(相關(guān)申請的相互參照)本技術(shù)主張2022年3月1日在日本特許廳提出申請的日本技術(shù)號第2022-30908號的利益。該日本技術(shù)通過參照而援引于本說明書，以使得其申請文件(說明書、權(quán)利要求書、附圖、說明書摘要)的整體在本說明書中公開。本發(fā)明主要涉及通過所謂的低分子化合物(例如，分子量為1000以下的化合物)從體細(xì)胞制備生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的方法、以及通過該制造方法制備的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞。本發(fā)明進(jìn)一步涉及從該生長因子產(chǎn)生細(xì)胞制備生長因子的方法、以及能夠用于制備該生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的方法的組合物。

背景技術(shù)：

1、隨著近年來的細(xì)胞相關(guān)研究的發(fā)展、特別是關(guān)于多能細(xì)胞的研究的發(fā)展，能夠在可用于向個體的移植的品質(zhì)及量方面獲得治療用細(xì)胞。在一些疾病中，已經(jīng)開始了將對治療有效的細(xì)胞應(yīng)用于患者的嘗試。例如，在非專利文獻(xiàn)1中，探討了基于誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(ips細(xì)胞)來源的神經(jīng)前體細(xì)胞的移植對亞急性脊髓損傷患者的再生醫(yī)療的嘗試。

2、另一方面，作為生長因子(growth?factor)的一種的hgf(肝細(xì)胞生長因子：hepatocyte?growth?factor)最初是作為肝細(xì)胞的生長因子被發(fā)現(xiàn)的，根據(jù)近年來的大量研究發(fā)現(xiàn)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中也具有血管新生作用、神經(jīng)營養(yǎng)作用。例如，在非專利文獻(xiàn)2中報告了對靈長類脊髓損傷模型進(jìn)行hgf給藥而顯著地促進(jìn)了四肢的運(yùn)動功能恢復(fù)。另外，專利文獻(xiàn)1中公開了以hgf蛋白作為有效成分的脊髓損傷治療劑。

3、現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

4、專利文獻(xiàn)

5、專利文獻(xiàn)1：國際公開第2008/105507號小冊子

6、非專利文獻(xiàn)

7、非專利文獻(xiàn)1：o.tsuji?et?al.,stem?cells.2019；37(1):6-13.

8、非專利文獻(xiàn)2：k.kitamura?et?al.,plos?one.2011；6(11):e27706.

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、發(fā)明要解決的課題

2、只要能夠從一般的體細(xì)胞簡易迅速地直接誘導(dǎo)或直接轉(zhuǎn)化成產(chǎn)生上述的生長因子的細(xì)胞，就可以認(rèn)為作為再生醫(yī)療用途是有希望的，但尚不知曉這樣的細(xì)胞的制備方法。

3、本發(fā)明以提供不需要基因?qū)搿捏w細(xì)胞安全且快速地誘導(dǎo)或轉(zhuǎn)化生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的新方法作為主要的課題。另外，本發(fā)明的課題還在于提供在再生醫(yī)療等中有用的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞。

4、解決課題的方法

5、本發(fā)明人等進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過使用tgf-β抑制劑、p53抑制劑、camp誘導(dǎo)劑等，可以從體細(xì)胞快速地直接轉(zhuǎn)化為生長因子產(chǎn)生細(xì)胞，從而完成了本發(fā)明。

6、作為本發(fā)明，例如，可以舉出下述的方式。

7、[1]一種生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的制造方法，其是通過直接分化誘導(dǎo)而從體細(xì)胞制造生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的方法，該方法包括：

8、在選自tgf-β抑制劑、p53抑制劑及camp誘導(dǎo)劑中的至少任1種的存在下培養(yǎng)體細(xì)胞的工序。

9、[2]根據(jù)上述[1]所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的制造方法，其中，

10、上述工序是至少在tgf-β抑制劑、bmp抑制劑、p53抑制劑及camp誘導(dǎo)劑這4種的存在下培養(yǎng)體細(xì)胞的工序。

11、[3]根據(jù)上述[1]或[2]所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的制造方法，其中，

12、上述工序是至少在tgf-β抑制劑、bmp抑制劑、p53抑制劑、camp誘導(dǎo)劑、gsk3抑制劑及erk抑制劑這6種的存在下培養(yǎng)體細(xì)胞的工序。

13、[4]根據(jù)上述[2]或[3]所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的制造方法，其中，

