專利名稱：一種金雀花堿的提取分離方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種生物堿的提取分離方法，具體涉及一種金雀花堿的提取分離方法。
背景技術：
1989年4月19日公開號為CN1003936B “苦豆綜合利用法”公開了一種苦豆綜合 利用的方法。其主要方法是先將苦豆用酸溶液浸泡去毒來獲得高蛋白飼料，并用萃取法連 續(xù)提取出槐果堿、苦豆堿、槐定堿、苦參堿、氧化苦參堿、槐胺堿及金雀花堿等。該發(fā)明只是 通過簡單的酸洗、萃取得到槐果堿、苦豆堿、槐定堿、苦參堿、氧化苦參堿、槐胺堿及金雀花 堿，依據該方法提取的金雀花堿含量低，并且工藝方法模糊，技術含量低。2008年2月27日公開號為CN101129455A “苦豆子提取物及其生產方法和應用” 公開了一種以苦豆子為原料，經水或乙醇粗提、乙醇沉淀雜質、大孔吸附樹脂吸附粗提物中 的提取物，溶劑洗脫并將洗脫液濃縮回收乙醇得到苦豆子提取物。此專利僅對苦豆子粗提 物中的生物堿類成分和黃酮類成分進行比較粗的富集，沒有涉及到對金雀花堿進行更進一 步的分離。2008年10月22日授權公告號為CN100427485C “從苦豆子中制備槐定堿、氧化槐 定堿及其鹽類的方法”公開了一種從苦豆子中制備槐定堿、氧化槐定堿及其鹽類的方法，從 苦豆子中制備槐定堿的方法包括以下步驟取苦豆子果期地上部分，粉碎，滲漉，棄滲漉液； 取滲漉后的藥渣，加磁化水，滲漉，收集滲漉液；加明膠水溶液，靜置，離心，取上清液；將上 清液通過陽離子交換樹脂，將淋洗過的陽離子交換樹脂傾入一容器中，用1，2_ 二氯乙烷提 ?。皇占崛∫?；加入正丁醇萃取，分出水相，用氯仿萃??；收集萃取液，干燥劑脫水；用石 油醚回流提取，回收石油醚，析出槐定堿結晶。此方法僅對槐定堿進行分離，沒有涉及到金 雀花堿的分離。2007年1月24日公開號為CN1899364A “苦豆子生物總堿的高效提取方法”提供 苦豆子生物總堿高效提取方法，采用超微破壁粉碎、常溫浸提、絮凝澄清、濃縮、堿化萃取、 酸化萃取、酸化過濾等方法步驟，提取苦豆子生物總堿。此方法僅對苦豆子總生物堿進行提 取和萃取，沒有涉及到對苦豆子生物堿進行分離純化。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供一種金雀花堿提取分離方法，主要解決現有方法提取金雀花堿含量 低、流程復雜、周期長的問題。本發(fā)明的技術解決方案如下該金雀花堿的提取分離方法包括以下步驟(1)提取(1. 1)取金雀花堿含量大于0. 的原料，進行粉碎；(1. 2)將經步驟(1. 1)處理所得的原料過篩，篩的目數為10-20目；
(1. 3)將經步驟(1. 2)處理所得的原料用水或有機溶劑提取，得到提取液；(2)濃縮將提取液合并，減壓濃縮至無醇味，得到濃縮液；(3)調堿向濃縮液中加入堿液進行調堿，使?jié)饪s液的pH = 9 12 ；(4)萃取(4. 1)將經步驟(3)處理所得的濃縮液用有機溶劑萃取，得到萃取液；萃取次數為 1 4次，萃取溶劑的體積為步驟(3)處理所得的濃縮液體積的1 10倍；(4.2)將萃取液濃縮至比重為1.00 1.30，該比重是在60°C-70°C，常壓下測得， 得到萃取濃縮液；向萃取濃縮液加入甲醇溶解，得到溶解樣；甲醇的體積量為萃取濃縮液 的 0. 