專(zhuān)利名稱(chēng)：：從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的方法。
背景技術(shù)：
：積雪草Ce"te//aos/arica(L.)Urban為傘形科積雪草屬植物，在許多國(guó)家和地區(qū)傳統(tǒng)醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用有悠久的歷史，我國(guó)中醫(yī)中藥對(duì)積雪草的內(nèi)服和外用已有兩千年的歷史。積雪草味苦、辛，性寒，歸肝、脾、腎、胃經(jīng)。古藥典記載主要用于治療濕熱黃疸、中暑腹瀉、砂淋血淋、癰腫瘡毒、跌打損傷等病癥。現(xiàn)代藥理學(xué)研究和應(yīng)用表明，積雪草可用于治療抑郁癥、皮膚創(chuàng)傷、胃潰瘍、傳染性肝炎、皮膚病和流行性腦脊髓膜炎等。積雪草的藥理作用同它的化學(xué)成分是密不可分的。積雪草的化學(xué)成分十分復(fù)雜，其主要成分有三萜類(lèi)、多炔烯烴類(lèi)、黃酮類(lèi)和揮發(fā)油類(lèi)等。此外，積雪草中還含有氯原酸、內(nèi)消旋肌醇、黃酮醇、脂肪酸、天胡荽堿、甾醇、蠟、葉綠素、烴類(lèi)、木脂素類(lèi)、糖、鞣質(zhì)和多元酚類(lèi)等成分。積雪草的化學(xué)成分中，三萜類(lèi)皂苷及其皂苷元是研究的最早、生物學(xué)活性研究較深入的一大類(lèi)組分，其中積雪草酸、羥基積雪草酸、多米諾積雪草酸等是其重要的活性成分。積雪草總苷是從積雪草中提取得到的皂苷類(lèi)物質(zhì)的總稱(chēng)，主要由三萜苷類(lèi)物質(zhì)組成，其主要成分包括積雪草苷(Asiaticoside，CASNo.:16830-15-2，分子式為<:481178019，分子量為959.12)、羥基積雪草苷(Madecassoside，CASNo.:34540-22-2，分子式為C48H7802。，分子量為975.12)和多米諾積雪草苷(Terminoloside，CASNo.:125265-68-1，分子式為C48H78O20，分子量為975.12)。積雪草總苷元是指上述皂苷類(lèi)成分的糖苷鍵斷裂后生成的糖苷配基(苷元)，分別是積雪草酸(Asiaticacid，CASNo.:464-92-6,分子式為C3GH4805,分子量為488.70)、羥基積雪草酸(Madecassicacid,CASNo.:18499-41-7，分子式為C30H48O6，分子量為504.70)、多米諾積雪草酸(Terminolicacid，CASNo.:564-13-6，分子式為C3QH4806，分子量為504.70)。羥基積雪草苷也叫積雪草苷A，多米諾苷也叫做積雪草苷B，兩者是一對(duì)同分異構(gòu)體，同樣羥基積雪草酸和多米諾酸也是一對(duì)同分異構(gòu)體。它們差異只在于其中一個(gè)甲基歸屬不同，且兩個(gè)不同的歸屬處于鄰位關(guān)系，性質(zhì)差異較小。三種苷元的結(jié)構(gòu)式分別如下積雪草酸羥基積雪草酸多米諾積雪草酸專(zhuān)利200810162211.X公開(kāi)了一種溶劑結(jié)晶法制備高純度積雪草苷的方法，專(zhuān)利200710164473.X公開(kāi)了一種從積雪草總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷A與積雪草苷B的方法，實(shí)現(xiàn)了積雪草苷、羥基積雪草苷、多米諾積雪草苷的分離制備；專(zhuān)利200810163172.5與專(zhuān)利200810163173.X分別公開(kāi)了堿水解與酸水解積雪草苷制備積雪草酸的方法，專(zhuān)利200810164182.0與專(zhuān)利200810164213.2分別公開(kāi)了堿水解與酸水解羥基積雪草苷制備羥基積雪草酸的方法。以上6個(gè)專(zhuān)利實(shí)現(xiàn)了從積雪草總苷出發(fā)先分離后水解分別制備積雪草酸、羥基積雪草酸的完整工藝過(guò)程。專(zhuān)利200910095289,9與專(zhuān)利200910095290.1中分別公開(kāi)了堿水解與酸水解積雪草總苷制備積雪草總苷元的方法，本專(zhuān)利從積雪草總苷元出發(fā)結(jié)合結(jié)晶和柱色譜方法同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸、多米諾積雪草酸。本專(zhuān)利與專(zhuān)利200910095289.9與專(zhuān)利200910095290.1結(jié)合可以提供一個(gè)從積雪草總苷出發(fā)先水解后分離制備積雪草酸、羥基積雪草酸、多米諾積雪草酸的全新工藝過(guò)程。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的方法。方法的步驟如下1)在無(wú)機(jī)堿的水溶液中加入積雪草總苷元原料，加熱至306(TC充分溶解后過(guò)濾得濾液I;2)濾液I中加入無(wú)機(jī)酸調(diào)節(jié)pH值至69，冷卻至025'C結(jié)晶后過(guò)濾，分別得結(jié)晶物I與濾液II，結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥后得積雪草酸產(chǎn)品；3)濾液II中加入無(wú)機(jī)酸，調(diào)節(jié)pH值至24，結(jié)晶后過(guò)濾得結(jié)晶物II;4)結(jié)晶物II自然晾干后用有機(jī)溶劑溶解；5)C18硅膠采用濕法裝柱，柱子的高徑比為420，用乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；6)按0.010.1g結(jié)晶物II/lgC18硅膠的比例上樣，乙腈一水混合溶劑以0.53床層體積/h的流速洗脫；7)洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分1為多米諾積雪草酸溶液，餾分2為羥基積雪草酸溶液；8)餾分l、餾分2分別經(jīng)減壓濃縮、真空干燥后得多米諾積雪草酸與羥基積雪草酸產(chǎn)品；步驟l)中的無(wú)機(jī)堿為NaOH或KOH，無(wú)機(jī)堿的濃度為0.01-0.1mol/L，每升無(wú)機(jī)堿的水溶液中積雪草總苷元的加入量為560g;步驟2)與步驟3)中的無(wú)機(jī)酸為鹽酸或硫酸；步驟4)中的有機(jī)溶劑為甲醇或乙醇，有機(jī)溶劑加入量為0.13g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑；步驟5)與步驟6)中乙腈一水混合溶劑中乙腈的體積百分比為50~70%。本發(fā)明結(jié)合結(jié)晶和柱色譜技術(shù)，提供了一種從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸、多米諾積雪草酸的方法。該方法產(chǎn)品收率和純度高(積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸等三種產(chǎn)品質(zhì)量含量295%)，可用作原料藥，同時(shí)工藝過(guò)程較簡(jiǎn)單、所需投資少、易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化。附圖是從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的工藝流程簡(jiǎn)圖。具體實(shí)施例方式本發(fā)明所使用的積雪草總苷元原料采用專(zhuān)利"一種積雪草總苷堿水解制備積雪草總苷元的方法"(呂秀陽(yáng)，鄭興芳，李音。一種積雪草總苷堿水解制備積雪草總苷元的方法，申請(qǐng)?zhí)?00910095289.9申請(qǐng)日2009年1月8日)中的實(shí)施例20(在1L帶攪拌和水冷凝管的三口燒瓶中加入0.5mol/LKOH水溶液500mL，放入75'C的恒溫水浴中，開(kāi)攪拌和冷凝水，分3批加入積雪草總苷原料20g(總加料時(shí)間為45min)，水解3h;水解液加入硫酸，調(diào)節(jié)pH值至2~4，沉淀后過(guò)濾，得沉淀物，沉淀物晾干后稱(chēng)重得8.3g;收集晾干后的沉淀物加入124.5mL甲醇溶解、活性炭脫色、過(guò)濾，濾液加入1992mL水結(jié)晶，經(jīng)過(guò)濾后得結(jié)晶物，結(jié)晶物再經(jīng)真空干燥后得5.9g積雪草總苷元產(chǎn)品，產(chǎn)品經(jīng)HPLC分析積雪草總苷元的質(zhì)量含量90.6%。)的方法制備，重復(fù)以上過(guò)程16次最終得93g積雪草總苷元，經(jīng)HPLC分析積雪草總苷元的質(zhì)量含量為卯.5。