乳腺癌的診斷標(biāo)志物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地本發(fā)明涉及一種可用于診斷 乳腺癌和/或乳腺癌預(yù)后的異常巖藻糖基化鞘糖脂。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖脂是含有糖基的脂質(zhì)，由糖的半縮醛羥基通過糖苷鍵與脂質(zhì)相連而成。其非脂 部分為糖基，脂部分為鞘氨醇或甘油，而且糖脂可根據(jù)脂部分的構(gòu)成而再分為鞘糖脂與甘 油糖脂，其中研究得較為深入的是糖鞘脂。鞘糖脂分子中的糖基數(shù)目不等。僅含一個糖基 的鞘糖脂統(tǒng)稱腦苷脂。含多個糖基的鞘糖脂又分為兩大類：不含唾液酸的中性鞘糖脂和含 有唾液酸的酸性鞘糖脂。
[0003] 鞘糖脂位于細胞膜脂質(zhì)雙分子層，非極性的碳氫長鏈埋在外側(cè)脂層中，極性的糖 鏈伸展到胞外水相中，是哺乳動物細胞膜上的必需組成成分之一。細胞膜上的鞘糖脂與細 胞生理狀況密切相關(guān)，參與細胞的多種生物學(xué)活動，其生物學(xué)功能非常復(fù)雜，在免疫應(yīng)答、 細胞發(fā)育、細胞識別及分化中都發(fā)揮重要的作用。此外，鞘糖脂的組成，無論是神經(jīng)酰胺部 分還是糖鏈部分，都表現(xiàn)出一定的種族、個體、組織以及同一組織內(nèi)各部分細胞的專一性。 即使同一類細胞，在不同的發(fā)育階段，鞘糖脂的組成也不同。正因為某些類型鞘糖脂是某 種細胞在某個發(fā)育階段所特有的，所以組織器官中鞘糖脂的異常表達往往與各種疾病具有 明顯的相關(guān)性，而鞘糖脂也常常被作為細胞表面標(biāo)志物質(zhì)。
[0004] 乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。乳腺癌中99%發(fā)生在女性，男性僅 占1%。原位乳腺癌雖然不致命，但是由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性，細胞之間的 粘連作用變小，容易脫落，也因此非常容易擴散，游離的癌細胞可以隨血液或淋巴液播散全 身，形成轉(zhuǎn)移，危及生命。目前乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。全球乳腺癌發(fā) 病率自20世紀(jì)70年代末開始一直呈上升趨勢。近年來，我國乳腺癌的發(fā)病率也呈現(xiàn)上升 的趨勢。據(jù)國家癌癥中心和衛(wèi)生部疾病預(yù)防控制局2012年公布的2009年乳腺癌發(fā)病數(shù)據(jù) 顯示：全國腫瘤登記地區(qū)乳腺癌發(fā)病率位居女性惡性腫瘤的第1位，女性乳腺癌發(fā)病率(粗 率)全國合計為42. 55/10萬，城市為51. 91/10萬，農(nóng)村為23. 12/10萬。然而，遺憾的是，目 前尚不完全清楚乳腺癌的發(fā)病機制。因此，目前對于乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷，是提高 療效的關(guān)鍵途徑。
[0005] 目前對于乳腺癌的早期診斷大部分還停留在影像學(xué)檢驗、組織病理學(xué)檢驗上，因 此急需發(fā)展一種生物學(xué)的分子診斷標(biāo)志物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是針對目前乳腺癌分子診斷標(biāo)志物匱乏的情況下，發(fā)現(xiàn)和發(fā)展一種 新的生物學(xué)診斷標(biāo)志物。這種標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)，將進一步推動乳腺癌的早期診斷、治療、以及 預(yù)后處理，具有重要的臨床意義。
[0007] 為達此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0008] 在第一方面，本發(fā)明提供了異常巖藻糖基化鞘糖脂在制備用于診斷乳腺癌和/或 乳腺癌預(yù)后的藥物中的用途，其中所述異常巖藻糖基化鞘糖脂中包含F(xiàn)uc-LacCer結(jié)構(gòu)，優(yōu) 選地所述藥物中包含以Fuc-LacCer結(jié)構(gòu)為抗原或表位的抗體，更優(yōu)選地，所述抗體為單克 隆抗體。
[0009] 在第二方面，本發(fā)明提供了 FUTl基因和/或FUT2基因在制備用于診斷乳腺癌和 /或乳腺癌預(yù)后的藥物或試劑盒中的用途，其中所述FUTl基因的序列為SEQ ID NO: 1 ;所述 FUT2基因的序列為SEQ ID N0:2。
[0010] 本發(fā)明的FUTl基因和/或FUT2基因在制備用于診斷乳腺癌和/或乳腺癌預(yù)后的 藥物或試劑盒中的用途中，所述藥物或所述試劑盒包含可擴增FUTl基因和/或FUT2基因 的引物對。
[0011] 本發(fā)明的FUTl基因和/或FUT2基因在制備用于診斷乳腺癌和/或乳腺 癌預(yù)后的藥物或試劑盒中的用途中，所述可擴增FUTl基因的引物對為：FUTl-F : GCAGGTTATGCCTCAGCG (SEQ ID NO:3) ；FUT1-R ：TCCATCGCCAGCAAACG (SEQ ID N0:4)〇
[0012] 本發(fā)明的FUTl基因和/或FUT2基因在制備用于診斷乳腺癌和/或乳腺 癌預(yù)后的藥物或試劑盒中的用途中，所述可擴增FUT2基因的引物對為：FUT2-F : CGTTCAGATGCCTTTCTCCTTT (SEQ ID NO: 5) ；FUT2-R ：GGTCCCAGTGCCTTTGATGTTG (SEQ ID N0:6)。
[0013] 本發(fā)明的FUTl基因和/或FUT2基因在制備用于診斷乳腺癌和/或乳腺癌預(yù)后的 藥物或試劑盒中的用途中，所述藥物組合物或所述試劑盒還包含對照引物對：β-actin-F: CACCATTG GCAATGAGCGGTTCC (SEQ ID NO:7)； β-actin-R =GTAGTT TCGTGGATGCCACAGG (SEQ ID N0:8)。