1-0. 2 倍；(5)連續(xù)中壓柱層析(5.1)裝柱及上樣(5. 1. 1)采用濕法填充中壓柱，填料填滿中壓柱柱體后密封，不留死體積；(5. 1. 2)將經步驟(4. 2)處理所得的溶解樣泵入中壓柱；(5. 1. 3)將有機溶劑泵入中壓柱除去極性小的雜質；所述有機溶劑是石油醚、乙 酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇或乙醇任一或者兩種以任意體積比混合；(5. 2)洗脫(5. 2. 1)對經步驟(5. 1. 3)處理所得的中壓柱進行洗脫，洗脫體系流速60_100ml/ min，中壓柱柱壓為l_5Mpa ；(5. 2. 2) TLC跟蹤洗脫部分，分段收集含有金雀花堿的洗脫液和其它有效成分的洗 脫液；(5. 3)中壓柱再生、平衡對經步驟(5. 2. 1)處理完所得的中壓柱進行再生、平衡；所述再生是用甲醇進行 再生，平衡是用步驟(5. 1. 3)所用的有機溶劑進行平衡；(5. 4)濃縮將經步驟(5. 2. 2)處理所得含有金雀花堿的洗脫液濃縮至其原體積的1/10 1/100，放置結晶10 30h，將結晶液通過離心機過濾，得到1次粗結晶；(5. 5)重結晶向經步驟(5. 4)處理所得粗結晶中加入有機溶劑進行熱溶，所用有機溶劑重量為 粗結晶重量的0. 1-10倍；熱溶完成后，放置至室溫，結晶10 20h ；依次離心，過濾，干燥， 即可得到含量為98%以上的金雀花堿。(5. 6)其它生物堿結晶對經步驟(5. 2. 2)收集到其它生物堿的洗脫液，經過現有技術的濃縮、結晶和反 復重結晶工藝處理后，即可分別得到含量為97%以上的槐定堿、槐胺堿、鷹爪豆堿等生物 堿。以上所述步驟(5.2. 1)中洗脫體系是石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇或乙醇 任意兩種混合，混合體積比為1 1 100 1 ；通過該洗脫體系的洗脫，除能收集到目的 產物金雀花堿外，還可得到其副產物槐定堿、槐胺堿、鷹爪豆堿等生物堿，其中洗脫體系以
5乙酸乙酯和甲醇混合為佳。以上所述步驟(4. 1)中有機溶劑是石油醚、二氯甲烷、二氯苯、乙酸乙酯或醋酸甲 酯任一或者兩種以任意體積比混合，其中萃取溶劑以二氯甲烷為佳。以上所述步驟(5. 1. 1)填充的填料是200 300目的硅膠、Sephadex LH-20、 CG161、HP-20或XAD-16等，其中填料以HP-20為佳。以上所述步驟(5. 5)重結晶中有機溶劑是氯仿、乙酸乙酯、丙酮或乙醇等，最佳重 結晶溶劑為乙酸乙酯。以上所述步驟(5. 4)濃縮，將洗脫液濃縮至原體積的1/30，放置結晶24小時為佳。以上所述步驟(1.3)是用體積濃度為60%的甲醇提取，提取溫度為80°C，提取3 次，每次提取1.5小時。以上所述步驟(3)調堿，加入的堿液是氫氧化鈉溶液、氨水或氫氧化鉀溶液。以上所述步驟(1. 1)，原料可以是苦豆子或牧馬豆。本發(fā)明的優(yōu)點在于1.本方法目標明確，通過簡單可行的方法，最終可得到含量為98%以上的金雀花 堿，其收率高，生產成本低。2.本方法不僅可得到含量為98%以上的金雀花堿，其它生物堿如槐定堿、槐胺 堿、鷹爪豆堿等在分離過程中也得到富集，進一步降低了生產成本，將原料充分利用，合理 開發(fā)。


