一種注射用胸腺肽的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說(shuō)，是涉及一種注射用胸腺肽的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]注射用胸腺肽是由動(dòng)物臟器提取的多組分混合物，用于治療各種原發(fā)性或繼發(fā)性T細(xì)胞缺陷病、某些自身免疫性疾病、各種細(xì)胞免疫功能低下的疾病及腫瘤的輔助治療。在注射用胸腺肽中，不僅含有分子量為3108的胸腺肽α:，還含有的分子量大于10000的高分子質(zhì)量蛋白以及其他復(fù)雜成分。其中，胸腺肽Ct1是注射用胸腺肽的主要活性成分，是一種針對(duì)T細(xì)胞的免疫增強(qiáng)劑；而高分子質(zhì)量蛋白會(huì)引起過(guò)敏等安全隱患。因此，為保證藥品的質(zhì)量、確保臨床用藥的安全性，對(duì)注射用胸腺肽進(jìn)行檢測(cè)至關(guān)重要。
[0003]目前，《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》第十六冊(cè)收載的檢測(cè)胸腺肽溶液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用高效液相色譜法，以核糖核酸酶A (分子量為13700)、胰島素(分子量為5808)、胸腺肽a j (分子量為3108)和生長(zhǎng)激素釋放抑制因子(分子量為1521)作為對(duì)照品進(jìn)行檢測(cè)。在檢測(cè)過(guò)程中，為了保證所配置的色譜條件和設(shè)定的參數(shù)的適用性以及確定分析使用的色譜條件的有效性，需要對(duì)理論板數(shù)與分離度進(jìn)行考察。其中，理論板數(shù)是以被分析物主峰或規(guī)定的色譜峰計(jì)算柱效，用來(lái)確定色譜峰的尖銳程度，特別在測(cè)定微量成分時(shí)尤為重要，由于核糖核酸酶A分子量大于10000且在注射用胸腺肽中的含量不超過(guò)5%，因此理論板數(shù)按核糖核酸酶A計(jì)算；而分離度是指注射用胸腺肽中各組分在高效液相色譜法中分離的程度，由于胸腺肽α ,是一種小分子多肽，化學(xué)合成的多肽中含有的部分雜質(zhì)分子結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)與目標(biāo)物十分相似，給其分離純化帶來(lái)很大困難，因此必須保證被測(cè)成分峰與其他色譜峰完全分離。
[0004]但是，按照現(xiàn)彳丁《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》WS1-XG-044-2000 (以下簡(jiǎn)稱(chēng)法定標(biāo)準(zhǔn))中色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，得到的理論板數(shù)與分離度均達(dá)不到法定標(biāo)準(zhǔn)的要求，從而影響到產(chǎn)品的正常檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]有鑒于此，本發(fā)明提供了一種注射用胸腺肽的檢測(cè)方法，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法能夠保證理論板數(shù)和分離度均達(dá)到法定標(biāo)準(zhǔn)要求，使檢測(cè)結(jié)果真實(shí)可靠。
[0006]本發(fā)明提供了一種注射用胸腺肽的檢測(cè)方法，包括:
[0007]a)將注射用胸腺肽待測(cè)樣品與流動(dòng)相混合后，進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，得到注射用胸腺肽待測(cè)樣品的液相色譜圖；
[0008]所述流動(dòng)相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為(0.01 ?0.5):20:80 ；
[0009]b)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液液相色譜圖的保留時(shí)間與所述標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子量關(guān)系，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0010]根據(jù)所述注射用胸腺肽待測(cè)樣品的液相色譜圖與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到注射用胸腺肽待測(cè)樣品中有效成分和有害物質(zhì)的含量。
[0011]優(yōu)選的，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為0.05:20:80o
[0012]優(yōu)選的，步驟a)中所述注射用胸腺肽待測(cè)樣品與流動(dòng)相的用量比為(0.5mg?