[0014] 本發(fā)明的FUTl基因和/或FUT2基因在制備用于診斷乳腺癌和/或乳腺癌預(yù)后的 藥物或試劑盒中的用途中，所述試劑盒還包含逆轉(zhuǎn)錄體系。
[0015] 本發(fā)明的FUTl基因和/或FUT2基因在制備用于診斷乳腺癌和/或乳腺癌預(yù)后的 藥物或試劑盒中的用途中，所述逆轉(zhuǎn)錄體系包含T重復(fù)寡核苷酸Ologo dT、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液、 M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、dNTPs。
[0016] 本發(fā)明的FUTl基因和/或FUT2基因在制備用于診斷乳腺癌和/或乳腺癌預(yù)后的 藥物或試劑盒中的用途中，所述試劑盒還包含PCR擴增體系。
[0017] 本發(fā)明的FUTl基因和/或FUT2基因在制備用于診斷乳腺癌和/或乳腺癌預(yù)后的 藥物或試劑盒中的用途中，所述PCR擴增體系為SYBR Green聚合酶鏈反應(yīng)體系。
[0018] 附圖簡述
[0019] 圖1顯示乳腺癌中的Fuc-LacCer高表達(A為癌旁對照組織的鞘糖脂質(zhì)譜結(jié)構(gòu)，B 為腫瘤組織的鞘糖脂質(zhì)譜圖譜，其中m/zll84即為Fuc-LacCer);
[0020] 圖2顯示Fuc-LacCer在乳腺癌中高表達（A質(zhì)譜的相對定量統(tǒng)計學(xué)證明 Fuc-LacCer在乳腺癌中表達，B為ROC分析結(jié)果證明Fuc-LacCer同Globo-H -樣在乳腺癌 中有很高的陽性率）
[0021] 圖3為顯示在多個乳腺癌細胞系中的FUTl和FUT2的表達水平都高于對照組的 PCR擴增結(jié)果
【具體實施方式】
[0022] 下面結(jié)合附圖并通過【具體實施方式】來進一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0023] 實施例1
[0024] 乳腺癌組織中Fuc-LacCer水平的的檢測，樣本從蘇州大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院獲 得，彳目息如表1所不。
【主權(quán)項】
1. 異常巖藻糖基化鞘糖脂在制備用于診斷乳腺癌和/或乳腺癌預(yù)后的藥物中的用 途，其中所述異常巖藻糖基化鞘糖脂中包含F(xiàn)uc-LacCer結(jié)構(gòu)，優(yōu)選地所述藥物中包含以 Fuc-LacCer結(jié)構(gòu)為抗原或表位的抗體，更優(yōu)選地，所述抗體為單克隆抗體。 2. FUT1基因和/或FUT2基因在制備用于診斷乳腺癌和/或乳腺癌預(yù)后的藥物或試劑 盒中的用途，其中所述FUT1基因的序列為SEQ ID N0:1;所述FUT2基因的序列為SEQ ID N0:2。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2中所述的用途，其特征在于，所述藥物或所述試劑盒包含可擴增 FUT1基因和/或FUT2基因的引物對。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3中所述的用途，其特征在于，所述可擴增FUT1基因的引物對為： FUT1-F ：GCAGGTTATGCCTCAGCG(SEQ ID NO:3)；FUT1-R ：TCCATCGCCAGCAAACG(SEQ ID N0:4)〇
5. 根據(jù)權(quán)利要求3或4中所述的用途，其特征在于，所述可擴增FUT2基因的引物對為： FUT2-F ：CGTTCAGATGCCTTTCTCCTTT (SEQ ID N0:5)；FUT2-R ：GGTCCCAGTGCCTTTGATGTTG (SEQ ID N0:6)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3至5中任一項所述的用途，其特征在于，所述藥物組合物或所述 試劑盒還包含對照引物對：0 -actin-F :CACCAITG GCAATGAGCGGITCC (SEQ ID NO: 7 ); ^-actin-R ：GTAGTT TCGTGGATGCCACAGG (SEQ ID N0:8)〇
7. 根據(jù)權(quán)利要求3至6中任一項所述的用途，其特征在于，所述試劑盒還包含逆轉(zhuǎn)錄體 系。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于，所述逆轉(zhuǎn)錄體系包含T重復(fù)寡核苷酸 Ologo dT、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液、M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、dNTPs，優(yōu)選地所述逆轉(zhuǎn)錄體系還 包含焦炭酸二乙酯處理的水、M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶緩沖液。
9. 根據(jù)權(quán)利要求3至8中任一項所述的用途，其特征在于，所述試劑盒還包含PCR擴增 體系。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述PCR擴增體系為SYBR Green聚合酶 鏈反應(yīng)體系。
【專利摘要】本發(fā)明公開了異常巖藻糖基化鞘糖脂及編碼其合成關(guān)鍵酶的基因FUT1和FUT2基因在制備診斷乳腺癌和/或乳腺癌預(yù)后的藥物或試劑盒中的用途。
【IPC分類】G01N33-92, C12Q1-68, G01N33-574, G01N33-577
【公開號】CN104655859
【申請?zhí)枴緾N201310596407
【發(fā)明人】吳忠福, 李云森, 許秀坤
【申請人】蘇州中贏醫(yī)療科技有限公司
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2013年11月21日