基、2-氰基-1，1-二甲基乙基等“氰基化低級(jí)烷基”；2-甲基二苯基甲硅烷基乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-三苯基甲硅烷基乙基等“被甲硅烷基取代的乙基”；2，2，2-三氯乙基、2，2，2-三溴乙基、2，2，2-三氟乙基、2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基等“鹵化低級(jí)烷基”；乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、1-甲基-1-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、2-乙基-2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1-甲基-2-丁烯基、1-甲基-1-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-乙基-2-丁烯基、3-丁烯基、1-甲基-3-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1-乙基-3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、2-甲基-2-戊烯基、3-戊烯基、1-甲基-3-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基、2-甲基-4-戊烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基等“低級(jí)鏈烯基”；環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、降冰片基、金剛烷基等“環(huán)烷基”；2-氰基丁烯基等“氰基低級(jí)鏈烯基”；苯甲基、α-萘基甲基、β-萘基甲基、茚基甲基、菲基甲基、蒽基甲基、二苯基甲基、三苯基甲基、1-苯乙基、2-苯乙基、1-萘基乙基、2-萘基乙基、1-苯基丙基、2-苯基丙基、3-苯基丙基、1-萘基丙基、2-萘基丙基、3-萘基丙基、1-苯基丁基、2-苯基丁基、3-苯基丁基、4-苯基丁基、1-萘基丁基、2-萘基丁基、3-萘基丁基、4-萘基丁基、1-苯基戊基、2-苯基戊基、3-苯基戊基、4-苯基戊基、5-苯基戊基、1-萘基戊基、2-萘基戊基、3-萘基戊基、4-萘基戊基、5-萘基戊基、1-苯基己基、2-苯基己基、3-苯基己基、4-苯基己基、5-苯基己基、6-苯基己基、1-萘基己基、2-萘基己基、3-萘基己基、4-萘基己基、5-萘基己基、6-萘基己基等“芳烷基”；4-氯苯甲基、2-(4-硝基苯基)乙基、鄰硝基苯甲基、4-硝基苯甲基、2，4-二硝基苯甲基、4-氯-2-硝基苯甲基等“芳環(huán)被硝基、鹵素原子取代的芳烷基”；苯基、茚基、萘基、菲基、蒽基等“芳基”；2-甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2-氯苯基、4-氯苯基、2，4-二氯苯基、2，5二氯苯基、2-溴苯基、4-硝基苯基、4-氯-2-硝基苯基等“被低級(jí)烷基、鹵素原子、硝基取代的芳基”。
優(yōu)選“低級(jí)烷基”、“被氰基取代的低級(jí)烷基”、“芳烷基”、“芳環(huán)被硝基、鹵素原子取代的芳烷基”或“被低級(jí)烷基、鹵素原子、硝基取代的芳基”，更優(yōu)選2-氰基乙基、2，2，2-三氯乙基、苯甲基、2-氯苯基或4-氯苯基。
上述α組的定義中“碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基”，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等碳原子數(shù)1～6個(gè)的直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選碳原子數(shù)1～4個(gè)的烷基，更優(yōu)選碳原子數(shù)1～2個(gè)的烷基，最優(yōu)選甲基。
上述R2的定義中“氨基的核酸合成保護(hù)基”只要在核酸合成時(shí)可穩(wěn)定地保護(hù)氨基，就沒有特殊的限定，例如甲?；⒁阴；?、丙?；?、丁?；?、異丁酰基、戊醛基、三甲基乙?；?、戊?；?、異戊?；?、辛?；?、癸?；?、8-甲基壬酰基、3-乙基辛酰基、3，7-二甲基辛酰基、十一烷酰基、十三烷?；?、十六烷?；?4-甲基十五烷?；?3，13-二甲基十四烷?；?-甲基十七烷?；⑹磐轷；?、二十烷?；岸煌轷；韧榛驶?，琥珀?；⑽於；⒓憾；若然榛驶纫阴；⒍纫阴；?、三氯乙?；⑷阴；塞u代低級(jí)烷基羰基，甲氧基乙酰基等低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基羰基，(E)-2-甲基-2-丁烯酰基等不飽和烷基羰基等“脂肪族?；?；苯甲?；?、α-萘甲?；ⅵ?萘甲?；确蓟驶?，2-溴苯甲?；?-氯苯甲?；塞u代芳基羰基，2，4，6-三甲基苯甲?；?、4-甲苯酰基等低級(jí)烷基化芳基羰基，4-茴香?；鹊图?jí)烷氧基化芳基羰基，2-羧基苯甲酰基、3-羧基苯甲?；?、4-羧基苯甲?；若然蓟驶?-硝基苯甲?；?、2-硝基苯甲?；认趸蓟驶?，2-(甲氧基羰基)苯甲?；鹊图?jí)烷氧基羰基化芳基羰基、4-苯基苯甲?；确蓟蓟驶取胺枷阕艴；?；甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、異丁氧基羰基等“低級(jí)烷氧基羰基”；2，2，2-三氯乙氧基羰基、2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基等“被鹵素或三低級(jí)烷基甲硅烷基取代的低級(jí)烷氧基羰基”；乙烯氧基羰基、丙烯氧基羰基等“鏈烯氧基羰基”；苯甲氧基羰基、4-甲氧基苯甲氧基羰基、3，4-二甲氧基苯甲氧基羰基、2-硝基苯甲氧基羰基、4-硝基苯甲氧基羰基等“芳環(huán)可以被1～2個(gè)低級(jí)烷氧基或硝基取代的芳烷氧基羰基”，優(yōu)選“脂肪族?；?、“芳香族?；被颉胺辑h(huán)可以被1～2個(gè)低級(jí)烷氧基或硝基取代的芳烷氧基羰基”，更優(yōu)選“脂肪族酰基”或“芳環(huán)可以被1～2個(gè)低級(jí)烷氧基或硝基取代的芳烷氧基羰基”，特別優(yōu)選三氟乙?；虮郊籽趸驶?br> 上述“氨基亞磷酸酯(phosphoroamidite)基”為式-P(OR3a)(NR3b)表示的基團(tuán)(式中，R3a為碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基或碳原子1～7個(gè)的氰基烷基，R3b為碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基)，優(yōu)選式-P(OC2H4CN)(NCH(CH3)2)表示的基團(tuán)或式-P(OCH3)(NCH(CH3)2)表示的基團(tuán)。
上述α組的定義中“鹵素原子”，例如氟原子、氯原子、溴原子或碘原子，優(yōu)選氟原子或氯原子。
上述R4a、R4b及α組的定義中“碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基”，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等碳原子數(shù)1～6個(gè)的直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選甲基或乙基。
上述R4a、R4b及α組的定義中“被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的羥基”的核酸合成保護(hù)基，例如與上述R1的定義中“羥基的核酸合成保護(hù)基”所示的基團(tuán)相同的基團(tuán)，優(yōu)選“脂肪族酰基”或“芳香族?；?，更優(yōu)選苯甲?；?。
上述R4a、R4b及α組的定義中“被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的巰基”的核酸合成保護(hù)基，例如除了上述R1的定義中“羥基的核酸合成保護(hù)基”所示的基團(tuán)，還有甲基硫基、乙基硫基、叔丁基硫基等烷基硫基，苯甲基硫基等芳基硫基等“形成二硫化物的基團(tuán)”，優(yōu)選“脂肪族?；被颉胺枷阕艴；?，更優(yōu)選苯甲?；?br> 上述R4a、R4b及α組的定義中“被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的氨基”的核酸合成保護(hù)基，例如與上述R2的定義中“氨基的核酸合成保護(hù)基”所示的基團(tuán)相同的基團(tuán)，優(yōu)選“脂肪族?；被颉胺枷阕艴；保鼉?yōu)選苯甲?；?。
上述R4a、R4b及α組的定義中“碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷氧基”，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等碳原子1～6個(gè)的直鏈或支鏈烷氧基，優(yōu)選甲氧基或乙氧基。
上述R4a、R4b及α組的定義中“碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基硫基”，例如甲基硫基、乙基硫基、丙基硫基、異丙基硫基、丁基硫基、異丁基硫基、仲丁基硫基、叔丁基硫基、戊基硫基、己基硫基，優(yōu)選甲基硫基或乙基硫基。
上述R4a、R4b及α組的定義中“被碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基取代的烷基氨基”，例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、異丙基氨基、丁基氨基、異丁基氨基、仲丁基氨基、叔丁基氨基、戊基氨基、己基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、二異丙基氨基、二丁基氨基、二異丁基氨基、二仲丁基氨基、二叔丁基氨基、二戊基氨基、二己基氨基，優(yōu)選甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基或二乙基氨基。
上述R4a、R4b及α組的定義中“碳原子數(shù)1～7個(gè)的氰基烷氧基”，例如氰基甲氧基、氰基乙氧基、氰基丙氧基、氰基丁氧基、氰基戊氧基、氰基己氧基，優(yōu)選2-氰基乙氧基。