圖1是本發(fā)明實施例1得到的金雀花堿含量測定結果的HPLC圖譜；圖2是本發(fā)明實施例2得到的金雀花堿含量測定結果的HPLC圖譜；圖3是本發(fā)明實施例3得到的金雀花堿含量測定結果的HPLC圖譜。
具體實施例方式實施例1(1)提取取金雀花堿含量為1. 2%的牧馬豆原料IOOkg進行粉碎；將上述處理所 得的原料過10目篩；然后將所得的原料用5倍原料重量的體積濃度為80%的甲醇提取，提 取溫度為60°C，提取3次，每次提取2小時，得到提取液；(2)濃縮將提取液合并，減壓濃縮至無醇味，得到濃縮液；(3)調堿向濃縮液中加入質量濃度為5%氫氧化鈉溶液，使?jié)饪s液的pH = 10 ；(4)萃取將經步驟(3)處理所得的濃縮液用乙酸乙酯萃取，得到萃取液；萃取次 數為3次，萃取溶劑的體積為步驟(3)處理所得濃縮液體積的3倍；將萃取液濃縮至比重為 1. 18，該比重是在63°C，常壓下測定，加入萃取濃縮液0. 1倍體積量的甲醇溶解，得到溶解 樣；(5)連續(xù)中壓柱層析(5. 1)裝柱及上樣(5. 1. 1)采用濕法填充中壓柱，中壓柱層析所用填料為200 300目硅膠，填料填 滿中壓柱柱體后密封，不留死體積；的溶解樣泵入中壓柱；(5. 1. 3)將1500ml的石油醚泵入中壓柱中除去極性小的雜質；(5. 2)洗脫(5. 2. 1)對經步驟(5. 1. 3)處理所得的中壓柱進行洗脫；洗脫體系為石油醚和氯 仿混合溶劑，流速80ml/min，中壓柱柱壓為3Mpa ；(5. 2. 2) TLC跟蹤洗脫部分，分段收集洗脫液中有效成分；當洗脫體系中石油醚和 氯仿體積比為9 1，收集到黃華堿；石油醚和氯仿體積比為5 1，收集到鷹爪豆堿；石油 醚和氯仿體積比為3 1，收集到金雀花堿；(5. 3)中壓柱再生、平衡對經步驟(5. 2. 1)處理完的中壓柱用甲醇進行再生，用 石油醚平衡；(5. 4)濃縮將經步驟(5. 2. 2)處理所得含有金雀花堿的洗脫液濃縮至其原體積 的1/10，放置結晶18h ；將結晶液通過離心機過濾，得到1次粗結晶；(5. 5)重結晶向經步驟(5. 4)處理所得粗結晶加入丙酮溶液進行熱溶，丙酮溶液 的重量為粗結晶重量的1倍；待溶解完后，放置至室溫，結晶12h;依次離心、過濾、干燥，即 可得到1.02kg含量為98. 70%的金雀花堿，收率為1.02% ；(5. 6)黃華堿和鷹爪豆堿結晶對經步驟(5. 2. 2)收集到黃華堿和鷹爪豆堿的洗脫液，分別濃縮至原體積的 1/20，放置結晶24h，將結晶液通過離心機過濾，得到1次粗結晶；向粗結晶中加入其重量1 倍量的丙酮溶液熱溶，待溶解完全后，放置至室溫，結晶12h，如此反復重結晶處理，即可分 別得到含量為97%以上的黃華堿和鷹爪豆堿。所得結果如圖1和表1所示 表 1實施例2(1)提取取金雀花堿含量為0. 6%的苦豆子原料IOOkg進行粉碎；將上述處理所 得的原料過20目篩；然后將所得的原料用6倍原料重量的體積濃度為60%的甲醇提取，提 取溫度為80°C，提取3次，每次提取1. 