一種抑菌保護(hù)劑以及制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種抑菌保護(hù)劑W及制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，在世界范圍內(nèi)每年有2 %的人口罹患食源性疾病，世界食品供應(yīng)量的25 %被 微生物污染。我國(guó)雖然對(duì)于食品法規(guī)越來(lái)越開放，但對(duì)食品安全要求則是越來(lái)越嚴(yán)格。隨著 人們消費(fèi)水平及意識(shí)的提高，天然的、安全的食品成為消費(fèi)者的主要消費(fèi)趨勢(shì)。而天然抑菌 成分主要分動(dòng)物源抑菌成分、植物源抑菌成分W及微生物源抑菌成分。由于微生物源抑菌 劑具有易獲取、來(lái)源廣、成本低、便于擴(kuò)大培養(yǎng)等諸多優(yōu)勢(shì)，成為近年食品保鮮劑開發(fā)的一 個(gè)重要的方向。
[0003] 乳制品抑菌方式包括乳制品內(nèi)源的成分作用，如具有廣譜抑菌特性的抗菌膚、乳 鐵蛋白及其水解產(chǎn)物乳鐵素、微生物發(fā)酵產(chǎn)生的有機(jī)酸等，另有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，德氏乳桿菌 保加利亞亞種、嗜熱鏈球菌等發(fā)酵有益菌種可W取代在腸道中生長(zhǎng)的多數(shù)腐敗細(xì)菌，減少 由腐敗菌產(chǎn)生的易腐敗代謝物，延長(zhǎng)了乳制品的保質(zhì)期。
[0004] 除產(chǎn)品內(nèi)源的抑菌體系外，從其他來(lái)源提取天然抑菌成分添加到產(chǎn)品中也成為乳 制品防腐的重要手段。此類外源抑菌成分主要包括抑菌類酶制劑、天然精油、多酪類等。如 目前研究最透徹、應(yīng)用最廣的是乳酸鏈球菌膚(Nisin) ,Nisin能有效地控制有害細(xì)菌，特別 是耐熱的芽抱桿菌及梭菌的生長(zhǎng)和繁殖，W達(dá)到延長(zhǎng)不同乳制品貨架期的目的。然而，與乳 制品內(nèi)源性抑菌體系相比，添加的外源抑菌成分存在作用范圍小、不具廣譜抑菌性的弊端。 并且為保證食品的安全性，按規(guī)定可添加于乳制品中的抑菌物質(zhì)種類有限，尤其是乳制品 因?yàn)槠渚哂幸欢ǖ乃旨盃I(yíng)養(yǎng)等特性，在加工和儲(chǔ)存過(guò)程中容易受到微生物污染而腐敗變 質(zhì)，Nisin因具有用量少、抗菌能力強(qiáng)等特點(diǎn)，是唯一可用于乳制品的抑菌添加劑，其他成分 添加劑對(duì)人體可能會(huì)產(chǎn)生一定的毒性，一定程度上限制了乳制品的抑菌物質(zhì)的開發(fā)，為開 發(fā)長(zhǎng)貨架期的乳制品帶來(lái)一定困難。故此現(xiàn)階段缺少一種作用范圍廣，具廣譜抗菌性的，高 效的，容易獲取，能夠大規(guī)模生產(chǎn)并應(yīng)用于乳制品的外源抑菌成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)目前用于乳制品中添加的外源抑菌成分存在著 不具廣譜抑菌性、作用范圍小，能確保安全無(wú)毒的種類極少等缺陷，本發(fā)明提供了一種抑菌 保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用，該抑菌保護(hù)劑來(lái)源于微生物，作用范圍廣且具廣譜抑菌性，天 然，安全，制備方法簡(jiǎn)單可靠，適合大規(guī)模生產(chǎn)W及在乳制品市場(chǎng)中應(yīng)用。
[0006] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案之一是，一種抑菌保護(hù)劑的制備方 法，所述制備方法包括W下步驟：
[0007] 1)將桑黃(Phellinus ba皿ii)子實(shí)體粉碎后加入水中，進(jìn)行沸水提??；
[000引2)將步驟1)所得混合物過(guò)濾，分別得到殘?jiān)吞崛∫海?br>[0009] 3)將步驟2)所得提取液濃縮后，取上清，即得濃縮液；
[0010] 4)在步驟3)所得濃縮液中加入乙醇，靜置，收集沉淀，加水溶解，取上清，即得抑菌 保護(hù)劑。
[0011] 本發(fā)明步驟1)為:將桑黃(Phellinus baumii)子實(shí)體粉碎后加入水中，進(jìn)行沸水 提取。其中，所述的桑黃子實(shí)體為桑黃(Phellinus baumii)菌種栽培得到。所述栽培條件為 常規(guī)，只要能由桑黃菌種得到桑黃子實(shí)體即可。桑黃作為一種珍貴的傳統(tǒng)藥用真菌，它最早 記載于《藥性論》，傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為桑黃味甘辛，是國(guó)際認(rèn)同的食品領(lǐng)域中相率最高的一種食 藥用真菌。目前，對(duì)于桑黃子實(shí)體水提物的生物活性有諸多報(bào)道，如抗氧化、抗衰老、提高免 疫力、抗突變、抗纖維化、抗肺炎等諸多生物功效。所述的桑黃子實(shí)體較佳地在粉碎前經(jīng)過(guò) 干燥，所述的干燥為常規(guī)干燥方法。所述的粉碎為常規(guī)的，較佳地為使用粉碎機(jī)粉碎子實(shí) 體，更佳地為將桑黃子實(shí)體粉碎至約0.5~3cm 3的顆粒，最佳地為將桑黃子實(shí)體粉碎成為約 Icm3的顆粒。所述的水為常規(guī)的，較佳地為去離子水，更佳地為10~25倍體積的去離子水， 最佳地為20~15倍體積的去離子水，所述體積倍數(shù)相對(duì)于桑黃子實(shí)體體積。所述的沸水提 取的提取時(shí)間為常規(guī)的，較佳地為1~3小時(shí)化），更佳地為1.5~2.5小時(shí)，最佳地為2小時(shí)。
