專利名稱：食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
蛋白質(zhì)是構(gòu)成生物體細(xì)胞的重要成分，食物中的蛋白質(zhì)是人體中氮的唯一來(lái)源， 具有糖類和脂肪等生物大分子不可替代的作用。蛋白質(zhì)與生物體中的營(yíng)養(yǎng)代謝、細(xì)胞結(jié)構(gòu)、 酶、激素、病毒以及免疫、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和遺傳等密切相關(guān)，其分離與定性或定量測(cè)定在食品檢驗(yàn)中具有重要意義。食品中測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法有很多種，一般可分為間接方法和直接方法，間接方法是通過(guò)測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)的含氮量進(jìn)而推算蛋白質(zhì)含量；直接方法則根據(jù)蛋白質(zhì)的物理或化學(xué)性質(zhì)直接測(cè)定蛋白質(zhì)的含量。凱氏定氮法作為食品類產(chǎn)品蛋白質(zhì)含量測(cè)定的法定方法，也是蛋白質(zhì)測(cè)定中最常用的方法，以其測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)確，在國(guó)內(nèi)外得到了廣泛地采用，但此法操作繁瑣，試劑消耗量大，消化時(shí)排放的SO2對(duì)人體健康造成直接危害，而且費(fèi)時(shí)、費(fèi)電、費(fèi)水；其他諸如分光光度法和滴定法等方法也都存在操作繁瑣的缺點(diǎn)；而利用凱氏定氮儀進(jìn)行蛋白質(zhì)測(cè)定成本過(guò)高，且由于儀器本身昂貴，難以推廣使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法操作復(fù)雜繁瑣， 對(duì)操作人員危害性大，費(fèi)用過(guò)高的技術(shù)問(wèn)題。本發(fā)明的食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法包括如下步驟步驟一，用雙氧水與濃硫酸組成的消化液消化樣品，得混合溶液；步驟二，取混合溶液，以甲基紅作為指示劑，加入NaOH的水溶液；步驟三，加入甲醛溶液振搖，之后加入酚酞指示劑，用濃度為C的NaOH的水溶液滴定至微紅色半分鐘內(nèi)不退色，記錄消耗的NaOH的水溶液的體積V，利用公式計(jì)算蛋白質(zhì)的含量，所述公式為蛋白質(zhì)含量=CVX 14. 01X6. 25X100%/m，其中，m為步驟二中所取混合溶液中
含有的樣品質(zhì)量。優(yōu)選地，所述雙氧水的濃度為8. 8mol/L。優(yōu)選地，所述消化液中雙氧水與濃硫酸的體積比為4 1。優(yōu)選地，所述消化包括如下步驟取樣品，加入濃硫酸，加熱，滴加消化液，加熱使溶液由黑色變?yōu)闊o(wú)色，加熱，冷卻，加蒸餾水定容。優(yōu)選地，所述加入NaOH的水溶液中和消化液中的酸具體為先使用2. 5mol/L的 NaOH的水溶液中和硫酸，接近終點(diǎn)時(shí)改用0. lmol/L的NaOH的水溶液滴定至紅色消失變成黃色。優(yōu)選地，所述甲醛溶液的濃度為6. 5mol/L。優(yōu)選地，所述NaOH的水溶液的濃度為0. lmol/L。本發(fā)明具有如下的有益效果
(1)本發(fā)明的方法使用的消化液能夠加快樣品的消化速度，縮短消化時(shí)間，使得分析速度加快；(2)本發(fā)明的方法采用甲醛法進(jìn)行滴定，簡(jiǎn)化了操作；(3)本發(fā)明的方法消除了空氣污染，減少了對(duì)操作人員的危害性，且節(jié)約了試劑和水電；(4)本發(fā)明的方法適于進(jìn)行大批量樣品的蛋白質(zhì)含量測(cè)定。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例本實(shí)施例中使用的消化裝置為用IOOml梨形三頸瓶代替凱氏燒瓶，上面分別連接滴液漏斗、真空調(diào)節(jié)管和彎管，彎管用導(dǎo)管與內(nèi)盛稀堿溶液的抽濾瓶和真空泵相連，將消化所產(chǎn)生的煙氣用堿液吸收。實(shí)施例中使用的試劑為濃硫酸購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；8. 8mol/L過(guò)氧化氫購(gòu)于開(kāi)封開(kāi)化集團(tuán)有限公司；氫氧化鈉購(gòu)于淄博市化學(xué)試劑廠；甲醛購(gòu)于淄博市化學(xué)試劑廠；六次甲基四胺購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；酚酞指示劑購(gòu)于上海市試劑三廠；甲基紅指示劑購(gòu)于上海市試劑三廠。