5小時，得到提取液；(2)濃縮將提取液合并，減壓濃縮至無醇味，得到濃縮液；(3)調堿向濃縮液中加入濃氨水，使?jié)饪s液pH = 9 ；(4)萃取將經步驟(3)處理所得的濃縮液用二氯甲烷萃取，得到萃取液；萃取次 數為2次，萃取溶劑的體積為步驟(3)處理所得濃縮液體積的4倍；將萃取液濃縮至比重為 1. 15，該比重是在60°C，常壓下測定，加入萃取濃縮液0. 15倍體積量的甲醇溶解，得到溶解 樣；(5)連續(xù)中壓柱層析(5. 1)裝柱及上樣(5. 1. 1)采用濕法填充中壓柱，中壓柱層析所用填料為HP-20，填料填滿中壓柱柱
7體后密封，不留死體積；(5. 1. 2)將經步驟(4)處理所得的溶解樣泵入中壓柱；(5. 1. 3)將800ml的乙酸乙酯泵入中壓柱除去極性小的雜質；(5. 2)洗脫(5. 2. 1)對經步驟(5. 1. 3)處理所得的中壓柱進行洗脫；洗脫體系為乙酸乙酯和 甲醇混合溶劑，分別洗脫，洗脫液流速SOml/min，中壓柱柱壓為4Mpa ；(5. 2. 2) TLC跟蹤洗脫部分，分段收集洗脫液中有效成分；當洗脫體系中乙酸乙酯 和甲醇體積比為80 1，收集到槐定堿；乙酸乙酯和甲醇體積比為60 1，收集到槐果堿； 乙酸乙酯和甲醇體積比為50 1，收集到槐胺堿；乙酸乙酯和甲醇體積比為20 1，收集到 金雀花堿；(5. 3)中壓柱再生、平衡對經步驟(5. 2. 1)處理完的中壓柱用甲醇進行再生、用 乙酸乙酯平衡；(5. 4)濃縮將經步驟(5. 2. 2)處理所得的含有金雀花堿的洗脫液濃縮至其原體 積的1/30，放置結晶24h ；將結晶液通過離心機過濾，得到1次粗結晶；(5. 5)重結晶向經步驟(5. 4)處理所得粗結晶中加入乙酸乙酯溶液進行熱溶，乙 酸乙酯溶液的重量為粗結晶重量的2倍；待溶解完后，放置至室溫，結晶12h ；依次離心，過 濾，干燥，即可得到0. 54kg含量為99. 06%的金雀花堿，收率為0. 54%。(5. 6)槐定堿、槐果堿和槐胺堿結晶對經步驟(5. 2. 2)收集到槐定堿、槐果堿和槐胺堿的洗脫液，分別濃縮至原體積 的1/30，放置結晶24h，將結晶液通過離心機過濾，得到1次粗結晶；向粗結晶中加入其重量 1倍量的乙酸乙酯溶液熱溶，待溶解完全后，放置至室溫，結晶16h，如此反復重結晶處理， 即可分別得到含量為97%以上的槐定堿、槐果堿和槐胺堿。所得結果如圖2和表2所示 表2實施例3(1)提取取金雀花堿含量為0. 56%的苦豆子原料IOOkg進行粉碎；將上述處理 所得的原料過20目篩；然后將所得的原料用4倍原料重量的體積濃度為90%的乙醇提取， 提取溫度為75°C，提取3次，每次提取為1. 5小時，得到提取液；(2)濃縮將提取液合并，減壓濃縮至無醇味，得濃縮液；(3)調堿向濃縮液中加入質量濃度為10%氫氧化鉀，使?jié)饪s液pH = 11 ；(4)萃取將經步驟(3)處理所得的溶液用石油醚和乙酸乙酯的體積比為1 3的 混合體系進行萃取，得到萃取液；萃取次數為2次，萃取溶劑的體積為步驟(3)處理所得濃 縮液體積的6倍；將萃取液濃縮至比重為1. 23，該比重是在65°C，常壓下測定，加萃取濃縮 液0. 15倍體積量的甲醇溶解，得到溶解樣；(5)連續(xù)中壓柱層析
