專利名稱：灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及灰樹花多糖提取物的測定方法，尤其涉及灰樹花深層液體發(fā)酵液多糖提取物中非活性成分淀粉含量的定量測定方法。
本發(fā)明的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法，由以下步驟組成1)除去脂溶性成分取烘干磨碎的待測多糖樣品，分別稱0.5～2克于6個離心杯中，分別加入30ml乙醚，充分振蕩5～15分鐘，以4000～5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5～10分鐘，棄去上清液，再加入30ml乙醚，如此重復(fù)離心3次；2)除去可溶性糖類干擾物質(zhì)向上述棄去上清液后的離心杯中加入50～60℃的80％乙醇30ml，充分振蕩5～15分鐘，以4000～5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5～10分鐘，棄去上清液，如此重復(fù)離心3次；然后再向離心后的杯中加入40～50℃蒸餾水30ml，在40～50℃恒溫水浴中振蕩60分鐘，以4000～5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5～10分鐘，棄去上清液，再加入30ml蒸餾水，如此重復(fù)離心3次；3)酶法分解淀粉向步驟2)棄去上清液后的離心杯中加入5ml蒸餾水，濕潤并攪拌分離出的樣品，再加入80～90℃蒸餾水40ml，攪勻后，置沸水浴中處理50～60分鐘使淀粉糊化；之后冷卻至50℃，加入1％的糖化酶液10ml，并立即加入pH4～6的磷酸鹽緩沖液25ml，再加入甲苯5～7滴，混勻，封口，置于45～48℃條件下保溫20～24小時進行淀粉酶解；4)淀粉酶解檢測取上述淀粉酶解液1滴加入碘溶液1滴進行酶解效果檢測，若顯藍色、紅色或紫色，即為淀粉酶解不完全，應(yīng)再重復(fù)步驟3)的酶法分解淀粉，直至加碘溶液檢測不顯藍色、紅色或紫色為止，即為淀粉酶解完全；
5)淀粉酶解液處理將上述完全酶解的淀粉酶解液冷后，用6molL-1NaOH中和至中性，然后邊攪動邊逐滴加入飽和Pb(0Ac)2溶液，直至淀粉酶解液無白色絮狀沉淀為止；再向淀粉酶解液中逐滴加入飽和的硫酸鈉溶液，直至不產(chǎn)生白色沉淀為止；以4000-5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5-10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移入容量瓶，調(diào)節(jié)pH為9.1～9.6，以測定需求量定容；6)斐林法測定還原糖含量取步驟5)中處理后的淀粉酶解液為樣品，按GB5009.7-85《食品中還原糖的測定方法》直接滴定法，測定樣品中可溶性糖的含量。
其中，上述步驟1)或2)所述的振蕩時間是8～12分鐘。
其中，上述步驟2)所述80％乙醇的溫度是55～58℃。
其中，上述步驟2)所述加入的蒸餾水和恒溫水浴的溫度均為45～50℃。
其中，上述步驟3)所述磷酸鹽緩沖液的pH為4.8～5.6。
其中，上述步驟3)所述進行淀粉酶解的溫度是45℃，時間是20小時。
其中，上述步驟5)所述處理后的淀粉酶解液pH為9.3～9.5。
其中，上述步驟6)所述的食品中還原糖的測定方法包括如下步驟①標定堿性酒石酸銅溶液吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以每兩秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積，同時平行操作三份，取其平均值，計算每10ml(甲、乙液各5ml)堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質(zhì)量(mg)；②樣品溶液預(yù)測吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積；③樣品溶液測定吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加比預(yù)測體積少1ml的樣品溶液，使在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸繼續(xù)以每兩秒1滴的速度滴定，直至藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗體積。
采用本發(fā)明進行灰樹花多糖產(chǎn)品中淀粉含量的測定，具有可操作性強、測定結(jié)果穩(wěn)定可靠、測定結(jié)果的變異系數(shù)小、誤差小、重現(xiàn)性高等優(yōu)點。實驗顯示，根據(jù)樣品中淀粉含量不同，變異系數(shù)一般在5％～10％范圍內(nèi)?？蓾M足常規(guī)實驗室對分析測試的要求以及相關(guān)企業(yè)對產(chǎn)品質(zhì)量的控制要求。
下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明作進一步的說明。
2)除去可溶性糖類干擾物質(zhì)向上述棄去上清液后的離心杯中加入57℃的80％乙醇30ml，充分振蕩15分鐘，以5000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，棄去上清液，如此重復(fù)離心3次；然后再向棄去上清液后的離心杯中加入50℃蒸餾水30ml，在50℃恒溫水浴中振蕩60分鐘，以5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，棄去上清液，再加入30ml蒸餾水，如此重復(fù)離心3次；3)酶法分解淀粉向步驟2)棄去上清液后的離心杯中加入5ml蒸餾水，濕潤并攪拌分離出的樣品，再加入90℃蒸餾水40ml，攪勻后，置沸水浴中處理55分鐘使淀粉糊化；之后冷卻至50℃，加入1％的糖化酶液10ml，并立即加入pH 5.2的磷酸鹽緩沖液25ml，再加入甲苯5滴，混勻，封口，置于45℃條件下保溫20小時進行淀粉酶解；4)淀粉酶解檢測取上述淀粉酶解液1滴加入碘溶液1滴進行酶解效果檢測，至結(jié)果為加碘溶液檢測不顯藍色、紅色或紫色為止，即為淀粉酶解完全；5)淀粉酶解液處理將上述完全酶解的淀粉酶解液冷后，用6molL-1NaOH中和至中性，然后邊攪動邊逐滴加入飽和Pb(OAc)2溶液，直至淀粉酶解液無白色絮狀沉淀為止；再向淀粉酶解液中逐滴加入飽和的硫酸鈉溶液，直至不產(chǎn)生白色沉淀為止；以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移入250ml容量瓶，調(diào)節(jié)pH為9.3，定容，設(shè)為V2；6)斐林法測定還原糖含量取步驟5)中處理后的淀粉酶解液為樣品，按GB5009.7-85《食品中還原糖的測定方法》直接滴定法，測定樣品中可溶性糖的含量。
