專(zhuān)利名稱(chēng)：對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒一步法rt-pcr檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及對(duì)蝦傳染性病毒的檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法，屬于海洋生物病原檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
傳染性肌肉壞死病為2002年在巴西發(fā)現(xiàn)的一種危害對(duì)蝦生產(chǎn)的新的病毒性傳染病,2004年美國(guó)亞利桑納大學(xué)Donald V. Lightner博士研究發(fā)現(xiàn)該病由一種新的病毒引起并將之定名為傳染性肌肉壞死病毒(Infectious myonecrosis virus,簡(jiǎn)稱(chēng)IMNV)。這種新型病毒為雙鏈RNA病毒，屬于整體病毒科。對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒的易感對(duì)蝦種類(lèi)為南美白對(duì)蝦，主要是感染60-80天的幼蝦。該病毒能造成感病對(duì)蝦全身肌肉組織壞死，一般情況下，病理死亡發(fā)生緩慢，死亡率不高，但整個(gè)養(yǎng)殖過(guò)程都有死亡，累積死亡率可達(dá)70%。 目前已有的傳染性肌肉壞死病毒RT-PCR(反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))檢測(cè)方法為套式RT-PCR檢測(cè)方法，檢測(cè)過(guò)程較為繁瑣、費(fèi)時(shí)。而進(jìn)行對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒早期檢測(cè)并采取預(yù)防措施是對(duì)蝦養(yǎng)殖中降低對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒流行風(fēng)險(xiǎn)、減少對(duì)蝦發(fā)病導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)損失的有效手段，所以建立簡(jiǎn)單快速高靈敏的檢測(cè)方法，以及配合該檢測(cè)方法使用的病毒檢測(cè)試劑盒極為重要。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的在于解決現(xiàn)有套式RT-PCR檢測(cè)方法中存在的檢測(cè)過(guò)程繁瑣費(fèi)時(shí)的問(wèn)題，提供對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒一步法RT-PCR檢測(cè)試劑盒，同時(shí)還提供了利用該試劑盒進(jìn)行檢測(cè)的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法靈敏、特異，且可縮短反應(yīng)時(shí)間，減少實(shí)驗(yàn)步驟。本實(shí)用新型是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒一步法RT-PCR檢測(cè)試劑盒，包括長(zhǎng)方形盒體和試劑管，特殊之處在于所述盒體通過(guò)上蓋開(kāi)設(shè)的定位孔將試劑管安裝定位其內(nèi)部，所述試劑管包括并列安裝的(I)、RT-PCR buffer 管，內(nèi)裝 2 X RT-PCR buffer ；(2)、引物管，內(nèi)裝傳染性肌肉壞死病毒正反引物；(3)、酶管，內(nèi)裝反轉(zhuǎn)錄酶及DNA聚合酶；(4)、去離子水管，內(nèi)裝無(wú)菌去離子水；(5)、陰性對(duì)照管，內(nèi)裝SPF對(duì)蝦核酸；(6)、陽(yáng)性對(duì)照管，內(nèi)裝傳染性肌肉壞死病毒cDNA陽(yáng)性克隆。所述RT-PCR弓丨物對(duì)包括正向引物序列5，-CCAACATACGGTACAGTGGCAG-3 ’反向引物序列5，-ATCGGTTGCCCAGGATACAAG-3 ’產(chǎn)物長(zhǎng)度為123bp。對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒一步法RT-PCR檢測(cè)方法如下(I) RT-PCR 反應(yīng)體系[0020]
權(quán)利要求1.對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒一步法RT-PCR檢測(cè)試劑盒，包括長(zhǎng)方形盒體和試劑管，特征在于所述盒體通過(guò)上蓋開(kāi)設(shè)的定位孔將試劑管安裝定位其內(nèi)部，所述試劑管包括并列安裝的(1)、RT-PCRbuffer 管，內(nèi)裝 2 X RT-PCR buffer ； (2)、引物管，內(nèi)裝傳染性肌肉壞死病毒正反引物； (3)、酶管，內(nèi)裝反轉(zhuǎn)錄酶及DNA聚合酶； (4)、去離子水管，內(nèi)裝無(wú)菌去離子水； (5)、陰性對(duì)照管，內(nèi)裝SPF對(duì)蝦核酸； (6)、陽(yáng)性對(duì)照管，內(nèi)裝傳染性肌肉壞死病毒cDNA陽(yáng)性克隆。
專(zhuān)利摘要本實(shí)用新型涉及對(duì)蝦傳染性病毒的檢測(cè)試劑盒，屬于海洋生物病原檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本實(shí)用新型目的提供檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法更加靈敏、特異，且可縮短反應(yīng)時(shí)間，減少實(shí)驗(yàn)步驟。檢測(cè)試劑盒包括(1)、RT-PCRbuffer管，內(nèi)裝2×RT-PCRbuffer；(2)、引物管，內(nèi)裝傳染性肌肉壞死病毒正反引物；(3)、酶管，內(nèi)裝反轉(zhuǎn)錄酶及DNA聚合酶；(4)、去離子水管，內(nèi)裝無(wú)菌去離子水；(5)、陰性對(duì)照管，內(nèi)裝SPF對(duì)蝦核酸；(6)、陽(yáng)性對(duì)照管，內(nèi)裝傳染性肌肉壞死病毒cDNA陽(yáng)性克隆。檢測(cè)方法包括(1)RT-PCR反應(yīng)體系(2)RT-PCR反應(yīng)程序。
文檔編號(hào)C12Q1/70GK202530089SQ201220006340

公開(kāi)日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2012年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月18日
發(fā)明者劉鴻玲, 謝瑋, 閆冬春 申請(qǐng)人:魯東大學(xué)