/。，其中積雪草酸的質(zhì)量含量為29.2%，羥基積雪草酸的質(zhì)量含量為30.6%，多米諾積雪草酸的質(zhì)量含量為21.5%。積雪草酸、羥基積雪草酸、多米諾基積雪草酸含量采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定，采用外標(biāo)法定量。采用AgilentllOO液相色譜分析系統(tǒng)，分析條件如下EclipseXDB—ds反相柱(<D4.6mmx250mm,5pm,Agilent);采用梯度洗脫，流速0.6mL/min;柱溫為35。C;檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。表1HPLC法測(cè)定積雪草總苷和積雪草總苷元的流動(dòng)相梯度<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>以下用實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的工藝方法作進(jìn)一步的說(shuō)明。本發(fā)明的保護(hù)范圍不受實(shí)施例的限制，本發(fā)明的保護(hù)范圍由權(quán)利要求書(shū)決定。實(shí)施例1在500mL燒杯中加入0.1mol/LNaOH水溶液lOOmL，積雪草總苷元原料6.0g(60g積雪草總苷元/lL無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至60。C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.5，冷卻至25'C結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品1.5g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為85.4%，濾液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重4.2g，用14mL甲醇(3g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為16cm的C18層析柱(高徑比8，裝填C18硅膠量28g，床層體積50mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為50%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取9mL濾液上樣(上樣量為0.1g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為50%的乙腈一水混合溶劑以0.4mL/min(0.5床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.81g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為96.1%;餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品1.2g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為95.2%。實(shí)施例2在500mL燒杯中加入0.1mol/LKOH水溶液100mL，積雪草總苷元原料5.5g(55g積雪草總苷元/1L無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至55。C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入硫酸調(diào)節(jié)pH值至8.5，冷卻至20'C結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品1.5g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為83.8%，濾液中加入硫酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾千后重3.7g，用15mL乙醇(2.5g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為16cm的C18層析柱(高徑比8，裝填C18硅膠量28g，床層體積50mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為55%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取llmL濾液上樣(上樣量為O.lg結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為55。/。的乙腈一水混合溶劑以0.8mL/min(1床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分1經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.80g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為97.2%;餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品1.2g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為93.2%。在500mL燒杯中加入0.09mol/LNaOH水溶液lOOmL，積雪草總苷元原料5.0g(50g積雪草總苷元/1L無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至50'C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入鹽酸調(diào)節(jié)pH值至9，冷卻至2(TC結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品1.1g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為81.2%，濾液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重3.6g，用15mL甲醇(2.5g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為12cm的C18層析柱(高徑比6，裝填C18硅膠量21g，床層體積38mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為55%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取8mL濾液上樣(上樣量為0.1g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為55%的乙腈一水混合溶劑以0.9mL/min(1.5床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.63g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為94.2e/。；餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品0.92g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為96.7%。實(shí)施例4在500mL燒杯中加入0.09mol/LKOH水溶液100mL，積雪草總苷元原料4.5g(45g積雪草總苷元/lL無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至50'C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入硫酸調(diào)節(jié)pH值至9，冷卻至20'C結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品0.99g,經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為84.4%，濾液中加入硫酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重3.3g，用13mL乙醇(2.5g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為12cm的C18層析柱(高徑比6，裝填C18硅膠量21g，床層體積38mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為60%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取8mL濾液上樣(上樣量為0.09g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為60%的乙腈一水混合溶劑以0.9mL/min(1.5床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.58g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為93.1%;餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品0.86g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為94.6%。