本發(fā)明涉及核酸提取，具體涉及一種基于磁珠法的核酸提取方法。
背景技術：
1、提取核酸在現代生物學研究中具有至關重要的意義。核酸包括dna和rna，是生命活動中的重要遺傳物質，它們攜帶著生物體的遺傳信息，控制蛋白質的合成，從而影響生物體的所有生理活動和特征。提取核酸能夠讓我們直接接觸到這些遺傳指令，進而對其進行深入的研究和分析。無論是在基因測序、基因表達分析、基因突變篩查，還是在疾病的早期診斷和治療中，核酸提取都是不可或缺的一步?，F有的核酸提取主要分為物理法、化學法、生物法。其中物理法又分為煮沸法、凍融法、超聲波法、研磨法等。其原理是利用高溫、高壓、冷凍、超聲波的機械效應、熱效應、空化作用等破壞待檢測樣本的細胞結構，釋放出細胞內容物，核酸分子因此得以被提取出來。這種操作方法簡單易操作，但提取效率低，提取出的產物純度低。其中化學法包括堿裂解法、苯酚-氯仿抽提法、鹽析法、trizol法、碘化鉀法等?；瘜W法能夠有效去除蛋白質、多糖、脂類等雜質，因此提取出的產物純度較高。然而化學法提取過程較為繁瑣，耗時較長。其中的生物法其原理是利用溶菌酶、蛋白酶k等裂解細胞，釋放出細胞內容物，從而提取核酸。但此方法存在酶易失活且成本高的弊端。因此又發(fā)展出了以固相提取為代表的新式核酸提取方法，主要包括二氧化硅基質提取法、離心柱提取法、紙基提取法、磁性離子液體提取法及磁珠法。其中磁珠法是一種安全環(huán)保的核酸提取方法，其操作靈活、安全性高、產品純度較高。但目前的磁珠法步驟較多，且需要經過多次洗滌及洗脫步驟，因此有可能會造成核酸損失及稀釋，影響了核酸濃度和純度。
技術實現思路
1、鑒于此，本發(fā)明提出一種基于磁珠法的核酸提取方法以解決上述問題。
2、本發(fā)明的技術方案是這樣實現的：一種基于磁珠法的核酸提取方法，包括以下步驟：
3、步驟一、磁珠表面修飾：在40-60℃下將磁性微球、磷脂酰肌醇、甲醇以80-100r/min震蕩混勻60-90s，向上述混合液中緩慢加入3-嗎啉丙磺酸、氯化鈉并將ph調節(jié)至6.8-7.2，反應25-35min，并采用無菌去離子水清洗磁珠微球，得到磷脂雙分子層磁珠；
4、步驟二、磁珠懸浮液制備：將溫吞20、聚乙二醇加入到生理鹽水中，以100-200r/min攪拌1-3min，加入磷脂雙分子層磁珠以20-40r/min震蕩混勻10-20s，得到磁珠懸浮液；
5、步驟三、樣品裂解孵育：取樣品加入到1.5ml的離心試管中，向上述離心試管中加入磁珠混懸液、細胞裂解液以20-40r/min震蕩混勻10-20s，在24-26℃并在紫光燈照射下孵育4-6min；
6、步驟四、磁吸吸附：將上述離心管置于磁力架中，靜置1-2min，使磁珠完全被吸附到磁力架上，使用移液槍吸取并棄去上清液；
7、步驟五、磁珠洗滌除雜：向上述離心管中加入洗滌液，20-40r/min震蕩混勻20-30s，靜置15-25s，使磁珠完全被吸附到磁力架上，使用移液槍吸取并棄去上清液，得到磁珠-核酸復合物，完成核酸提取。
8、進一步的，步驟一中的磁性微球是羥基磁性微球、羧基磁性微球、環(huán)氧基磁性微球、四氧化三鐵磁性微球其中的一種，且磁性微球粒徑為500-1000nm。
9、進一步的，步驟一中磁性微球、磷脂酰肌醇、甲醇、3-(n-嗎啉基)丙磺酸、氯化鈉質量體積比g/ml為(6-10):(3-5):(5-7):(1-3):(1-3)。
10、進一步的，步驟二中溫吞20、聚乙二醇、生理鹽水體積比為(0.1-0.3):(1.5-2.5):(90-100)，且磷脂雙分子層磁珠在溶液中濃度為10-30mg/ml。
11、進一步的，步驟三中樣品加入量為100-200μl、磁珠混懸液加入量為15-25μl、細胞裂解液加入量為100-200μl。
12、進一步的，細胞裂解液由質量體積比g/ml為(3-5):(0.5-1.0):(1-2):(0.4-0.6):(1-3)的奎寧、蛋白酶k、十二烷基硫酸鈉、4,4'-二羥基偶氮苯、氨丁三醇組成。
