專利名稱：一種測(cè)定抗性淀粉含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測(cè)定抗性淀粉含量的方法，更具體涉及一種能夠準(zhǔn)確測(cè)定食品、飼料原料中抗性淀粉含量的方法。
背景技術(shù)：
抗性淀粉(Resistant starch，簡(jiǎn)稱RS)，這一概念由Englyst提出，也有的將其稱為抗消化淀粉，抗性淀粉有防治腸道疾病，降低血糖、血脂，降低體重以及促進(jìn)礦物質(zhì)吸收等作用。因此，開展對(duì)抗性淀粉的測(cè)定方法的研究有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。
最早建立的抗性淀粉測(cè)定方法是Englyst法(1983)用胰α-淀粉酶將試樣水解，然后測(cè)定殘留的淀粉量。之后又出現(xiàn)了Berry法、Bjorck法、Tovar法、Champ法、EURESTA等不同的抗性淀粉測(cè)定方法，這些方法的靈敏度、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性都不高，而且測(cè)定步驟繁瑣。不滿足對(duì)抗性淀粉作進(jìn)一步研究的需要。因此，選擇一種方便、快捷、靈敏度高定量測(cè)定方法就十分必要了。
雙酶水解法是一種靈敏度和重現(xiàn)性都非常好的檢測(cè)抗性淀粉含量的理想方法，其工作原理為先用胰α-淀粉酶(Pancreatic α-amylase)將非抗性淀粉水解成葡萄糖，再利用抗性淀粉能溶于KOH中的性質(zhì)，用淀粉葡萄糖苷酶(Amyloglucosidase，AMG)使其水解成葡萄糖，然后測(cè)定糖的含量，從而推算出抗性淀粉的含量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種測(cè)定抗性淀粉含量的方法，該方法能夠較準(zhǔn)確地定量測(cè)定食品和飼料原料中抗性淀粉的含量。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施其特征為分兩步水解樣品中的淀粉(先將非抗性淀粉水解掉，然后再水解抗性淀粉)，這樣可以消除非抗性淀粉對(duì)抗性淀粉的測(cè)定所產(chǎn)生的影響，從而獲得更加準(zhǔn)確的測(cè)定結(jié)果。
其步驟如下1.取樣準(zhǔn)確稱取95-105mg食品或飼料原料樣品于離心試管中。(食品原料有土豆粉、小麥、玉米、綠豆、芋頭、米、蠶豆等，飼料原料有玉米、蕎麥、紅薯等)2.第一次酶解反應(yīng)加胰α-淀粉酶(Pancreatic α-amylase)反應(yīng)液3.8-4.5ml，放入30-40℃的水浴恒溫振蕩器中水解，15-17小時(shí)后取出。加入3.8-4.2ml乙醇(95％)旋渦混勻，以2800-3100rpm的速度離心11-14分鐘，棄上清液，再加入7-13ml乙醇(95％)，旋渦混勻，仍然以2800-3100rpm的速度離心11-14分鐘，棄上清液。
胰α-淀粉酶(Pancreatic α-amylase)反應(yīng)液的配制為稱取0.8-1.1g胰α-淀粉酶，用適量0.1-0.3mol/L的馬來酸緩沖液(調(diào)PH為6.0-7.5)溶解，轉(zhuǎn)入于100ml容量瓶，加入0.9-1.3ml淀粉葡萄糖苷酶液(AMG)工作液，振搖4-7分鐘，搖勻，用0.1-0.3mol/L的馬來酸緩沖液定容。溶液于12000rpm離心8-12分鐘，取出上清液，備用。
3.溶解抗性淀粉向離心管中加入1.8-2.5ml氫氧化鉀溶液(1.5-2.2mol/L)，冰浴振蕩16-21分鐘，再加7.8-9.0ml醋酸鈉緩沖溶液(1.1-1.5mol/L，pH＝3.5-4.0)，搖勻。
4.第二次酶解反應(yīng)加入淀粉葡萄糖苷酶液(AMG)，放入48-55℃水浴恒溫振蕩器中，26-31分鐘后取出。
5.測(cè)定離心后，吸取100μl上清液于生化分析儀中測(cè)定葡萄糖(GLU)，計(jì)算出抗性淀粉含量。
6.計(jì)算公式抗性淀粉含量＝G×(10.3/W)×0.9×100％其中G為水解樣中葡萄糖含量，W為樣品干物質(zhì)重量(mg)，0.9為淀粉與葡萄糖的轉(zhuǎn)換系數(shù)，10.3為一經(jīng)驗(yàn)值。
應(yīng)用實(shí)例根據(jù)上述方法，對(duì)不同食品(飼料)原料中抗性淀粉的含量進(jìn)行了各20次測(cè)定。結(jié)果如下

