專利名稱：葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一系列葡萄糖醛酸化的香豆素類化 合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
香豆素類化合物廣泛存在于傘形科、豆科、蕓香科、菊科、虎耳草科、 瑞香科等植物以及微生物代謝產(chǎn)物中，目前，已發(fā)現(xiàn)的香豆素類化合物大
約有1300多個[Bruneton J et al., (799力Lavo&z'w P"6toW"g: Pan's,
"5-C義]。前期研究表明，該類化合物具有包括抗炎、抗凝血、抗腫瘤 及愛滋病等廣泛的藥用活性。同時，這類化合物存在明顯的結(jié)構(gòu)和活性的
代謝關(guān)系[Thuong PD et al.，卩O0"尸/^o^eA:及饑]。如莨菪堿作為抗真菌
劑及法華林作為抗凝血劑使用等。
林國強等(CN 1679540A)通過在香豆素母核(苯基-a-吡喃酮)C-4， C-5， C-6, C-7， C-8位上衍生及合成了一系列的具有抗真菌活性的化合物。張衛(wèi)東 等(CN 1923193 A)通過從毛瑞香等中藥中分離純化了 一系列的香豆素類化 合物，并將其用于制備抗炎鎮(zhèn)痛藥物。通過動物實驗證明，這些化合物具 有一定的抗炎鎮(zhèn)痛活性。M.布勞因(CN 101 )等合成噻二唑取代的 香豆素類衍生物，并發(fā)現(xiàn)該類化合物可用作抗動脈粥樣硬化、抗哮喘、抗 過敏、抗炎及細(xì)胞保護(hù)劑。同時，瑞香素及七葉葶雖已被報道具有抗炎， 但其抗癌活性報道只針對腎癌細(xì)胞[Finn GJ et al.， Ca"cw 雖^一幼]。飯倉仁等(CN 101384577A)通過在香豆素母核結(jié)構(gòu)及化學(xué)元素組成，開 發(fā)了具有明顯抗癌活性的一系列化合物。黃永富等(CN101029047A)將從海 藻上分離得到的海洋真菌的發(fā)酵液過濾后，分離得到一個具有抗癌及抗?jié)?瘍活性的異香豆素。
本發(fā)明針對具有酚羥基的香豆素類化合物在體內(nèi)可被葡萄糖醛酸酶快 速代謝的特點，以香豆素及4-甲基香豆素為母核的單葡萄糖醛酸化合物抗 關(guān)節(jié)炎及抗腫瘤活性為基礎(chǔ)，開發(fā)新型的抗關(guān)節(jié)炎及抗腫瘤藥物。
本發(fā)明的目的是提供了葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物及其應(yīng)用。 本發(fā)明提供了葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物，該化合物具有如下結(jié)
構(gòu)
其中R為-H、 -OH、 -CH3、 -OCH3、-皿2或酯基(芳香酯或脂肪酯) 中的一種；
R!， R2， R3， R4為-H、 -OH、 -CH3、 -SH、 -OCH3、-順2或葡萄
糖醛酸基中的一種。 本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)舉例如下 (1) 7-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU001)
發(fā)明內(nèi)容(2) 7-羥基-8-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU002)
HOOC /
其中R-H;R4，R2-H;RfOH;R^ H° ^ ;<formula>formula see original document page 6</formula>
(3) 8-羥基-7-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU003)
其中R=H; R!， R2 = H; R4= OH; R3=
HOOC、 / —-0 O HO,、— HO-
、OH
(4) 6-羥基-7-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU004)
其中R=H; R!, R4 = H; R2= OH; R3=
HOOC、 / —-O O HO,、— HO-
、OH
(5) 7-羥基-6-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU005)
HOOC /
其中R^RbF^H-'RfOH;!^- H0 、。"；
(6)7-甲氧基-6-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU006)
其中R=H; R!， R4 = H; R3= OCH3; R2=
HOOC、 / —-O. p HO,、— HO-
、OH
(7)7-甲氧基-8-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU007)
HOOC、 /
其中11= ;111，112 = 11;113=0013;114= H° \";豆素(化合物GLU008)
其中R=H; Rl5 R2 = H; OCH3; R3=
