煙草或其制品中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種煙草或其制品中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定方法，包括以下步驟：稱取煙草或其制品樣品，加水溶解，超聲震蕩、離心得待測樣品溶液；將牛血清蛋白溶于水中，配制牛血清白蛋白儲備液，然后稀釋成不同濃度的牛血清白蛋白標準液；將考馬斯亮藍G-250溶于90%的乙醇中，加入質(zhì)量濃度為850g/L的磷酸，用水定容，再加入Brij-35，配成考馬斯亮藍G-250標準液；將牛血清白蛋白標準液分別與考馬斯亮藍G-250標準液和待測樣品溶液結(jié)合，通過連續(xù)流動分析儀的程序運行將各試劑按序進樣，在595nm波長下檢測待測樣品中可溶性蛋白質(zhì)的含量。本方法直接檢測可溶性蛋白質(zhì)的含量，不需要與標準曲線人為對比，操作簡便、自動化程度高、樣品回收方便，準確率和重復性都較高。
【專利說明】煙草或其制品中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定方法【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及煙草的檢測技術，具體是一種煙草或其制品中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定方法。
技術背景
[0002]在煙葉眾多成分中，蛋白質(zhì)的含量最為豐富，如白肋煙中蛋白質(zhì)含量高達20.48%。煙葉中的蛋白質(zhì)分為可溶性蛋白質(zhì)和不溶性蛋白質(zhì)。可溶性蛋白質(zhì)中一半左右是葉綠體蛋白質(zhì)(Fraction I protein, FI蛋白),另一半為其他可溶性蛋白質(zhì)的復合物(Fraction IIprotein, FII蛋白)。研究結(jié)果表明，植物葉片中可溶性蛋白質(zhì)的含量以煙草葉片中含量最高，F(xiàn)I蛋白中的各種必需氨基酸含量不僅均高于世界糧農(nóng)組織(FAO)制定的蛋白制品中必需氨基酸的含量標準，其中酪氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸和亮氨酸都超過該標準一倍左右，t匕一些主要糧食作物如水稻、小麥、玉米、大豆蛋白質(zhì)中的必需氨基酸含量都高，表明煙葉中FI蛋白具有較高的營養(yǎng)價值。
[0003]目前，植物中可溶性蛋白質(zhì)的檢測方法主要有Lowry法和考馬斯亮藍法，Lowry法具有測定范圍窄、使用試劑多、耗時等缺點，而考馬斯亮藍法在一定范圍內(nèi)準確度高，而且前處理相對簡單，但大批量檢測時比較耗時。有些研究人員采用流動分析法檢測煙草中的蛋白質(zhì)含量，其原理是利用煙草中可溶性蛋白質(zhì)在0.5%的熱醋酸溶液中發(fā)生變性沉淀，從而將可溶性蛋白質(zhì)分離后再測定其中的非蛋白質(zhì)氮，蛋白質(zhì)的量由6.25X (總氮一非蛋白質(zhì)氮)計算煙草中總蛋白質(zhì)的含量。這種方法根據(jù)經(jīng)驗值計算，結(jié)果準確度稍差，前處理比較麻煩。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術問題是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種煙草或其制品中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定方法，該方法利用連續(xù)流動分析儀直接檢測煙草或其制品中可溶性蛋白質(zhì)的含量，不需要與標準曲線人為對`比，不僅操作簡便、自動化程度高、樣品回收方便，而且準確率和重復性都較高。`
[0005]為解決上述技術問題，本發(fā)明提供了一種煙草或其制品中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定方法，包括以下具體步驟:
(1)稱取煙草樣品或煙草制品樣品0.25~1.0 g，加入蒸餾水25~100 mL溶解，然后超聲震蕩20~45 min、以3000-10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心5~20 min,將上清液通過中速定量無灰濾紙過濾至樣品杯中，得到待測樣品溶液；
(2)稱取1.0g牛血清蛋白溶于蒸餾水中，定容至100 mL，中速定量無灰濾紙過濾，得到10 mg/mL的牛血清白蛋白儲備液,然后將儲備液稀釋成濃度為1.0 mg/mL、0.8 mg/mL、