實(shí)施例5在500mL燒杯中加入0.08mol/LNaOH水溶液100mL，積雪草總苷元原料4.0g(40g積雪草總苷元/1L無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至45。C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入鹽酸調(diào)節(jié)pH值至9，冷卻至15'C結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品0.85g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為83.4%，濾液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重3.0g，用12mL甲醇(2.5g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為8cm的C18層析柱(高徑比4，裝填C18硅膠量14g，床層體積25mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為60%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取5mL濾液上樣(上樣量為0.09g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為60。/。的乙腈一水混合溶劑以0.6mL/min(1.5床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分1經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.34g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為97.5。/。；餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品0.46g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為98.3%。實(shí)施例6在500mL燒杯中加入0.07mol/LKOH水溶液100mL，積雪草總苷元原料3.5g(35g積雪草總苷元/1L無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至40'C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入硫酸調(diào)節(jié)pH值至8.5，冷卻至15'C結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品0.88g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為90.5%，濾液中加入硫酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重2.4g，用12mL乙醇(2g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為8cm的C18層析柱(高徑比4，裝填C18硅膠量14g，床層體積25mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為60°/。的乙腈_水混合溶劑沖洗柱子；取6mL濾液上樣(上樣量為0.09g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為60。/。的乙腈一水混合溶劑以0.6mL/min(1.5床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.43g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為91.3n/。；餾分2經(jīng)減壓濃縮、真9空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品0.64g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為90.2%。實(shí)施例7在500mL燒杯中加入0.06mol/LNaOH水溶液200mL，積雪草總苷元原料6.0g(30g積雪草總苷元/1L無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至40。C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.5，冷卻至15'C結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品1.4g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為91.9%，濾液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重4.3g，用21mL甲醇(2g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為12cm的C18層析柱(高徑比6，裝填C18硅膠量21g，床層體積38mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為60%的乙腈_水混合溶劑沖洗柱子；取8mL濾液上樣(上樣量為0.08g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為60%的乙腈_水混合溶劑以1.3mL/min(2床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分1經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.52g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為94.3。/。；餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品0.76g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為95.4%。實(shí)施例8在500mL燒杯中加入0.05mol/LKOH水溶液200mL,積雪草總苷元原料5.0g(25g積雪草總苷元/1L無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至40-C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入硫酸調(diào)節(jié)pH值至8.5，冷卻至2(TC結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品1.2g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為92.1%，濾液中加入硫酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重3.6g，用18mL乙醇(2g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為16cm的C18層析柱(高徑比8，裝填C18硅膠量28g，床層體積50mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為60%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取10mL濾液上樣(上樣量為0.07g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為60%的乙腈一水混合溶劑以1.7mL/min(2床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.60g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為95.2%;餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品0.87g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為96.3%。