(9)4_甲基_7_葡萄糖醛酸_香豆素(化合物GLU009)
其中R=CH3; R,， R2， Rr H; R3-
(10)4-甲基-7-羥基-8-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU010)
其中R= CH3; Rl5 R2 = H; R3= OH;
(11) 4-甲基-8-羥基-7-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU011)
其中R= CH3; Rb R2 = H; OH; R3=
(12) 4-甲基-6-羥基-7-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU012)
其中R= CH3; Rl5 R4 = H; R2= OH; R3=
(13) 4^甲基-7-羥基-6^葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU013)
其中R= CH3; R，， R4 = H; R3= OH; R2=
(14)4-甲基-7-甲氧基-6-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU014)其中R= CH3; R4， R4 = H; R3= OCH3; R2=
(15) 4-甲基-7-甲氧基-8-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU015)
其中R= CH3; Rh R2 = H; R3= OCH3;
(16) 4-甲基-8-甲氧基-7-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU016)
其中R= CH3; R,， R2= H; OCH3; R3=
(17) 4-甲基-5-羥基-7-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU017)
其中R= CH3; R2, R4= H; R產(chǎn)OH; R3=
(18)4-甲基-7-羥基-5-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU018)
其中R= CH3; R2， R4= H; R3= OH; R尸
(19) 4-甲基-5-甲氧基-7-葡萄糖醛酸-香豆素(化合物GLU019)
其中R= CH3; R2， R4= H; R產(chǎn)OCH3; R3=20 其中R= CH3; R2, R4 = H; R3= OCH3; R尸
上述20種葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物均通過體外生物轉(zhuǎn)化法獲 得。具體實施以香豆素及其類似物為底物，與大鼠肝臟微粒體、 uridine-5'-diphosphoglucuronicacid(UDPDA)孵育，通過適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件(溫 度，催化劑等)，使相應(yīng)的取代位點選擇性地加合葡萄糖醛酸基團(tuán)。該化學(xué) 反應(yīng)通式如下所示
、
注箭頭表示可能發(fā)生的葡萄糖醛酸位點 本發(fā)明提供的葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物應(yīng)用于抗關(guān)節(jié)炎和抗腫
瘤方面。
本發(fā)明提供的葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物或其可藥用的鹽，可以
與任何可藥用載體、賦型劑或稀釋劑組成藥物組合物；或者與其它化療藥 物或化療藥物增效劑聯(lián)合使用，制備成復(fù)方制劑。
根據(jù)本發(fā)明，發(fā)現(xiàn)得到的葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物，如GLU002 及GLU003等，對于大鼠關(guān)節(jié)炎模型的治療效果顯著，對白血病細(xì)胞(K562)， 非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549)，結(jié)腸癌細(xì)胞(HT-29)，卵巢癌細(xì)胞(OVCAR-3)， 人成骨肉瘤細(xì)胞(Saos-2)，乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)等多種腫瘤細(xì)胞系均表現(xiàn)出 良好的細(xì)胞毒性。其中香豆素母核C-4位被甲基取代后的化合物雖對關(guān)節(jié)炎的治療效果影響不大，但對多種腫瘤細(xì)胞系均表現(xiàn)出較C-4未被甲基取 代后的葡萄糖醛酸化合物細(xì)胞毒活性降低(實驗結(jié)果見表1和表2)。實驗 證明，這20種新型葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物有望成為新一代抗關(guān)節(jié) 炎及抗腫瘤候選藥物，從而能夠應(yīng)用于關(guān)節(jié)炎及白血病、人肺腺癌、結(jié)腸 癌、人卵巢癌、骨肉瘤、人乳腺癌等癌癥疾病的治療當(dāng)中。


