本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合、液相芯片、試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

目前，轉(zhuǎn)基因玉米是目前全球最主要的轉(zhuǎn)基因糧食作物之一。根據(jù)國際農(nóng)業(yè)生物技術(shù)應(yīng)用服務(wù)組織(ISAAA)資料顯示，從1996年到2015年的20年期間全球轉(zhuǎn)基因作物累計(jì)種植面積達(dá)到空前的20億公頃，相當(dāng)于中國大陸總面積(9.56億公頃)或美國總面積(9.37億公頃)的2倍，其中轉(zhuǎn)基因玉米占了30％。轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物在全球市場(chǎng)的大量出現(xiàn)，在其環(huán)境和食品安全問題尚未完全確定的情況下，中國、歐盟等國家和組織要求對(duì)其進(jìn)行標(biāo)識(shí)。因此，快速、準(zhǔn)確、靈敏和高通量的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)技術(shù)是非常主要的。目前，在基因水平上檢測(cè)轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的方法已經(jīng)有很多，主要包括PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)和基因芯片技術(shù)。但由于轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物種類多、數(shù)量大，很多作為加工原料引進(jìn)，經(jīng)過處理后，轉(zhuǎn)基因成分可能會(huì)降解，所以使檢測(cè)難度變大，且現(xiàn)有的檢測(cè)試劑盒單次檢測(cè)能夠檢測(cè)出的轉(zhuǎn)基因成分類別少。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一目的在于提供一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合，此探針組合可用于快速準(zhǔn)確的檢測(cè)出轉(zhuǎn)基因玉米中的多種轉(zhuǎn)基因成分，其具有特異性好，靈敏度高，通量大、結(jié)果可靠等特點(diǎn)。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的液相芯片，其由上述探針組合分別與熒光編碼微球偶聯(lián)制成，此液相芯片可用于快速準(zhǔn)確的檢測(cè)出轉(zhuǎn)基因玉米中的多種轉(zhuǎn)基因成分，其具有特異性好，靈敏度高，通量大、結(jié)果可靠等特點(diǎn)。

本發(fā)明的第三目的在于提供一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒，此試劑盒包括上述液相芯片，此試劑盒快速準(zhǔn)確的檢測(cè)出轉(zhuǎn)基因玉米中的多種轉(zhuǎn)基因成分，具有特異性好，靈敏度高，通量大、結(jié)果可靠等特點(diǎn)。

本發(fā)明的第四目的在于提供另一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒，此試劑盒快速準(zhǔn)確的檢測(cè)出轉(zhuǎn)基因玉米中的多種轉(zhuǎn)基因成分，具有特異性好，靈敏度高，通量大、結(jié)果可靠等特點(diǎn)。

本發(fā)明的第五目的在于提供上述用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒在玉米轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)中的應(yīng)用。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。

一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合，其包括5’端標(biāo)記C₁₂分子臂和氨基修飾的陽性探針和檢測(cè)探針，陽性探針的堿基序列為SEQ ID NO.33所示，且檢測(cè)探針的堿基序列為選自SEQ ID NO.23-SEQ ID NO.32所示序列的中的任一種；或陽性探針的堿基序列為SEQ ID NO.33所示序列的反向互補(bǔ)序列，檢測(cè)探針的堿基序列為選自SEQ ID NO.23-SEQ ID NO.32所示序列的中的任一種的反向互補(bǔ)序列。

一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的液相芯片，其由上述的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合分別與羥基化的熒光編碼微球偶聯(lián)混合制成。

一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒，其包括上述的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的液相芯片。

一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒，其包括對(duì)照組和檢測(cè)組，檢測(cè)組包括第1-10檢測(cè)組中的至少一個(gè)，對(duì)照組包括正向引物、反向引物以及5’端帶有C12分子臂和氨基修飾標(biāo)記的陽性探針，每個(gè)檢測(cè)組合均包括正向引物、反向引物以及5’端帶有C12分子臂和氨基修飾標(biāo)記的檢測(cè)探針，對(duì)照組的正向引物和反向引物其中之一和每個(gè)檢測(cè)組的正向引物和反向引物其中之一的5’端帶有生物素標(biāo)記；

其中，第1-10檢測(cè)組的正向引物和對(duì)照組的正向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO.1-11所示，第1-10檢測(cè)組的反向引物和對(duì)照組的反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO.12-22所示；

當(dāng)?shù)?-10檢測(cè)組的反向引物和對(duì)照組的反向引物的5’端帶有生物素標(biāo)記時(shí)，第1-10檢測(cè)組和對(duì)照組的檢測(cè)探針的堿基序列分別如SEQ ID NO.23-33所示；

當(dāng)?shù)?-10檢測(cè)組的正向引物和對(duì)照組的正向引物的5’端帶有生物素標(biāo)記時(shí)，第1-10檢測(cè)組和對(duì)照組的檢測(cè)探針的堿基序列分別為SEQ ID NO.23-33所示序列的反向互補(bǔ)序列。