本發(fā)明的核苷類似物(1)及含有上述結(jié)構(gòu)(1a)的寡核苷酸類似物可形成鹽，上述“其可藥用鹽”是指它們的鹽，作為這種鹽，優(yōu)選鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽等堿金屬鹽，鈣鹽、鎂鹽等堿土金屬鹽，鋁鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、鎳鹽、鈷鹽等金屬鹽，銨鹽等無機(jī)鹽，叔辛基胺鹽、二苯甲基胺鹽、嗎啉鹽、葡糖胺鹽、苯基甘氨酸烷基酯鹽、乙二胺鹽、N-甲基葡糖胺鹽、胍鹽、二乙基胺鹽、三乙基胺鹽、二環(huán)己基胺鹽、N，N’-二苯甲基乙二胺鹽、氯普魯卡因鹽、普魯卡因鹽、二乙醇胺鹽、N-苯甲基-苯乙基胺鹽、哌嗪鹽、四甲基銨鹽、三(羥甲基)氨基甲烷鹽等有機(jī)鹽等胺鹽，氫氟酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽等氫鹵酸鹽，硝酸鹽、高氯酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等無機(jī)酸鹽，甲磺酸鹽、三氟甲磺酸鹽、乙磺酸鹽等低級(jí)烷基磺酸鹽，苯磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽等芳基磺酸鹽，乙酸鹽、蘋果酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽等有機(jī)酸鹽，及甘氨酸鹽、賴氨酸鹽、精氨酸鹽、鳥氨酸鹽、谷氨酸鹽、天冬氨酸鹽等氨基酸鹽，含有核苷結(jié)構(gòu)(1a)的寡核苷酸類似物優(yōu)選鈉鹽及三乙基胺鹽，核苷類似物(1)優(yōu)選游離體。
將本發(fā)明的核苷類似物(1)及含有上述結(jié)構(gòu)(1a)的寡核苷酸類似物放置在大氣中時(shí)，可吸收水分，附著吸附水，進(jìn)而形成水合物，這種鹽也包括在本發(fā)明中。
本發(fā)明的核苷類似物(1)及含有上述結(jié)構(gòu)(1a)的寡核苷酸類似物也可吸收其他種類的溶劑，形成溶劑合物，這種鹽也包括在本發(fā)明中。
作為本發(fā)明化合物(1)的具體例子，例如下述表1及表2所示的化合物。
表1及表2中，[Bn]表示苯甲基，[Bz]表示苯甲酰基，[Me]表示甲基，[PMBn]表示對(duì)甲氧基苯甲基，[MMTr]表示4-甲氧基三苯基甲基，[DMTr]表示4，4’-二甲氧基三苯基甲基，[TMTr]表示4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基，[TMS]表示三甲基甲硅烷基，[TBDMS]表示叔丁基二甲基甲硅烷基，[TBDPS]表示叔丁基二苯基甲硅烷基。
(表1) 示例化合物序號(hào)R1R2RaRb1-1 H NH2H H1-2 H NH2H OH1-3 H NH2H SH1-4 H NH2H NH21-5 H NH2H OMe1-6 H NH2F H1-7 H NH2F NH21-8 H NH2Cl H1-9 H NH2Cl NH21-10H NH2Cl Cl1-11H NH2Br H1-12H NH2Br NH21-13H NH2OH H1-14H NH2OH OH1-15H NH2OH NH21-16H NH2OMeOMe1-17H NH2OMeNH21-18H NH2NH2H1-19 H NH2NH2F1-20 H NH2NH2Cl1-21 H NH2NH2Br1-22 H NH2NH2OH1-23 H NH2NH2NH21-24 H NH2NH2OMe1-25 H N3HH1-26 H N3HOH1-27 H N3HSH1-28 H N3HNH21-29 H N3HOMe1-30 H N3FH1-31 H N3FNH21-32 H N3Cl H1-33 H N3Cl NH21-34 H N3Cl Cl1-35 H N3Br H1-36 H N3Br NH21-37 H N3OH H1-38 H N3OH OH1-39 H N3OH NH21-40 H N3OMe OMe1-41 H N3OMe NH21-42 H N3NH2H1-43 H N3NH2F1-44 H N3NH2Cl1-45 H N3NH2Br1-46 H N3NH2OH1-47 H N3NH2NH21-48 HN3NH2OMe1-49 HN3H NHBz1-50 HNH2H NHBz1-51 HN3ClNHBz1-52 HN3OHNHBz1-53 HN3OMe NHBz1-54 HN3NHBz H1-55 HN3NHBz Cl1-56 HN3NHBz OH1-57 HNH2NHBz OH1-58 HN3NHBz NHBz1-59 HN3NHBz OMe1-60 Bn N3H NHBz1-61 Bn N3NHCOCH(CH3)2OH1-62 PMBn N3H NHBz1-63 PMBn N3NHCOCH(CH3)2OH1-64 MMTr N3H NHBz1-65 MMTr N3NHCOCH(CH3)2OH1-66 DMTr N3H NHBz1-67 DMTr N3NHCOCH(CH3)2OH1-68 TMTr N3H NHBz1-69 TMTr N3NHCOCH(CH3)2OH1-70 TMS N3H NHBz1-71 TMS N3NHCOCH(CH3)2OH1-72 TBDMSN3H NHBz1-73 TBDMSN3NHCOCH(CH3)2OH1-74 TBDPSN3H NHBz1-75 TBDPSN3NHBz OH1-76 Bn NH2H NHBz1-77Bn NH2NHCOCH(CH3)2OH1-78PMBn NH2HNHBz1-79PMBn NH2NHCOCH(CH3)2OH1-80MMTr NH2HNHBz1-81MMTr NH2NHCOCH(CH3)2OH1-82DMTr NH2HNHBz1-83DMTr NH2NHCOCH(CH3)2OH1-84TMTr NH2HNHBz1-85TMTr NH2NHCOCH(CH3)2OH1-86TMS NH2HNHBz1-87TMS NH2NHCOCH(CH3)2OH1-88TBDMSNH2HNHBz1-89TBDMSNH2NHCOCH(CH3)2OH1-90TBDPSNH2HNHBz1-91TBDPSNH2NHCOCH(CH3)2OH(表2) 示例化合物序號(hào) R1R2R5R62-1 HNH2H H2-2 HNH2Cl H2-3 HNH2OH H2-4 HNH2OH Me2-5 HNH2SH H2-6 HNH2NH2H2-7 HNH2NH2F2-8 HNH2NH2Cl2-9 HNH2NH2Me2-10 HNH2OMe H2-11 HN3H H2-12 HN3Cl H2-13 HN3OH H2-14 HN3OH Me2-15 HN3SH H2-16 HN3NH2H2-17 HN3NH2F2-18 HN3NH2Cl2-19 HN3NH2Me2-20 HN3OMe H2-21 HN3NHBzH2-22 HNH2NHBzH2-23 HN3NHBzF2-24 HN3NHBzCl2-25 HN3NHBzMe2-26 Bn N3OH H2-27 Bn N3OH Me2-28 Bn N3NHBzH2-29 PMBn N3OH H2-30 PMBn N3OH Me2-31 PMBn N3NHBzH2-32 MMTr N3OH H2-33 MMTr N3OH Me2-34 MMTr N3NHBzH2-35 DMTr N3OH H2-36 DMTr N3OH Me2-37 DMTr N3NHBzH2-38 TMTr N3OH H2-39 TMTr N3OH Me2-40 TMTr N3NHBzH2-41 TMSN3OH H2-42 TMSN3OH Me2-43 TMSN3NHBzH2-44 TBDMS N3OH H2-45 TBDMS N3OH Me2-46 TBDMS N3NHBzH2-47 TBDPS N3OH H2-48 TBDPS N3OH Me2-49 TBDPS N3NHBzH2-50 Bn NH2OH H2-51 Bn NH2OH Me2-52 Bn NH2NHBzH2-53 PMBn NH2OH H2-54 PMBn NH2OH Me2-55 PMBn NH2NHBzH2-56 MMTr NH2OH H2-57 MMTr NH2OH Me2-58 MMTr NH2NHBzH2-59 DMTr NH2OH H
2-60 DMTr NH2OH Me2-61 DMTr NH2NHBz H2-62 TMTr NH2OH H2-63 TMTr NH2OH Me2-64 TMTr NH2NHBz H2-65 TMS NH2OH H2-66 TMS NH2OH Me2-67 TMS NH2NHBz H2-68 TBDMS NH2OH H2-69 TBDMS NH2OH Me2-70 TBDMS NH2NHBz H2-71 TBDPS NH2OH H2-72 TBDPS NH2OH Me2-73 TBDPS NH2NHBz H上述表中，優(yōu)選的化合物為化合物序號(hào)1-3、1-4、1-7、1-9、1-10、1-16、1-17、1-19、1-20、1-21、1-22、1-23、1-27、1-28、1-31、1-33、1-34、1-40、1-41、1-43、1-44、1-45、1-46、1-47、1-49、1-50、1-56、1-57、1-82、1-83、2-3、2-4、2-5、2-6、2-7、2-8、2-9、2-10、2-13、2-14、2-15、2-16、2-17、2-18、2-19、2-20、2-21、2-22、2-48、2-59、2-60、及2-61的化合物，更優(yōu)選的化合物為化合物序號(hào)1-4、1-22、1-28、1-46、1-49、1-50、1-56、1-57、1-82、1-83、2-3、2-4、2-6、2-13、2-14、2-16、2-21、2-22、2-48、2-59、2-60、及2-61的化合物，最優(yōu)選的化合物為，化合物序號(hào)2-43’-氨基-3’-脫氧-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷、化合物序號(hào)2-143’-疊氮基-3’-脫氧-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷、
化合物序號(hào)2-363’-疊氮基-3’-脫氧-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷、化合物序號(hào)2-483’-疊氮基-5’-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-3’-脫氧-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷、及化合物序號(hào)2-603’-氨基-3’-脫氧-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷。
本發(fā)明化合物(1)可按照以下所述的A方法來制備。 上述步驟表中，R1、R2及B與上述意義相同。
R7為羥基的保護(hù)基，優(yōu)選苯甲酰基、α-萘甲酰基、β-萘甲酰基等芳基羰基，2，4，6-三甲基苯甲?；?-甲苯?；鹊图?jí)烷基化芳基羰基，4-苯基苯甲?；确蓟蓟驶取胺枷阕艴；保鼉?yōu)選苯甲?；?br> R8為羥基的保護(hù)基，優(yōu)選三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、異丙基二甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、甲基二異丙基甲硅烷基、甲基二叔丁基甲硅烷基、三異丙基甲硅烷基等低級(jí)烷基甲硅烷基，二苯基甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、二苯基異丙基甲硅烷基、苯基二異丙基甲硅烷基等被1～2個(gè)芳基取代的三低級(jí)烷基甲硅烷基等“甲硅烷基”；苯甲基、α-萘基甲基、β-萘基甲基、二苯基甲基、三苯基甲基、α-萘基二苯基甲基、9-蒽基甲基等“被1～3個(gè)芳基取代的甲基”；4-甲基苯甲基、2，4，6-三甲基苯甲基、3，4，5-三甲基苯甲基、4-甲氧基苯甲基、4-甲氧基苯基二苯基甲基、4，4’-二甲氧基三苯基甲基、4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基、2-硝基苯甲基、4-硝基苯甲基、4-氯苯甲基、4-溴苯甲基、4-氰基苯甲基等“用芳環(huán)被低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵素、氰基取代的1～3個(gè)芳基取代的甲基”，更優(yōu)選三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、苯甲基、三苯基甲基、4-甲氧基苯甲基、4-甲氧基苯基二苯基甲基、4，4’-二甲氧基三苯基甲基或4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基。