[0012] 本發(fā)明步驟2)為:將步驟1)所得混合物過(guò)濾，分別得到殘?jiān)吞崛∫骸Ｆ渲?，所?的過(guò)濾是常規(guī)的，較佳的是使用4層紗布進(jìn)行過(guò)濾。
[0013] 本發(fā)明所述制備方法在步驟3)之前較佳地還包括步驟2'）即將步驟2)所述的殘?jiān)?再次進(jìn)行沸水提取，將所得提取液與步驟2)所得提取液合并。
[0014] 本發(fā)明步驟3)為:將步驟2)所得提取液濃縮后，取上清，即得濃縮液。其中，所述的 濃縮為常規(guī)的，較佳地為在減壓狀態(tài)下，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對(duì)提取液進(jìn)行減壓濃縮，更佳地為 減壓濃縮的過(guò)程中控制溫度不高于50°C。所述的上清為常規(guī)方法得到，較佳地為提取液濃 縮后經(jīng)離屯、去除沉淀后得到，更佳地為提取液濃縮后經(jīng)4000r/min離屯、IOmin去除沉淀得 到。
[001引本發(fā)明步驟4)為:在步驟3)所得濃縮液中加入乙醇，靜置，收集沉淀，加水溶解，取 上清，即得抑菌保護(hù)劑。其中，所述的乙醇為常規(guī)的，較佳地為加入乙醇后乙醇濃度為60% ~95%，所述百分比為體積百分比。所述的靜置的時(shí)間為常規(guī)的，較佳地為12~30小時(shí)，最 佳地為24小時(shí)，靜置溫度為常規(guī)的，較佳地為室溫。所述的收集沉淀的方法為常規(guī)的，較佳 地為靜置后倒出上清液部分，剩余部分經(jīng)4000r/min離屯、IOmin收集沉淀。所述的上清取得 方法與步驟3)所述的上清取得方法相同。
[0016] 較佳地，本發(fā)明所述制備方法步驟4)所述的上清經(jīng)過(guò)冷凍干燥即得抑菌保護(hù)劑。
[0017] 本發(fā)明所述制備方法較佳地在步驟4)之后還包括步驟5)，即將步驟4)所得抑菌保 護(hù)劑進(jìn)行透析，得到透析后的溶液，即為抑菌保護(hù)劑。其中，所述的透析為常規(guī)的，透析溫度 較佳地為4°C，透析時(shí)間為常規(guī)，較佳地為0~24小時(shí)，更佳地為4~24小時(shí)，最佳地為12~24 小時(shí)。
[0018] 較佳地本發(fā)明所述制備方法在步驟5)所述透析后的溶液經(jīng)過(guò)冷凍干燥即得抑菌 保護(hù)劑。前述步驟之后較佳地還包括步驟6):將步驟5)所述的抑菌保護(hù)劑加水進(jìn)行溶解，得 到不同濃度的抑菌保護(hù)劑溶液，所述抑菌保護(hù)劑溶液濃度較佳的為0.5mg/mL~lOOmg/mL。
[0019] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案之二是，一種抑菌保護(hù)劑，所述抑菌 保護(hù)劑由前述制備方法制備而得。
[0020] 本發(fā)明中，當(dāng)前述制備方法優(yōu)選地包括步驟6)時(shí)，即相應(yīng)制備得到不同濃度的抑 菌保護(hù)劑溶液。所述抑菌保護(hù)劑溶液濃度較佳的為〇.5mg/mL~lOOmg/mL。所述抑菌保護(hù)劑 或所述的抑菌保護(hù)劑溶液的作用溫度為常規(guī)的，較佳地為4~37°C。
[0021] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案之=是，抑菌保護(hù)劑在乳制品的應(yīng) 用。
[0022] 在符合本領(lǐng)域常識(shí)的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí) 例。
[0023] 本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0024] 本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于:本發(fā)明開發(fā)了一種抑菌保護(hù)劑的制備方法，該制備 方法操作簡(jiǎn)便，能較好的滿足工業(yè)化生產(chǎn)的需求。利用該制備方法制備的抑菌保護(hù)劑來(lái)源 于可食用真菌，安全可靠，具有廣譜抑菌性，可不同程度抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙 口氏菌、枯草芽抱桿菌、單增李斯特菌等有害細(xì)菌的生