圖1為瑞香素的LC-MS譜圖，其中瑞香素的正離子信號[M+H]+at m/z 176.9;
圖2為7-羥基-8-葡萄糖醛酸-香豆素的LC-MS譜圖，其中7-羥基-8-葡萄糖醛酸-香豆素的正離子信號[M+H]+atm/z 353.0;
圖3為8-羥基-7-葡萄糖醛酸-香豆素的LC-MS譜圖，其中8-羥基-7-葡萄糖醛酸-香豆素的正離子信號[M+H]+atm/z 353.0。
具體實施例方式
以下實施例將對本發(fā)明予以進(jìn)一步的說明，但并不因此而限制本發(fā)明。 實施例1制備化合物GLU002及GLU003
稱取lg瑞香素(7、 8-二羥基香豆素)樣品(HPLC外標(biāo)法測定，含量 為99%， LC-MS譜圖見圖1)溶于1 ml甲醇體系中，加入含大鼠肝微粒體 (0.5mg/ml)及UDPGA (5 ^M)的磷酸鉀緩沖液(pH7.4) 100 ml反應(yīng) 體系中充分反應(yīng)2h后，HPLC檢測顯示瑞香素轉(zhuǎn)化完全。離心后將反應(yīng)液 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至10ml，通過反相(YMC， C18柱)高效液相色譜系統(tǒng)，使用水: 乙腈(50: 50)的流動相以1 ml/min的流速淋洗，可得到80 mg化合物GLU002 (含量98%， LC-MS譜圖見圖2)及78mg GLU003 (含量95%, LC-MS譜圖見圖3)。其它葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物的制備與該反應(yīng)條件及 步驟類似。
實施例2葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物抗關(guān)節(jié)炎實驗
21只體重200 g左右的SD大鼠，使用0.1 ml弗氏完全佐劑注射右腳 掌，7天后隨機分為3組，即每天飼喂葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物50 mg/kg的A組，每天飼喂蒸餾水的B組。另設(shè)未經(jīng)任何處理的7只SD大 鼠作為正常組對照C組。21天后，各實驗組的大鼠被分別測定右腳掌膨脹 物大小，并從頸動脈取血測定血清免疫指標(biāo)，相關(guān)結(jié)果見表l。
表l大鼠關(guān)節(jié)炎模型相關(guān)實驗結(jié)果
袖幼l膨脹物大小TNF-aIL-1MIF
組別mgng/ mlng/mlng/ml
對照組21.3±3.50.102±0.0240.311±0.0212.521±0.212
蒸餾水組109.1±4.90,208±0.0530.745士0.0153.913±0.123
GLU001組72.1±4,20.132±0.009#0.434±0.0122.432±0.232#
GLU002組66.3±4.5#0.134±0駕#0.432±0.0222.334±0.432#
GLU003組67.5±1.1#0.145±0.0140.342±0.014#2.564±0.323
GLU004組47.0±2.4*0.165±0.0130.343±0扁2.211±0.312*
GLU005組68.2±3.0#0.133±0.032#0.434±0.0322.323±0.210#
GLU006組89.3±1.90.134±0.014#0.522±0.0322.432±0.234#
GLU007組99.4±2.60.179±0.0140.454±0.0202.431±0.342
GLU008組103.5±5.20.167±0.0440.323±0.034#2.243±0.108*
GLU009組82.7±3.90.143±0.0320.234±0.028*2.434±0.12389.9±3.60.103±0.032*0.545士0，2.433±0.401
GLU011組76.5±1.00.122±0.031#0.322±0.023#2.423±0.390
GLU012組94.6±2.60.134±0.011#0.434±0.0532.494士0.390
GLU013組64.6±2.0#0.143±0.0330.564±0.0232.675±0.221
GLU014組77.5±4.40.165±0.0520.323±0.033#2.754±0.500
GLU015組88.4±2.30.132±0.040#0.443±0.0432.536±0.324
GLU016組89.3±2.30.123±0.014#0.432±0.0422.654±0.553
GLU017組87.5±3.30.143±0.0320.431±0.0152.544±0.322
GLU018組87.3±4.30.143±0.0140.343±0,036#2.654±0.278
GLU019組67.5±3.3#0.165±0.0430.543±0細(xì)2.645±0.329
GL匿0組87.3±3.80.134±0.034#0.432±0.0212.654±0.232
Mean士S.D， 《=7.