上述所述的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒在玉米轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合、液相芯片、試劑盒及其應(yīng)用有益效果是：本發(fā)明提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合包括5’端標(biāo)記C12分子臂和氨基修飾的陽性探針和檢測(cè)探針，陽性探針的堿基序列為SEQ ID NO.33所示，且檢測(cè)探針的堿基序列為選自SEQ ID NO.23-SEQ ID NO.32所示序列的中的任一種。或者陽性探針的堿基序列為SEQ ID NO.33所示序列的反向互補(bǔ)序列，檢測(cè)探針的堿基序列為選自SEQ ID NO.23-SEQ ID NO.32所示序列的中的任一種的反向互補(bǔ)序列。由于SEQ ID NO.23-SEQ ID NO.32所示的檢測(cè)探針的序列針對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米常見的轉(zhuǎn)基因成分Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS-P0、EPSPS-P2、P35S、T35S以及Nos-3’進(jìn)行特異性設(shè)計(jì)，上述5’端標(biāo)記C12分子臂和氨基修飾的各探針能夠與熒光編碼微球偶聯(lián)混合后，得到液相芯片，其與多重PCR擴(kuò)增產(chǎn)物特異性結(jié)合，通過液相芯片的檢測(cè)方法，可檢測(cè)出樣品中是否含有上述轉(zhuǎn)基因成分。其中，陽性探針針對(duì)性檢測(cè)的玉米內(nèi)源基因Ivr1，作為陽性對(duì)照，以使檢測(cè)結(jié)果更可靠，避免假陽性結(jié)果出現(xiàn)?？傊?，本發(fā)明的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、單次可檢指標(biāo)多的特點(diǎn)，其對(duì)種子站、農(nóng)科院所和邊境口岸對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)具有重要作用。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，應(yīng)當(dāng)理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實(shí)施例，因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例5的檢測(cè)結(jié)果；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例6的檢測(cè)結(jié)果；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例7的檢測(cè)結(jié)果；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例8的檢測(cè)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合、液相芯片、試劑盒及其應(yīng)用進(jìn)行具體說明。

液相芯片是繼基因芯片、蛋白芯片之后的新一代高通量分子檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)。迄今為止十年時(shí)間，全球已有數(shù)百套基于xMAP技術(shù)的檢測(cè)平臺(tái)用于免疫學(xué)、蛋白質(zhì)、核酸檢測(cè)、基因研究等領(lǐng)域，該技術(shù)已成為一種新的蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)研究工具，也是最早通過美國食品與藥物管理局(FDA)認(rèn)證的可用于臨床診斷的生物芯片技術(shù)。該技術(shù)主要通過紅、綠兩束激光分別檢測(cè)微球編碼和報(bào)告熒光來達(dá)到定性和定量的目的，一個(gè)反應(yīng)孔內(nèi)可以完成多達(dá)100種不同的生物學(xué)反應(yīng)。這使它具有生物芯片的高通量、高集成、微型化、連續(xù)化和自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，還具有液相反應(yīng)的高敏感性、高重復(fù)性、檢測(cè)線性范圍寬、反應(yīng)快速等優(yōu)點(diǎn)，并且該方法操作簡(jiǎn)便、快捷、樣品用量少。

基于此技術(shù)，發(fā)明人針對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米常見的轉(zhuǎn)基因成分如Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS-P0、EPSPS-P2、P35S、T35S以及Nos-3’等的保守序列以及玉米內(nèi)源基因Ivr1的保守序列設(shè)進(jìn)行計(jì)，得到了檢測(cè)上述基因成分的11種探針。對(duì)于該11種探針形成的探針組合具體說明如下。

一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合，其包括5’端標(biāo)記C₁₂分子臂和氨基修飾的陽性探針和檢測(cè)探針，陽性探針的堿基序列為SEQ ID NO.33所示，且檢測(cè)探針的堿基序列為選自SEQ ID NO.23-SEQ ID NO.32所示序列的中的任一種；或陽性探針的堿基序列為SEQ ID NO.33所示序列的反向互補(bǔ)序列，檢測(cè)探針的堿基序列為選自SEQ ID NO.23-SEQ ID NO.32所示序列的中的任一種的反向互補(bǔ)序列。

上述探針的5’端標(biāo)記C₁₂分子臂和氨基修飾，它們可分別與不同的熒光編碼微球偶聯(lián)、混合后制成液相芯片，進(jìn)而可實(shí)現(xiàn)對(duì)Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS-P0、EPSPS-P2、P35S、T35S以及Nos-3’轉(zhuǎn)基因成分的液相芯片檢測(cè)。且在檢測(cè)過程中，具有上述堿基序列的各探針之間不發(fā)生非特異性結(jié)合，確保探針能夠與其對(duì)應(yīng)的目標(biāo)序列(對(duì)應(yīng)的基因或?qū)?yīng)基因的PCR產(chǎn)物)進(jìn)行特異性結(jié)合，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，有效地避免假陽性結(jié)果出現(xiàn)。且本發(fā)明提供的探針組合為采用液相芯片檢測(cè)技術(shù)來實(shí)現(xiàn)對(duì)玉米轉(zhuǎn)基因成分Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS-P0、EPSPS-P2、P35S、T35S以及Nos-3’的快速、簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高等的檢測(cè)提供了支持。

優(yōu)選地，探針組合還包括5’端標(biāo)記C₁₂分子臂和氨基修飾的陰性探針，陰性探針的堿基序列如SEQ ID NO.34所示。具有如SEQ ID NO.34所示陰性探針在檢測(cè)的過程不與任何PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)合，能夠起到良好的陰性對(duì)照效果，進(jìn)一步避免假陽性結(jié)果的發(fā)生，提高檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的液相芯片，其由上述任一項(xiàng)的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合分別與羥基化的熒光編碼微球偶聯(lián)混合制成。