測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)均小于2.00，說明本方法的穩(wěn)定性和重復(fù)性都是令人滿意的。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其靈敏度和重現(xiàn)性都比較高，而且方便、快捷。
具體實(shí)施例方式
一種測(cè)定抗性淀粉含量的方法，其具體步驟如下1.取樣準(zhǔn)確稱取100mg食品或飼料原料樣品于離心試管中。(食品原料有土豆粉、小麥、玉米、綠豆、芋頭、米、蠶豆等，飼料原料有玉米、蕎麥、紅薯等)2.第一次酶解反應(yīng)加胰α-淀粉酶(Pancreatic α-amylase)反應(yīng)液4.0ml，放入35℃或37℃或40℃的水浴恒溫振蕩器中水解，15或16或17小時(shí)后取出。加入4.0ml乙醇(95％)旋渦混勻，以2800或3000rpm的速度離心12分鐘，棄上清液，再加入8ml乙醇(95％)，旋渦混勻，仍然以2800或3000rpm的速度離心12分鐘，棄上清液。(胰α-淀粉酶反應(yīng)液的配制為稱取0.8-1.1g胰α-淀粉酶，用0.1-0.3mol/L馬來酸緩沖液(調(diào)PH值為6.0-7.5)溶解，轉(zhuǎn)入于100ml容量瓶，加入1.0ml淀粉葡萄糖苷酶液(297-305U/ml)，振搖4-7分鐘，搖勻，用馬來酸緩沖液定容，溶液于12000rpm離心10分鐘，取出上清液，備用。)3.溶解抗性淀粉向離心管中加入2.0或2.4ml氫氧化鉀溶液(1.5-2.2mol/L)，冰浴振蕩20分鐘，再加8.0ml醋酸鈉緩沖溶液(1.2mol/L，pH＝3.8)，搖勻。
4.第二次酶解反應(yīng)加入淀粉葡萄糖苷酶液(AMG)，放入48或50或52或55℃水浴恒溫振蕩器中，30分鐘后取出。
5.測(cè)定離心后，吸取100μl上清液于生化分析儀中測(cè)定葡萄糖(GLU)，計(jì)算出抗性淀粉含量。
6.計(jì)算公式抗性淀粉含量＝G×(10.3/W)×0.9×100％。
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定抗性淀粉含量的方法，其步驟如下①.取樣稱取95-105mg樣品于離心試管中；②.第一次酶解反應(yīng)加胰α-淀粉酶反應(yīng)液3.8-4.5ml，放入35-40℃的水浴恒溫振蕩器中水解，15-17小時(shí)后取出，加入3.8-4.2ml乙醇旋渦混勻，以2800-3100rpm的速度離心11-14分鐘，棄上清液，再加入7-13ml乙醇，旋渦混勻，仍然以2800-3100rpm的速度離心10-13分鐘，棄上清液；③.溶解抗性淀粉向離心管中加入1.8-2.5ml氫氧化鉀溶液，冰浴振蕩16-21分鐘，再加7.8-9ml醋酸鈉緩沖溶液，搖勻；④.第二次酶解反應(yīng)加入淀粉葡萄糖苷酶液200-350U/ml，放入48-55℃水浴恒溫振蕩器中，26-31分鐘后取出；⑤.測(cè)定離心后，吸取100μl上清液于生化分析儀中測(cè)定葡萄糖，計(jì)算出抗性淀粉含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定抗性淀粉含量的方法，其特征在于所述的胰α-淀粉酶反應(yīng)液的配制為稱取0.8-1.1g胰α-淀粉酶，用0.1-0.3mol/L馬來酸緩沖液溶解，PH值為6.0-7.5，轉(zhuǎn)入于100ml容量瓶，加入0.9-1.3ml淀粉葡萄糖苷酶液297-305U/ml，振搖4-7分鐘，搖勻，用馬來酸緩沖液定容，溶液于12000rpm離心8-12分鐘，取出上清液，備用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種測(cè)定抗性淀粉含量的方法，其步驟是①取樣；②第一步酶解反應(yīng)；③溶解抗性淀粉；④第二步酶解反應(yīng)；⑤測(cè)定。本發(fā)明可以定量檢測(cè)出食品原料、飼料原料中抗性淀粉的含量；方便、快捷、靈敏度高、穩(wěn)定性和重復(fù)性好，實(shí)用性強(qiáng)。
文檔編號(hào)G01N31/00GK1719221SQ200510018859
公開日2006年1月11日 申請(qǐng)日期2005年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月7日
發(fā)明者印遇龍, 張平, 黃瑞林, 李鐵軍, 李麗立, 侯振平 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所