# _P < 0.05 vs. normal group.
*戶< 0.01 vs. model group.實施例3葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物抗腫瘤活性實驗
體外抗腫瘤活性實驗白血病細(xì)胞(K562)，非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549)， 結(jié)腸癌細(xì)胞(HT-29)，卵巢癌細(xì)胞(OVCAR-3)，人成骨肉瘤細(xì)胞(Saos-2)，乳 腺癌細(xì)胞(MCF-7)等六種腫瘤細(xì)胞被用于測定二十種葡萄糖醛酸化的香豆 素類化合物的體外抗腫瘤活性。六種腫瘤細(xì)胞分別接種于96孔平底培養(yǎng)板， 加10>\11 1640+ 10%]^68+慶大霉素的無菌培養(yǎng)液，在37""C下C02溫箱孵 育24 h。藥品用DMSO助溶后，用培養(yǎng)基稀釋至不同濃度梯度的溶液， DMSO終濃度低于0.P/。。在供試化合物作用下培養(yǎng)48 h后，使用SRB法 測定細(xì)胞生存率。體外腫瘤實驗的IC50結(jié)果見表2。根據(jù)表2的結(jié)果我們 可以看出其中C-7， C-8及C-6結(jié)合位點的葡萄糖醛酸化合物均表現(xiàn)出良好 的細(xì)胞毒性，而C-5位葡萄糖醛酸如GLU018及GLU020的細(xì)胞毒活性降 低，但仍具有一定的細(xì)胞毒性。
表2體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖實驗的IC5Q結(jié)果
ICsoOiM)
化合物-
K562A549 HT-29 OVCAR-3 Saos-2 MCF-7
GLU001320108>500>500>500390
GLU0024812301124
GLU00374312125
GLU004193534109604
GLU00523563950346
GLU006—_——201109—
GLU007—一—一 一—一 一302302——一GLU008
GLU009
GLUOll
GLU012
GLU013
GLU015
GLU017
GLU019
120
GLUOIO 232
281
122
321
GLU014 212
123
120
323
212
212
211
321
104
109
143
121
113
54
432
254
232
130
60
124
GLU016>500>500> 500
154
GL畫8>500>500> 500
145
GLU020>500>500> 500
109
43
332
454
212
122
212
122
>500 143
>500 198
>500
232 76 432 542
214
143
154
43 433 322 122 321 232 124
> 500 > 500
154
> 500 > 500
159
> 500 > 500
權(quán)利要求
1、葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物，其特征在于該化合物具有如下結(jié)構(gòu)其中R為-H、-OH、-CH3、-OCH3、-NH2或酯基中的一種；R1，R2，R3，R4為-H、-OH、-CH3、-SH、-OCH3、-NH2或葡萄糖醛酸基中的一種。
2、按照權(quán)利要求1所述葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物，其特征在于: 該化合物如下(1) 7-葡萄糖醛酸-香豆素；(2) 7-羥基-8-葡萄糖醛酸-香豆素；(3) 8-羥基-7-葡萄糖醛酸-香豆素；(4) 6-羥基-7-葡萄糖醛酸-香豆素；(5) 7-羥基-6-葡萄糖醛酸-香豆素；(6) 7-甲氧基-6-葡萄糖醛酸-香豆素；(7) 7-甲氧基-8-葡萄糖醛酸-香豆素；(8) 8-甲氧基-7-葡萄糖醛酸-香豆素；(9) 4-甲基-7-葡萄糖醛酸-香豆素；(10) 4-甲基-7-羥基-8-葡萄糖醛酸-香豆氣(11) 4-甲基-8-羥基-7-葡萄糖醛酸-香豆素；(12) 4-甲基-6-羥基-7-葡萄糖醛酸-香豆素；(13) 4-甲基-7-羥基-6-葡萄糖醛酸-香豆素；(14) 4-甲基-7-甲氧基-6-葡萄糖醛酸-香豆素；(15) 4-甲基-7-甲氧基-8-葡萄糖醛酸-香豆素；(16) 4-甲基-8-甲氧基-7-葡萄糖醛酸-香豆素；(17) 4-甲基-5-羥基-7-葡萄糖醛酸-香豆素；(18) 4-甲基-7-羥基-5-葡萄糖醛酸-香豆素；(19) 4-甲基-5-甲氧基-7-葡萄糖醛酸-香豆素；(20) 4-甲基-7-羥基-5-葡萄糖醛酸-香豆素。
3、 按照權(quán)利要求1所述葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物，其特征在于: 所述酯基為芳香酯或脂肪酯。
4、 權(quán)利要求l， 2所述葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物應(yīng)用于抗關(guān)節(jié)炎 和抗腫瘤方面。
全文摘要
葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物及其應(yīng)用，該化合物具有如右結(jié)構(gòu)。其中R為-H、-OH、-CH₃、-OCH₃、-NH₂或酯基中的一種；R₁，R₂，R₃，R₄為-H、-OH、-CH₃、-SH、-OCH₃、-NH₂或葡萄糖醛酸基中的一種；本發(fā)明葡萄糖醛酸化的香豆素類化合物具有抗關(guān)節(jié)炎和抗腫瘤活性。
文檔編號C07H17/00GK101613388SQ20091001255
公開日2009年12月30日 申請日期2009年7月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月16日
發(fā)明者劉慧鑫, 張延延, 凌 楊, 梁思成, 葛廣波 申請人:中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所