優(yōu)選地，在偶聯(lián)的過程中，按0.1nmol用量的檢測(cè)探針對(duì)應(yīng)1×10⁵個(gè)羥基化的熒光編碼微球進(jìn)行偶聯(lián)。可使得偶聯(lián)效率更高，有利于節(jié)約資源和降低成本。

一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒，其包括上述的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的液相芯片。

本發(fā)明的另一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒，其包括對(duì)照組和檢測(cè)組，檢測(cè)組包括第1-10檢測(cè)組中的至少一個(gè)，對(duì)照組包括正向引物、反向引物以及5’端帶有C12分子臂和氨基修飾標(biāo)記的陽性探針，每個(gè)檢測(cè)組合均包括正向引物、反向引物以及5’端帶有C12分子臂和氨基修飾標(biāo)記的檢測(cè)探針，對(duì)照組的正向引物和反向引物其中之一和每個(gè)檢測(cè)組的正向引物和反向引物其中之一的5’端帶有生物素標(biāo)記；

其中，第1-10檢測(cè)組的正向引物和對(duì)照組的正向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO.1-11所示，第1-10檢測(cè)組的反向引物和對(duì)照組的反向引物的堿基序列分別如SEQ ID NO.12-22所示。需要說明的是，探針需要與帶有生物素標(biāo)記的引物所擴(kuò)增出的單鏈DNA進(jìn)行特異性結(jié)合，進(jìn)行實(shí)現(xiàn)檢出目的。

因此，當(dāng)?shù)?-10檢測(cè)組的反向引物和對(duì)照組的反向引物的5’端帶有生物素標(biāo)記時(shí)，第1-10檢測(cè)組和對(duì)照組的檢測(cè)探針的堿基序列分別如SEQ ID NO.23-33所示；

當(dāng)?shù)?-10檢測(cè)組的正向引物和對(duì)照組的正向引物的5’端帶有生物素標(biāo)記時(shí)，第1-10檢測(cè)組和對(duì)照組的檢測(cè)探針的堿基序列分別為SEQ ID NO.23-33所示序列的反向互補(bǔ)序列。

此外，發(fā)明人在上述探針設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)上，還針對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米常見的轉(zhuǎn)基因成分如Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS-P0、EPSPS-P2、P35S、T35S以及Nos-3’等的保守序列以及玉米內(nèi)源基因Ivr1進(jìn)行了引物設(shè)計(jì)，得到了檢測(cè)上述可同時(shí)擴(kuò)增上述基因的11重PCR引物。以確保其在進(jìn)行11重PCR時(shí)能夠最大程度地避免了非特異性擴(kuò)增，且通過非對(duì)稱擴(kuò)增技術(shù)進(jìn)行非對(duì)稱PCR，確保擴(kuò)增出的單鏈DNA鏈能夠有效地和對(duì)應(yīng)的檢測(cè)探針進(jìn)行特異性結(jié)合，使得檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，避免假陽性結(jié)果出現(xiàn)。引物對(duì)和檢測(cè)探針?biāo)鋵?duì)應(yīng)的基因檢測(cè)成分的類別見實(shí)施例。

優(yōu)選地，該試劑盒還包括報(bào)告分子，報(bào)告分子為鏈霉親和素-藻紅蛋白。鏈霉親和素-藻紅蛋白能夠和生物素標(biāo)記的引物所擴(kuò)增出的單鏈DNA鏈結(jié)合，在相應(yīng)激發(fā)光的作用下產(chǎn)生熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)檢出目的。

優(yōu)選地，試劑盒還包括輔料組合，輔料組合為選自dNTP、TaqDNA聚合酶、PCR緩沖液中的一種或多種。

上述的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒在玉米轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒在玉米轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)中的應(yīng)用，其包括：用正向引物和反向引物進(jìn)行多重非對(duì)稱PCR，在PCR反應(yīng)體系中，帶有生物素標(biāo)記的正向引物與未帶有生物素標(biāo)記的反向引物的摩爾比為1.2-1.8:1或帶有生物素標(biāo)記的反向引物與未帶有生物素標(biāo)記的正向引物的摩爾比為1.2-1.8:1。也就是說，在進(jìn)行多重非對(duì)稱PCR的過程中，帶有生物素標(biāo)記的引物與未帶有生物素標(biāo)記的引物的摩爾比為1.2-1.8:1，以使擴(kuò)增出的單鏈DNA具有生物素標(biāo)記，便于與報(bào)告分子結(jié)合。

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合，其包括5’端標(biāo)記C12分子臂和氨基修飾的陽性探針和檢測(cè)探針。陽性探針的堿基序列為SEQ ID NO.33所示，且檢測(cè)探針的堿基序列分別為SEQ ID NO.23-SEQ ID NO.32所示序列。

其中，陽性探針?biāo)鶛z測(cè)的基因成分為玉米轉(zhuǎn)化酶I基因(Irv1)，為內(nèi)參基因，作為陽性對(duì)照。

檢測(cè)探針的5’端也標(biāo)記C12分子臂和氨基修飾，用于與熒光編碼微球偶聯(lián)。檢測(cè)探針共10個(gè)，分別是第1-10檢測(cè)探針，其堿基序列SEQ ID NO.23-SEQ ID NO.32所示序列。