(5. 1)裝柱及上樣(5. 1. 1)采用濕法填充中壓柱，中壓柱層析所用填料為XAD-16，填料填滿中壓柱 柱體后密封，不留死體積；(5. 1. 2)將經步驟(4)處理所得的溶解樣泵入中壓柱；(5. 1. 3)將IOOOml的氯仿泵入中壓柱中除去極性小的雜質；(5. 2)洗脫(5. 2. 1)對經步驟(5. 1. 3)處理所得的中壓柱進行洗脫；洗脫體系為氯仿和乙醇 混合溶劑，洗脫液流速70ml/min，中壓柱柱壓為2Mpa ；(5. 2. 2)TLC跟蹤洗脫部分，分段收集洗脫液中的有效成分；當洗脫體系中氯仿和 乙醇體積比為90 1，收集到槐定堿；氯仿和乙醇體積比為70 1，收集到槐果堿；氯仿和 乙醇體積比為50 1，收集到槐胺堿；氯仿和乙醇體積比為10 1，收集到金雀花堿；
(5. 3)中壓柱再生、平衡對經步驟(5. 2. 1)處理完的中壓柱用甲醇進行再生、用 氯仿平衡；(5. 4)濃縮將經步驟(5. 2. 2)處理所得的含有金雀花堿的洗脫液濃縮至其原體 積的1/30，放置結晶16h ；將結晶液通過離心機過濾，得到1次粗結晶；(5. 5)重結晶向經步驟(5. 4)處理所得粗結晶中加入乙醇溶液進行熱溶，乙醇溶 液的重量為粗結晶重量的0.8倍；待溶解完后，放置至室溫，結晶IOh;依次離心，過濾，干 燥，即可得到0. 50kg含量為98. 4%的金雀花堿，收率為0. 50%。(5. 6)槐定堿、槐果堿和槐胺堿結晶對經步驟(5. 2. 2)收集到槐定堿、槐果堿和槐胺堿的洗脫液，分別濃縮至原體積 的1/30，放置結晶24h，將結晶液通過離心機過濾，得到1次粗結晶；向粗結晶中加入其重 量0. 8倍量的乙醇溶液熱溶，待溶解完全后，放置至室溫，結晶20h，如此反復重結晶處理， 即可分別得到含量為97%以上的槐定堿、槐果堿和槐胺堿。所得結果如圖3和表3所示 表 權利要求
一種金雀花堿的提取分離方法，其特征在于，包括以下步驟(1)提取(1.1)取金雀花堿含量大于0.1％的原料，進行粉碎；(1.2)將經步驟(1.1)處理所得的原料過篩，篩的目數為10 20目；(1.3)將經步驟(1.2)處理所得的原料用水或有機溶劑提取，得到提取液；(2)濃縮將提取液合并，減壓濃縮至無醇味，得到濃縮液；(3)調堿向濃縮液中加入堿液進行調堿，使?jié)饪s液的pH＝9～12；(4)萃取(4.1)將經步驟(3)處理所得的濃縮液用有機溶劑萃取，得到萃取液；萃取次數為1～4次，萃取溶劑的體積為步驟(3)處理所得的濃縮液體積的1～10倍；(4.2)將萃取液濃縮至比重為1.00～1.30，該比重是在60℃ 70℃，常壓下測得，得到萃取濃縮液；向萃取濃縮液加入甲醇溶解，得到溶解樣；甲醇的體積量為萃取濃縮液的0.1 0.2倍；(5)連續(xù)中壓柱層析(5.1)裝柱及上樣(5.1.1)采用濕法填充中壓柱，填料填滿中壓柱柱體后密封，不留死體積；(5.1.2)將經步驟(4.2)處理所得的溶解樣泵入中壓柱；(5.1.3)將有機溶劑泵入中壓柱除去極性小的雜質；所述有機溶劑是石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇或乙醇任一或者兩種以任意體積比混合；(5.2)洗脫(5.2.1)對經步驟(5.1.3)處理所得的中壓柱進行洗脫，洗脫體系流速60 