14、上述tgf-β抑制劑為alk5抑制劑，上述bmp抑制劑為alk2/alk3抑制劑。

15、[5]根據(jù)上述[1]～[4]中任一項所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的制造方法，其中，

16、上述alk5抑制劑為sb431542(cas?no.：301836-41-9)或repsox(cas?no.：446859-33-2)、上述alk2/alk3抑制劑為ldn193189(cas?no.：1062368-24-4)、上述p53抑制劑為pifithrin-α(cas?no.：63208-82-2)、或者上述camp誘導(dǎo)劑為毛喉素(forskolin)(casno.：66428-89-5)。

17、[6]根據(jù)上述[3]～[5]中任一項所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的制造方法，其中，

18、上述gsk3抑制劑為chir99021(cas?no.：252917-06-9)、或者上述erk抑制劑為pd0325901(cas?no.：391210-10-9)。

19、[7]根據(jù)上述[1]～[6]中任一項所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的制造方法，其中，

20、上述體細(xì)胞為終末分化后的體細(xì)胞。

21、[8]根據(jù)上述[1]～[7]中任一項所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的制造方法，其中，

22、上述體細(xì)胞為成纖維細(xì)胞。

23、[9]一種生長因子產(chǎn)生細(xì)胞，其通過上述[1]～[8]中任一項所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的制造方法而制造。

24、[10]根據(jù)上述[9]所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞，其產(chǎn)生生長因子及抗炎癥因子。

25、[11]根據(jù)上述[10]所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞，其中，

26、上述生長因子為hgf，上述抗炎癥因子為il-1rn(interleukin-1receptorantagonist：白細(xì)胞介素-1受體拮抗劑)。

27、[12]一種細(xì)胞片(cell?sheet)或醫(yī)藥組合物，其包含上述[9]～[11]中任一項所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞，所述細(xì)胞片或醫(yī)藥組合物用于疾病的治療。

28、[13]根據(jù)上述[12]所述的細(xì)胞片或醫(yī)藥組合物，其中，

29、上述疾病為脊髓損傷、燙傷或褥瘡。

30、[14]一種生長因子的制造方法，該方法包括：

31、從上述[9]所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞或其分泌物提取分離生長因子的工序。

32、[15]一種生長因子或抗炎癥因子的制造方法，該方法包括：

33、從上述[10]或者[11]所述的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞或其分泌物提取分離生長因子或抗炎癥因子的工序。

34、[16]一種用于制造生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的組合物，其是用于通過直接分化誘導(dǎo)而從體細(xì)胞制造生長因子產(chǎn)生細(xì)胞的組合物，所述組合物包含選自tgf-β抑制劑、p53抑制劑及camp誘導(dǎo)劑中的至少任1種。

35、[17]根據(jù)上述[16]所述的組合物，其至少包含tgf-β抑制劑、bmp抑制劑、p53抑制劑及camp誘導(dǎo)劑這4種。

36、[18]根據(jù)上述[17]所述的組合物，其進(jìn)一步包含gsk3抑制劑及erk抑制劑。

37、[19]根據(jù)上述[17]或[18]所述的組合物，其中，

38、上述tgf-β抑制劑為alk5抑制劑，上述bmp抑制劑為alk2/alk3抑制劑。

39、[20]根據(jù)上述[16]～[19]中任一項所述的組合物，其中，

40、上述alk5抑制劑為sb431542(cas?no.：301836-41-9)或repsox(cas?no.：446859-33-2)、上述alk2/alk3抑制劑為ldn193189(cas?no.：1062368-24-4)、上述p53抑制劑為pifithrin-α(cas?no.：63208-82-2)、或者上述camp誘導(dǎo)劑為毛喉素(cas?no.：66428-89-5)。

41、[21]根據(jù)上述[18]～[20]中任一項所述的組合物，其中，

42、上述gsk3抑制劑為chir99021(cas?no.：252917-06-9)、或者上述erk抑制劑為pd0325901(cas?no.：391210-10-9)。

43、發(fā)明的效果

44、根據(jù)本發(fā)明，可以在短時間內(nèi)從體細(xì)胞(特別是終末分化后的體細(xì)胞或成纖維細(xì)胞)制造生長因子產(chǎn)生細(xì)胞、或者生長因子或抗炎癥因子。通過本發(fā)明得到的生長因子產(chǎn)生細(xì)胞在再生醫(yī)療等中是有用的。