其中，堿基序列如SEQ ID NO.23所示的第1檢測(cè)探針用于檢測(cè)草丁膦乙酰CoA轉(zhuǎn)移酶基因(Pat)。

堿基序列如SEQ ID NO.24所示的第2檢測(cè)探針用于檢測(cè)草丁膦乙酰轉(zhuǎn)移酶基因(Bar)。

堿基序列如SEQ ID NO.25所示的第3檢測(cè)探針用于檢測(cè)蘇云金芽孢桿菌殺蟲毒蛋白cry1A(b)基因(Cry1Ab)。

堿基序列如SEQ ID NO.26所示的第4檢測(cè)探針用于檢測(cè)蘇云金芽孢桿菌殺蟲毒蛋白cry1A(c)基因(Cry1Ac)。

堿基序列如SEQ ID NO.27所示的第5檢測(cè)探針用于檢測(cè)蘇云金芽孢桿菌殺蟲毒蛋白cry105基因(Cry105)。

堿基序列如SEQ ID NO.28所示的第6檢測(cè)探針用于檢測(cè)莽草酸羥基乙酰轉(zhuǎn)移酶P0基因(EPSPS-P0)。

堿基序列如SEQ ID NO.29所示的第7檢測(cè)探針用于檢測(cè)莽草酸羥基乙酰轉(zhuǎn)移酶P2基因(EPSPS-P2)。

堿基序列如SEQ ID NO.30所示的第8檢測(cè)探針用于檢測(cè)花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子(P35S)。

堿基序列如SEQ ID NO.31所示的第9檢測(cè)探針用于檢測(cè)花椰菜花葉病毒35S終止子(T35S)。

堿基序列如SEQ ID NO.32所示的第10檢測(cè)探針用于檢測(cè)堿基序列胭脂堿合成酶基因終止子(Nos-3’)。

由于上述探針的5’端標(biāo)記C12分子臂和氨基修飾，使得它們可分別與不同的熒光編碼微球偶聯(lián)、混合后制成液相芯片，進(jìn)而為實(shí)現(xiàn)對(duì)Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS-P0、EPSPS-P2、P35S、T35S以及Nos-3’轉(zhuǎn)基因成分的液相芯片檢測(cè)提供了支持。

且在檢測(cè)過程中，具有上述堿基序列的各探針之間不發(fā)生非特異性結(jié)合，確保探針能夠與其對(duì)應(yīng)的目標(biāo)序列(對(duì)應(yīng)的基因或?qū)?yīng)基因的PCR產(chǎn)物)進(jìn)行特異性結(jié)合，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，有效地避免假陽性結(jié)果出現(xiàn)。

因此，本發(fā)明提供的探針組合為采用液相芯片檢測(cè)技術(shù)來實(shí)現(xiàn)對(duì)玉米轉(zhuǎn)基因成分Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS-P0、EPSPS-P2、P35S、T35S以及Nos-3’的快速、簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高等的檢測(cè)提供了支持。

總之，上述所述的任意一種探針組合均能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)玉米轉(zhuǎn)基因成分的液相芯片檢測(cè)，且在檢測(cè)過程中，各探針之間不發(fā)生非特異性結(jié)合，確保探針能夠與其對(duì)應(yīng)的目標(biāo)序列進(jìn)行特異性結(jié)合，使得檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，有效地避免假陽性結(jié)果出現(xiàn)。

實(shí)施例2

本發(fā)明提供的用于用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合同實(shí)施例1，但不同的本發(fā)明的探針組合還包括5’端標(biāo)記C₁₂分子臂和氨基修飾的陰性探針，陰性探針的堿基序列如SEQ ID NO.34所示。本發(fā)明提供的用于用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合不僅具有與同實(shí)施例1相同的效果。還有其他的效果體現(xiàn)在，具有如SEQ ID NO.34所示陰性探針在檢測(cè)的過程不與任何PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)合，能夠起到良好的陰性對(duì)照效果，進(jìn)一步避免假陽性結(jié)果的發(fā)生，提高檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

實(shí)施例3

本實(shí)施例提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的液相芯片，該液相芯片由實(shí)施例1所述的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合(即陽性探針和第1-10檢測(cè)探針)分別與熒光編碼微球偶聯(lián)制成。以下對(duì)于偶聯(lián)的步驟作具體說明。但本發(fā)明的液相芯片并不限于采用以下所述的偶聯(lián)方法制成，也可以是由其他的偶聯(lián)方法制得，只要是采用了實(shí)施例1所述的探針組合的任意一種組合與熒光編碼微球結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)玉米轉(zhuǎn)基因成分的液相芯片檢測(cè)即落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。本實(shí)施例的可通過如下偶聯(lián)方法制成。

1制備偶聯(lián)體系：取40μl(微球總數(shù)量為1×10⁵個(gè))羥基化修飾的熒光編碼微球(微球，美國Luminex公司)，12000rpm離心2min后棄上清，在沉淀中加入5μl的0.1M、pH值4.5的MES[2-(N-嗎啉代)乙磺酸]溶液，混勻，得到5μl的偶聯(lián)體系(微球濃度為2×10⁴個(gè)/μl，微球總數(shù)量為1×10⁵個(gè))。