13、進一步的，紫光燈照射時波長設置為300-400nm、光照強度設置為800-1200lux。
14、進一步的，洗滌液加入量為400-600μl。
15、進一步的，洗滌液由質量體積比g/ml為(5-10):(5-10):(70-80)的椰油酰胺丙基甜菜堿、尿素、乙醇組成。
16、與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明通過對磁珠進行表面修飾，制得磷脂雙分子層磁珠，磷脂雙分子層具有獨特的生物相容性和仿生特性。當磁珠表面修飾了磷脂雙分子層，這種仿生界面能夠降低核酸與磁珠之間的界面張力，使得核酸更容易與磁珠表面接觸并結合。且磷脂分子通常包含帶負電荷的磷酸基團和疏水的脂肪酸鏈。當磷脂雙分子層覆蓋在磁珠表面時，這些負電荷可以與核酸分子上的正電荷區(qū)域發(fā)生靜電相互作用，有助于將核酸分子拉近磁珠表面，并促進其結合。本發(fā)明在樣品裂解孵育時采用特定成分的裂解液并結合紫光燈照射不僅提高了裂解效率，還進一步提高了裂解程度，所提取出的核酸濃度、純度更高。通過對磁珠表面修飾、采用特定裂解液裂解孵育，使得本發(fā)明的磁珠與核酸特異性結合程度高，只經一次洗滌，免去了洗脫步驟，制得的得到磁珠-核酸復合物可直接作為后續(xù)核酸檢測靶標，減少了多次洗滌和洗脫過程中造成的核酸損失和稀釋，提高了核酸的濃度和純度。
1.一種基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的一種基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述步驟一中所述的磁性微球是羥基磁性微球、羧基磁性微球、環(huán)氧基磁性微球、四氧化三鐵磁性微球其中的一種，所述磁性微球粒徑為500-1000nm。
3.如權利要求1所述的一種基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述步驟一中所述磁性微球、磷脂酰肌醇、甲醇、3-(n-嗎啉基)丙磺酸、氯化鈉質量體積比g/ml為(6-10):(3-5):(5-7):(1-3):(1-3)。
4.如權利要求1所述的一種基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述步驟二中所述溫吞20、聚乙二醇、生理鹽水體積比為(0.1-0.3):(1.5-2.5):(90-100)，所述磷脂雙分子層磁珠在溶液中濃度為10-30mg/ml。
5.如權利要求1所述的一種基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述步驟三中樣品加入量為100-200μl、磁珠混懸液加入量為15-25μl、細胞裂解液加入量為100-200μl。
6.如權利要求5所述的一種基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述的細胞裂解液由質量體積比g/ml為(3-5):(0.5-1.0):(1-2):(0.4-0.6):(1-3)的奎寧、蛋白酶k、十二烷基硫酸鈉、4,4'-二羥基偶氮苯、氨丁三醇組成。
7.如權利要求5所述的一種基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述紫光燈照射時波長設置為300-400nm、光照強度設置為800-1200lux。
8.如權利要求1所述的一種基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述步驟五中所述洗滌液加入量為400-600μl。
9.如權利要求8所述的一種基于磁珠法的核酸提取方法，其特征在于，所述洗滌液由質量體積比g/ml為(5-10):(5-10):(70-80)的椰油酰胺丙基甜菜堿、尿素、乙醇組成。