一種采用高效液相色譜法分離檢測阿普斯特及其對映異構體的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學領域，具體涉及一種用高效液相色譜法分離測定阿普斯特及 其對映異構體的方法。
【背景技術】
[0002] 阿普斯特是一種磷酸二酯酶抑制劑，為首個被FDA在2014年3月21日批準上市、 用于治療銀肩病引起的關節(jié)炎的小分子藥物，原研公司為Celgene。化學結構式如下：
[0003]
[0004] 含有手性碳原子的對映異構體分離一直是手性藥物合成和制劑過程中質量控制 的難點。阿普斯特為手性藥物，為保證藥物的安全性，在質量標準中需要檢測藥物中對映異 構體雜質的含量。對映異構體在常規(guī)的高效液相色譜法中無法得到分離，必須使用合適的 手性柱才能達到分離。
[0005] 中國專利201410765717. 5公開了一種阿普斯特有關物質的方法，該方法使用 AD-H色譜柱，流動相為正己烷/異丙醇/二乙胺/三氟乙酸=80/20/0. 2/0. 5,流速1.0 mL/ min，柱溫40°C，檢測波長240nm，但該方法的分離度低。
[0006] 中國專利201510253092. 9公開了一種阿普斯特及其對映異構體的分離檢測方 法，該方法使用ChiralPak AD-H色譜柱，該類色譜柱的填料為表面涂敷直鏈淀粉-三（3， 5-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅膠，流動相為正己烷-無水乙醇-二乙胺=50 : 50 : 0.1， 流速1.0 ml/min，柱溫25°C，檢測波長240nm。但該方法靈敏度低，分離度小，主峰拖尾嚴重。
[0007] 中國專利201510188349. 7公開了另一種阿普斯特及其對映異構體的分離檢測方 法，該方法使用ChiralPak AD-H色譜柱或ChiralPak AS-H色譜柱，ChiralPakAD-H色譜 柱的填料為表面涂敷直鏈淀粉-三（3, 5-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅膠，AS-H色譜柱的填 料為表面涂敷直鏈淀粉-三（S)-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅膠，流動相為正己烷-異丙 醇-甲醇（100 : 900 : 100)，流速l.Oml/min，柱溫35°C，檢測波長230η。但該方法使用 ChiralPakAD-H色譜柱時分離效果不佳，使用AS-H色譜柱時分離效果較好，但該類色譜柱 價格昂貴。
[0008] 實現(xiàn)阿普斯特與其對映異構體的有效分離在阿普斯特的合成和制劑的質量控制 中具有重要的意義，為了有效控制阿普斯特的質量，需要發(fā)明一種能將阿普斯特與其對應 異構體有效分離的高效液相測定方法。

【發(fā)明內容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于提供一種用高效液相色譜法分離測定阿普斯特及其對映異構 體的方法，該方法能將阿普斯特與其對映異構體有效分離，實現(xiàn)了阿普斯特的質量控制。
[0010] 本發(fā)明通過如下技術方案實現(xiàn)：
[0011] -種分離阿普斯特及其對映異構體的高效液相檢測方法，該方法采用直鏈淀粉類 手性柱，其中所述直鏈淀粉類手性柱為ChiralPak AD、ChiralPak AD-H、S-Chiral，優(yōu)選 ChiralPak AD-H ;以烷烴-極性有機溶劑為流動相，其中所述烷烴-極性有機溶劑溶液中包 含乙二胺、二乙胺、三乙胺中的一種有機堿，優(yōu)選乙二胺，所述極性有機溶劑由第一有機溶 劑和第二有機溶劑組成，所述烷烴選自正己烷、己烷，優(yōu)選己烷，所述第一有機溶劑選自甲 醇、乙醇、異丙醇，優(yōu)選乙醇，所述第二有機溶劑選自乙腈。流動相中，所述烷烴-第一有機 溶劑-第二有機溶劑的體積比為：40~50 : 40~50 : 5~15,優(yōu)選45 : 45 : 10,所述 有機堿的濃度（V/V)為0. 05 %~0. 15 %，優(yōu)選0. 1 %。
[0012] 所述色譜條件還可以進一步優(yōu)選流動相流速為0. 6~1.0 ml/min，優(yōu)選0. 8ml/ min ;檢測波長200nm~260nm，優(yōu)選230nm ;柱溫：30°C~40°C，優(yōu)選35°C ;
[0013] 上述實施方案中，本發(fā)明的方法，進一步包含以下內容：