實(shí)施例9在500mL燒杯中加入0.04mol/LNaOH水溶液200mL，積雪草總苷元原料4.0g(20g積雪草總苷元/lL無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至35'C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8，冷卻至15"C結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品1.1g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為95.2%，濾液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重2.8g，用14mL甲醇(2g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為16cm的C18層析柱(高徑比8，裝填C18硅膠量28g，床層體積50mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為60%的乙腈_水混合溶劑沖洗柱子；取8mL濾液上樣(上樣量為0.06g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為60%的乙腈_水混合溶劑以1.7mL/min(2床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.53g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為95.9。/。；餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品0.77g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為96.7%。實(shí)施例10在500mL燒杯中加入0.03mol/LKOH水溶液200mL，積雪草總苷元原料3.0g(15g積雪草總苷元/lL無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至35。C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入硫酸調(diào)節(jié)pH值至8，冷卻至5'C結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品0.80g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為94.7%，濾液中加入硫酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重2.0g，用14mL.乙醇(1.5g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為16cm的C18層析柱(高徑比8，裝填C18硅膠量28g，床層體積50mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為60%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取9mL濾液上樣(上樣量為0.05g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為60%的乙腈一水混合溶劑以1.7mL/min(2床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.43g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為95.3。/。；餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品0.67g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為94.2%。實(shí)施例11在1L燒杯中加入0.02mol/LNaOH水溶液500mL，積雪草總苷元原料5.0g(10g積雪草總苷元/1L無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至35"C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8，冷卻至1(TC結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾;過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品1.0g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為96.2%，濾液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重3.8g，用25mL甲醇(1.5g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為20cm的C18層析柱(高徑比10，裝填C18硅膠量35g，床層體積63mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為60%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取9mL濾液上樣(上樣量為0.04g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為60%的乙腈—水混合溶劑以2.1mL/min(2床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分1經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.38g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為97.4%;餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品0.57g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為96.3%。實(shí)施例12在1L燒杯中加入0.01mol/LKOH水溶液1L，積雪草總苷元原料5.0g(5g積雪草總苷元/lL無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至35'C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入硫酸調(diào)節(jié)pH值至7.5，冷卻至Or結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品1.1g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為70.5%，濾液中加入硫酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重3.7g，用37mL乙醇(lg結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為20cm的C18層析柱(高徑比10，裝填C18硅膠量35g，床層體積63mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為65%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取10mL濾液上樣(上樣量為0.03g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為65%的乙腈_水混合溶劑以2.1mL/min(2床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.18g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為94.3。