①標定堿性酒石酸銅溶液吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以每兩秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積，同時平行操作三份，取其平均值V0，計算每10ml(甲、乙液各5ml)堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質(zhì)量(mg)；②樣品溶液預(yù)測吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積；③樣品溶液測定吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加比預(yù)測體積少1ml的樣品溶液，使在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸繼續(xù)以每兩秒1滴的速度滴定，直至藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗體積V1。
同時，以同方法做試劑空白試驗。
結(jié)果計算淀粉％＝V0*C/(1000mV1)*0.9*100％(式中淀粉含量以葡萄糖計)灰樹花活性多糖中淀粉含量的測定實施例分析結(jié)果見附表1。
其中m1——10ml堿性酒石酸銅溶液(甲、乙液各5ml)相當于還原糖(以葡萄糖計)的質(zhì)量，mg；m——樣品質(zhì)量，g；V0——10ml堿性酒石酸銅溶液(甲、乙液各5ml)消耗的標準葡萄糖溶液體積，ml；V2——定容體積，mlV1——測定樣品時平均消耗樣品溶液體積，ml。
實施例21)除去脂溶性成分取烘干磨碎的待測多糖樣品(編號為2號)，稱0.943克、1.0392克、0.85克、0.9977克、0.9023克、0.9383克分別放于6個離心杯中，分別加入30ml乙醚，充分振蕩15分鐘，以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，棄去上清液，再加入30ml乙醚，如此重復(fù)離心3次；2)除去可溶性糖類干擾物質(zhì)向上述棄去上清液后的離心杯中加入50℃的80％乙醇30ml，充分振蕩10分鐘，以5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，棄去上清液，如此重復(fù)離心3次；然后再向棄去上清液后的離心杯中加入40℃蒸餾水30ml，在45℃恒溫水浴中振蕩60分鐘，以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，棄去上清液，再加入30ml蒸餾水，如此重復(fù)離心3次；3)酶法分解淀粉；向步驟2)棄去上清液后的離心杯中加入5ml蒸餾水，濕潤并攪拌分離出的樣品，再加入80℃蒸餾水40ml，攪勻后，置沸水浴中處理60分鐘使淀粉糊化；之后冷卻至50℃，加入1％的糖化酶液10ml，并立即加入pH 4.8的磷酸鹽緩沖液25ml，再加入甲苯7滴，混勻，封口，置于48℃條件下保溫24小時進行淀粉酶解；4)淀粉酶解檢測取上述淀粉酶解液1滴加入碘溶液1滴進行酶解效果檢測，至結(jié)果為加碘溶液檢測不顯藍色、紅色或紫色為止，即為淀粉酶解完全；5)淀粉酶解液處理將上述完全酶解的淀粉酶解液冷后，用6molL-1NaOH中和至中性，然后邊攪動邊逐滴加入飽和Pb(OAc)2溶液，直至淀粉酶解液無白色絮狀沉淀為止；再向淀粉酶解液中逐滴加入飽和的硫酸鈉溶液，直至不產(chǎn)生白色沉淀為止；以4800轉(zhuǎn)/分鐘離心7分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移入250ml容量瓶，調(diào)節(jié)pH為9.5，定容，設(shè)為V2；6)斐林法測定還原糖含量取步驟5)中處理后的淀粉酶解液為樣品，按GB5009.7-85《食品中還原糖的測定方法》直接滴定法，測定樣品中可溶性糖的含量。
①標定堿性酒石酸銅溶液吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以每兩秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積，同時平行操作三份，取其平均值V0，計算每10ml(甲、乙液各5ml)堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質(zhì)量(mg)②樣品溶液預(yù)測吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積；③樣品溶液測定吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加比預(yù)測體積少1ml的樣品溶液，使在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸繼續(xù)以每兩秒1滴的速度滴定，直至藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗體積V1。
同時，以同方法做試劑空白試驗。