[0014] 取阿普斯特適量，加乙腈Iml使溶解，用乙醇稀釋制成每1ml約含1.0 mg的溶液， 作為供試品溶液；精密量取適量，用溶劑稀釋并制成每1ml中約含10 μ g的溶液。照高效 液相法（中國藥典2010年版二部附錄V D)測定。用（ChiralPak AD-H)為填充劑，以己 烷-乙醇-乙腈-二乙胺（45 : 45 : 10 : 0. 1)為流動相，柱溫35°C，檢測波長230nm，流 速為每分鐘〇. 8ml。取阿普斯特消旋體適量，加乙腈Iml使溶解，用乙醇稀釋并制成每1ml 中約含1.0 mg的溶液，取10 μ 1注入液相色譜儀，記錄色譜圖，阿普斯特R異構體與阿普斯 特依次流出，阿普斯特與異構體見的分離度應符合要求。精密量取供試品溶液和對照溶液 各10 μ 1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖中阿普斯特R異構體峰不 得大于對照溶液主峰面積（1. 0% )。
[0015] 本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明的方法可以將阿普斯特及其對映異構體有效分離， 該方法靈敏度高，柱效高，峰行對稱，從而可以準確控制阿普斯特的質量，簡單、快速、準確 地分離檢測出阿普斯特的對映異構體。
【附圖說明】
[0016] 圖1空白溶液圖譜
[0017] 圖2阿普斯特消旋體圖譜
[0018] 圖3阿普斯特供試品溶液圖譜
【具體實施方式】
[0019] 下面的實施例將對本發(fā)明作更具體的解釋，但本發(fā)明并不僅僅局限于這些實施 例，同樣這些實施例也不以任何方式限制本發(fā)明。
[0020] [實施例1]
[0021] 儀器與條件
[0022] 高效液相色譜儀：Agi lent 1260
[0023] 色譜柱：ChiralPak AD-H (250*4. 6mm，5 μ m)
[0024] 流動相：己烷-乙醇-乙腈-二乙胺（45 : 45 : 10 : 0· I)
[0025] 流速：0· 8ml/min
[0026] 波長：230nm
[0027] 柱溫：35°C
[0028] 進樣量：10 μ L
[0029] 實驗步驟：
[0030] 取阿普斯特5mg，加乙腈Iml使溶解，用乙醇稀釋制成每1ml約含1.0 mg的溶液，作 為供試品溶液；取阿普斯特消旋體5mg，加乙腈Iml使溶解，用乙醇稀釋并制成每1ml中約 含1.0 mg的溶液，取10 μ 1注入液相色譜儀，記錄色譜圖，精密量取供試品溶液10 μ 1，分別 注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
【主權項】
1. 一種采用高效液相色譜法分離檢測阿普斯特及其對映異構體的方法，其特征在于該 方法色譜條件采用表面涂敷直鏈淀粉-三（3,5_二甲苯基氨基甲酸酯）硅膠為填料的手性 柱，以己燒 -乙醇-乙臆-二乙胺為流動相。2. 如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于該方法中所述的表面涂敷直鏈淀粉-三 (3,5_二甲苯基氨基甲酸酯）的硅膠為填料的手性柱為ChiralPak AD、ChiralPak AD-H、 S-Chiral03. 如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于該方法中所述流動相己烷-乙醇-乙 腈-二乙胺溶液的體積比為：45 : 45 : 10 : 0.1。4. 如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于該方法色譜條件中柱溫為：30°C~40°C。5. 如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于該方法色譜條件中流動相的流速為： 0? 6 ~L 0ml/min〇6. 如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于該方法色譜條件中檢測波長為：200nm~ 260nm〇7. 如權利要求4所述的檢測方法，其特征在于該方法色譜條件中柱溫為：35°C。8. 如權利要求5所述的檢測方法，其特征在于該方法色譜條件中流動相的流速為： 0. 8ml/min〇9. 如權利要求6所述的檢測方法，其特征在于該方法色譜條件中檢測波長為：230nm。
【專利摘要】一種用高效液相色譜法分離檢測阿普斯特及其對映異構體的方法，該方法色譜條件采用表面涂敷直鏈淀粉-三(3，5-二甲苯基氨基甲酸酯)硅膠為填料的手性柱，流動相為己烷-乙醇-乙腈-二乙胺(45∶45∶10∶0.1)，流速為0.8ml/min，波長為230nm，柱溫為35℃。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號】CN105136933
【申請?zhí)枴緾N201510585123
【發(fā)明人】張在富, 吳浩山, 許馨文
【申請人】億邦國創(chuàng)藥物研究院(北京)有限公司
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年9月16日