2將陽性探針稀釋至0.1mM，往偶聯(lián)體系中加入2μl的陽性探針(共0.2nmol的陽性探針)，混勻。

3往偶聯(lián)體系中加入2.5μl EDC(濃度為10mg/ml，二氯乙烷)，混勻，避光反應(yīng)30min。

4往偶聯(lián)體系中再次加入2.5μl EDC(10mg/ml)，混勻，避光反應(yīng)30min。

5往偶聯(lián)體系中加入0.2ml 0.02％的Tween-20，離心12000rpm、1min，棄上清。

6往偶聯(lián)體系中加入0.2ml 0.1％的SDS(十二烷基硫酸鈉)溶液，離心12000rpm、1min，棄上清。

7加入10μl 1×TE緩沖液(pH 8.0)，混勻微球，得到偶聯(lián)有陽性探針的熒光編碼微球的微球儲(chǔ)備液，于4℃避光保存。

8按1-7的方法，將第1-10檢測(cè)探針分別偶聯(lián)不同的熒光編碼微球，分別得到10種微球儲(chǔ)備液。

9將上述得到11種微球儲(chǔ)備液混合，用1.5×TMAC溶液(組成的物質(zhì)終濃度如下：4.5M的TMAC(四甲基氯化氨)、質(zhì)量體積比0.15％的十二烷基肌氨酸鈉、75mM pH 8.0的Tris-HCl和pH 8.0的6mM EDTA)稀釋至每種熒光編碼微球的工作濃度為100個(gè)/μl，得到微球檢測(cè)液即液相芯片。

通過采用液相芯片檢測(cè)技術(shù)，本實(shí)施例的液相芯片可用于快速準(zhǔn)確的檢測(cè)出轉(zhuǎn)基因玉米中的轉(zhuǎn)基因成分Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS-P0、EPSPS-P2、P35S、T35S以及Nos-3’，其具有特異性好，靈敏度高，通量大、結(jié)果可靠等特點(diǎn)。

實(shí)施例4

本實(shí)施例提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒，其包括上述實(shí)施例3所述的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的液相芯片。通過采用液相芯片檢測(cè)技術(shù)，本實(shí)施例的試劑盒快速準(zhǔn)確的檢測(cè)出轉(zhuǎn)基因玉米中的轉(zhuǎn)基因成分Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS-P0、EPSPS-P2、P35S、T35S以及Nos-3’，其具有特異性好，靈敏度高，通量大、結(jié)果可靠等特點(diǎn)。

實(shí)施例5

本實(shí)施例提供了另一種用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒，該試劑盒與實(shí)施例4的試劑盒稍有不同。本實(shí)施例的試劑盒還包括與探針檢測(cè)配套的用于多重非對(duì)稱PCR擴(kuò)增的引物。具體如下。

本實(shí)施例提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒包括對(duì)照組和檢測(cè)組，檢測(cè)組包括第1-10檢測(cè)組。對(duì)照組包括正向引物、反向引物以及5’端帶有C12分子臂和氨基修飾標(biāo)記的陽性探針。每個(gè)檢測(cè)組合均包括正向引物、反向引物以及5’端帶有C12分子臂和氨基修飾標(biāo)記的檢測(cè)探針。第1-10檢測(cè)組的反向引物和對(duì)照組的反向引物的5’端帶有生物素標(biāo)記。其中，第1-10檢測(cè)組用于檢測(cè)玉米的外源轉(zhuǎn)基因成分，對(duì)照組合用于檢測(cè)玉米內(nèi)源基因Irv1，第1-10檢測(cè)組和對(duì)照組的引物和探針的堿基序列(5’-3’)如下。