結(jié)果計算淀粉％＝V0*C/(1000mV1)*0.9*100％(式中淀粉含量以葡萄糖計)灰樹花活性多糖中淀粉含量的測定實施例分析結(jié)果見附表2。
權(quán)利要求
1.一種灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法，由以下步驟組成1)除去脂溶性成分取烘干磨碎的待測多糖樣品，分別稱0.5～2克于6個離心杯中，分別加入30ml乙醚，充分振蕩5～15分鐘，以4000～5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5～10分鐘，棄去上清液，再加入30ml乙醚，如此重復(fù)離心3次；2)除去可溶性糖類干擾物質(zhì)向上述棄去上清液后的離心杯中加入50～60℃的80％乙醇30ml，充分振蕩5～15分鐘，以4000～5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5～10分鐘，棄去上清液，如此重復(fù)離心3次；然后再向棄去上清液后的離心杯中加入40～50℃蒸餾水30ml，在40～50℃恒溫水浴中振蕩60分鐘，以4000～5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5～10分鐘，棄去上清液，再加入30ml蒸餾水，如此重復(fù)離心3次；3)酶法分解淀粉向步驟2)離心棄去上清液后的杯中加入5ml蒸餾水，濕潤并攪拌分離出的樣品，再加入80～90℃蒸餾水40ml，攪勻后，置沸水浴中處理50～60分鐘使淀粉糊化；之后冷卻至50℃，加入1％的糖化酶液10ml，并立即加入pH4～6的磷酸鹽緩沖液25ml，再加入甲苯5～7滴，混勻，封口，置于45～48℃條件下保溫20～24小時進行淀粉酶解；4)淀粉酶解檢測取上述淀粉酶解液1滴加入碘溶液1滴進行酶解效果檢測，若顯藍色、紅色或紫色，即為淀粉酶解不完全，應(yīng)再重復(fù)步驟3)的酶法分解淀粉，直至加碘溶液檢測不顯藍色、紅色或紫色為止，即為淀粉酶解完全；5)淀粉酶解液處理將上述完全酶解的淀粉酶解液冷后，用6molL-1NaOH中和至中性，然后邊攪動邊逐滴加入飽和Pb(OAc)2溶液，直至淀粉酶解液無白色絮狀沉淀為止；再向淀粉酶解液中逐滴加入飽和的硫酸鈉溶液，直至不產(chǎn)生白包沉淀為止；以4000-5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5-10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移入容量瓶，調(diào)節(jié)pH為9.1～9.6，以測定需求量定容；6)斐林法測定還原糖含量取步驟5)中處理后的淀粉酶解液為樣品，按GB5009.7-85《食品中還原糖的測定方法》直接滴定法，測定樣品中可溶性糖的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法，其特征在于，步驟1)或2)所述的振蕩時間是8～12分鐘。
3.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法，其特征在于，步驟2)所述80％乙醇的溫度是55～58℃。
4.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法，其特征在于，步驟2)所述加入的蒸餾水和恒溫水浴的溫度均為45～50℃。
5.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法，其特征在于，步驟3)所述磷酸鹽緩沖液的pH為4.8～5.6。
6.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法，其特征在于，步驟3)所述進行淀粉酶解的溫度是45℃，時間是20小時。
7.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法，其特征在于，步驟5)所述處理后的淀粉酶解液pH為9.3～9.5。
8.如權(quán)利要求1所述的灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法，其特征在于，步驟6)所述的食品中還原糖的測定方法包括如下步驟①標定堿性酒石酸銅溶液吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以每兩秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積，同時平行操作三份，取其平均值，計算每10ml(甲、乙液各5ml)堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質(zhì)量(mg)；②樣品溶液預(yù)測吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積；③樣品溶液測定吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加比預(yù)測體積少1ml的樣品溶液，使在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸繼續(xù)以每兩秒1滴的速度滴定，直至藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗體積。
全文摘要
本發(fā)明公開一種灰樹花多糖中淀粉含量的測定方法，其方法包括脂溶性成分除去，可溶性糖類干擾物質(zhì)除去，酶法分解淀粉，淀粉酶解檢測，淀粉酶解液處理，斐林法測定還原糖含量等步驟。本發(fā)明的方法具有可操作性強、測定結(jié)果穩(wěn)定可靠、測定結(jié)果的變異系數(shù)小、誤差小、重現(xiàn)性高等優(yōu)點。
文檔編號G01N31/16GK1474183SQ0313896
公開日2004年2月11日 申請日期2003年8月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月1日
發(fā)明者隋方功, 宋愛榮, 張玉娜, 呂銀燕 申請人:萊陽農(nóng)學(xué)院