100ml/min，中壓柱柱壓為1 5Mpa；(5.2.2)TLC跟蹤洗脫部分，分段收集含有金雀花堿的洗脫液和其它有效成分的洗脫液；(5.3)中壓柱再生、平衡對經步驟(5.2.1)處理所得的中壓柱進行再生、平衡；所述再生是用甲醇進行再生，平衡是用步驟(5.1.3)中所用的有機溶劑進行平衡；(5.4)濃縮將經步驟(5.2.2)處理所得含有金雀花堿的洗脫液濃縮至其原體積的1/10～1/100，放置結晶10～30h，將結晶液通過離心機過濾，得到1次粗結晶；(5.5)重結晶向經步驟(5.4)處理所得粗結晶中加入有機溶劑進行熱溶，所用有機溶劑重量為粗結晶重量的0.1 10倍；熱溶完成后，放置至室溫，結晶10～20h；依次離心，過濾，干燥，即可得到含量為98％以上的金雀花堿。
2.根據權利要求1所述的金雀花堿的提取分離方法，其特征在于所述步驟(5.2. 1) 中洗脫體系為石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇或乙醇任意兩種混合，混合體積比為 1 1 100 1。
3.根據權利要求1或2所述的金雀花堿的提取分離方法，其特征在于所述步驟(4.1) 中有機溶劑是石油醚、二氯甲烷、二氯苯、乙酸乙酯或醋酸甲酯任一或者兩種以任意體積比混合ο
4.根據權利要求3所述的金雀花堿的提取分離方法，其特征在于所述步驟(5.1. 1) 填充的填料是200 300目的硅膠、S印hadex LH-20、CG161、HP-20或XAD-16。
5.根據權利要求4所述的金雀花堿的提取分離方法，其特征在于所述步驟(5.5)重 結晶中有機溶劑是氯仿、乙酸乙酯、丙酮或乙醇。
6.根據權利要求5所述的金雀花堿的提取分離方法，其特征在于所述步驟(5.4)濃 縮，將洗脫液濃縮至原體積的1/30，放置結晶24小時。
7.根據權利要求6所述的金雀花堿的提取分離方法，其特征在于所述步驟(1.3)是 用體積濃度為60%的甲醇提取，提取溫度為80°C，提取3次，每次提取1. 5小時。
8.根據權利要求7所述的金雀花堿的提取分離方法，其特征在于所述步驟(3)調堿， 加入的堿液是氫氧化鈉溶液、氨水或氫氧化鉀溶液。
9.根據權利要求8所述的金雀花堿的提取分離方法，其特征在于所述步驟(1.1)，原 料是苦豆子或牧馬豆。
全文摘要
本發(fā)明提供一種金雀花堿的提取分離方法，主要解決現有方法提取分離金雀花堿純度低、流程復雜、周期長的問題。該金雀花堿的提取分離方法包括以下步驟(1)提?。?2)濃縮；(3)調堿；(4)萃??；(5)連續(xù)中壓柱層析。該方法目標明確，通過簡單可行的方法，不僅可得到含量為98％以上的金雀花堿，其它生物堿如槐定堿、槐胺堿、鷹爪豆堿等在分離過程中也得到富集，進一步降低了生產成本，將原料充分利用，合理開發(fā)。
文檔編號C07D471/22GK101921272SQ200910206528
公開日2010年12月22日 申請日期2009年10月12日 優(yōu)先權日2009年7月2日
發(fā)明者王春德, 肖紅, 鄧尚勇, 金富林 申請人:陜西嘉禾植物化工有限責任公司