R9為脫去基，優(yōu)選甲磺酰基、乙磺?；鹊图?jí)烷基磺酰基，三氟甲磺酰基等鹵素取代低級(jí)烷基磺?；瑢?duì)甲苯磺?；确蓟酋；?，更優(yōu)選甲磺?；?qū)妆交酋；?br> R10為羥基保護(hù)基，優(yōu)選甲?；?、乙酰基、丙酰基、丁?；?、異丁?；⑽烊┗?、三甲基乙酰基、戊?；愇祯；⑿刘；?、癸?；?、1-甲基十七烷?；⑹磐轷；?、二十烷酰基及二十一烷?；韧榛驶牾；⑽於；?、己二?；若然榛驶?，氯乙?；?、二氯乙?；?、三氯乙?；?、三氟乙?；塞u代低級(jí)烷基羰基，甲氧基乙酰基等低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基羰基，(E)-2-甲基-2-丁烯?；炔伙柡屯榛驶取爸咀艴；?；苯甲?；?、α-萘甲?；?、β-萘甲?；确蓟驶?，2-溴苯甲?；?、4-氯苯甲酰基等鹵代芳基羰基，2，4，6-三甲基苯甲?；?、4-甲苯?；鹊图?jí)烷基化芳基羰基，4-茴香?；鹊图?jí)烷氧基化芳基羰基，2-羧基苯甲?；?、3-羧基苯甲酰基、4-羧基苯甲酰基等羧基化芳基羰基，4-硝基苯甲?；?、2-硝基苯甲?；认趸蓟驶?-(甲氧基羰基)苯甲?；鹊图?jí)烷氧基羰基化芳基羰基、4-苯基苯甲?；确蓟蓟驶取胺枷阕艴；?，更優(yōu)選“脂肪族?；?，特別優(yōu)選乙酰基。
B1為可以具有1個(gè)以上選自下述α1組的任一取代基的嘌呤-9-基或2-氧代-1，2-二氫嘧啶-1-基。(α1組)羥基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的羥基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷氧基、巰基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的巰基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基硫基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的氨基、用碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基取代的氨基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基、及鹵素原子。
A方法是以化合物(2)為起始原料，導(dǎo)入取代基B后進(jìn)行環(huán)化，得到目的化合物(1a)、(1b)及(1c)的方法。
這里，原料化合物(2)可以市售的二丙酮-D-葡萄糖為起始原料，按照文獻(xiàn)(O.T.Schmidt，Methods in Carbohydr.Chem.，4，318(1964)；J.S.Brimacombe and O.A.Ching，Ca rbhyd.Res.，8，82(1968)；T.F.Tam and B.Fraser-Reid，Can.J.Chem.，57，2818(1979)；S.A.Suzhkov，Nucleosides & Nucleotides，13，2283(1994))的方法來制備。
以下，對(duì)于A方法的各步驟進(jìn)行詳細(xì)說明。<A方法>(A-1步驟)本步驟是在惰性溶劑中，堿存在的條件下，脫去原料化合物(2)的一級(jí)羥基的保護(hù)基，制備化合物(3)的步驟。
使用的溶劑只要是通常水解反應(yīng)中使用的溶劑，就沒有特殊的限定，例如水，甲醇、乙醇、正丙醇等醇類，四氫呋喃、二噁烷等醚類等有機(jī)溶劑或水和上述有機(jī)溶劑的混合溶劑，優(yōu)選醇類。
使用的堿只要不影響到化合物的其他部分，就沒有特殊的限定，優(yōu)選甲醇鈉等金屬醇化物類，碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鋰等堿金屬碳酸鹽，氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、氫氧化鋇等堿金屬氫氧化物或氨水、濃氨-甲醇等氨類，優(yōu)選堿金屬碳酸鹽。
反應(yīng)溫度及反應(yīng)時(shí)間根據(jù)起始物質(zhì)、溶劑及使用的堿而不同，沒有特殊的限定，但為了抑制副反應(yīng)，通常為0℃～15℃，反應(yīng)1～10小時(shí)。
反應(yīng)結(jié)束后，本反應(yīng)的目的化合物(3)可按常規(guī)方法，由反應(yīng)混合物中提取。例如通過中和反應(yīng)液，濃縮反應(yīng)混合物，加入乙酸乙酯等不與水混合的有機(jī)溶劑，水洗后，分離含有目的化合物的有機(jī)層，用無水硫酸鈉等干燥后，蒸餾除去溶劑來得到。
得到的化合物根據(jù)需要，可通過常規(guī)方法，例如重結(jié)晶、硅膠柱色譜等進(jìn)行純化。(A-2步驟)本步驟是在惰性溶劑中，堿存在的條件下，將A-1步驟得到的化合物(3)與羥基的保護(hù)化劑反應(yīng)，制備化合物(4)的步驟。
使用的溶劑只要不防礙反應(yīng)，并在一定程度上溶解起始物質(zhì)，就沒有特殊的限定，例如己烷、庚烷等脂肪族烴類，苯、甲苯、二甲苯等芳香族烴類，二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯、二氯苯等鹵代烴類，甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、碳酸二乙酯等酯類，乙醚、二異丙基醚、四氫呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲基醚等醚類，乙腈、異丁腈等腈類，甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷二酮、六甲基磷酰三胺等酰胺類，優(yōu)選二氯甲烷。
使用的堿只要是通常的反應(yīng)中使用的堿，就沒有特殊的限定，例如N-甲基嗎啉、三乙基胺、三丁基胺、二異丙基乙基胺、二環(huán)己基胺、N-甲基哌啶、吡啶、4-吡咯并吡啶、甲基吡啶、4-(N，N-二甲基氨基)吡啶、2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶、喹啉、N，N-二甲基苯胺、N，N-二乙基苯胺等有機(jī)堿類，優(yōu)選三乙基胺。作為使用的保護(hù)化劑，例如叔丁基二甲基甲硅烷基氯、三甲基甲硅烷基氯、三乙基甲硅烷基氯、三乙基甲硅烷基溴、三異丙基甲硅烷基氯、二甲基異丙基甲硅烷基氯、二乙基異丙基甲硅烷基氯、叔丁基二苯基甲硅烷基氯、二苯基甲基甲硅烷基氯、三苯基甲硅烷基氯等甲硅烷基鹵化物類，4-甲氧基三苯基甲基氯、4，4’-二甲氧基三苯基甲基氯、4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基氯等三苯甲基鹵化物類，苯甲基氯、苯甲基溴、對(duì)甲氧基苯甲基溴等芳烷基鹵化物類，優(yōu)選叔丁基二苯基甲硅烷基氯。
反應(yīng)溫度通常為-20℃至使用溶劑的回流溫度，優(yōu)選0℃至使用溶劑的回流溫度。
反應(yīng)時(shí)間主要根據(jù)反應(yīng)溫度、原料化合物、使用的堿或使用的溶劑的種類而不同，通常為10分鐘至3天，優(yōu)選1小時(shí)至24小時(shí)。
反應(yīng)結(jié)束后，本反應(yīng)的目的化合物(4)可按常規(guī)方法，由反應(yīng)混合物中提取。例如通過中和反應(yīng)液，加入乙酸乙酯等不與水混合的有機(jī)溶劑，水洗后，分離含有目的化合物的有機(jī)層，用無水硫酸鈉等干燥后，蒸餾除去溶劑來得到。
得到的化合物必要時(shí)，尤其是生成所不希望的羥基上導(dǎo)入R8的化合物時(shí)，可通過常規(guī)方法，例如重結(jié)晶、硅膠柱色譜等進(jìn)行純化。(A-3步驟)本步驟是在惰性溶劑中，堿催化劑存在的條件下，將A-2步驟得到的化合物(4)與脫去基導(dǎo)入試劑反應(yīng)，制備化合物(5)的步驟。
作為使用的溶劑，例如己烷、庚烷、輕石油、石油醚等脂肪族烴類，苯、甲苯、二甲苯等芳香族烴類，二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯、二氯苯等鹵代烴類，甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、碳酸二乙酯等酯類，乙醚、二異丙基醚、四氫呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲基醚等醚類，丙酮、丁酮、甲基異丁基酮、異佛爾酮、環(huán)己酮等酮類，硝基乙烷、硝基苯等硝基化合物類，乙腈、異丁腈等腈類，甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷二酮、六甲基磷酰三胺等酰胺類，環(huán)丁砜等亞砜類，吡啶類，優(yōu)選二氯甲烷。
作為使用的堿催化劑，優(yōu)選三乙基胺、吡啶、三甲基氨基吡啶等堿。
作為使用的脫去基導(dǎo)入試劑，例如甲磺酰氯、乙磺酰溴等烷基磺酰鹵化物類，對(duì)甲苯磺酰氯等芳基磺酰鹵化物類，優(yōu)選甲磺酰氯及對(duì)甲苯磺酰氯。
反應(yīng)溫度根據(jù)使用的原料化合物、溶劑、脫去基導(dǎo)入試劑、堿催化劑而不同，通常為0℃～50℃，優(yōu)選10℃～40℃。
反應(yīng)時(shí)間根據(jù)使用的原料化合物、溶劑、脫去基導(dǎo)入試劑、堿催化劑、反應(yīng)溫度而不同，通常為10分鐘至24小時(shí)，優(yōu)選1小時(shí)至15小時(shí)。
反應(yīng)結(jié)束后，本反應(yīng)的目的化合物(5)可按常規(guī)方法，由反應(yīng)混合物中提取。例如通過中和反應(yīng)液，濃縮反應(yīng)混合物，加入乙酸乙酯等不與水混合的有機(jī)溶劑，水洗后，分離含有目的化合物的有機(jī)層，用無水硫酸鈉等干燥后，蒸餾除去溶劑來得到。
得到的化合物必要時(shí)可通過常規(guī)方法，例如重結(jié)晶、硅膠柱色譜等進(jìn)行純化。(A-4步驟)本步驟是在溶劑中，酸催化劑存在的條件下，將A-3步驟得到的化合物(5)與酸酐反應(yīng)，制備化合物(6)的步驟。
作為使用的溶劑，例如乙醚、二噁烷、四氫呋喃等醚類，乙腈、異丁腈等腈類，甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷二酮、六甲基磷酰三胺等酰胺類，乙酸等有機(jī)酸類，優(yōu)選乙酸。