第1檢測(cè)組合，用于檢測(cè)Pat(草丁膦乙酰CoA轉(zhuǎn)移酶基因)：

正向引物為：TGATATGGCCGCGGTTTGTGAT(堿基序列如SEQ ID NO.1所示)；

反向引物為：Biotin-GGCCCAGCGTAAGCAATACC(堿基序列如SEQ ID NO.12所示)；

檢測(cè)探針(Pat探針)為：

NH₂-C₁₂-GCAAGATAGATACCCTTGGTTGGTTGCTGAGGTTGAGGGTGTTGTGGCTGGTATTGCTT(堿基序列如SEQ ID NO.23所示)。

第2檢測(cè)組合，用于檢測(cè)Bar(草丁膦乙酰轉(zhuǎn)移酶基因)：

正向引物為：GGGGATCTACCATGAGCCCA(堿基序列如SEQ ID NO.2所示)；

反向引物為：Biotin-GGCTCGGTACGGAAGTTGAC(堿基序列如SEQ ID NO.13所示)；

檢測(cè)探針(Bar探針)為：

NH₂-C₁₂-ACCGAGGCGGACATGCCGGCGGTCTGCACCATCGTCAACCACTACATCGAGACAAGCAC(堿基序列如SEQ ID NO.24所示)。

第3檢測(cè)組合，用于檢測(cè)Cry1Ab(蘇云金芽孢桿菌殺蟲毒蛋白cry1A(b)基因)：

正向引物為：CGACATCTCCTTGTCCTTGAC(堿基序列如SEQ ID NO.3所示)；

反向引物為：Biotin-CTCAATTTGCACCAGGAATGC(堿基序列如SEQ ID NO.14所示)；

檢測(cè)探針(Cry1Ab探針)為：

NH₂-C₁₂-GCTGGGTTCGTTCTCGGACTAGTTGACATCATCTGGGGTATCTTTGGTCCATCTCAATG(堿基序列如SEQ ID NO.25所示)。

第4檢測(cè)組合，用于檢測(cè)Cry1Ac(蘇云金芽孢桿菌殺蟲毒蛋白cry1A(c)基因)：

正向引物為：GTTAGACTCAACAGCAGTGGA(堿基序列如SEQ ID NO.4所示)；

反向引物為：Biotin-GAGAAGATGGATGAATTACCCCA(堿基序列如SEQ ID NO.15所示)；

檢測(cè)探針(Cry1Ac探針)為：

NH₂-C₁₂-TCTACCAGATATAGAGTTCGTGTGAGGTATGCTTCTGTGACCCCTATTCACCTCAACGT(堿基序列如SEQ ID NO.26所示)。

第5檢測(cè)組合，用于檢測(cè)Cry105(蘇云金芽孢桿菌殺蟲毒蛋白cry105基因)：

正向引物為：ACTCGATCAGGTACAATGCCA(堿基序列如SEQ ID NO.5所示)；

反向引物為：Biotin-GCATCTGTTAGGCTCTCCAC(堿基序列如SEQ ID NO.16所示)；

檢測(cè)探針(Cry105探針)為：

NH₂-C₁₂-GACCGTGAATGTCCCAGGTACTGGTTCCCTCTGGCCACTTTCTGCCCAATCTCCCATTG(堿基序列如SEQ ID NO.27所示)。

第6檢測(cè)組合，用于檢測(cè)EPSPS-P0(莽草酸羥基乙酰轉(zhuǎn)移酶P0基因)：

正向引物為：GCGCGATCATACGGAAAAGAT(堿基序列如SEQ ID NO.6所示)；

反向引物為：Biotin-TCGATGACTTGGCCGGTGAG(堿基序列如SEQ ID NO.17所示)；

檢測(cè)探針(EPSPS-P0探針)為：

NH₂-C₁₂-ACCTTACCGTCGAGACGGATGCGGACGGCGTGCGCACCATCCGCCTGGAAGGCCGCGGC(堿基序列如SEQ ID NO.28所示)。

第7檢測(cè)組合，用于檢測(cè)EPSPS-P2(莽草酸羥基乙酰轉(zhuǎn)移酶P2基因)：

正向引物為：TCGTGACCACACTGAAAAGAT(堿基序列如SEQ ID NO.7所示)；

反向引物為：Biotin-TCAATCACTTGACCGGTGAG(堿基序列如SEQ ID NO.18所示)；

檢測(cè)探針(EPSPS-P2探針)為：

NH₂-C₁₂-ACCTTACCGTCGAGACGGATGCGGACGGCGTGCGCACCATCCGCCTGGAAGGCCGCGGC(堿基序列如SEQ ID NO.29所示)。

第8檢測(cè)組合，用于檢測(cè)P35S(花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子)：

正向引物為：AAGACGTTCCAACCACGTCTTCAA(堿基序列如SEQ ID NO.8所示)；

反向引物為：Biotin-GAGGAAGGGTCTTGCGAAGG(堿基序列如SEQ ID NO.19所示)；

檢測(cè)探針(P35S探針)為：

NH₂-C₁₂-CAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCAC(堿基序列如SEQ ID NO.30所示)

第9檢測(cè)組合，用于檢測(cè)T35S(花椰菜花葉病毒35S終止子)：

正向引物為：TGTATTTGTATTTGTAAAATACTTCTATCAA(堿基序列如SEQ ID NO.9所示)；

反向引物為：Biotin-CTGGATTTTGGTTTTAGGAATTAGA(堿基序列如SEQ ID NO.20所示)；

檢測(cè)探針(T35S探針)為：

NH₂-C₁₂-CTTAGTATGTATTTGTATTTGTAAAATACTTCTATCAATAAAATTTCT(堿基序列如SEQ ID NO.31所示)。

第10檢測(cè)組合，用于檢測(cè)Nos-3’(堿基序列胭脂堿合成酶基因終止子)：

正向引物為：TGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTT(堿基序列如SEQ ID NO.10所示)；

反向引物為：Biotin-GCGCGCGATAATTTATCCTAGTTT(堿基序列如SEQ ID NO.21所示)；

檢測(cè)探針(Nos-3’探針)為：

NH₂-C₁₂-TTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGC(堿基序列如SEQ ID NO.32所示)。

對(duì)照組，用于檢測(cè)Ivr1(玉米轉(zhuǎn)化酶I基因，為玉米內(nèi)參基因，可作為陽性對(duì)照)：

正向引物為：ACTAGTGCGACCCATATTCCAG(堿基序列如SEQ ID NO.11所示)；

反向引物為：Biotin-AAGCGGTAAGGCCAACAGTT(堿基序列如SEQ ID NO.22所示)；

陽性探針(Ivr1探針)為：

NH₂-C₁₂-ACTGCATGATGCAACAGGGGCTTGCCAGCTTGATGGCGTGTCCGTCCCTGATGCTGCAG(堿基序列如SEQ ID NO.33所示)。

本實(shí)施例以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米品系BT11為例進(jìn)行說明檢測(cè)方法。采用固相亞磷酰胺三酯法合成得到上述引物和探針，當(dāng)然合成引物和探針的方法不限于此，也可是由其他的方法合成。采用本實(shí)施例提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒檢測(cè)玉米轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)方法如下。