0.6 mg/mL、0.4 mg/mL和0.2 mg/mL的牛血清白蛋白標準溶液各100 mL ；
(3)量取900mL無水乙醇加入到1000 mL容量瓶中，用蒸餾水定容至1000 mL，中速定量無灰濾紙過濾，得到90%的乙醇溶液；(4)稱取100mg考馬斯亮藍G-250溶于50 mL上述90%的乙醇中，加入質(zhì)量濃度850g/L的磷酸100 mL,最后用蒸懼水定容至1000 mL,加入0.5 mL Bri j-35 (十二烷基聚乙二醇醚)，中速定量無灰濾紙過濾，得到考馬斯亮藍G-250標準溶液；
(5)將牛血清蛋白標準溶液和待測樣品溶液分別與考馬斯亮藍G-250標準溶液結(jié)合，通過連續(xù)流動分析儀的程序運行將各試劑按序進樣，在595 nm波長下檢測待測樣品中可溶性蛋白質(zhì)的含量。
[0006](6)按YC/T31-1996標準方法測定煙草或其制品樣品中的水分含量，進而結(jié)合步驟(5)測得的可溶性蛋白質(zhì)的含量計算待測樣品中可溶性蛋白質(zhì)的絕干含量(質(zhì)量百分含量)。
[0007]可溶性蛋白質(zhì)的絕干含量W (%)的計算公式為:
【權利要求】
1.煙草或其制品中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定方法，其特征在于包括以下步驟: (1)稱取煙草或其制品樣品，加入蒸餾水溶解，然后超聲震蕩、離心得到待測樣品溶液； (2)將98%的牛血清蛋白溶于蒸餾水中，配制牛血清白蛋白儲備液，然后將儲備液稀釋成不同濃度的牛血清白蛋白標準溶液； (3)將無水乙醇加入到容量瓶中，用蒸餾水定容，配成90%的乙醇溶液； (4)將考馬斯亮藍G-250溶于上述90%的乙醇中，加入質(zhì)量濃度為850g/L的磷酸，最后用蒸餾水定容，再加入Bri j-35，配成考馬斯亮藍G-250標準溶液； (5)將牛血清白蛋白標準溶液分別與考馬斯亮藍G-250標準溶液和待測樣品溶液結(jié)合，通過連續(xù)流動分析儀的程序運行將各試劑按序進樣，在595 nm波長下檢測待測樣品中可溶性蛋白質(zhì)的含量。
2.如權利要求1所述的煙草或其制品中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定方法，其特征在于包括以下具體步驟: (1)稱取煙草或其制品樣品0.25?1.0 g，加入蒸餾水25?100 mL溶解，然后超聲震蕩20?45 min、以3000-10000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心5?20 min,將上清液通過中速定量無灰濾紙過濾至樣品杯中，得到待測樣品溶液； (2)稱取1.0g牛血清蛋白溶于蒸餾水中，定容至100 mL，中速定量無灰濾紙過濾，得到10 mg/mL的牛血清白蛋白儲備液,然后將儲備液稀釋成濃度為1.0 mg/mL、0.8 mg/mL、0.6 mg/mL、0.4 mg/mL和0.2 mg/mL的牛血清白蛋白標準溶液各100 mL ； (3)量取900mL無水乙醇加入到1000 mL容量瓶中，用蒸餾水定容至1000 mL，中速定量無灰濾紙過濾，得到90%的乙醇溶液； (4)稱取100mg考馬斯亮藍G-250溶于50 mL上述90%的乙醇中，加入質(zhì)量濃度850g/L的磷酸100 mL,最后用蒸懼水定容至1000 mL,加入0.5 mL Bri j_35,中速定量無灰濾紙過濾，得到考馬斯亮藍G-250標準溶液； (5)將牛血清蛋白標準溶液和待測樣品溶液分別與考馬斯亮藍G-250標準溶液結(jié)合，通過連續(xù)流動分析儀的程序運行將各試劑按序進樣，在595 nm波長下檢測待測樣品中可溶性蛋白質(zhì)的含量。
3.如權利要求2所述的煙草或其制品中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定方法，其特征在于:步驟(5)中連續(xù)流動分析儀的進樣速率為30?40個樣品/小時，進樣清洗比例為1:1。
4.如權利要求1或2所述的煙草或其制品中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定方法，其特征在于:還包括步驟(6)，所述步驟(6)為按YC/T31-1996標準方法測定待測樣品中的水分含量，進而計算待測樣品中可溶性蛋白質(zhì)的絕干含量。
【文檔編號】G01N21/78GK103822918SQ201410066903
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年2月26日 優(yōu)先權日:2014年2月26日
【發(fā)明者】蘇瑤, 趙春雷, 陶杰, 高軍, 丁嘉珅, 章存勇 申請人:安徽中煙再造煙葉科技有限責任公司