作為使用的酸催化劑，例如鹽酸、硫酸、硝酸等無機(jī)酸，但優(yōu)選硫酸(特別是濃硫酸)。
作為使用的酸酐，例如乙酸酐、丙酸酐等低級(jí)脂肪族羧酸酐，優(yōu)選乙酸酐。
反應(yīng)溫度根據(jù)使用的原料化合物、溶劑、酸催化劑、酸酐而不同，通常為0℃～50℃，優(yōu)選10℃～40℃。
反應(yīng)時(shí)間根據(jù)使用的原料化合物、溶劑、酸催化劑、酸酐、反應(yīng)溫度而不同，通常為10分鐘至12小時(shí)，優(yōu)選30分鐘至6小時(shí)。
反應(yīng)結(jié)束后，本反應(yīng)的目的化合物(6)可按常規(guī)方法，由反應(yīng)混合物中提取。例如通過加入乙酸乙酯等不與水混合的有機(jī)溶劑，水洗后，分離含有目的化合物的有機(jī)層，用無水硫酸鈉等干燥后，蒸餾除去溶劑來得到。
得到的化合物必要時(shí)可通過常規(guī)方法，例如重結(jié)晶、硅膠柱色譜等進(jìn)行純化。(A-5步驟)本步驟是在惰性溶劑中，酸催化劑存在的條件下，將A-4步驟得到的化合物(6)與按文獻(xiàn)(H.Vorbrueggen，K.Krolikiewicz andB.Bennua，Chem.Bet.，114，1234-1255(1981))配制的、對(duì)應(yīng)于可以具有所希望的取代基的嘌呤或嘧啶的三甲基甲硅烷基化物反應(yīng)，制備化合物(7)的步驟。
作為使用的溶劑，例如苯、甲苯、二甲苯等芳香族烴類，二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，2-二氯乙烷、氯苯、二氯苯等鹵代烴類，乙腈、異丁腈等腈類，甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷二酮、六甲基磷酰三胺等酰胺類，硫化碳等，優(yōu)選1，2-二氯乙烷。
作為使用的酸催化劑，例如AlCl3、SnCl4、TiCl4、ZnCl2、BF3、三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯等路易斯酸催化劑，優(yōu)選四氯化錫(SnCl4)。
反應(yīng)溫度根據(jù)使用的原料化合物、溶劑、酸催化劑而不同，通常為0℃～100℃，優(yōu)選30℃～80℃。
反應(yīng)時(shí)間根據(jù)使用的原料化合物、溶劑、酸催化劑、反應(yīng)溫度而不同，通常為1小時(shí)至3天，優(yōu)選1小時(shí)至2天。
反應(yīng)結(jié)束后，本反應(yīng)的目的化合物(7)可按常規(guī)方法，由反應(yīng)混合物中提取。例如通過中和反應(yīng)液，加入乙酸乙酯或二氯甲烷等不與水混合的有機(jī)溶劑，水洗后，分離含有目的化合物的有機(jī)層，用無水硫酸鈉等干燥后，蒸餾除去溶劑來得到。
得到的化合物必要時(shí)可通過常規(guī)方法，例如重結(jié)晶、硅膠柱色譜等進(jìn)行純化。(A-6步驟)本步驟是在惰性溶劑中，堿催化劑存在的條件下，將A-5步驟得到的化合物(7)環(huán)化，制備化合物(1a)的步驟。
作為使用的溶劑只要不妨礙反應(yīng)，并可在一定程度溶解起始物質(zhì)，就沒有特殊的限定，優(yōu)選甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、異戊醇、二甘醇、甘油、辛醇、環(huán)己醇、甲基溶纖素等醇類，更優(yōu)選甲醇。
作為使用的堿催化劑，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀等堿金屬氫氧化物，碳酸鈉、碳酸鉀等堿金屬碳酸鹽，甲醇鈉、乙醇鈉等堿金屬醇化物，氨水等，優(yōu)選堿金屬碳酸鹽，更優(yōu)選碳酸鉀。
反應(yīng)溫度根據(jù)使用的原料化合物、溶劑、堿催化劑而不同，通常為0℃～50℃，優(yōu)選10℃～30℃。
反應(yīng)時(shí)間根據(jù)使用的原料化合物、溶劑、堿催化劑、反應(yīng)溫度而不同，通常為1小時(shí)至3天，優(yōu)選3小時(shí)至2天。
反應(yīng)結(jié)束后，本反應(yīng)的目的化合物(1a)可按常規(guī)方法，由反應(yīng)混合物中提取。例如通過濃縮反應(yīng)混合物，加入乙酸乙酯等不與水混合的有機(jī)溶劑，水洗后，分離含有目的化合物的有機(jī)層，用無水硫酸鈉等干燥后，蒸餾除去溶劑來得到。
得到的化合物必要時(shí)可通過常規(guī)方法，例如重結(jié)晶、硅膠柱色譜等進(jìn)行純化。(A-7步驟)本步驟是在惰性溶劑中，將A-6步驟得到的化合物(1a)與脫保護(hù)試劑反應(yīng)，制備化合物(1b)的步驟。但是，不需要脫保護(hù)時(shí)，就無需進(jìn)行本步驟而直接進(jìn)行下一步驟。
脫保護(hù)的方法根據(jù)保護(hù)基的種類而不同，只要不引起其他副反應(yīng)，就沒有特殊的限定，例如按照“Protective Groups in OrganicSynthesis(有機(jī)合成中的保護(hù)基)”(Theodora W.Greene著，1981年、A Wiley-Interscience Publication發(fā)行)所述的方法來進(jìn)行。
存在多個(gè)不同種類的保護(hù)基時(shí)，可將這些方法適宜組合，依次進(jìn)行脫保護(hù)。
尤其是保護(hù)基為(1)“脂肪族酰基或芳香族?；薄?2)“被1～3個(gè)芳基取代的甲基”或“用芳環(huán)被低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵素、氰基取代的1～3個(gè)芳基取代的甲基”、(3)“甲硅烷基”時(shí)，可按以下所述的方法進(jìn)行。(1)保護(hù)基為脂肪族?；蚍枷阕艴；鶗r(shí)，通常在惰性溶劑中，與堿進(jìn)行反應(yīng)。
使用的溶劑只要是通常水解反應(yīng)中使用的溶劑，就沒有特殊的限定，例如水，甲醇、乙醇、正丙醇等醇類，四氫呋喃、二噁烷等醚類等有機(jī)溶劑或水與上述有機(jī)溶劑的混合溶劑，優(yōu)選醇類。
使用的堿只要不影響到化合物的其他部分，就沒有特殊的限定，優(yōu)選甲醇鈉等堿金屬醇化物類，碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鋰等堿金屬碳酸鹽，氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、氫氧化鋇等堿金屬氫氧化物或氨水，濃氨-甲醇等氨類，優(yōu)選堿金屬碳酸鹽。
反應(yīng)溫度及反應(yīng)時(shí)間根據(jù)起始物質(zhì)、溶劑及使用的堿等而不同，沒有特殊的限定，但為了抑制副反應(yīng)，通常為0℃～150℃，反應(yīng)1小時(shí)～10小時(shí)。
反應(yīng)結(jié)束后，本反應(yīng)的目的化合物(1b)可按常規(guī)方法，由反應(yīng)混合物中提取。例如通過濃縮反應(yīng)混合物，加入乙酸乙酯等不與水混合的有機(jī)溶劑，水洗后，分離含有目的化合物的有機(jī)層，用無水硫酸鈉等干燥后，蒸餾除去溶劑來得到。
得到的化合物必要時(shí)可通過常規(guī)方法，例如重結(jié)晶或硅膠柱色譜等進(jìn)行純化。(2)保護(hù)基為“被1～3個(gè)芳基取代的甲基”或“用芳環(huán)被低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵素、氰基取代的1～3個(gè)芳基取代的甲基”時(shí)，在惰性溶劑中，用還原劑進(jìn)行反應(yīng)。
作為使用的溶劑，優(yōu)選甲醇、乙醇、異丙醇等醇類，乙醚、四氫呋喃、二噁烷等醚類，甲苯、苯、二甲苯等芳香族烴類，己烷、環(huán)己烷等脂肪族烴類，乙酸乙酯、乙酸丙酯等酯類，乙酸等有機(jī)酸類或這些有機(jī)溶劑與水的混合溶劑。
使用的還原劑只要是通常的催化還原反應(yīng)中使用的還原劑，就沒有特殊的限定，優(yōu)選鈀碳、阮來鎳、氧化鉑、鉑黑、銠-氧化鋁、三苯基膦-氯化銠、鈀-硫酸鋇。
對(duì)于壓力沒有特殊的限定，通常在1～10個(gè)氣壓的條件下進(jìn)行。
反應(yīng)溫度為0℃～60℃，優(yōu)選20℃～40℃。
反應(yīng)時(shí)間為10分鐘至24小時(shí)，優(yōu)選1小時(shí)至3小時(shí)。
反應(yīng)結(jié)束后，本反應(yīng)的目的化合物(1b)可按常規(guī)方法，由反應(yīng)混合物中提取。例如從反應(yīng)混合物中除去還原劑，加入乙酸乙酯等不與水混合的有機(jī)溶劑，水洗后，分離含有目的化合物的有機(jī)層，用無水硫酸鈉等干燥后，蒸餾除去溶劑來得到。
得到的化合物必要時(shí)可通過常規(guī)方法，例如重結(jié)晶或硅膠柱色譜等進(jìn)行純化。
保護(hù)基為“被3個(gè)芳基取代的甲基”、即為三苯甲基時(shí)，也可用酸來進(jìn)行反應(yīng)。
這時(shí)，作為使用的溶劑，例如苯、甲苯、二甲苯等芳香族烴類，二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，2-二氯乙烷、氯苯、二氯苯等鹵代烴類，甲醇、乙醇、異丙醇、叔丁醇等醇類，乙腈、異丁腈等腈類，甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷二酮、六甲基磷酰三胺等酰胺類，乙酸等有機(jī)酸類，優(yōu)選有機(jī)酸(尤其是乙酸)或醇類(尤其是叔丁醇)。
作為使用的酸，優(yōu)選乙酸或三氟乙酸。
反應(yīng)溫度為0℃～60℃，優(yōu)選20℃～40℃。
反應(yīng)時(shí)間為10分鐘至24小時(shí)，優(yōu)選1小時(shí)至3小時(shí)。
反應(yīng)結(jié)束后，本反應(yīng)的目的化合物(1b)可按常規(guī)方法，由反應(yīng)混合物中提取。例如通過中和反應(yīng)混合物，加入乙酸乙酯等不與水混合的有機(jī)溶劑，水洗后，分離含有目的化合物的有機(jī)層，用無水硫酸鈉等干燥后，蒸餾除去溶劑來得到。
得到的化合物必要時(shí)可通過常規(guī)方法，例如重結(jié)晶、硅膠柱色譜等進(jìn)行純化。(3)保護(hù)基為“甲硅烷基”時(shí)，通常可用氟化四丁基銨、氫氟酸、氫氟酸-吡啶、氟化鉀等可生成氟陰離子的化合物處理，或用乙酸、甲磺酸、對(duì)甲苯磺酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸等有機(jī)酸或鹽酸等無機(jī)酸進(jìn)行處理來除去保護(hù)基。
此外，用氟陰離子除去保護(hù)基時(shí)，可通過加入甲酸、乙酸、丙酸等有機(jī)酸來促進(jìn)反應(yīng)。
使用的溶劑只要不妨礙反應(yīng)，并在一定程度上溶解起始物質(zhì)，就沒有特殊的限定，優(yōu)選乙醚、二異丙基醚、四氫呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲基醚等醚類，乙腈、異丁腈等腈類，水，乙酸等有機(jī)酸及這些溶劑的混合溶劑。
反應(yīng)溫度為0℃～100℃，優(yōu)選20℃～70℃。
反應(yīng)時(shí)間為5分鐘至48小時(shí)，優(yōu)選1小時(shí)至24小時(shí)。
