專利名稱：從三裂葉蟛蜞菊中分離制備對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥用植物有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種從三裂葉蟛蜞菊中分離制備對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸的方法。
背景技術(shù)：
對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸(ent-KA)最早是從墨西哥傳統(tǒng)的抗生育草藥Montanoa tomentosa (Zoapatle)中分離得至丨J，參見文獻(xiàn):Journal of ethnopharmaco1gy(1986)，18(1)，89-94。曾有文獻(xiàn)報道，化合物ent_KA對人體鼻咽癌細(xì)胞(KB)和胃癌細(xì)胞(BGC-823)有很強的毒性，參見文獻(xiàn):(I) Phytotherapy Research (2002), 16，387 -388和(2)黑龍江醫(yī)藥(2006)，19，26-27。該化合物和其衍生物有很大的抗腫瘤研究價值和應(yīng)用前景?，F(xiàn)已經(jīng)有文獻(xiàn)披露從其它一些植物中也可分離得到這種物質(zhì)，但含量都很少。所以從生長繁殖能力強的植物中以較高的提取率來提取該化合物成為研究的熱點。三裂葉膨蜞菊即南美膨蜞菊(Wedelia trilobata)為菊科(Compositae)膨蜞菊屬(Wedelia)植物，多年生草本，原產(chǎn)熱帶美洲，群落中很少有其它雜草，具有極強的入侵性，已經(jīng)在許多熱帶、亞熱帶地區(qū)形成危害，被列為“世界上最有害的外來入侵物種”之一。生性強健，綠化迅速，能抑制雜草生長，常長大片生長。繁殖容易，摘取莖葉扦插即可成活。國內(nèi)外曾經(jīng)對南美蟛蜞菊的化學(xué)成分進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸是其主要活性成分。但常規(guī)的提取方法得到的產(chǎn)品純度較低、收率較低、操作麻煩、生產(chǎn)工藝周期長、且重復(fù)性差，不利于大規(guī)模生產(chǎn)，不能滿足市場需求。超臨界流體萃取是使用高于臨界溫度、臨界壓力的流體作為溶劑的萃取過程。處于臨界點附近的流體不僅對物質(zhì)具有極高的溶解能力，而且物質(zhì)的溶解度隨體系的壓力或溫度的變化而變化，從而通過調(diào)節(jié)體系的壓力或溫度就可方便地進(jìn)行選擇性地萃取分離物質(zhì)。超臨界萃取被視為環(huán)境友好且高效節(jié)能的新的化工分離技術(shù)在很多領(lǐng)域得到廣泛重視和開發(fā)。在溶劑分離與回收方面超臨界萃取優(yōu)于一般液一液萃取和精餾，被認(rèn)為是萃取速度快、效率高、能耗少的先進(jìn)工藝。超臨界流體萃取在中草藥及天然產(chǎn)物提取分離方面具有低溫、快速、收率高、產(chǎn)品純天然等特點。該技術(shù)對實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化具有重要的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種萃取速度快、效率高、能耗少的從三裂葉蟛蜞菊中分離制備對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸的方法，獲得的產(chǎn)品收率高、純度高。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:一種從三裂葉蟛蜞菊中分離制備對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸的方法，將三裂葉蟛蜞菊干燥，粉碎，過篩，稱取三裂葉蟛蜞菊粉末200-300g裝入超臨界萃取儀的萃取釜中，夾帶劑選用60-95 wt%乙醇，控制萃取壓力為20-25 MPa，萃取溫度為40_60°C，CO2流量為30_40L/h，萃取時間2_3h ;然后減壓濃縮去除乙醇得到總浸膏(40-50g)，總浸膏溶于100- 200ml水中，用100_200ml乙酸乙酯萃取三次，合并有機相，有機相減壓濃縮去除乙酸乙酯得到浸膏(20-30g)，浸膏上DlOl型大孔吸附樹月旨，用50-60wt%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮獲得粗晶，粗晶用石油醚重結(jié)晶，即得對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸。本發(fā)明針對三裂葉蟛蜞菊本身特性，開發(fā)適合的工藝，采用二氧化碳臨界萃取技術(shù)來提取三裂葉蟛蜞菊的有效成分對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸，所用溶劑二氧化碳具有無毒、無味、不燃、不腐蝕、價格便宜、易于精制等優(yōu)點。與傳統(tǒng)溶劑提取法相比，步驟相對少，流程短，操作參數(shù)也易于控制，是產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定且無有害溶劑的殘留；不僅萃取效率高、能耗低，而且萃取物雜質(zhì)減少、有效成分高度富集。提取過程中通過使用60-95 wt%乙醇作為夾帶劑，增加了對目標(biāo)化合物提取的選擇性和效率。采用DlOl型大孔吸附樹脂脫色處理與已有硅膠柱層析提純的技術(shù)相比，具有工藝步驟相對少，流程短，填料成本低，溶劑用量少等優(yōu)點。控制洗脫時，乙醇水溶液濃度為50_60wt%，該濃度洗脫液下的目標(biāo)產(chǎn)物(即對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸)收率高，且受雜質(zhì)成分干擾最少。作為優(yōu)選，所述夾帶劑的流速是10-12ml/min，夾帶劑加入量是1000-1200ml?？刂茒A帶劑的流量和加入量，提高了對目標(biāo)化合物提取的選擇性和效率。作為優(yōu)選，浸膏與樹脂的質(zhì)量比為1:5-10。這樣分離純化效果好。本發(fā)明的有益效果是:1、步驟相對少，流程短，操作參數(shù)也易于控制，是產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定且無有害溶劑的殘留；不僅萃取效率高、能耗低，而且萃取物雜質(zhì)減少、有效成分高度富集。2、提取過程中通過使用60-95 wt%乙醇作為夾帶劑，增加了對目標(biāo)化合物提取的選擇性和效率。