/。；餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品0.27g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為92.1%。實(shí)施例13在lL燒杯中加入0.01mol/LNaOH水溶液lL，積雪草總苷元原料1.0g(lg積雪草總苷元/lL無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至35'C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7，冷卻至2(TC結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品0.08g,經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為67.4%，濾液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重0.9g，用17mL甲醇(0.5g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為24cm的C18層析柱(高徑比12，裝填C18硅膠量42g，床層體積75mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為65%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取17mL濾液上樣(上樣量為0.02g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為65%的乙腈—水混合溶劑以3.1mL/min(2.5床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.17g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為92.2餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品0.23g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為96.2%。實(shí)施例14在1L燒杯中加入0.01mol/LKOH水溶液1L，積雪草總苷元原料0.5g(0.5g積雪草總苷元/1L無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至30'C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入硫酸調(diào)節(jié)pH值至6，冷卻至25"C結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品0.13g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為60.1%，濾液中加入硫酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重0.31g，用35mL乙醇(0.1g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為20cm的C18層析柱(高徑比10，裝填C18硅膠量35g，床層體積63mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為70°/。的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取35mL濾液上樣(上樣量為0.01g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為70%的乙腈一水混合溶劑以3.1mL/min(3床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)熘分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.08g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為95.5%;餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品0.11g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為94.3%。實(shí)施例15在500mL燒杯中加入0:04molZLNaOH水溶液200rr丄，積雪草總苷元原料4.0g(20g積雪草總苷元/lL無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至35'C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8，冷卻至15'C結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品1.1g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為94.8%，濾液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重2.7g，用14mL甲醇(2g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為28cm的C18層析柱(高徑比14，裝填C18硅膠量49g，床層體積88mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為70%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取12mL濾液上樣(上樣量為0.05g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為70。/。的乙腈一水混合溶劑以2.2mL/min(1.5床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.74g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為95.7%;餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品1.1g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為95.4%。實(shí)施例1613在500mL燒杯中加入0.04mol/LKOH水溶液200mL，積雪草總苷元原料4.0g(20g積雪草總苷元/lL無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至35"C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入硫酸調(diào)節(jié)pH值至8，冷卻至15'C結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品1.1g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為93.2%，濾液中加入硫酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重2.7g，用14mL乙醇(2g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為32cm的C18層析柱(高徑比16，裝填C18硅膠量56g，床層體積100mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為70。/。的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取14mL濾液上樣(上樣量為0.05g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為70。/。的乙腈一水混合溶劑以2.5mL/min(1.5床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.88g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為97.2。/。；餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品1.4g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為96.7。