反應(yīng)結(jié)束后，本反應(yīng)的目的化合物(1b)可按常規(guī)方法，由反應(yīng)混合物中提取。例如蒸餾除去溶劑，用硅膠柱色譜純化來得到。(A-8步驟)本步驟是在惰性溶劑中，氫及催化劑存在的條件下，將A-7步驟得到的化合物(1b)的疊氮基還原為氨基，并且根據(jù)需要保護(hù)該氨基，制備化合物(1c)的步驟。
使用的溶劑只要不參與本反應(yīng)，就沒有特殊的限定，優(yōu)選甲醇、乙醇、異丙醇等醇類，乙醚、四氫呋喃、二噁烷等醚類，甲苯、苯、二甲苯等芳香族烴類，己烷、環(huán)己烷等脂肪族烴類，乙酸乙酯、乙酸丙酯等酯類，甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、六甲基磷酰三胺等酰胺類，甲酸、乙酸等脂肪酸類，水，或這些溶劑的混合溶劑。
使用的催化劑只要是通常的催化還原反應(yīng)中使用的催化劑，就沒有特殊的限定，優(yōu)選鈀碳、鈀黑、阮來鎳、氧化鉑、鉑黑、銠-氧化鋁、三苯基膦-氯化銠、鈀-硫酸鋇。
對(duì)于壓力沒有特殊的限定，通常在1～10個(gè)氣壓的條件下進(jìn)行。
反應(yīng)溫度及反應(yīng)時(shí)間根據(jù)起始物質(zhì)、溶劑及催化劑的種類等而不同，通常為0℃～100℃(優(yōu)選20℃～40℃)，反應(yīng)5分鐘～48小時(shí)(優(yōu)選30分鐘～10小時(shí))。
反應(yīng)結(jié)束后，本反應(yīng)的目的化合物(1c)可按常規(guī)方法，由反應(yīng)混合物中提取。例如過濾除去催化劑，蒸餾除去溶劑來得到。
此時(shí)，根據(jù)需要可按照文獻(xiàn)(Protective Groups in OrganicSynthesis)所述的方法，對(duì)氨基進(jìn)行保護(hù)。
應(yīng)用本發(fā)明的化合物(1d)，按照以下所述的B方法，可合成通過磷酸鍵合3’位的氮原子和5’位的氧原子的、N3’-P5’型的本發(fā)明的寡核苷酸類似物。 上述步驟表中，B1及R8與上述意義相同，式(1d)的B1和式(8)的B1可以相同或不同。
R11為琥珀酸CPG(succinyl Controlled Pore Glass)或天塔膠(Tentagel)等寡核苷酸合成中通常應(yīng)用的樹脂。
CEO為2-氰基乙氧基。
以下，對(duì)于B方法的各步驟進(jìn)行詳細(xì)說明。(B-1步驟)本步驟為將化合物(1d)與化合物(8)進(jìn)行反應(yīng)，制備化合物(9)的氧化性磷酸化偶合反應(yīng)(oxidative phosphorylation coupling)，可按照文獻(xiàn)(1)(Nucleic Acids Research，Vol.23，No.14，pp.2661-2668，1995)中所述的方法進(jìn)行。
化合物(1d)為由A-8步驟得到的化合物(1c)中5’位的羥基被保護(hù)，且堿基B上存在氨基時(shí)，該氨基被保護(hù)的化合物。
化合物(8)為可由A-8步驟得到的化合物(1c)，按照文獻(xiàn)(1)所述的方法進(jìn)行合成的化合物。(B-2步驟)本步驟為由B-1步驟得到的化合物(9)合成寡核苷酸的步驟。
首先，用上述A-7步驟的方法脫去化合物(9)的羥基的保護(hù)基R8，隨后，按照文獻(xiàn)(1)中所述的方法進(jìn)行磷酸化，進(jìn)而，和上述B-1步驟同樣使之與化合物(1d)進(jìn)行反應(yīng)，反復(fù)進(jìn)行這種循環(huán)來合成寡核苷酸。
得到的寡核苷酸類似物的鏈長(zhǎng)以核苷為單位，通常為2～50個(gè)，優(yōu)選10～30個(gè)。
得到的寡核苷酸類似物難以被各種核酸酶降解，給藥于生物體后，可在生物體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間存在。另外，可與mRNA形成穩(wěn)定的雙鏈而抑制作為病因的蛋白質(zhì)的生物合成，或與基因組中的雙鏈DNA形成三鏈而抑制mRNA的轉(zhuǎn)錄，并可抑制感染細(xì)胞的病毒的增殖。
因此，本發(fā)明的寡核苷酸類似物有望作為抗腫瘤劑、抗病毒劑等抑制特定基因的功能、并治療疾病的醫(yī)藥品。
本發(fā)明的寡核苷酸類似物例如可與緩沖劑和/或穩(wěn)定劑等慣用的輔助劑配合而制成非口服給藥制劑，或制成脂質(zhì)體制劑。另外，作為局部用制劑，可與慣用的醫(yī)藥用載體配合而配制成軟膏、乳液、液劑或膏藥等。
其用量根據(jù)癥狀、年齡、給藥方法等而不同，例如以每次下限為0.001mg/kg體重(優(yōu)選0.01mg/kg體重)，上限為100mg/kg體重(優(yōu)選10mg/kg體重)，根據(jù)癥狀每天1次至數(shù)次給藥。
以下，結(jié)合實(shí)施例及參考例，進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，但本發(fā)明的范圍并不局限于此。
合成具有目的序列的寡核苷酸，進(jìn)行至合成循環(huán)1)使5’-位的二甲氧基三苯甲基脫去后，按照常規(guī)方法，用濃氨水進(jìn)行處理使寡聚物從支持物上切離的同時(shí)，脫去磷原子上的保護(hù)基氰基乙基，并進(jìn)一步脫去核酸堿基上的保護(hù)基。
用反相HPLC進(jìn)行純化，得到目的寡核苷酸。
按照本合成方法，得到具有以下序列5’-ttttttttttnt-3’(序列表的序列序號(hào)1)所示的序列，堿基序號(hào)11的n為3’-氨基-3’-脫氧-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷的寡核苷酸類似物(以下，略作“寡核苷酸1”)。
(收量8.5nmol，產(chǎn)率4.3％)
用反相HPLC(HPLCGI LSON公司Model 302柱，CHEMCOCHEMCOBOND 5-ODS-H(7.8×300nm)；0.1M乙酸三乙基胺水溶液(TEAA)，pH7；10→12.5％CH3CN/40分鐘，線性梯度；50℃，2.5ml/分鐘，254nm)純化得到的改性寡核苷酸類似物，收集25.4分鐘時(shí)洗脫出的組分。(實(shí)施例11)寡核苷酸類似物的合成使用5’-O-二甲氧基三苯甲基-N-4-苯甲酰基-5-甲基-2’-脫氧胞苷-3’-O-(2-氰基乙基)N，N-二異丙基phosphoroamidite(Pharmacia公司制)，與實(shí)施例11同樣，得到具有以下序列5’-tttttmtntmtmtmt-3’(序列表的序列序號(hào)2)所示的序列，m為5-甲基2’-脫氧胞苷，n為3’-氨基-3’-脫氧-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷的寡核苷酸類似物(以下，略作“寡核苷酸2”)。
(收量7.1nmol，產(chǎn)率3.5％)用反相HPLC(HPLCGILSON公司Model 302柱，CHEMCOCHEMCOBOND 5-ODS-H(7.8×300nm)；0.1M乙酸三乙基胺水溶液(TEAA)，pH7；10→12％CH3CN/40分鐘，線性梯度；50℃，2.5ml/分鐘，254nm)純化得到的改性寡核苷酸類似物，收集22.5分鐘時(shí)洗脫出的組分。(參考例1)3-疊氮基-3-脫氧-4-羥基甲基-1，2-O-異亞丙基-α-D-呋喃核糖按照文獻(xiàn)(Surzhykov S.A.，Krayevsky A.A.，NucleosidesNucleotides，13，2283-2305(1994))配制的3-疊氮基-4-苯甲酰氧基甲基-5-O-苯甲?；?3-脫氧-1，2-O-異亞丙基-α-D-呋喃核糖(4.13g，9.15mmol)的甲醇溶液(85ml)中，于0℃、加入碳酸鉀(380mg，2.75mmol)、水(15ml)，在相同溫度下攪拌4.5小時(shí)。于0℃、用10％鹽酸中和，蒸餾除去甲醇。殘?jiān)屑尤胨?，用乙酸乙酯萃取，用飽和食鹽水洗滌。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥后，蒸餾除去溶劑，得到的白色固體用冷正己烷洗滌，得到白色粉末狀的目的物(1.93g，7.87mmol，86％)。mp 113-115℃(甲苯).IRνmax(KBr)3460，3417，2989，2951，2907，2111cm-1.1H-NMR(CDCl3)δ1.62(3H，s)，1.35(3H，s)2.65(2H，brs)，3.81，3.65(2H，AB，J＝12Hz)，3.59，4.00(2H，AB，J＝12.5Hz)，4.28(1H，d，J＝5.5Hz)，4.82(1H，dd，J＝4Hz，5.5Hz)，5.85(1H，d，J＝4Hz).13C-NMR(CDCl3)δ25.7，26.2，61.9，62.1，63.2，79.9，87.3，104.4，113.6.(參考例2)3-疊氮基-5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-3-脫氧-4-羥基甲基-1，2-O-異亞丙基-α-D-呋喃核糖氮?dú)饬飨?，在參考?的化合物(2.56g，10.5mmol)的無水二氯甲烷溶液(73ml)中，于0℃、加入三乙基胺(3.5g，4.82ml，34.6mmol)、氯化叔丁基二苯基甲硅烷(9.75g，9.22ml，35.46mmol)，室溫下攪拌24小時(shí)。反應(yīng)溶液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯萃取，用飽和食鹽水洗滌。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，蒸餾除去溶劑后，用硅膠柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶6)純化，得到白色粉末狀的目的物(3.13g，6.47mmol，62％)。mp 99.5-100.5℃ (正己烷).IRνmax(KBr)3504，2936，2852，2111cm-1.1H-NMR(CDCl3)δ1.07(9H，s)，1.36(3H，s)，1.62(3H，s)，3.62，3.92(2H，AB，J＝12Hz)，4.38(1H，d，J＝6Hz)，4.84(1H，dd，J＝4Hz，5.5Hz)，3.82，3.70(2H，AB，J＝11Hz)，4.84(1H，dd，J＝4Hz，5.5Hz)，5.86(1H，d，J＝4Hz)，7.36-7.44(6H，m)，7.64-7.67(4H，m).13C-NMR(CDCl3)δ19.2，26.1，26.3，26.8，62.2，62.3，65.2，80.4，88.0，104.5，113.7，127.7，127.8，129.8，129.9，132.7，132.8，135.5.(參考例3)3-疊氮基-5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-3-脫氧-4-(對(duì)甲苯磺酰氧基甲基)-1，2-O-異亞丙基-α-D-呋喃核糖氮?dú)饬飨?，在參考?的化合物(100mg，0.21mmol)的無水二氯甲烷溶液(2ml)中，于0℃、加入三乙基胺(137mg，180μl，1.29mmol)、對(duì)甲苯磺酰氯(63.3mg，0.33mmol)、4-二甲基氨基吡啶(4mg，0.03mmol)，室溫下攪拌14小時(shí)。