1.5mg): ImL0
[0013]優(yōu)選的，步驟a)中所述液相色譜檢測(cè)的色譜柱為T(mén)SK GEL 2005WX1型凝膠色譜柱。
[0014]優(yōu)選的，步驟a)中所述液相色譜檢測(cè)的流動(dòng)相流速為0.5mL/min?1.0mL/min。
[0015]優(yōu)選的，步驟a)中所述液相色譜檢測(cè)的波長(zhǎng)為200nm?220nm。
[0016]優(yōu)選的，步驟a)中所述液相色譜檢測(cè)的柱溫為25°C?35°C。
[0017]優(yōu)選的，步驟a)中所述液相色譜檢測(cè)的進(jìn)樣量為15 μ L?25 μ L。
[0018]優(yōu)選的，步驟b)中所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為0.5mg/mL?1.5mg/mL。
[0019]本發(fā)明提供了一種注射用胸腺肽的檢測(cè)方法，包括:a)將注射用胸腺肽待測(cè)樣品與流動(dòng)相混合后，進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，得到注射用胸腺肽待測(cè)樣品的液相色譜圖；所述流動(dòng)相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為(0.0l?0.5):20:80 ;b)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液液相色譜圖的保留時(shí)間與所述標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子量關(guān)系，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；根據(jù)所述注射用胸腺肽待測(cè)樣品的液相色譜圖與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到注射用胸腺肽待測(cè)樣品中有效成分和有害物質(zhì)的含量。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法能夠保證理論板數(shù)和分離度均達(dá)到法定標(biāo)準(zhǔn)要求，使檢測(cè)結(jié)果真實(shí)可靠。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法的理論板數(shù)能夠達(dá)到8574，遠(yuǎn)高于法定標(biāo)準(zhǔn)的5000，分離度為7.5?22.3，遠(yuǎn)高于法定標(biāo)準(zhǔn)要求的3.0。
【附圖說(shuō)明】
[0020]圖1為實(shí)施例1提供的核糖核酸酶A標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的高效液相色譜圖；
[0021]圖2為實(shí)施例1提供的膜島素標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的尚效液相色譜圖；
[0022]圖3為實(shí)施例1提供的胸腺肽ai標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的高效液相色譜圖；
[0023]圖4為實(shí)施例1提供的生長(zhǎng)激素釋放抑制因子標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的高效液相色譜圖；
[0024]圖5為實(shí)施例1得到的注射用胸腺肽待測(cè)樣品的高效液相色譜圖；
[0025]圖6為實(shí)施例2得到的注射用胸腺肽待測(cè)樣品的高效液相色譜圖；
[0026]圖7為實(shí)施例3得到的注射用胸腺肽待測(cè)樣品的高效液相色譜圖；
[0027]圖8為對(duì)比例I得到的注射用胸腺肽待測(cè)樣品的高效液相色譜圖；
[0028]圖9為對(duì)比例2得到的注射用胸腺肽待測(cè)樣品的高效液相色譜圖；
[0029]圖10為對(duì)比例3得到的注射用胸腺肽待測(cè)樣品的高效液相色譜圖；
[0030]圖11為對(duì)比例4得到的注射用胸腺肽待測(cè)樣品的高效液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0031]下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0032]本發(fā)明提供了一種注射用胸腺肽的檢測(cè)方法，包括:
[0033]a)將注射用胸腺肽待測(cè)樣品與流動(dòng)相混合后，進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，得到注射用胸腺肽待測(cè)樣品的液相色譜圖；
[0034]所述流動(dòng)相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為(0.01 ?0.5):20:80 ；