3、采用DlOl型大孔吸附樹脂脫色處理與已有硅膠柱層析提純的技術(shù)相比，具有工藝步驟相對少，流程短，填料成本低，溶劑用量少等優(yōu)點。
具體實施例方式下面通過具體實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的具體說明。本發(fā)明中，若非特指，所采用的原料和設(shè)備等均可從市場購得或是本領(lǐng)域常用的。下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法。實施例1:將三裂葉蟛蜞菊干燥，粉碎，過30目篩，稱取三裂葉蟛蜞菊粉末200g裝入超臨界萃取儀(超臨界萃取儀:美國ISCO公司，Model 260D, Syringe pump)的萃取爸中，夾帶劑選用60wt%乙醇，夾帶劑加入量是1200ml，夾帶劑的流速是12ml/min ;控制萃取壓力為25MPa，萃取溫度為60°C，CO2流量為40L/h，萃取時間3h ;然后減壓濃縮去除乙醇得到總浸膏約40g，總浸膏溶于IOOml水中，用IOOml乙酸乙酯萃取三次，合并有機相，有機相減壓濃縮去除乙酸乙酯得到浸膏約20g，浸膏上IOOg DlOl型大孔吸附樹脂，用IOL 60wt%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至50ml，該濃縮液中有大量白色晶體(粗晶)析出，粗晶用石油醚20ml重結(jié)晶，即得對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸，收率1.9%，純度99.4%。實施例2:將三裂葉蟛蜞菊干燥，粉碎，過30目篩，稱取三裂葉蟛蜞菊粉末250g裝入超臨界萃取儀(超臨界萃取儀:美國ISCO公司，Model 260D, Syringe pump)的萃取爸中，夾帶劑選用80 wt%乙醇，夾帶劑加入量是1000ml，夾帶劑的流速是10ml/min ;控制萃取壓力為22MPa，萃取溫度為50°C，CO2流量為35L/h，萃取時間2.5h ;然后減壓濃縮去除乙醇得到總浸膏約45g，總浸膏溶于150ml水中，用150ml乙酸乙酯萃取三次，合并有機相，有機相減壓濃縮去除乙酸乙酯得到浸膏約25g，浸膏上200g DlOl型大孔吸附樹脂，用IOL 55wt%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至50ml，該濃縮液中有大量白色晶體(粗晶)析出，粗晶用石油醚20ml重結(jié)晶，即得對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸，收率1.8%，純度99.2%。實施例3:將三裂葉蟛蜞菊干燥，粉碎，過30目篩，稱取三裂葉蟛蜞菊粉末300g裝入超臨界萃取儀(超臨界萃取儀:美國ISCO公司，Model 260D, Syringe pump)的萃取爸中，夾帶劑選用95 wt%乙醇，夾帶劑加入量是1200ml，夾帶劑的流速是10ml/min ;控制萃取壓力為20MPa，萃取溫度為40°C，CO2流量為30L/h，萃取時間2h ;然后減壓濃縮去除乙醇得到總浸膏約50g，總浸膏溶于200ml水中，用200ml乙酸乙酯萃取三次，合并有機相，有機相減壓濃縮去除乙酸乙酯得到浸膏約30g，浸膏上300g DlOl型大孔吸附樹脂，用IOL 50wt%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至50ml，該濃縮液中有大量白色晶體(粗晶)析出，粗晶用石油醚20ml重結(jié)晶，即得對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸，收率2%，純度99.8%。

對上述產(chǎn)物對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸(ent-KA)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定:
權(quán)利要求
1.一種從三裂葉蟛蜞菊中分離制備對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸的方法，其特征在于:將三裂葉蟛蜞菊干燥，粉碎，過篩，稱取三裂葉蟛蜞菊粉末200-300g裝入超臨界萃取儀的萃取釜中，夾帶劑選用60-95 wt%乙醇，控制萃取壓力為20-25 MPa，萃取溫度為40_60°C，CO2流量為30-40L/h，萃取時間2-3h ;然后減壓濃縮去除乙醇得到總浸膏，總浸膏溶于100-200ml水中，用100-200ml乙酸乙酯萃取三次，合并有機相，有機相減壓濃縮去除乙酸乙酯得到浸膏，浸膏上DlOl型大孔吸附樹脂，用50-60wt%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮獲得粗晶，粗晶用石油醚重結(jié)晶，即得對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的，其特征在于:所述夾帶劑的流速是10-12ml/min,夾帶劑加入量是 1000-1200ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所 述的方法，其特征在于:浸膏與樹脂的質(zhì)量比為1:5-10。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥用植物有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種從三裂葉蟛蜞菊中分離制備對映貝殼杉烷-16-烯-19-酸的方法。本發(fā)明將三裂葉蟛蜞菊干燥，粉碎，過篩，稱取三裂葉蟛蜞菊粉末裝入超臨界萃取儀的萃取釜中，夾帶劑選用乙醇，萃取壓力為20-25MPa，萃取溫度為40-60℃，CO2流量為30-40L/h，萃取時間2-3h；然后減壓濃縮得到總浸膏，總浸膏溶于水中，用乙酸乙酯萃取三次，有機相減壓濃縮去除乙酸乙酯得到浸膏，浸膏上D101型大孔吸附樹脂，用乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮獲得粗晶，粗晶用石油醚重結(jié)晶，即得產(chǎn)品。本發(fā)明萃取速度快、效率高、能耗少，獲得的產(chǎn)品收率高、純度高。
文檔編號C07C51/47GK103086879SQ20131001557
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月16日
發(fā)明者高坤, 陳佳, 陳艷君 申請人:浙江大學(xué)寧波理工學(xué)院