反應(yīng)溶液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯萃取，用飽和食鹽水洗滌。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，蒸餾除去溶劑后，用硅膠柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶6)純化，得到白色粉末狀的目的物(130mg，0.20mmol，98％)。mp 122-124℃(乙酸乙酯-正己烷).IRνmax(KBr)3069，2935，2114，1366，1183，1109cm-1.1H-NMR(CDCl3)δ1.03(9H，s)，1.27(3H，s)，1.31(3H，s)，2.41(3H，s)，3.60，3.72(2H，AB，J＝10.5Hz)，4.33，4.40(2H，AB，J＝10Hz)，4.55(1H，d，J＝5.5Hz)，5.00(1H，dd，J＝3.7Hz，5.5Hz)，5.82(1H，d，J＝3.7Hz)，7.23(2H，d，J＝8.5Hz)，7.36-7.45(6H，m)，7.61-7.63(4H，m)，7.72(2H，d，J＝8.5Hz).13C-NMR(CDCl3)δ19.1，21.5，25.9，26.0，26.7，63.1，64.7，68.9，80.1，85.6，104.4，113.8，127.8，128.0，129.6，129.9，132.4，132.5，135.4，144.6.(參考例4)3-疊氮基-5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-3-脫氧-4-(對(duì)甲苯磺酰氧基甲基)-1，2-二-O-乙?；?D-呋喃核糖氮?dú)饬飨?，在參考?的化合物(230mg，0.36mmol)的乙酸溶液(3.5ml)中，加入乙酸酐(406mg，375μl，3.98mmol)、濃硫酸(6.5mg，3.5μl，0.066mmol)，室溫下攪拌5小時(shí)。將反應(yīng)溶液加入到冰水中，攪拌30分鐘，加入飽和食鹽水，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，蒸餾除去溶劑后，用硅膠柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝4∶1)純化，得到α∶β＝約3∶7的混合物狀態(tài)的無色油狀目的物(230mg，0.34mmol，94％)。IRνmax(KBr)3048，2935，2864，2117，1756.cm-1.1H-NMR(CDCl3)[β體]δ1.06(9H，s)，1.83(3H，s)，2.08(3H，s)，2.40(3H，s)，3.54，3.80(2H，AB，J＝11Hz)，4.12，4.26(2H，AB，J＝10Hz)，4.37(1H，d，J＝5.5Hz)，5.32(1H，d，J＝5.5Hz)，5.98(1H，s)，7.29(2H，d，J＝8Hz)，7.37-7.46(6H，m)，7.59-7.65(4H，m)，7.76(2H，d，J＝8Hz).[α體]δ1.05(9H，s)，2.02(3H，s)，2.13(3H，s)，2.39(3H，s)，3.51，3.68(2H，AB，J＝11Hz)，4.12，4.21(2H，AB，J＝10.5Hz)，4.40(1H，d，J＝7Hz)，5.32(1H，m)，6.31(1H，d，J＝4.5Hz)，7.25(2H，d，J＝8.5Hz)，7.37-7.46(6H，m)，7.59-7.65(4H，m)，7.70(2H，d，J＝8.5Hz).13C-NMR(CDCl3)δ19.0，19.1，20.0，20.6，20.9，21.1，21.5，26.6，61.0，63.2，65.1，68.4，68.8，72.2，75.5，85.4，86.5，93.6，96.0，97.3，127.8，127.9，128.0，129.6，129.9，130.0，132.0，132.3，132.4，135.4，144.7，168.5，169.2，169.3，169.4.(參考例5)2’-O-乙酰基-3’-疊氮基-5’-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-3’-脫氧-4’-(對(duì)甲苯磺酰氧基甲基)-5-甲基尿苷氮?dú)饬飨?，在參考?的化合物(300mg，0.44mmol)的無水1，2-二氯乙烷溶液(6ml)中，于0℃、加入O，O’-二(三甲基甲硅烷基)胸腺嘧啶(240mg，0.93mmol)、四氯化錫(253mg，114μl，0.97mmol)，室溫下攪拌43小時(shí)。冰冷下，用二氯甲烷稀釋后，反應(yīng)溶液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用二氯甲烷萃取。用飽和食鹽水洗滌后，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，蒸餾除去溶劑后，用硅膠柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2-1∶0)純化，得到白色粉末狀的目的物(300mg，0.4mmol，91％).mp158.5-159.5℃ (乙酸乙酯-正己烷).IRνmax(KBr)3185，3067，2956，2116，1752，1695，1369，1100cm-1.1H-NMR(CDCl3)δ1.11(9H，s)，1.59(3H，s)，2.15(3H，s)，2.41(3H，s)，3.80，3.84(2H，AB，J＝11.5Hz)，4.04，4.10(2H，AB，J＝11Hz)，4.47(1H，d，J＝6Hz)，5.53(1H，t，J＝6.5Hz)，5.94(1H，d，J＝7Hz)，7.18(1H，s)，7.28(2H，d，J＝7.5Hz)，7.37-7.47(6H，m)，7.61-7.65(4H，m)，7.71(2H，d，J＝7.5Hz)，9.68(1H，br s).13C-NMR(CDCl3)δ11.8，19.2，20.9，21.5，26.9，62.3，65.9，68.3，74.2，84.8，86.1，118.9，127.9，128.0，129.7，130.1，131.5，132.2，135.2，135.3，135.5，145.0，150.4，163.6，169.9.(參考例6)3 ’-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)胸苷5’-(2-氰基乙基)膦酸酯氮?dú)饬飨?，?’-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)胸苷(記載于K.M.Fries，C.Joswing and R.F.Borch，J.Med.Chem.，38，2672(1995))(100mg，0.34mmol)的乙腈溶液(4ml)中，用5分鐘加入2-氰基乙基四異丙基二氨基亞磷酸酯(132mg，0.44mmol)，室溫下攪拌2.2小時(shí)。接著，加入四唑(30.8mg，0.44mmol)的乙腈溶液(0.88ml)，室溫下攪拌1小時(shí)。反應(yīng)溶液中加入水后，用二氯乙烷萃取。有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌后，用無水硫酸鈉干燥。減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱色譜(氯仿∶甲醇＝30∶1，正己烷∶乙酸乙酯＝1∶5→0∶1)純化得到的粗產(chǎn)物，得到無色油狀的標(biāo)題化合物(98.4mg，0.21mmol，70％)。1H-NMR(CDCl3)δ0.10(6H，s)，0.90(9H，s)，1.96(3H，s)，2.16-2.28(2H，m)，2.77-2.82(2H，m)，4.09-4.41(6H，m)，6.28(1H，dd，J＝7Hz，11Hz)，6.98(1H，d，J＝720Hz)，7.36(1H，d，J＝8Hz)，8.20(1H，brs).31P-NMR(CDCl3)δ7.70，8.94.(參考例7)3’-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)胸苷5’-甲基膦酸酯氮?dú)饬飨?，?’-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)胸苷(100mg，0.28mmol)的二氯甲烷溶液(2ml)中，用5分鐘加入氯二異丙基氨基甲氧基膦(69.2mg，0.35mmol)，室溫下攪拌1小時(shí)。接著，加入四唑(56.0mg，0.80mmol)的乙腈溶液(2.0ml)，室溫下攪拌40分鐘。反應(yīng)溶液中加入水后，用二氯乙烷萃取。有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌后，用無水硫酸鈉干燥。減壓蒸餾除去溶劑，用硅膠柱色譜(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1→0∶1，正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)純化得到的粗產(chǎn)物，得到無色油狀的標(biāo)題化合物(109mg，0.25mmol，91％)。31P-NMR(CDCl3)δ9.13，10.07.(試驗(yàn)例1)(測(cè)定三鏈形成能力的Tm測(cè)定)在含140mM KCl及10mM MgCl2的7mM磷酸鈉緩沖液(pH7.0)(或者未添加該MgCl2的溶液)中，溶解可形成三鏈的、等摩爾量的寡核苷酸2和天然型雙鏈DNA寡核苷酸(各寡核苷酸的終濃度為1.5μM)制成樣品溶液，將樣品溶液在沸水浴中煮沸，用12小時(shí)緩慢地冷卻至室溫，再于4℃放置1小時(shí)。在分光光度計(jì)(Beckman公司制，Du650)的比色皿中，由5℃至85℃緩慢升溫(0.5℃/分鐘)并測(cè)定樣品溶液的260nm處的紫外吸收。
天然型雙鏈DNA寡核苷酸由以下兩個(gè)序列構(gòu)成。序列5’-gctaaaaagaaagagagatcg-3’(序列表的序列序號(hào)3)及其互補(bǔ)鏈序列5’-cgatctctctttctttttagc-3’(序列表的序列序號(hào)4)作為形成三鏈的天然型寡核苷酸為，序列5’-tttttmtttmtmtmt-3’(序列表的序列序號(hào)5)其中，m為5-甲基-2’-脫氧胞苷(以下，略作“寡核苷酸3”)。
表3中示出了寡核苷酸2及3與雙鏈DNA之間的Tm測(cè)定結(jié)果。
(表3)Tm(℃)寡核苷酸2 寡核苷酸3實(shí)施例11添加MgCl255 44未添加MgCl244 32由上述結(jié)果可知，本發(fā)明的寡核苷酸類似物相比于天然型寡核苷酸，形成三鏈時(shí)，Tm值高，具有極為理想的三鏈形成能力。(試驗(yàn)例2)(核酸酶耐受性的測(cè)定)在含有各種寡核苷酸(10μg)的緩沖溶液320μl(50mM Tris(pH8.0)和10mM MgCl2)中，加入3’-核酸外切酶(磷酸二酯酶，源于Crotalus durissus(Boehringer Mannheim))0.2μg，將混合液保溫在37℃并進(jìn)行反應(yīng)。一定時(shí)間后取出混合液的一部分，于90℃加熱2分鐘使酶失活并終止反應(yīng)。各時(shí)間的混合液中的殘量寡核苷酸用反相高速液相柱色譜進(jìn)行定量，測(cè)定存在核酸酶的條件下，寡核苷酸量隨時(shí)間的變化，結(jié)果如