1提取待測(cè)樣品的基因組DNA

按DNA提取試劑盒(Nu Clean Plant Gen DNA Kit，CW2634S，北京康為世紀(jì)生物科技有限公司)的操作說明提取轉(zhuǎn)基因玉米品系BT11的基因組DNA，按每30mg初始樣本經(jīng)抽提后用60μl ddH₂O溶解基因組DNA，并用紫外分光光度計(jì)將DNA溶液稀釋至同一質(zhì)量濃度(100ng/μl)，作為DNA模板。

2多重非對(duì)稱PCR

用本實(shí)施例提供的轉(zhuǎn)基因液相芯片檢測(cè)試劑盒中的各檢測(cè)組合中的正向引物和反向引物對(duì)待測(cè)樣品DNA模板進(jìn)行多重非對(duì)稱PC擴(kuò)增。正向引物和反向引物提前稀釋至工作濃度20μM。反應(yīng)體系為：10×PCR反應(yīng)緩沖液(含mg²⁺)5μl，dNTP(2.5mM each)4μl，正向引物(20μM)各0.5μl，反向引物(20μM)各0.6μl，EX-Taq DNA聚合酶(5U/μl、Takara)0.5μl，DNA模板(100ng/μl)1μl，補(bǔ)ddH2O至總體積為50μl。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性10min，95℃變性30s、65℃退火30s、72℃延伸30s、共35個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min，最后4℃保存。最后得到多重非對(duì)稱PCR產(chǎn)物。

3微球與探針偶聯(lián)

3.1制備偶聯(lián)體系：取40μl(總微球數(shù)為1×10⁵個(gè))羥基化修飾的熒光編碼微球(微球，美國Luminex公司)，12000rpm離心2min后棄上清，在沉淀中加入5μl的0.1M、pH值4.5的MES[2-(N-嗎啉代)乙磺酸]溶液，混勻，得到5μl的偶聯(lián)體系，其中，微球濃度為2×10⁴個(gè)/μl。

3.2將對(duì)照組的陽性探針稀釋至0.1mM，往偶聯(lián)體系中加入1μl對(duì)照組的陽性探針(共0.1nm的陽性探針)，混勻。

3.3往偶聯(lián)體系中加入2.5μl EDC(濃度為10mg/ml，二氯乙烷)，混勻，避光反應(yīng)30min。

3.4往偶聯(lián)體系中再次加入2.5μl EDC(10mg/ml)，混勻，避光反應(yīng)30min。

3.5往偶聯(lián)體系中加入0.2ml 0.02％的Tween-20，離心12000rpm、1min，棄上清。

3.6往偶聯(lián)體系中加入0.2ml 0.1％的SDS(十二烷基硫酸鈉)溶液，離心12000rpm、1min，棄上清。

3.7加入10μl 1×TE緩沖液(pH 8.0)，混勻微球，得到偶聯(lián)有陽性探針的熒光編碼微球的陽性微球儲(chǔ)備液，于4℃避光保存。

3.8按3.1-3.7的方法，將第1-10檢測(cè)組的檢測(cè)探針以及陰性探針(Negative Probe)分別偶聯(lián)不同的熒光編碼微球，分別得到12種微球儲(chǔ)備液。其中，陰性探針為：

NH₂-C₁₂-GTTAATGCGCGATTGTCACCACACGTTGCGAGTTATGTTGCTGCGGAGATGG(如SEQ ID NO.34所示)。

3.9將上述得到12中微球儲(chǔ)備液混合，用1.5×TMAC溶液((組成的物質(zhì)終濃度如下：4.5M的TMAC(四甲基氯化氨)、質(zhì)量體積比0.15％的十二烷基肌氨酸鈉、75mM pH 8.0的Tris-HCl和pH 8.0的6mM EDTA))稀釋至每種熒光編碼微球的工作濃度為100個(gè)/μl，得到微球檢測(cè)液即液相芯片。

4雜交

4.1雜交反應(yīng)體系為：33μl微球檢測(cè)液，7μl pH8.0的l×TE緩沖液，10μl多重非對(duì)稱PCR產(chǎn)物。雜交程序?yàn)椋?5℃5min，55℃15min，循環(huán)1次。

4.2雜交結(jié)束后，加入25μl含鏈霉親和素R-藻紅蛋白的報(bào)告溶液，混勻，于55℃下孵育5min。其中，報(bào)告溶液為用25μl 1×TMAC溶液(物質(zhì)組成的終濃度如下：3M的TMAC、質(zhì)量體積比0.1％的十二烷基肌氨酸鈉、50mM pH 8.0的Tris-HCl、4mM pH 8.0的EDTA)稀釋0.04μg鏈霉親和素R-藻紅蛋白得到。

5檢測(cè)

上機(jī)檢測(cè)，使用Luminex液相芯片檢測(cè)儀，參數(shù)設(shè)置為Count100，儀器讀出MFI(Median Fluorescence Intensity，平均熒光強(qiáng)度)，數(shù)據(jù)收集軟件對(duì)檢測(cè)的熒光強(qiáng)度比值分析判斷。判斷標(biāo)準(zhǔn)是：探針熒光信號(hào)值與相應(yīng)陰性對(duì)照比值≥3判讀為陽性，信號(hào)值與相應(yīng)陰性對(duì)照比值≤3為陰性。本實(shí)施例的檢測(cè)結(jié)果如圖1和表1所示。