1、消化樣品，得混合溶液稱取0. 5g樣品置于消化裝置中，加濃硫酸5ml ；打開(kāi)真空泵，用螺旋夾調(diào)節(jié)三頸瓶中的壓力，使產(chǎn)生的煙氣被堿液完全吸收，三頸瓶置電爐上加熱2 5min，然后用滴液漏斗緩慢滴加15ml消化液，所述消化液是將濃度為8. 8mol/L的雙氧水與濃硫酸按體積比為 4 1的比例進(jìn)行混合而得；加完后繼續(xù)加熱:3min，樣品由黑色變?yōu)闊o(wú)色，再加熱aiiin，除去H2A ；冷卻后緩緩加入蒸餾水20ml，搖勻，定量轉(zhuǎn)移至IOOml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度。2、取混合溶液，加入NaOH的水溶液中和混合溶液中的酸取混合溶液IOml于IOOml的三角瓶中，加入蒸餾水20ml以及甲基紅指示劑2滴， 此處先用蒸餾水稀釋，可防止在后續(xù)加入NaOH溶液的過(guò)程中出現(xiàn)堿的局部過(guò)濃，避免產(chǎn)生氨從溶液中逸失；先用2. 5mol/L的NaOH溶液中和過(guò)剩的硫酸，接近終點(diǎn)時(shí)改用0. lmol/L 的NaOH溶液滴定至紅色消失變成黃色，先用高濃度后用低濃度的NaOH溶液中和酸可以避免加入過(guò)量的堿。3、滴定加入6. 5mol/L的甲醛溶液10ml，強(qiáng)力振搖0. 5min，放置1 2min，然后加入酚酞指示劑2滴，用0. lmol/L的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至微紅色半分鐘不退，即為終點(diǎn)，記錄消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積；
所述公式為蛋白質(zhì)含量=CVX 14. 01X6. 25X100%/m，其中，C為NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，V為消耗的NaOH的水溶液的體積，m為步驟2中混合溶液中樣品的質(zhì)量。本實(shí)施例的實(shí)施結(jié)果(1)回收率測(cè)定取3份樣品(大豆)，分別加入一定量的六次甲基四胺，按實(shí)施例的方法測(cè)定，該基準(zhǔn)物的理論含氮量為39. 85%，結(jié)果如表1所示。結(jié)果顯示，平均回收率為98. 80%。表 權(quán)利要求
1.一種食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法，其特征在于，包括如下步驟步驟一，用雙氧水與濃硫酸組成的消化液消化樣品，得混合溶液；步驟二，取混合溶液，以甲基紅作為指示劑，加入NaOH的水溶液；步驟三，加入甲醛溶液振搖，之后加入酚酞指示劑，用濃度為C的NaOH的水溶液滴定至微紅色半分鐘內(nèi)不退色，記錄消耗的NaOH的水溶液的體積V，利用公式計(jì)算蛋白質(zhì)的含量， 所述公式為蛋白質(zhì)含量=CVX 14. 01X6. 25X100% /m，其中，m為步驟二中所取混合溶液中含有的樣品質(zhì)量。
2.如權(quán)利要求1所述的食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法，其特征在于，所述雙氧水的濃度為 8. 8mol/L0
3.如權(quán)利要求1或2所述的食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法，其特征在于，步驟一中，所述消化液中雙氧水與濃硫酸的體積比為4 1。
4.如權(quán)利要求1所述的食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法，其特征在于，步驟一中，所述消化包括如下步驟取樣品，加入濃硫酸，加熱，滴加消化液，加熱使溶液由黑色變?yōu)闊o(wú)色，加熱，冷卻，加蒸餾水定容。
5.如權(quán)利要求1所述的食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法，其特征在于，步驟二中，所述加入NaOH的水溶液中和消化液中的酸具體為先使用2. 5mol/L的NaOH的水溶液中和硫酸， 接近終點(diǎn)時(shí)改用0. lmol/L的NaOH的水溶液滴定至紅色消失變成黃色。
6.如權(quán)利要求1所述的食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法，其特征在于，步驟三中，所述甲醛溶液的濃度為6. 5mol/L。
7.如權(quán)利要求1所述的食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法，其特征在于，步驟三中，所述 NaOH的水溶液的濃度為0. lmol/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域的食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法，該方法包括如下步驟用雙氧水與濃硫酸組成的消化液消化樣品，得混合溶液；取混合溶液，以甲基紅作為指示劑，加入NaOH的水溶液；加入甲醛溶液振搖，之后加入酚酞指示劑，用濃度為C的NaOH的水溶液滴定至微紅色半分鐘內(nèi)不退色，記錄消耗的NaOH的水溶液的體積V，利用公式計(jì)算蛋白質(zhì)的含量。本發(fā)明的方法使用的消化液能夠加快樣品的消化速度，縮短消化時(shí)間，使得分析速度加快；同時(shí)本發(fā)明的方法采用甲醛法進(jìn)行滴定，簡(jiǎn)化了操作。
文檔編號(hào)G01N21/79GK102338749SQ20101023792
公開(kāi)日2012年2月1日 申請(qǐng)日期2010年7月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月27日
發(fā)明者丁國(guó)才, 沙飛翔, 郭景鵬 申請(qǐng)人:上海海帝園藝有限公司