圖1所示。
縱坐標(biāo)為相對(duì)于0(分鐘)時(shí)的各寡核苷酸量，各寡核苷酸的殘存率(％)。
橫坐標(biāo)為由反應(yīng)開始起的經(jīng)過時(shí)間(分鐘)。試驗(yàn)中所用的寡核苷酸1.實(shí)施例10中得到的寡核苷酸12.具有下述序列所示的序列，n為2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷的寡核苷酸(以下，略作“寡核苷酸4”)5’-ttttttttttnt-3’(序列表的序列序號(hào)1)3.具有下述序列所示的序列的天然型寡核苷酸(以下，略作“寡核苷酸5”)5’-tttttttttttt-3’(序列表的序列序號(hào)6)本發(fā)明的寡核苷酸類似物相對(duì)于天然型，具有顯著的核酸酶耐受性。再者，與已知的非天然型寡核苷酸類似物相比，也顯示出顯著的核酸酶耐受性。
本發(fā)明的寡核苷酸類似物的雜交鏈形成能力及抗HIV活性的測(cè)定，可按照以下方法進(jìn)行測(cè)定。(試驗(yàn)方法1)將得到的種種寡核苷酸類似物作為反義鏈，通過測(cè)定上述反義鏈和天然型DNA或RNA構(gòu)成的有義鏈的退火產(chǎn)物的熔融溫度(Tm值)，測(cè)定本發(fā)明的寡核苷酸類似物對(duì)于互補(bǔ)DNA及RNA的雜交鏈形成能力。
將終濃度分別為NaCl 100mM、磷酸鈉緩沖液(pH7.2)10mM、反義鏈4μM、有義鏈4μM的樣品溶液(500μL)在沸水浴中煮沸，用10小時(shí)緩慢地冷卻至室溫。在分光光度計(jì)(例如島津UV-2001PC)的比色皿中通入氮?dú)饬?，以防止結(jié)成露水，將樣品溶液緩慢冷卻至5℃，再于5℃保持20分鐘后，開始測(cè)定。樣品以每分鐘0.2℃升溫至90℃，以0.1℃的間隔測(cè)定260nm處的紫外吸收。
另外，為防止升溫的同時(shí)樣品濃度產(chǎn)生變化，比色皿應(yīng)使用帶有蓋子的比色皿，并在樣品溶液表面添加1滴礦物油后進(jìn)行測(cè)定。(試驗(yàn)方法2)抗HIV活性的測(cè)定本發(fā)明化合物的抗HIV活性測(cè)定可按照R.Pauwel等的方法(J.Virological Method 20，p.309-321(1988))進(jìn)行。即，將MT-4細(xì)胞經(jīng)離心(1000×g，5分鐘)得到的細(xì)胞沉積物懸浮于不含血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，得到細(xì)胞懸液，將HIV接種于細(xì)胞懸液中，37℃培養(yǎng)1小時(shí)后，加入到添加10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基(以下，略作血清培養(yǎng)基)中，洗滌后進(jìn)行離心(1000×g，5分鐘)。由上述步驟得到的HIV感染細(xì)胞及HIV非感染細(xì)胞懸浮于血清培養(yǎng)基中，并使其終濃度分別為4×105/ml，并在組織培養(yǎng)用96孔培養(yǎng)板的各孔中分別加入100μl。這些孔中分別加入100μl后，在5％二氧化碳存在的條件下，于37℃靜置培養(yǎng)5天。同樣，培養(yǎng)未添加化合物的HIV感染細(xì)胞及HIV非感染細(xì)胞。培養(yǎng)結(jié)束后，用MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物)測(cè)定活細(xì)胞，求得添加化合物時(shí)的細(xì)胞損傷抑制活性(抗HIV活性)。另外，確認(rèn)細(xì)胞液及接種病毒液中不含支原體。
以未添加化合物的HIV非感染細(xì)胞的細(xì)胞損傷抑制活性為100％，未添加化合物的HIV感染細(xì)胞的細(xì)胞損傷活性為0％，求得對(duì)于HIV感染細(xì)胞顯示50％細(xì)胞損傷抑制活性的化合物濃度(EC50)。產(chǎn)業(yè)上的實(shí)用性本發(fā)明的新型雙環(huán)核苷類似物可用作制備具有優(yōu)良的反義或反基因活性、且在體內(nèi)穩(wěn)定的寡核苷酸類似物的中間體。
并且，本發(fā)明的新型寡核苷酸類似物可用作在體內(nèi)穩(wěn)定的、反義或反基因藥。
再者，本發(fā)明的新型雙環(huán)核苷類似物可用作具有抗HIV活性的、ATDS的預(yù)防或治療藥。
序列表<110>三共株式會(huì)社(Sankyo Company，limited)<120>新型雙環(huán)核苷類似物<130>FP-200042<140><141><150>JPHE111-207170<151>1999-07-22<160>6<170>PatentIn Ver.2.0<210>1<211>12<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220><223>人工序列的描述用于測(cè)定核酸酶耐受性的合成寡核苷酸<220><221>改性堿基<222>(11)<223>改性尿苷<400>1tttttttttt nt12<210>2<211>15<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220><223>人工序列的描述用于測(cè)定三鏈形成能力的合成寡核苷酸<220><221>改性堿基<222>(6)<223>5-甲基-2’-脫氧胞苷<220><221>改性堿基<222>(8)<223>3’-氧基-3’-脫氧-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷<220><221>改性堿基<222>(10)<223>5-甲基-2’-脫氧胞苷<220><221>改性堿基<222>(12)<223>5-甲基-2’-脫氧胞苷<220><221>改性堿基<222>(14)<223>5-甲基-2’-脫氧胞苷<400>2tttttntntn tntnt 15<210>3<211>21<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220><223>人工序列的描述用于測(cè)定三鏈形成能力的合成寡核苷酸<400>3gctaaaaaga aagagagatc g 21<210>4<211>21<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220><223>人工序列的描述用于測(cè)定三鏈形成能力的合成寡核苷酸<400>4cgatctctct ttctttttag c 21<210>5<211>15<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220><223>人工序列的描述用于測(cè)定三鏈形成能力的合成寡核苷酸<220><221>改性堿基<222>(6)<223>5-甲基-2’-脫氧胞苷<220><221>改性堿基<222>(10)<223>5-甲基-2’-脫氧胞苷<220><221>改性堿基<222>(12)<223>5-甲基-2’-脫氧胞苷<220><221>改性堿基<222>(14)<223>5-甲基-2’-脫氧胞苷<400>5tttttntttn tntnt 15<210>6<211>12<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220><223>人工序列的描述用于測(cè)定核酸酶耐受性的合成寡核苷酸<400>6tttttttttt tt1權(quán)利要求
1.通式(1)表示的化合物或其可藥用鹽， 式中，R1相同或不同，為氫原子、羥基的核酸合成保護(hù)基、磷酸基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的磷酸基或式-P(R4a)R4b表示的基團(tuán)(式中，R4a及R4b相同或不同，為羥基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的羥基、巰基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的巰基、氨基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的氨基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷氧基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基硫基、碳原子數(shù)1～7個(gè)的氰基烷氧基或用碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基取代的氨基)；R2為疊氮基、氨基或式NH-R3表示的基團(tuán)；R3相同或不同，為氨基的核酸合成保護(hù)基、磷酸基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的磷酸基或式-P(R4a)R4b表示的基團(tuán)(式中，R4a及R4b相同或不同，為羥基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的羥基、巰基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的巰基、氨基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的氨基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷氧基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基硫基、碳原子數(shù)1～7個(gè)的氰基烷氧基或用碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基取代的氨基)；B為可以具有1個(gè)以上選自下述α組的任一取代基的嘌呤-9-基或2-氧代-1，2-二氫嘧啶-1-基；(α組)羥基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的羥基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷氧基、巰基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的巰基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基硫基、氨基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的氨基、用碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基取代的氨基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基、及鹵素原子。
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中，R1為氫原子、脂肪族酰基、芳香族酰基、甲硅烷基、用1～3個(gè)芳基取代的甲基、或用芳環(huán)被低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵素或氰基取代的1～3個(gè)芳基取代的甲基。