/。。在500mL燒杯中加入0.04mol/LNaOH水溶液200mL，積雪草總苷元原料4.0g(20g積雪草總苷元/lL無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至35。C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，'加入鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8，冷卻至2(TC結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品0.98g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為96.1%，濾液中加入鹽酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重2.8g，用14mL甲醇(2g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為36cm的C18層析柱(高徑比18，裝填C18硅膠量63g，床層體積113mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為70%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取13mL濾液上樣(上樣量為0.04g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為70%的乙腈一水混合溶劑以3.8mL/min(2床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.78g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為93.4%;餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品1.2g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為93.2%。實(shí)施例18在500mL燒杯中加入0.04mol/LKOH水溶液200mL，積雪草總苷元原料4.0g(20g積雪草總苷元/lL無(wú)機(jī)堿的水溶液)，加熱至35。C充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入硫酸調(diào)節(jié)pH值至8，冷卻至2(TC結(jié)晶后進(jìn)行過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品0.91g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為96.8%,濾液中加入硫酸，調(diào)節(jié)pH值至24結(jié)晶后過(guò)濾；過(guò)濾得結(jié)晶物II自然晾干后重2.9g，用MmL乙醇(2g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑)溶解。內(nèi)徑為2cm、高度為40cm的C18層析柱(高徑比20，裝填C18硅膠量70g，床層體積126mL)采用濕法裝柱，用體積濃度為70%的乙腈一水混合溶劑沖洗柱子；取14mL濾液上樣(上樣量為0.04g結(jié)晶物II/lgC18硅膠)，體積濃度為70%的乙腈一水混合溶劑以4,2mL/min(2床層體積/h)的流速洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分l經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得多米諾積雪草酸產(chǎn)品0.84g，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為92.6°/。；餾分2經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得羥基積雪草酸產(chǎn)品1.3g，經(jīng)HPLC撿測(cè)純度為91.9%。權(quán)利要求1.一種從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的方法，其特征在于，方法的步驟如下1)在無(wú)機(jī)堿的水溶液中加入積雪草總苷元原料，加熱至30～60℃充分溶解后過(guò)濾得濾液I；2)濾液I中加入無(wú)機(jī)酸調(diào)節(jié)pH值至6～9，冷卻至0～25℃結(jié)晶后過(guò)濾，分別得結(jié)晶物I與濾液II，結(jié)晶物I經(jīng)真空干燥后得積雪草酸產(chǎn)品；3)濾液II中加入無(wú)機(jī)酸，調(diào)節(jié)pH值至2～4，結(jié)晶后過(guò)濾得結(jié)晶物II；4)結(jié)晶物II自然晾干后用有機(jī)溶劑溶解；5)C18硅膠采用濕法裝柱，柱子的高徑比為4～20，用乙腈—水混合溶劑沖洗柱子；6)按0.01～0.1g結(jié)晶物II/1gC18硅膠的比例上樣，乙腈—水混合溶劑以0.5～3床層體積/h的流速洗脫；7)洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，餾分1為多米諾積雪草酸溶液，餾分2為羥基積雪草酸溶液；8)餾分1、餾分2分別經(jīng)減壓濃縮、真空干燥后得多米諾積雪草酸與羥基積雪草酸產(chǎn)品。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的方法，其特征在于步驟l)中的無(wú)機(jī)堿為NaOH或KOH。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的方法，其特征在于步驟l)中的無(wú)機(jī)堿的濃度為0.01~0.1mol/L。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的方法，其特征在于步驟l)中的每升無(wú)機(jī)堿的水溶液中積雪草總苷元的加入量為560g。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的方法，其特征在于步驟2)與步驟3)中的無(wú)機(jī)酸為鹽酸或硫酸。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的方法，其特征在于步驟4)中的有機(jī)溶劑為甲醇或乙醇。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的方法，其特征在于步驟4)中的有機(jī)溶劑加入量為0.13g結(jié)晶物11/10mL有機(jī)溶劑。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的方法，其特征在于步驟5)與步驟6)中乙腈一水混合溶劑中乙腈的體積百分比為5070%。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種從積雪草總苷元出發(fā)同時(shí)制備積雪草酸、羥基積雪草酸和多米諾積雪草酸的方法。方法的步驟如下在無(wú)機(jī)堿的水溶液中加入積雪草總苷元原料，加熱充分溶解后過(guò)濾除去不溶性固形物，加入無(wú)機(jī)酸調(diào)節(jié)pH值至6～9，冷卻、結(jié)晶后過(guò)濾得結(jié)晶物I與濾液，結(jié)晶物I真空干燥得積雪草酸產(chǎn)品；濾液中加入無(wú)機(jī)酸調(diào)節(jié)pH值至2～4，結(jié)晶后過(guò)濾得結(jié)晶物II，結(jié)晶物II自然晾干后用有機(jī)溶劑溶解，過(guò)C18硅膠柱，并用乙腈—水混合溶劑洗脫；洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并成兩個(gè)餾分，分別經(jīng)減壓濃縮、真空干燥后得多米諾積雪草酸與羥基積雪草酸產(chǎn)品。該方法產(chǎn)品收率和純度高，可用作原料藥，同時(shí)工藝過(guò)程較簡(jiǎn)單、所需投資少、易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化。文檔編號(hào)C07J63/00GK101463064SQ20091009545公開(kāi)日2009年6月24日申請(qǐng)日期2009年1月15日優(yōu)先權(quán)日2009年1月15日發(fā)明者呂秀陽(yáng),音李,鄭興芳申請(qǐng)人:浙江大學(xué)