[0035]b)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液液相色譜圖的保留時(shí)間與所述標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子量關(guān)系，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0036]根據(jù)所述注射用胸腺肽待測(cè)樣品的液相色譜圖與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到注射用胸腺肽待測(cè)樣品中有效成分和有害物質(zhì)的含量。
[0037]在本發(fā)明中，將注射用胸腺肽待測(cè)樣品與流動(dòng)相混合后，進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，得到注射用胸腺肽待測(cè)樣品的液相色譜圖。本發(fā)明對(duì)所述注射用胸腺肽的來(lái)源沒(méi)有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的市售商品即可。在本發(fā)明中，所述流動(dòng)相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物。本發(fā)明采用三元流動(dòng)相，目的是將注射用胸腺肽中有效成分和雜質(zhì)進(jìn)行分離，在此基礎(chǔ)上為提高注射用胸腺肽檢測(cè)的準(zhǔn)確性，需要對(duì)流動(dòng)相中各組分的比例進(jìn)行控制，以提高理論板數(shù)和分離度，從而提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。在本發(fā)明中，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為(0.01?0.5):20:80，優(yōu)選為為(0.02?0.1):20:80，更優(yōu)選為為 0.05:20:80o
[0038]在本發(fā)明中，將注射用胸腺肽待測(cè)樣品與流動(dòng)相混合，得到待測(cè)溶液。在本發(fā)明中，所述注射用胸腺肽待測(cè)樣品與流動(dòng)相的用量比優(yōu)選為(0.5mg?1.5mg):lmL，更優(yōu)選為Img:lmL。本發(fā)明對(duì)所述混合的方式?jīng)]有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的人工攪拌或機(jī)械攪拌即可，目的是將注射用胸腺肽待測(cè)樣品溶解在所述流動(dòng)相中得到待測(cè)溶液。
[0039]得到所述待測(cè)溶液后，本發(fā)明將所述待測(cè)溶液進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，得到注射用胸腺肽待測(cè)樣品的液相色譜圖。在本發(fā)明中，所述液相色譜檢測(cè)優(yōu)選為高效液相色譜檢測(cè)；本發(fā)明對(duì)所述高效液相色譜檢測(cè)的儀器沒(méi)有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的高效液相色譜儀即可。
[0040]在本發(fā)明中，所述液相色譜檢測(cè)的色譜柱優(yōu)選為T(mén)SK GEL 2005WX1型凝膠色譜柱。在本發(fā)明中，所述TSK GEL 2005WX1型凝膠色譜柱的尺寸為:長(zhǎng)X寬=300mmX7.8mm，內(nèi)徑=5μπι。本發(fā)明對(duì)所述色譜柱的來(lái)源沒(méi)有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的上述TSKGEL 2005WX1型凝膠色譜柱的市售商品即可。在本發(fā)明中，所述色譜柱對(duì)實(shí)現(xiàn)待測(cè)溶液中各成分的分離有重要作用，色譜柱與流動(dòng)相的相互作用，對(duì)注射用胸腺肽檢測(cè)的準(zhǔn)確性有重要影響。
[0041]在本發(fā)明中，所述液相色譜檢測(cè)的進(jìn)樣量?jī)?yōu)選為15 μ L?25 μ L，更優(yōu)選為20 μ L0在本發(fā)明中，選擇適合的進(jìn)樣量能夠避免壓力突然上升而造成的色譜柱破壞，從而提高色譜柱的使用壽命。
[0042]在本發(fā)明中，所述液相色譜檢測(cè)的柱溫優(yōu)選為25°C?35°C，更優(yōu)選為30°C。在本發(fā)明中，選擇合適的柱溫對(duì)色譜柱與流動(dòng)相的相互作用起到積極效果。
[0043]在本發(fā)明中，所述液相色譜檢測(cè)的流動(dòng)相流速優(yōu)選為0.5mL/min?1.0mL/min,更優(yōu)選為0.7mL/min。在本發(fā)明中，選擇合適的流動(dòng)相流速能夠避免由于流動(dòng)相的突然變化造成柱壓增加過(guò)大對(duì)色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞。
[0044]在本發(fā)明中，所述液相色譜檢測(cè)優(yōu)選采用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)