3.權(quán)利要求1所述的化合物，其中，R1為氫原子、甲硅烷基、用1～3個(gè)芳基取代的甲基、或用芳環(huán)被低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵素或氰基取代的1～3個(gè)芳基取代的甲基。
4.權(quán)利要求1所述的化合物，其中，R1為氫原子、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、苯甲基、三苯基甲基、4-甲氧基苯甲基、4-甲氧基苯基二苯基甲基、4，4’-二甲氧基三苯基甲基或4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基。
5.權(quán)利要求1所述的化合物，其中，R2為疊氮基、氨基、或式-NH-R3表示的基團(tuán)；式中，R3為脂肪族?；?、芳香族酰基、用1～3個(gè)芳基取代的甲基、用芳環(huán)被低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵素或氰基取代的1～3個(gè)芳基取代的甲基、甲硅烷基、氨基亞磷酸酯(phosphoroamidite)基、膦?；?、磷酸基或用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的磷酸基。
6.權(quán)利要求1所述的化合物，其中，R2為疊氮基、氨基、或式-NH-R3表示的基團(tuán)；式中，R3為乙?；⑷阴；⒈郊柞；?、苯甲基、對(duì)甲氧基苯甲基、叔丁基二苯基甲硅烷基、式-P(OC2H4CN)(NCH(CH3)2)表示的基團(tuán)、式-P(OCH3)(NCH(CH3)2)表示的基團(tuán)、膦酰基、2-氯苯基或4-氯苯基磷酸基。
7.權(quán)利要求1所述的化合物，其中，R2為疊氮基、氨基。
8.權(quán)利要求1所述的化合物，其中，B為6-氨基嘌呤-9-基(即腺嘌呤基)、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的6-氨基嘌呤-9-基、2，6-二氨基嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2，6-二氨基嘌呤-9-基、2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、2-氨基-6-羥基嘌呤-9-基(即鳥嘌呤基)、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-羥基嘌呤-9-基、6-氨基-2-甲氧基嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的6-氨基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-氨基-2-氯嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的6-氨基-2-氯嘌呤-9-基、6-氨基-2-氟嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的6-氨基-2-氟嘌呤-9-基、2，6-二甲氧基嘌呤-9-基、2，6-二氯嘌呤-9-基、6-巰基嘌呤-9-基、巰基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的6-巰基嘌呤-9-基、2-氧代-4-氨基-1，2-二氫嘧啶-1-基(即胞嘧啶基)、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氧代-4-氨基-1，2-二氫嘧啶-1-基、4-氨基-2-氧代-5-氟-1，2-二氫嘧啶-1-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的4-氨基-2-氧代-5-氟-1，2-二氫嘧啶-1-基、4-氨基-2-氧代-5-氯-1，2-二氫嘧啶-1-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的4-氨基-2-氧代-5-氯-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧代-4-甲氧基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧代-4-巰基-1，2-二氫嘧啶-1-基、巰基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氧代-4-巰基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2，4-二羥基嘧啶-1-基(即尿嘧啶基)、2，4-二羥基-5-甲基嘧啶-1-基(即胸腺嘧啶基)、4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氫嘧啶-1-基或氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氫嘧啶-1-基。
9.權(quán)利要求1所述的化合物，其中，B為6-苯甲?；被堰?9-基、腺嘌呤基、2-苯甲?；被?6-羥基嘌呤-9-基、鳥嘌呤基、2-氧代-4-苯甲?；被?1，2-二氫嘧啶-1-基、胞嘧啶基、尿嘧啶基或胸腺嘧啶基。
10.權(quán)利要求1所述的化合物，它選自下述化合物組3’-氨基-3’-脫氧-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷、3’-疊氮基-3’-脫氧-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷、3’-疊氮基-5’-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-3’-脫氧-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷、3’-疊氮基-3’-脫氧-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷、以及3’-氨基-3’-脫氧-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-O，4’-C-亞甲基-5-甲基尿苷。
11.含有1個(gè)或2個(gè)以上通式(1a)表示的結(jié)構(gòu)的寡核苷酸類似物及其可藥用鹽， 式中，B為可以具有選自下述α組的取代基的嘌呤-9-基或2-氧代-1，2-二氫嘧啶-1-基；但是含有2個(gè)以上上述結(jié)構(gòu)時(shí)，該結(jié)構(gòu)間的B可以相同或不同；(α組)羥基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的羥基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷氧基、巰基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的巰基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基硫基、氨基、用核酸合成保護(hù)基保護(hù)的氨基、用碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基取代的氨基、碳原子數(shù)1～6個(gè)的烷基、及鹵素原子。
12.權(quán)利要求11所述的寡核苷酸類似物及其可藥用鹽，其中，B為6-氨基嘌呤-9-基(即腺嘌呤基)、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的6-氨基嘌呤-9-基、2，6-二氨基嘌呤-9-基、2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、2-氨基-6-羥基嘌呤-9-基(即鳥嘌呤基)、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-羥基嘌呤-9-基、氨基及羥基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氨基-6-羥基嘌呤-9-基、6-氨基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-氨基-2-氯嘌呤-9-基、6-氨基-2-氟嘌呤-9-基、2，6-二甲氧基嘌呤-9-基、2，6-二氯嘌呤-9-基、6-巰基嘌呤-9-基、2-氧代-4-氨基-1，2-二氫嘧啶-1-基(即胞嘧啶基)、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氧代-4-氨基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧代-4-氨基-5-氟-1，2-二氫嘧啶-1-基、氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的2-氧代-4-氨基-5-氟-1，2-二氫嘧啶-1-基、4-氨基-2-氧代-5-氯-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧代-4-甲氧基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧代-4-巰基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧代-4-羥基-1，2-二氫嘧啶-1-基(即尿嘧啶基)、2-氧代-4-羥基-5-甲基-1，2-二氫嘧啶-1-基(即胸腺嘧啶基)、4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氫嘧啶-1-基(即5-甲基胞嘧啶基)或氨基被核酸合成保護(hù)基保護(hù)的4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氫嘧啶-1-基。
13.權(quán)利要求11所述的寡核苷酸類似物及其可藥用鹽，其中，B為6-苯甲?；被堰?9-基、腺嘌呤基、2-異丁基氨基-6-羥基嘌呤-9-基、鳥嘌呤基、2-氧代-4-苯甲?；被?1，2-二氫嘧啶-1-基、胞嘧啶基、2-氧代-5-甲基-4-苯甲?；被?1，2-二氫嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶基、尿嘧啶基或胸腺嘧啶基。
全文摘要
本發(fā)明提供具有抗艾滋病活性的新型雙環(huán)核苷類似物,以及用于制備具有優(yōu)良的反義或反基因活性、且在體內(nèi)穩(wěn)定的寡核苷酸類似物的中間體,尤其是結(jié)構(gòu)式(1)表示的化合物或其可藥用鹽;式中,R
文檔編號(hào)A61P31/18GK1376161SQ00813279
公開日2002年10月23日 申請(qǐng)日期2000年7月21日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月22日
發(fā)明者今西武, 小比賀聰 申請(qǐng)人:三共株式會(huì)社