一種植物乳桿菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，是關(guān)于一種新發(fā)現(xiàn)的植物乳桿菌及其降解膽固醇功能的 作用。
【背景技術(shù)】
[0002] 植物乳桿菌與人類、動(dòng)物的生活關(guān)系密切，是一種常見于奶油、肉類及許多蔬菜發(fā) 酵制品、青貯飼料中的乳酸菌，能通過胃并定植于腸道發(fā)揮有益作用，例如維持腸道內(nèi)菌群 的平衡、促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收、緩解乳糖不耐癥及抑制腫瘤細(xì)胞的形成等多種功能，目前研究 報(bào)道較多的應(yīng)用領(lǐng)域包括食品、飼料、醫(yī)療保健、化妝品、美容、水產(chǎn)養(yǎng)殖、工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、生物 防腐劑、益生菌制劑等等。
[0003] 本發(fā)明新發(fā)現(xiàn)的植物乳桿菌是從養(yǎng)殖水體的動(dòng)植物體內(nèi)提取的乳桿菌，經(jīng)鑒定是 一種植物乳桿菌，最適生長溫度為30~35，菌種為直或彎的桿狀或成鏈狀，最適pH6.5左右， 屬于同型發(fā)酵乳酸菌。此菌與其他乳酸菌的區(qū)別在于此菌的活菌數(shù)比較高，能大量的產(chǎn)酸， 使水中的pH值穩(wěn)定不升高；由于此菌是厭氧細(xì)菌(兼性好氧），在繁殖過程中能產(chǎn)出特有的 乳酸桿菌素，目前植物乳桿菌目前主要應(yīng)用于改變各類型過敏癥狀，改善體質(zhì)，排毒等醫(yī)用 方面，在研究新發(fā)現(xiàn)的植物乳桿菌作用時(shí)，發(fā)現(xiàn)其對(duì)降解膽固醇具有很好的功效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了一種新的植物乳桿菌，并發(fā)現(xiàn)了其新的用途。
[0005] 具體地，本發(fā)明在養(yǎng)殖水體的動(dòng)植物體內(nèi)提取分離得到一種乳桿菌，經(jīng)鑒定為一 種新的植物乳桿菌，其于2015年12月保存于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中 心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，保藏號(hào)為CGMCC N0:11875。
[0006] 本發(fā)明的植物乳桿菌16S rDNA序列SEQ Nol所示。
[0007] 培養(yǎng)乳桿菌所用的是MRS培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方為：葡萄糖30g，蛋白胨10g，酵母粉 7 · 5g，無水乙酸鈉5g，K2HP042g，硫酸鎂0 · 8g，硫酸錳0 · 2g，檸檬酸二銨2g，PH7 · 0-7 · 5，培養(yǎng) 溫度為37°C。
[0008] 菌種的形態(tài)
[0009] 植物乳桿菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)48h，生成的的菌落圖如圖1所示，菌落邊緣整齊，表面 光滑、呈乳黃色;將單菌落取樣在電子顯微鏡下(放大倍數(shù)為1800倍)進(jìn)行觀察，觀察結(jié)果如 圖2所示，細(xì)胞形態(tài)為桿狀，革蘭氏染色鑒定為革蘭氏陽性，無芽孢和鞭毛。
[0010] 本發(fā)明進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了該植物乳桿菌以及其對(duì)膽固醇的降解作用。
[0011] 更進(jìn)一步地，本發(fā)明提出了上述植物乳桿菌在制備用于降解膽固醇的藥物或保健 品上的應(yīng)用。
【附圖說明】
[0012] 圖1為植物乳桿菌菌落圖；
[0013] 圖2為植物乳桿菌鏡檢圖。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 以下是通過具體實(shí)驗(yàn)詳細(xì)說明了新發(fā)現(xiàn)的植物乳桿菌以及其對(duì)膽固醇的降解作 用。
[0015] 本發(fā)明在養(yǎng)殖水體的動(dòng)植物體內(nèi)提取分離得到一種乳桿菌，經(jīng)鑒定為一種新的植 物乳桿菌，其于2015年12月保存于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏 地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，保藏號(hào)為CGMCC N0: 11875〇
[0016] 本發(fā)明的植物乳桿菌16S r DNA序列如序列表所示。本發(fā)明的植物乳桿菌16SrDNA 序列如序列表所示。通過對(duì)該菌株的16SrDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，回收擴(kuò)增產(chǎn)物測序，序列與 GenBank數(shù)據(jù)庫中已經(jīng)登錄的序列進(jìn)行同源性比較，該菌株的16SrDNA序列與植物乳桿菌同 源性達(dá)99 %。