由圖1(橫坐標(biāo)為偶聯(lián)相應(yīng)探針的微球、縱坐標(biāo)為相應(yīng)微球的平均熒光強(qiáng)度，圖中NC代表陰性對(duì)照)和表1可知，本實(shí)施例的待測(cè)樣品轉(zhuǎn)基因玉米品系BT11含有Pat、Cry1Ab、P35S以及Nos-3’等轉(zhuǎn)基因成分，檢測(cè)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致。

另外，需要說明的是本實(shí)施例中所用的報(bào)告分子、微球以及dNTP、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺和PCR緩沖液均為市購。

實(shí)施例6

本實(shí)施例提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒與實(shí)施例5基本相同。不同的是，本實(shí)施例的試劑盒還包括陰性探針。

陰性探針為：

NH₂-C₁₂-GTTAATGCGCGATTGTCACCACACGTTGCGAGTTATGTTGCTGCGGAGATGG(其堿基序列如SEQ ID NO.34所示)。

采用本實(shí)施例提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米品系BT176，檢測(cè)方法與實(shí)施例5基本一致。不同的是：在多重非對(duì)稱PCR中，反應(yīng)引物與正向引物的用量比為1.8:1，即每50μl的反應(yīng)體系中，各檢測(cè)組合中的反向引物(20μM)的加入量為0.9μl、正向引物(20μM)的加入量為0.5μl。檢測(cè)結(jié)果如圖2和表1所示。

由圖2和表1可知，本實(shí)施例的待測(cè)樣品轉(zhuǎn)基因玉米品系BT176含有Bar、P35S以及T35S等轉(zhuǎn)基因成分。

實(shí)施例7

本實(shí)施例提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒與實(shí)施例6基本相同，不同的是，本實(shí)施例的試劑盒還包括報(bào)告分子以及輔料組合。

報(bào)告分子為鏈霉親和素-藻紅蛋白。

輔料組合為dNTP、Taq DNA聚合酶、PCR緩沖液。當(dāng)然，在其他的實(shí)施例中，輔料組合可以是dNTP、Taq DNA聚合酶、PCR緩沖液中的一種或任意兩種的組合。

采用本實(shí)施例提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米品系MON88017，檢測(cè)方法與同實(shí)施例5基本相同。檢測(cè)結(jié)果如圖3和表1所示。

由圖3和表1可知，本實(shí)施例的待測(cè)樣品轉(zhuǎn)基因玉米品系MON88017含有EPSPS-P2、P35S、Nos-3'等轉(zhuǎn)基因成分。

實(shí)施例8

本實(shí)施例提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒包括對(duì)照組和檢測(cè)組，檢測(cè)組包括第1-10檢測(cè)組。對(duì)照組包括正向引物、反向引物以及5’端帶有C12分子臂和氨基修飾標(biāo)記的陽性探針。每個(gè)檢測(cè)組合均包括正向引物、反向引物以及5’端帶有C12分子臂和氨基修飾標(biāo)記的檢測(cè)探針。與實(shí)施例5不同的是，本實(shí)施例中，第1-10檢測(cè)組的正向引物和對(duì)照組的正向引物的5’端帶有生物素標(biāo)記。

第1-10檢測(cè)組的正向引物和對(duì)照組的正向引物的堿基序列和第1-10檢測(cè)組的反向引物和對(duì)照組的反向引物的堿基序列同實(shí)施例5。但本實(shí)施例中，第1-10檢測(cè)組和對(duì)照組的檢測(cè)探針的堿基序列分別為SEQ ID NO.23-33所示序列的反向互補(bǔ)序列。

采用本實(shí)施例的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的試劑盒檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米品系MON89034。檢測(cè)方法與實(shí)施例5基本相同，不同的是，在多重非對(duì)稱PCR時(shí)，各檢測(cè)組合所用的正向引物與反向引物的用量比為1.2:1，即每50μl的反應(yīng)體系中，各檢測(cè)組合中的正向引物(20μM)的加入量為0.6μl、反向引物(20μM)的加入量為0.5μl。檢測(cè)結(jié)果如圖4和表1所示。

表1.實(shí)施例5-8中待測(cè)樣品的檢測(cè)結(jié)果

由圖4和表1可知，本實(shí)施例的待測(cè)樣品轉(zhuǎn)基因玉米品系MON89034含有Cry105、P35S、Nos-3'等轉(zhuǎn)基因成分。

綜上所述，本發(fā)明實(shí)施例的試劑盒通過針對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米常見的轉(zhuǎn)基因成分Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS-P0、EPSPS-P2、P35S、T35S以及Nos-3’等10種外源基因成分以及玉米內(nèi)源基因Ivr1設(shè)計(jì)出可快速檢測(cè)的多重非對(duì)稱PCR的引物組合和以及用于液相芯片檢測(cè)的探針組合，且設(shè)計(jì)出的11重PCR引物最大程度地避免了非特異性擴(kuò)增，檢測(cè)探針能夠與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的單鏈DNA進(jìn)行特異性結(jié)合，避免假陽性結(jié)果，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、可檢指標(biāo)多的特點(diǎn)。

總之，本發(fā)明提供的用于轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)的探針組合、液相芯片以及試劑盒可以快速準(zhǔn)確的判斷待檢玉米產(chǎn)品中是否含有上述轉(zhuǎn)基因序列，操作簡(jiǎn)便，特異性好，靈敏度高，檢測(cè)通量大，對(duì)種子站、農(nóng)科院所和邊境口岸對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)具有重要作用。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。