[0017] 培養(yǎng)乳桿菌所用的是MRS培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方為：葡萄糖30g，蛋白胨10g，酵母粉 7 · 5g，無水乙酸鈉5g，K2HP042g，硫酸鎂0 · 8g，硫酸錳0 · 2g，檸檬酸二銨2g，PH7 · 0-7 · 5，培養(yǎng) 溫度為37°C。
[0018] 菌種的形態(tài)
[0019] 植物乳桿菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)48h，生成的的菌落圖如圖1所示，菌落邊緣整齊，表面 光滑、呈乳黃色;將單菌落取樣在電子顯微鏡下(放大倍數(shù)為1800倍)進(jìn)行觀察，觀察結(jié)果如 圖2所示，細(xì)胞形態(tài)為桿狀，革蘭氏染色鑒定為革蘭氏陽性，無芽孢和鞭毛。
[0020] 本發(fā)明進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了植物乳桿菌降解膽固醇的作用，并對(duì)其降解膽固醇的作用進(jìn) 行了研究。
[0021] 首先配制含膽固醇MRS液體培養(yǎng)基:先用無水乙醇配制濃度為10g L-1的膽固醇溶 液，用孔徑為〇.45μπι的微孔濾膜過濾除菌后，加入到含0.30%牛膽酸鈉的滅菌MRS中，使膽 固醇最終濃度為l〇〇mg L-1。
[0022] 發(fā)酵液的制備:在MRS中連傳3代，第3代培養(yǎng)物5000r min-1離心10min，棄上清液， 用滅菌生理鹽水離心洗菌3遍，調(diào)菌懸液濃度為3\1090?1]1^-1。按2%的接種量接種到含 膽固醇的MRS液體培養(yǎng)基中，37 °C厭氧培養(yǎng)24h。同時(shí)保留未接菌的含膽固醇MRS培養(yǎng)基，5 °C 保存，作為空白對(duì)照。
[0023] 鄰苯二甲醛工作液的配制：50mg鄰苯二甲醛溶于100mL冰醋酸中，攪拌至完全溶 解，制成〇. 5g L-1的工作液。該溶液須使用當(dāng)天配制。
[0024] 膽固醇含量測定:發(fā)酵液5000r min-1離心10min，保留發(fā)酵上清。沉淀菌體用與原 發(fā)酵液等量的生理鹽水離心洗滌3遍，洗滌液保留。發(fā)酵上清液和菌體洗滌液中膽固醇含量 均用改良的Ophthalaldehyde法進(jìn)行測定。
[0025] 具體方法如下:移取0.5mL樣品于一潔凈試管中，加入3mL 95%的乙醇和2mL 50% 的Κ0Η。振蕩混勻，60°C水浴中皂化10min。冷卻至室溫后，加入5mL正己烷，完全混勻，萃取 lmin。再加入3mL蒸餾水混勾，室溫下靜置15min。待各項(xiàng)分離后，從己燒層準(zhǔn)確吸取2.5mL至 另一干凈試管中。60 °C水浴揮干正己烷，加入4mL新配制的鄰苯二甲醛工作液，室溫下顯色 lOmin。再加入2mL濃硫酸，立即完全混勾，室溫靜置lOmin。在90min內(nèi)測定550nm處的吸光 值。
[0026] 膽固醇脫除率可由以下公式得出：
[0027]脫除率=(1_發(fā)酵上清液吸光值/未接菌培養(yǎng)基吸光值）X 100%
[0028]計(jì)算得到乳桿菌降解膽固醇的脫除率為55.19%。
[0029]通過實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的一種植物乳桿菌對(duì)膽固醇具有很好的降解作用，能夠用于 醫(yī)用方面或保健品方面。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種植物乳桿菌，其特征在于，所述植物乳桿菌于2015年12月14日保藏于中國微生 物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC NO. 11875。.2. 權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌在降解膽固醇上的應(yīng)用。3. 權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌在制備用于降解膽固醇的藥物或保健品上的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種植物乳桿菌，其保藏號(hào)為CGMCC？NO.11875。本發(fā)明進(jìn)一步提出了所述的植物乳桿菌在降解膽固醇上的應(yīng)用以及在制備用于降解膽固醇的藥物或保健品上的應(yīng)用。CGMCC NO:1187520151214
【IPC分類】A23L33/10, C12N1/20, A61K35/747, C12R1/25, A61P3/06
【公開號(hào)】CN105567601
【申請?zhí)枴緾N201610066292
【發(fā)明人】金雪霞, 路慶鵬, 陳家偉
【申請人】江蘇綠科生物技術(shù)有限公司
【公開日】2016年5月11日
【申請日】2016年1月29日